CN103816213A - 一种从紫穗槐根中提取药物组合物的制备方法及新医药用途 - Google Patents
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Abstract
本发明首次从新药用资源紫穗槐Amorpha fruticosa L.根中提取分离得到含有异戊烯基双黄酮和异黄酮的药物组合物,并首次证明紫穗槐根药物组合物具有抑制α-葡萄糖苷酶活性及抑制脂肪酶活性,可用于预防和治疗糖尿病及高血脂症作用。本发明同时涉及该药物的药物制剂,可制成口服制剂,如硬胶囊、软胶囊、片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、袋泡茶、药酒。
Description
技术领域
本发明涉及一种从紫穗槐根中提取药物组合物的制备方法及本药物组合物在制备α-糖苷酶抑制剂药物及脂肪酶抑制剂药物中的应用,可用于预防和治疗糖尿病及高血脂症作用。本发明也涉及该药物的药物制剂,属于医药技术领域。
背景技术
糖尿病、高血脂均为代谢性疾病,糖尿病常伴有脂代谢紊乱及高脂血症。目前,代谢性疾病的发病率越来越高,可涉及心、脑、肾、肺、血管、神经、皮肤、眼、耳、足等组织的慢性进行性病变,引起功能缺陷及衰竭,已经严重威胁到人们的正常生活。长期高血糖、高血脂极易诱发糖尿病性心脑血管病变。α-葡萄糖苷酶抑制剂是通过竞争性抑制α-葡萄糖苷酶的活性,可阻滞双糖水解为单糖,延缓糖的吸收,使血糖平稳并缓慢的维持在一定的水平,防治餐后高血糖症,同时还可以提高糖耐量,预防和治疗肥胖症,高三酰甘油血症,用于治疗应碳水化合物紊乱而引起的疾病。脂肪酶抑制剂就是专门用来对付脂肪酶的降脂减肥药。在脂肪酶抑制剂的作用下,脂肪酶将失去部分的分解能力,因而大约有三分之一的脂肪没有被脂肪酶分解,随食渣一起被排出体外。脂肪酶抑制剂就是它能将人摄入的部分脂肪在进入体血液之前就排出了体外,这样可以从脂肪的源头控制脂肪在人体内的聚积。况且,目前还没有副作用小疗效确切的治疗这两种代谢性疾病的天然药物。糖尿病及高血脂症是近年来的常见病,本发明基于本组合物具有抑制α-葡萄糖苷酶及抑制脂肪酶的双重作用,本发明是一种从紫穗槐根中提取的药物组合物,该组合物具有既可以降低血糖又可以防治高血脂症的作用。
紫穗槐Amorpha fruticosa L.为豆科紫穗槐属植物,别名:棉槐、椒条、棉条、穗花槐。为引进品种,目前为止,对紫穗槐的化学成分及药理活性研究主要集中的地上部分,对于地下部分研究较少。李坤报道了紫穗槐果实提取物具有保肝作用(2006年,中医药学刊,第2期,272-273页);姜泓报道了紫穗槐中黄酮类化学成分具有体外抗癌活性(2008年,中药材,第5期,736-738页);Takao K.报道了紫穗槐螺酮、灰叶素和达番醇-O-葡萄糖苷对TPA诱导的EB病毒早期抗原有显著的抑制作用(1993年,Journal of Natural Products,第6期,843-848页);陈蕙芳等报道了紫穗槐苷元对牛痘病毒有一定活性(植物活性成分词典,第一版,第三册);Pekotv E.报道了鱼藤酮,紫穗槐苷,紫穗槐苷元,灰叶素等具有抑制磷酸二酯酶的作用(1983年,Planat Medica,237-239页)。
本发明是从紫穗槐根中提取的药物组合物,在本发明完成之前还没有文献报道关于紫穗槐根提取的组合物的制备方法及医药方面应用的报道,更没有关于本发明药物组合物具有抑制α-葡萄糖苷酶活性及抑制脂肪酶活性的报道。
发明内容
发明目的是提供一种紫穗槐根药物组合物,用于预防和治疗糖尿病及高血脂症的作用。本发明对紫穗槐根的有效成分进行了研究,寻找到了活性更强、实用性强的有效部位,用于糖尿病及高血脂症的预防和治疗。更进一步地,本发明的发明人通过进一步的研究发现,主要由异戊烯基双黄酮及异黄酮组成的组合物在抑制α-葡萄糖苷酶及抑制脂肪酶方面有很强的活性。这种天然的药物组合物是本发明人首次通过实验筛选得到,具有突出的贡献及显著的技术进步。
本发明突出贡献在于:从新药用资源紫穗槐根中富集异戊烯基双黄酮及异黄酮,得到紫穗槐根药物组合物,具有治疗糖尿病及高血脂症的作用。提供一种新药用资源及新医药用途,这是本发明最突出的贡献及最显著的创新性。
本发明首次采用了水浸泡除去皂苷、水溶性多糖、水溶性黄酮等成分,然后利用乙醇提取,提取液不经过浓缩,直接经过聚酰胺柱或大孔树脂柱吸附纯化,解决了乙醇提取液浓缩后具有大量析出物,不利于在树脂柱上吸附纯化的问题。本发明先用水浸泡,除去大量水溶性杂质,然后乙醇提取液通过树脂柱除掉脂溶性杂质成分,也是本发明的创新点之一。
