CN103830656B

CN103830656B - 治疗盆腔炎的药物及其制备方法

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Publication number: CN103830656B
Application number: CN201210478909.9A
Authority: CN
Inventors: 丁丽仙; 张永萍
Original assignee: Guiyang College of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Guizhou University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2012-11-22
Filing date: 2012-11-22
Publication date: 2016-03-09
Anticipated expiration: 2032-11-22
Also published as: CN103830656A

Abstract

本发明公开了一种治疗盆腔炎的药物及其制备方法，所述治疗盆腔炎的药物主要由丹参、三棱、莪术、红藤、乌药和败酱草制成，与现有技术相比，所述治疗椎动脉缺血性的药物具有活血化瘀、温经止痛、散结消症的作用，能有效治疗慢性盆腔炎；且工艺简单，疗效确切，安全无副作用，易于推广。

Description

治疗盆腔炎的药物及其制备方法

发明领域：

本发明涉及一种治疗盆腔炎的药物及其制备方法，属于食品的技术领域。

技术背景：

盆腔炎即盆腔炎症性疾病（Pelvicinflammatorydisease，PID)，是由女性上生殖道炎症引起的一组疾病，包括子宫内膜炎、输卵管炎、输卵管卵巢脓肿和盆腔腹膜炎。炎症可局限于一个部位，也可同时累及几个部位，最常见的是输卵管炎、输卵管卵巢炎。盆腔炎90%以上是以疼痛为主要表现的，按其发病过程、临床表现可分为急性盆腔炎与慢性盆腔炎两种。盆腔炎最大的危害是造成不孕症。妇女盆腔内子宫、输卵管及卵巢或其周围的组织，包括盆腔内腹膜，任何一处发生炎症时，都可以造成妇女不孕，当急性炎症未能彻底治疗时转变成慢性，或者盆腔炎治疗不及时，迁延成慢性时，常常造成妇女不孕。盆腔炎的另一大危害是引起肾病。由于盆腔结缔组织与腹膜后结缔组织相连，向上可达肾脏周围，因此如果急性盆腔结缔组织炎未经治疗，炎症不仅可以扩散至输卵管、盆腔腹膜等组织器官，引起盆腔脓肿，还可以向上蔓延，导致肾周围脓肿。如慢性炎症久治不愈、反复发作还会影响患者正常的工作和生活以及身心健康。随着对外交流的日益频繁，患有盆腔炎的患者也在增多。因此开发一种优质高效的中药制剂具有重要意义。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种治疗盆腔炎的药物及其制备方法。所述药物能有效治疗盆腔炎，安全无副作用，且制备工艺简单，易于操作。

为解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案实现：

一种治疗盆腔炎的药物，按照重量组份计算，由丹参20-40份、三棱2040份、莪术20-40份、红藤20-40份、乌药20-40份、败酱草20-40份及辅料制备而成。

具体地说,前述治疗盆腔炎的药物按照重量组份计算，由丹参30份、三棱30份、莪术30份、红藤30份、乌药30份、败酱草30份及辅料制备而成。

前述治疗盆腔炎的药物的制备方法为：根据配方称取各药物，按照药学上可接受的工艺进行制备，再加入药学上可接受的辅料，按照常规工艺制备成药学上可接受的药物制剂。

具体地说,前述治疗盆腔炎的药物的制备方法为：根据配方称取各药物，加入6-12倍量水煎煮1-3次，每次0.5-3小时，滤过，合并滤液，浓缩，加入辅料，按照常规工艺制备成药物制剂。

所述药物制剂为外用制剂。

所述外用制剂为灌肠剂。

所述灌肠剂这样制备：根据配方称取方中药物，加10倍量水，煎煮三次，每次1.5小时，合并三次煎煮液，旋转减压浓缩,10000r/min超速离心30分钟，滤除沉淀，取上清液105℃流通蒸汽灭菌，加入制成量12-14%的苯甲酸钠，分装，即得。

现代研究发现盆腔炎由多种微生物感染引起,包括内源性和外源性病原体,主要有链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、厌氧菌、淋球菌、沙眼衣原体、支原体、疱疹病毒等。其中,由性传播疾病的病原体如淋病奈瑟菌和沙眼衣原体感染导致的盆腔炎约占总盆腔炎发病率的1/2～2/3,而细菌性阴道炎和支原体感染导致的盆腔炎主要发生于老年妇女。中医认为慢性盆腔炎“血瘀”为病机关键，“化”乃基本治则，所以中医临床上多采用活血化瘀药治疗。