本发明的另一目的是提供一种从紫穗槐根中提取的药物组合物的制备方法,其特征在于:紫穗槐根切片,先用40-70℃去离子水浸泡2-3次,滤过,滤渣用6-10倍量药材重量的60-85%的乙醇回流提取2-3次,每次2-3小时,滤过,滤液通过已处理好的聚酰胺柱或大孔树脂柱,再用60-85%的乙醇洗脱4-6倍柱体积,收集流出液及洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,沉淀干燥,得紫穗槐根药物组合物。优选最佳制备工艺:紫穗槐根切片,先用6倍量60℃去离子水浸泡3次,每次3小时,滤过,滤渣用6倍量药材重量的75%的乙醇回流提取2次,每次3小时,滤过,滤液通过已处理好的大孔树脂柱,再用75%的乙醇洗脱5倍柱体积,收集流出液及洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,沉淀干燥,得紫穗槐根药物组合物。
本发明的另一突出贡献在于,提供一种具有抑制α-葡萄糖苷酶活性及抑制脂肪酶活性的药物组合物,其特征在于:主要由异戊烯基双黄酮及异黄酮组成,组合物中总黄酮含量不低于80%。
为实现以上技术方案,紫穗槐根药物组合物总黄酮含量通过以下方法测定:
对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品10mg,置100ml量瓶中,用甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的制备 取紫穗槐根药物组合物粉末,精密称定50mg,至50ml容量瓶中,加甲醇适量,超声处理20min,取出,放置室温,加甲醇定容至刻度,摇匀,取2ml至25ml容量瓶中,加甲醇定容至刻度即得。
测定法 分别取对照品溶液、供试品溶液、随行空白。照分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录V B),在波长340nm处分别测定吸收度,计算。
紫穗槐根药物组合物(简称组合物)具有抑制α-葡萄糖苷酶的活性及抑制脂肪酶活性,通过以下药效学实验得到证实。
实验原料:本药效学中用到的组合物为本发明人提供。按照实例1制备而成。
本药效学试验中用到的奥利司他胶囊为浙江海正药业股份有限公司 生产(批号为:20120301);阿卡波糖为拜耳医药保健有限公司生产(批号:20120928)。
本药效学试验用的α-葡萄糖苷酶为sigma公司生产(G5003-100UN);大鼠肠内粘膜酶自制;脂肪酶为北京凯泰新世纪生物技术有限公司生产。
1、紫穗槐根药物组合物对α-糖苷酶的抑制作用
1.1标准反应体系 67mmol/L pH为6.8磷酸钾缓冲液150uL,1mg/mL谷胱甘肽溶液50μL,2.5U/mL α-葡萄糖苷酶溶液100μL,37℃保温10min,20mmol/L PNPG溶液100ul,37℃反应20min后加入0.2mol/L Na2CO3溶液400uL终止反应,测定400nm处光吸收值。样品对酶活性的抑制率计算公式:
抑制率(%)=(A对照-A样品)/A对照 ×100% 1.2拜糖平对α-葡萄糖苷酶活性的影响 取研磨后的拜糖平配制成50mg/ml的原溶液,并以此稀释成20.0,10.0,5.0,2.5,1.0,0.2,0.05mg/ml不同浓度。将100ul拜糖平加入到酶反应体系中,先与酶在37℃保温10min,,再加底物反应20min,用Na2CO3溶液终止反应,测定400nm处光吸收值。
1.3紫穗槐根药物组合物对α-葡萄糖苷酶活性的影响 组合物用二甲基亚砜溶解,然后用缓冲液稀释至5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1,0.05 mg/ml,二甲基亚砜于反应体系中终含量﹤1%。将100ul组合物加入到反应体系中,测定组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用。实验结果见表1。
表1紫穗槐根药物组合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
结果表明,拜糖平对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用具有良好的量效关系。组合物在浓度为5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1,0.05,条件下,对α-葡萄糖苷酶的抑制作用存在良好的量效关系,组合物对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用是阳性药拜糖平的2倍以上,对α-葡萄糖苷酶表现出非常强的抑制作用。