本发明所述治疗盆腔炎的药物由丹参、三棱、莪术、红藤、乌药、败酱草及料制备而成。其中：

丹参根中主含脂溶性的二萜类成分和水溶性的酚酸成分，还含黄酮类，三萜类，甾醇等其他成分，现代研究表明丹参中所含成分及其衍生物对微循环障碍有改善甚至治愈的作用；对血小板聚集和凝血功能的改善作用；对红细胞膜的保护用；对血脂和动脉粥样硬化斑块形成的抑制作用；抗菌、消炎作用；抗肿瘤作用等。

三棱块茎含挥发油，其中主要成分为苯乙醇(benzeneethanol)，对苯二酚1,4-benzenediol)，十六酸(hexadecanoicacid)等；现代研究表明三棱水煎液能抑制血栓形成，降低全血粘度，能抑制血小板聚集，还可引起家兔肠管收缩加强，紧张性升高，但其作用可被不同浓度的阿托品所拮抗，同时对离体兔子宫也有兴奋作用。

莪术根茎含挥发油，油中主成分为莪术呋喃烯酮(curzenone)占44.93%，龙脑(borneo1)占4.28%，大牻牛儿酮(pormacrone)占6.16%，还含α-和β-蒎烯(pinene)等，现代研究表明莪术水提取液对ADP（二磷酸腺苷）诱导的血小板聚集有显著的抑制作用，并能明显降低血液粘度，以及缩短红细胞的电泳时间；莪术挥发油试管内能抑制金黄色葡萄球菌；β-溶血性链球菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌、霍乱弧菌等的生长；莪术有一定的升高白细胞作用；莪术增加股动脉血流量的作用在活血化瘀药中最为明显。

红藤含大黄素（emodin），大黄素甲醚（physcion），β-谷甾醇（β-sitosterol）等。现代研究表明红藤水溶性提取物体外试验对ADP诱导的兔血小板聚集有明显的抑制和促进解聚作用，ID₅₀为14.6mg/ml；红藤水溶性提取物40、100mg/kg对大鼠ADP诱发的血小板聚集有抑制作用；用平碟法试验，25%煎剂对金黄色葡萄球菌、乙型链球菌有极敏感抑菌作用，对大肠杆菌、绿脓杆菌、甲型链球菌、卡他球菌、白色葡萄球菌均有高敏感抑菌作用等。

乌药根茎含钓樟醇(Linderol，即龙脑Borneol)、倍半萜等成分；现代研究表明乌药对金黄色葡萄球菌，甲型溶血性链球菌，伤寒杆菌，变形杆菌，绿脓杆菌，大肠杆菌均有抑制作用，临床药理研究证明乌药具有抗病毒、抑菌、抗肿瘤、镇痛、抗炎的等药理作用。

败酱草根茎含败酱皂甙（patrino-side），败酱皂甙A1、B1、C1、D1、E、F、G、H、J、K、L等，根含黄花败酱皂甙（scabioside）A、B、C、D、E、F、G等；现代研究表明败酱根热水提取物500μg/ml对人子宫颈癌细胞的抑制率为100%，而对正常细胞则反有促进增殖的作用；临床药效研究证明败酱草抗菌、抗炎作用、镇静作用、抗肿瘤等作用。

本发明将上述药物组方，共奏“活血化瘀、温经止痛、散结消症”之功效，主治因蕴结胞脉胞络,气滞血瘀,郁滞下焦,不通则痛，阴阳失调,迁延不愈所致的“症瘕”、“带下病”、“痛经”、“月经不调”、“不孕”等病。对慢性子宫内膜炎、慢性输卵管炎、输卵管积水、输卵管、卵巢炎及输卵管卵巢囊肿、慢性盆腔结缔组织炎疗效显著，尤其是改善慢性盆腔痛的症状和因慢性盆腔炎导致的不孕症、输卵管妊娠、继发性痛经等病的治疗效果肯定；全方及其方中各味中药具有显著地抗炎抑菌、改善病灶部位血液流变性等药理作用。

申请人对本发明所述治疗盆腔炎的药物进行了以下实验研究：

实验例1.工艺研究

一、提取工艺研究

1．仪器与试剂

1.1仪器

E-52B旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；Waters515双元泵，Waters2487可变波长紫外检测器，WatersDC柱温箱，威玛龙色谱工作站，Diamonsil(R)C18(250×4.6,5μm),METTLERAE240电子分析天平（梅特勒—脱利多仪器有限公司）。90mm蛋白胨培养基，90mm血琼脂板，200μL牛津杯，厌氧菌培养箱，37℃恒温培养箱；1mL移液枪。

1.2试剂与材料

丹酚酸B（批号：111562-201009），甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），乙腈（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），甲酸（分析纯，重庆化学试剂总厂）水为重蒸水,实验医学细菌：大肠杆菌（ATCC25922）及金黄色葡萄球菌（ATCC25293）为中国医学细菌保藏管理中心提供；产气荚膜梭菌（ATCC25285）及破伤风杆菌（No.64008）由贵阳医学院微生物实验室提供。

2实验方法与结果

2.1正交实验方法

将方中各味药材制成饮片，按正交实验设计表安排实验，以方中丹参中所含水溶性成分丹酚酸B的提取量为指标，同时结合提取液的抑菌作用大小综合评分，利用SPSS17统计软件进行统计学分析，最终得出最优水提工艺。实验设计见表。

表1水提正交实验因素水平表

2.2抑菌实验

2.2.1需氧菌的抑菌试验：取已复苏的实验菌液（9×10⁸个/mL）用无菌棉签均匀涂布于各90mm琼脂平板表面（约0.5个麦氏单位共计1.5×10⁸个细菌），稍后用无菌镊子夹取无菌牛津杯等距离放置于平板表面，再将正交实验得到的1～9号浓缩液用移液枪滴入200μL牛津杯中，并标记，随即将平板置于37℃培养箱中培养16～18h，量取牛津杯周围抑菌环大小，结果见表2。

2.2.2厌氧菌抑菌试验：取已复苏的实验菌液（9×10⁸个/mL）用无菌棉签均匀涂布于各90mm血琼脂平板表面（约0.5个麦氏单位共计1.5×10⁸个细菌），稍后用无菌镊子夹取无菌牛津杯等距离放置于平板表面，再将正交实验得到的1～9号浓缩液用移液枪滴入200μL牛津杯中，并标记，随即将平板置于37℃厌氧罐中培养48～72h，量取牛津杯周围抑菌环大小，结果见表2及表3。

2.3实验结果

表2L₉(3⁴)正交试验结果分析表

注:综合评分=(A/A_max×0.4+B/B_max×0.15+C/C_max×0.15+D/D_max×0.15+E/E_max×0.15)×100

表3方差分析表

2.4实验结果分析：实验中以丹酚酸B的总提取量（g）以及四种CPID临床常见致病菌的抑菌环大小（cm）综合评分，最后得到正交实验各实验号的综合分数，然后将这个分数进行统计学分析，得到如下结论：直观分析可知,各因素水平优劣次序为:溶剂量A₂>A₃>A₁,提取时间B₃>B₂>B₁,提取次数C₃>C₂>C₁,故最佳提取工艺为A₂B₃C₃D₂,由方差分析表可知,各因素对提取效率的影响次序为C>B>A,,同时也表明提取次数C对提取效果有显著性影响,故最终确定本发明自来水直火煎煮提取的最佳工艺是A₂B₃C₃D₂,即每次加入10倍量水,提取3次,每次1.5小时。

3验证实验：由以上所得全方最佳提取工艺，称取处方量药材，提取三次，每次1.5h,每次加10倍量水，做三次平行验证实验，结果见表4：

表4水提正交验证实验

结果表明丹酚酸B的平均总提取量为1440.37mg,平均转移率为85.74%,RSD%=0.72%，对四种细菌的抑菌环大小分别约为：2.0±0.5cm(金黄色葡萄球菌)；1.7±0.5cm（大肠杆菌）；1.2±0.5cm（产气荚膜梭菌）；1.2±0.5cm（破伤风杆菌）。

4讨论

本实验选用上述四种细菌作为实验用菌，主要是因为金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是CPID中常见的需氧菌，产气荚膜杆菌是CPID中常见的厌氧菌，破伤风杆菌是制药企业生产抑菌制剂时普遍用到的实验用厌氧菌，选用丹酚酸B作为测评指标之一的原因一是它来自君药丹参，二是现代药理研究证明其具有改善病灶部位血液流变性的功效，与功能主治中活血化瘀相吻合。直火煎煮是常用提取方法，为了得到水提最优工艺，采用正交实验法，以上述测评指标综合评分，得到全方水提最优工艺，经验证得到的工艺稳定可靠。实验结果表明该方确有明显的抗菌作用，经生化检测用药后能明显改善病变部位的血液流变性，能达到良好的治疗效果。

二、浓缩工艺研究

1仪器与试剂

1.1仪器：WBZ-2微波真空干燥机（贵阳新奇微波工业有限责任公司）；UDJT-2000A无级电子节能调温炉（贵阳永佳机械电器厂）；E-52B旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；Waters515双元泵，Waters2487可变波长紫外检测器，WatersDC柱温箱，威玛龙色谱工作站，Diamonsil(R)C18(250×4.6,5μm),METTLERAE240电子分析天平（梅特勒—脱利多仪器有限公司）。

1.2试剂：丹酚酸B（批号：111562-201009），甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），乙腈（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），甲酸（分析纯，重庆化学试剂总厂）水为重蒸水，75%甲醇。

2实验方法

2.1直火浓缩样品制备：依照提取工艺研究的结果全方经提取之后合并三次提取液定容至5000mL,摇匀。将药液100℃直火浓缩至200mL,从其中精密吸取1mL至50mL容量瓶中用75%甲醇溶液定容至刻度，吸取其中稀释液经0.45μm微孔滤膜滤过即得浓缩后的溶液。

2.2微波浓缩样品制备：依照提取工艺研究的结果全方经提取之后合并三次提取液定容至5000mL,摇匀，将药液45℃微波减压浓缩至200mL,从其中精密吸取1mL至50mL容量瓶中用75%甲醇溶液定容至刻度，吸取其中稀释液经0.45μm微孔滤膜滤过即得浓缩后的溶液。

2.3旋转减压浓缩样品制备：依照提取工艺研究的结果全方经提取之后合并三次提取液定容至5000mL,摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过即得浓缩前的溶液。将剩下的药液85℃旋转减压浓缩至200mL,从其中精密吸取1mL至50mL容量瓶中用75%甲醇溶液定容至刻度，吸取其中稀释液经0.45μm微孔滤膜滤过即得浓缩前的溶液。

3结果与讨论（表5）

表5浓缩工艺研究

从表中计算结果可得，旋转减压浓缩后的丹酚酸B的提取率最高，故选择旋转减压蒸发浓缩为最优浓缩工艺。

三、灌肠剂精制工艺研究

1仪器与试剂

1.1仪器：RE-52B旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；Waters515双元泵，Waters2487可变波长紫外检测器，WatersDC柱温箱，威玛龙色谱工作站；Diamonsil(R)C18(250×4.6,5μm),METTLERAE240电子分析天平（梅特勒—脱利多仪器有限公司）；AUY220万分之一电子天平（日本岛津），TGL-16C台式超速离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.2试药试剂：丹酚酸B（批号：111562-201009），甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），乙腈（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司），甲酸（分析纯，重庆化学试剂总厂），水为重蒸水，75%甲醇；95%食用酒精；ZTC1+1天然澄清剂Ⅱ型（天津振天成科技有限公司）。

2实验方法

2.1直接超速离心：依照浓缩工艺所得提取液200mL直接以10000r/min超速离心20min,过滤，用蒸馏水定容至200mL,精密吸取1mL,用75%甲醇稀释至50mL,0.45μm微孔滤膜滤过即得。

2.2醇沉

2.2.1醇沉之后不离心：依照浓缩工艺所得提取液200mL用95%食用酒精稀释至含醇量为75%，4℃静置过夜，过滤，减压浓缩至200mL，精密吸取1mL,75%甲醇定容至50mL,0.45μm微孔滤膜滤过即得。

2.2.2醇沉之后离心：依照浓缩工艺所得提取液200mL用95%食用酒精稀释至含醇量为75%，4℃静置过夜，过滤，减压浓缩至200mL，以10000r/min超速离心20min,吸取上清液定容至200mL,精密吸取1mL,用75%甲醇稀释至50mL,0.45μm微孔滤膜滤过即得。

2.3吸附澄清

2.3.1吸附澄清剂的配置

A组分:精密称取A组分适量，先用少量去离子水（蒸馏水）搅成糊状，然后加入需要量的蒸馏水，溶胀24h,搅拌，用双层纱布过滤，即得1%粘胶液。

B组分：先用冰醋酸和去离子水配制成1%的醋酸溶液，然后精密称取A组分适量，用少量1%的醋酸溶液溶解B组分并搅成糊状，加入足够量的1%的醋酸溶液，溶胀24h,搅拌，用双层纱布过滤，即得1%粘胶液。

2.3.2使用方法

（1）将（二）所得的提取液稀释至生药：水=1:5左右时，水浴加热至60℃时，搅拌分散加入药液量的10%的1%浓度的B组分溶液（即按液体量加入万分之十的固体B），每隔30mim左右间隔搅拌一次；

（2）2h后，同样方法加入5%的1%浓度A组分溶液，加料30min～60min再搅拌一次；

（3）静置4h后过滤即得。

2.3.3吸附澄清之后不离心：依（2.3.2使用方法）得到精制液，浓缩至200mL,精密吸取1mL,用75%甲醇稀释至50mL,0.45μm微孔滤膜滤过即得。

2.3.4吸附澄清之后离心：依（2.3.2使用方法）得到精制液,浓缩至200mL,以10000r/min超速离心20min,过滤，蒸馏水定容至200mL,精密吸取1mL,用75%甲醇稀释至50mL,0.45μm微孔滤膜滤过即得。

2.4指标性成分的转移率的测定（表6）

表6精制工艺研究

3.结论与讨论

通过实验研究数据得出浓缩之后的药液做直接离心处理与75%乙醇沉淀后再超速离心处理的丹酚酸B的转移率比较稍低，但考虑10版《中国药典》对灌肠剂的澄明度的要求不高，且醇沉的成本高，再者直接离心的操作较醇沉和吸附澄清简便；醇沉澄明度虽然好，但是丹酚酸B的转移率较低，回收乙醇的操作繁琐，费用较高；此外，虽然吸附澄清技术指标性成分的转移率与直接离心的相差无几，但就目前为止其技术还不够成熟，且处理后的过滤相当困难，操作繁琐，不利于大生产。

综上所述，本发明灌肠剂的精制方法选择直接高速离心的方法。

实验例2.药效学试验

一、抗炎实验

1.1材料

1.1.1动物

健康KM小鼠18-22g，全雌，由重庆市中药研究院、贵阳医学院动物实验中心提供。SPF级动物，动物合格证为：SCXK（渝）20070006；SCXK（黔)2002-0001。

健康SD大鼠，200g左右，全雌，由贵阳医学院动物实验中心提供。(SPF级动物，动物，合格证号：SCXK（黔)2002-0001。

1.1.2药物

妇炎康片：湖南湘泉制药有限公司，产品批号：100407

阿司匹林肠溶片：湖南新汇制药有限公司，产品批号：100102

本发明灌肠剂：按照实施例1的方法制备。

醋酸地塞米松片：浙江仙琚制药股份有限公司，批号：090725

20%乌拉坦：北京化学试剂公司，批号：090817

1.1.3试剂

二甲苯：上海试剂一厂，批号：070802；0.6%冰醋酸（HAc）：成都市恒昌化工有限公司，批号：081209；0.5%依文思兰：上海化学试剂采购供应站分装厂，批号：071213。

1.1.4仪器

十万分之一天平：上海精密仪器仪表有限公司；8mm打孔器；高压灭菌锅，lml注射器，10mg消毒棉球，手术剪，镊子；医用真丝编织线:：山东博达医疗用品有限公司，批号：20100128；202-2A型直热式电热恒温干燥箱：上海新诺仪器设备有限公司。

1.2方法

1.2.1剂量及给药体积设计

本发明灌肠剂成人临床剂量为0.75g生药/kg体重，按照体表系数法，经过剂量换算，本实验本发明灌肠剂小鼠高、中、低三个剂量组，分别设计为18g生药/kg体重，9g生药/kg体重，4.5g生药/kg体重，为人临床剂量24，12，6倍；本发明灌肠剂大鼠高、中、低三个剂量组分别设计为9g生药/kg体重，4.5g生药/kg体重，2.25g生药/kg体重，为人临床用量的12，6，3倍;各阳性药按照临床等效剂量换算。给药体积经过摸索，小鼠确定为0.05mL/10g，大鼠0.25mL/l00g。

1.2.2动物分组与给药方法

1.2.2.1小鼠耳廓肿胀实验及醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的试验

将60只小鼠随机分为6组，每组10只，全雌。

(l)空白组：灌肠给予0.05mL/10g蒸馏水，日一次;

(2)阿司匹林组：灌胃给予10mg/kg，日一次。

(3)妇炎康组：灌胃给予妇炎康0.9g/kg体重，日一次。

(4)本发明灌肠剂高剂量组：18g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

(5)本发明灌肠剂中剂量组：9g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

(6)本发明灌肠剂低剂量组：4.5g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

1.2.2.2大鼠棉球肉芽肿

将60只SD大鼠随机分为6组，每组10只，全雌。

(1)空白组：灌肠给予0.25mL/100g蒸馏水;

(2)醋酸地塞米松组：灌胃给药0.6mg/kg，日一次。

(3)妇炎康组：灌胃给与妇炎康0.45g/kg，日一次。

(4)本发明灌肠剂高剂量组：9g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

(5)本发明灌肠剂中剂量组：4.5g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

(6)本发明灌肠剂低剂量组：2.25g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

1.2.3造模与检测方法

1.2.3.1小鼠耳廓肿胀实验

连续给药7天，末次给药后1小时，小鼠右耳内外侧涂抹0.03ml二甲苯致炎，左耳作对照，40分钟后脱颈处死小鼠，剪下双耳用8mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重，每鼠右耳片重量减去左耳片重量即为肿胀度，统计各组小鼠的耳肿胀程度以及给药组的肿胀抑制率。

肿胀抑制率(%)二(对照组平均肿胀度一给药组平均肿胀度)/对照组平均肿胀度*100%。

1.2.3.2大鼠棉球肉芽肿

大鼠20%乌拉坦0.5ml/100g麻醉，将10mg消毒棉球植入左、右前腋皮下，缝合切口，以盐酸金霉素眼膏涂于切口处消毒后，第二天开始给药，每天1次，连续给药15天，末次给药后lh称体重，脱颈处死，打开原切口，取出棉球，剔除棉球周围脂肪组织。把带肉芽组织的棉球放60℃烘箱恒温12小时烤干，取出分别称重，带干肉芽组织的棉球重减去原棉球重量即为干肉芽组织的重量。

1.2.3.3酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的试验

方法：1）0.6%冰醋酸（HAc）生理盐水溶液的配制准确吸取纯冰醋酸0.3ml，溶于生理盐水50ml；2）0.5%依文思蓝生理盐水溶液：精确称取伊文思蓝0.5g溶解于生理盐水中成100ml3）按上述灌药方法1小时后，各鼠尾静脉注射0.5%依文思蓝生理盐水溶液0.1ml/10g体重（可用白色内芯的0.25ml注射器及4号针头），随即腹腔注射0.6%冰醋酸（HAc）生理盐水溶液0.2ml/只，20分钟后脱颈椎处死，剪开腹部皮肤肌肉，用5ml生理盐水分数次洗涤腹腔，吸管吸出洗涤液，合并后加入生理盐水至5ml，3000r/min离心15分钟，取上清液于721分光光度计下590nm比色测吸光度，记录，并进行组间T检验。

1.2.4统计方法

计量资料用SPSS软件包进行统计学处理，多组间比较用单因素方差分析，组间比较用t检验。

1.3结果

1.3.1小鼠耳廓肿胀实验结果

表7对二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀的影响(mean士SD，n=10)

注：与空白组相比*(P<0.05)***(P<0.001)；与妇炎康片组相比^▲▲(p<0.01)

结果表明，与空白组相比，阿司匹林，本发明灌肠剂高、中剂量能够显著减轻二甲苯所致小鼠耳廓肿胀程度(P<0.001，P<0.001，P<0.05)。妇炎康片组与本发明灌肠剂低剂量组亦能减轻小鼠耳廓肿胀程度，但无显著性。与妇炎康片组相比，本发明灌肠剂高剂量组有极显著性差异（p<0.01）。

1.3.2棉球肉芽肿试验结果

表8本发明灌肠剂对大鼠棉球肉芽肿的影响(mean士SD，n=10)

注：与空白组相比，*(P<0.05)**(P<0.01)***(P<0.001)；

与妇炎康片组相比，^▲(p<0.05)^▲▲(p<0.01)^▲▲▲(p<0.001)

结果表明，与空白组相比，各给药组及阳性药地塞米松组棉球肉芽肿均明显减轻。其中，阳性药、本发明灌肠剂高、中、低剂量组与空白组有极显著性差异(P<0.001，P<0.01)；与妇炎康片组相比，本发明灌肠剂高剂量组有极显著性差异(p<0.001)，本发明灌肠剂中剂量组有显著性差异(p<0.05)。

1.3.3醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的试验结果

表9对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的影响(mean士SD，n=10)

注：与空白组相比，*(P<0.05)**(P<0.01)***(p<0.001)；

与妇炎康组相比，^▲(p<0.05)^▲▲(p<0.01)

结果表明，与空白组相比，各给药组及阳性药阿司匹林组均能明显减轻小鼠腹腔毛细血管渗透性。其中，阳性药、本发明灌肠剂高、中、低剂量组与空白组有极显著性差异(P<0.001，P<0.01)；与妇炎康片组相比，本发明灌肠剂高剂量组有极显著性差异(p<0.01)，本发明灌肠剂中剂量组有显著性差异(p<0.05)。

二、血流变学实验

1.材料

1.1动物

健康SD大鼠，200g左右，全雌，由贵阳医学院动物实验中心提供。SPF级动物，动物合格证号：SCXK（黔)2002-0001。

1.2药物

复方丹参片：陕西春晖药业有限公司，批号：100102；

盐酸肾上腺素：天津药业集团新郑股份有限公司，批号：0905211；

乌拉坦：北京化学试剂公司，批号：090817；

肝素钠注射液：天津市生物化学制药厂，批号：090716。

1.3仪器

麦迪克全自动血流变仪MDK100。

2方法

2.1动物分组与给药方法

取健康SD种大鼠60只，全雌，体重180~220g，随机分为6组，每组10只。

(l)空白组：灌肠给予0.25ml/100g体重蒸馏水，日一次;

(2)血瘀模型组：灌肠给予0.25ml/100g体重蒸馏水，日一次;

(3)复方丹参片：灌胃给予0.848mg/kg复方丹参片，日一次。

(5)本发明灌肠剂中剂量组：4.5g生药/kg，灌肠给药，日一次。

(6)本发明灌肠剂低剂量组：2.25g生药/kg灌肠给药，日一次。

2.2造模与检测方法

按文献方法，连续给药15天，末次给药后同时皮下注射盐酸肾上腺素(Adr)8g.kg共2次，两次间隔4h，在两次注射盐酸肾上腺素之间(前后各间隔2h)将大鼠浸入冰水内5min(第1组，空白对照组不注射盐酸肾上腺素及冰水浴)，处置后禁食，次晨动物断头取血，肝素钠抗凝，测定血液全血黏度、血浆黏度、红细胞压积。

2.3统计方法:

3结果

表10对血瘀模型大鼠血液流变性的影响（mean士SD，n=10）

注：与空白组比较，*为P<0.05，**为P<0.01;

与模型组比较，)^▲为P<0.05，)^▲▲为P<0.01

结果表明，与空白组相比，模型组的全血粘度的高、中、低切，红细胞压积有显著性升高，说明造模成功。与模型组相比，复方丹参片组、本发明灌肠剂高、中剂量组能够显著降低高、中、低切(P<0.05)和血浆粘度(P<0.05)，降低红细胞压积(P<0.01);本发明灌肠剂低剂量能够显著降低高切、低切、血浆粘度(P<0.05)，但对中切和红细胞压积无显著性改变。

六、讨论

综上实验，本发明灌肠剂有很好的抗炎、镇痛、活血化瘀作用。本发明灌肠剂治疗慢性盆腔炎值得临床推广。

实验例3.协同增效镇痛实验

1材料

1.1动物

健康KM小鼠18一22g，全雌，由贵阳医学院动物实验中心提供。SPF级动物，动物合格证为：SCXK（黔）2002-0001。

1.2实验药物

A组：取丹参30g、三棱30g与莪术30g加10倍量水，煎煮三次，每次1.5小时，合并三次煎煮液，旋转减压浓缩至200mL,10000r/min超速离心30分钟，滤除沉淀，取上清液105℃流通蒸汽灭菌，加入0.8g苯甲酸钠，制成600ml，备用。

B组：取红藤30g、乌药30g与败酱草30g加10倍量水，煎煮三次，每次1.5小时，合并三次煎煮液，旋转减压浓缩至200mL,10000r/min超速离心30分钟，滤除沉淀，取上清液105℃流通蒸汽灭菌，加入0.8g苯甲酸钠，制成600ml，备用。

C组：取丹参30g、三棱30g、莪术30g、红藤30g、乌药30g与败酱草30g加10倍量水，煎煮三次，每次1.5小时，合并三次煎煮液，旋转减压浓缩至200mL,10000r/min超速离心30分钟，滤除沉淀，取上清液105℃流通蒸汽灭菌，加入0.8g苯甲酸钠，制成600ml，备用。

1.3试剂

冰醋酸：成都市恒昌化工有限公司，批号：081209

2方法

2.1动物分组与给药方法

将健康KM小鼠40随机分为4组，每组10只；分别为：

(1)空白组：灌肠给予0.05mL/10g蒸馏水，日一次。

(2)A组：8g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

(3)B组：8g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

(4)C组：16g生药/kg体重，灌肠给药，日一次。

2.2本发明灌肠剂对小鼠的镇痛作用（扭体法）

连续给药10天，末次给药1小时后腹腔注射0.6%冰醋酸生理盐水溶液0.2mL/只，观察各组动物20分钟内扭体的次数。对疼痛的抑制率表示为：抑制率=(空白组平均扭体次数一给药组平均扭体次数)/空白组平均扭体次数*100%

2.3统计方法

3结果

表11对小鼠醋酸扭体的影响（mean士SD，n=10）

注：与空白组相比**(P<0.01)；

3.结论：

3.1结果表明：与空白组比较，C组能显著减少小鼠扭体次数，差异有非常显著性(P<0.01)；A组、B组亦能减少小鼠扭体次数，但与空白组无显著性差异。

3.2本试验采用金式公式法评价了丹参+三棱+莪术，与红藤+乌药+败酱草单独使用以及联合使用后，对小鼠醋酸扭体的影响，结果显示，Q值为1.16，显示药物联用后产生了协同增效的作用。

实验例4.毒性实验

一、急性毒性试验：严格按照国家食品药品监督管理局《中药新药研究技术要求》及卫生部《中药新药药理研究指南》及国家食品药品监督管理局药品审评中心对中药研究指导原则（药品技术审评论坛，2004）要求进行本项实验研究。

经对本发明灌肠剂以最大浓度、最大容积直肠给药的大鼠急性毒性实验，结果本发明灌肠剂直肠给药后受试动物无急性毒性反应，经统计给药量已达生药量120g/kg，相当于临床成人日用量（生药量1g/kg体重）的120倍，提示本发明灌肠剂急性毒性低，临床使用较安全。

二、长期毒性试验：观察雌性大鼠连续13周直肠给予本发明灌肠剂60g、30g、15g生药/kg体重，相当于拟用临床成人日剂量1g生药/kg体重的60倍、30倍、15倍及停药2周。除去各组大鼠体重、摄食逐日增加外，未观察到各组大鼠行为、活动、皮毛、大、小便等明显异常变化，未观察到各组大鼠血液细胞学、血液生化学指标明显变化，未观察到各组大鼠主要器官：心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑组织、子宫、卵巢系数明显差异，同时上述脏器及气管、食管、胃、肠、膀胱、胰腺、视神经、直肠等脏器病理检查未见明显异常反应。

以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。

具体实施方式：

实施例1。

处方：丹参30g、三棱30g、莪术30g、红藤30g、乌药30g、败酱草30g。

工艺：取方中六味中药，加10倍量水，煎煮三次，每次1.5小时，合并三次煎煮液，旋转减压浓缩至200mL,10000r/min超速离心30分钟，滤除沉淀，取上清液105℃流通蒸汽灭菌，加入0.8g苯甲酸钠，制成600ml分装，即得灌肠剂。

规格：每瓶200mL。

用法用量：直肠给药，每日一次，每次200mL。

功效：活血化瘀、温经止痛、散结消症。主治:慢性盆腔炎

实施例2。

处方：丹参20g、三棱20g、莪术40g、红藤40g、乌药40g、败酱草20g。

工艺：根据配方称取方中药物，加12倍量水，煎煮3小时，合并三次煎煮液，旋转减压浓缩,10000r/min超速离心30分钟，滤除沉淀，取上清液105℃流通蒸汽灭菌，加入制成量12%的苯甲酸钠，分装，即得灌肠剂。

规格：每瓶200mL。

用法用量：直肠给药，每日一次，每次200mL。

功效：活血化瘀、温经止痛、散结消症。主治:慢性盆腔炎

实施例3。

处方：丹参40g、三棱40g、莪术20g、红藤20g、乌药20g、败酱草40g。

工艺：所述灌肠剂这样制备：根据配方称取方中药物，加6倍量水，煎煮2次，每次0.5小时，合并三次煎煮液，旋转减压浓缩,10000r/min超速离心30分钟，滤除沉淀，取上清液105℃流通蒸汽灭菌，加入制成量14%的苯甲酸钠，分装，即得灌肠剂。

规格：每瓶200mL。

用法用量：直肠给药，每日一次，每次200mL。

功效：活血化瘀、温经止痛、散结消症。主治:慢性盆腔炎。

Claims

1.一种治疗盆腔炎的药物，其特征在于：按照重量组份计算，由丹参30份、三棱30份、莪术30份、红藤30份、乌药30份、败酱草30份及辅料制备而成。

2.制备权利要求1所述治疗盆腔炎的药物的方法，其特征在于：根据配方称取各药物，按照药学上可接受的工艺进行制备，再加入药学上可接受的辅料，按照常规工艺制备成药学上可接受的药物制剂。

3.如权利要求2所述治疗盆腔炎的药物的方法，其特征在于：根据配方称取各药物，加入6-12倍量水煎煮1-3次，每次0.5-3小时，滤过，合并滤液，浓缩，加入辅料，按照常规工艺制备成药物制剂。

4.如权利要求3所述治疗盆腔炎的药物的方法，其特征在于：所述药物制剂为外用制剂。

5.如权利要求4所述治疗盆腔炎的药物的方法，其特征在于：所述外用制剂为灌肠剂。

6.如权利要求5所述治疗盆腔炎的药物的方法，其特征在于：所述灌肠剂这样制备：根据配方称取方中药物，加10倍量水，煎煮三次，每次1.5小时，合并三次煎煮液，旋转减压浓缩,10000r/min超速离心30分钟，滤除沉淀，取上清液105℃流通蒸汽灭菌，加入制成量12-14%的苯甲酸钠，分装，即得。