2、紫穗槐根药物组合物对大鼠肠内粘膜酶的抑制作用
2.1大鼠肠内粘膜酶的提取
取正常大鼠1只,处死后,立即取出小肠,洗净内容物,按质量体积比1:3加入4℃预冷的0.1mol/L,pH=6.8 PBS,匀浆,4℃、8000 rpm,离心20分钟,取上清液分装入EP管中,-20℃冷冻备用。
2.2紫穗槐根药物组合物对大鼠肠内粘膜酶的抑制作用
2.2.1标准反应体系 67mmol/L pH为6.8磷酸钾缓冲液150uL,1mg/mL谷胱甘肽溶液50μL,大鼠肠内粘膜酶溶液100μL,37℃保温10min,20mmol/L PNPG溶液100ul,37℃反应20min后加入0.2mol/L Na2CO3溶液400uL终止反应,测定400nm处光吸收值。样品对酶活性的抑制率计算公式:
抑制率(%)=(A对照-A样品)/A对照 ×100% 2.2.1拜糖平对大鼠肠内粘膜酶活性的影响 取研磨后的拜糖平配制成50mg/ml的原溶液,并以此稀释成20.0,10.0,5.0,2.5,1.0,0.2,0.05mg/ml不同浓度。将100ul拜糖平加入到酶反应体系中,先与酶在37℃保温10min,再加底物反应20min,用Na2CO3溶液终止反应,测定400nm处光吸收值。
2.2.2紫穗槐根药物组合物对大鼠肠内粘膜酶活性的影响 组合物用二甲基亚砜溶解,然后用缓冲液稀释至5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1,0.05 mg/ml,二甲基亚砜于反应体系中终含量﹤1%。将100ul组合物加入到反应体系中,测定组合物对大鼠肠内粘膜酶的抑制作用。实验结果见表2。
表2紫穗槐根药物组合物对大鼠肠内粘膜酶的抑制作用
结果表明,拜糖平对大鼠肠内粘膜酶活性的抑制作用具有良好的量效关系。组合物在浓度为5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1,0.05,条件下,对大鼠肠内粘膜酶的抑制作用存在良好的量效关系,组合物对大鼠肠内粘膜酶活性的抑制作用是阳性药拜糖平的4倍以上,对大鼠肠内粘膜酶表现出非常强的抑制作用。
3、紫穗槐根药物组合物对脂肪酶的抑制作用
3.1脂肪酶抑制活性的测定
在100mL锥形瓶中加入5mL 0.025mol/L磷酸缓冲液( pH=7.4)和4mL聚乙烯醇三油酸甘油酯底物乳化液(0.229g/mL),置于37℃水浴保温10min,然后加入1mL酶液(2mg/mL),之后再反应15min,加95%乙醇15mL终止酶反应。加酚酞2滴,用0.025mol/LNaOH标准溶液滴定至微红色。空白实验的酶液在反应终止后加入。
3.2 阳性对照药奥利司他对脂肪酶抑制作用
在100mL锥形瓶中加入5mL 0.025mol/L磷酸缓冲液( pH=7.4)和4mL聚乙烯醇三油酸甘油酯底物乳化液(0.229g/mL),分别加入浓度为5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1,0.05mg/ml的阳性对照药1mL,置于37℃水浴保温10min,然后加入1mL酶液(2mg/mL),之后再反应15min,加95%乙醇15mL终止酶反应。加酚酞2滴,用0.025mol/LNaOH标准溶液滴定至微红色。
3.3 紫穗槐根药物组合物对脂肪酶抑制作用
在100mL锥形瓶中加入5mL 0.025mol/L磷酸缓冲液( pH=7.4)和4mL聚乙烯醇三油酸甘油酯底物乳化液(0.229g/mL),分别加入浓度为5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1,0.05mg/ml的紫穗槐组合物1mL,置于37℃水浴保温10min,然后加入1mL酶液(2mg/mL),之后再反应15min,加95%乙醇15mL终止酶反应。加酚酞2滴,用0.025mol/LNaOH标准溶液滴定至微红色。
抑制率=×100%
表3紫穗槐根药物组合物对脂肪酶的抑制作用
结果表明,奥利司他对脂肪酶的抑制作用具有良好的量效关系。组合物在浓度为5.0,2.5,1.0,0.5,0.25,0.1,0.05,条件下,对脂肪酶的抑制作用存在良好的量效关系,组合物对脂肪酶活性的抑制作用较阳性药奥利司他弱。
实施例
本发明是通过如下的实验施例得以实现(证实),但不仅限于本实例。
实例1 紫穗槐根药物组合物的制备方法
紫穗槐根10kg,切片,先用6倍量60℃去离子水浸泡3次,每次3小时,滤过,滤渣用6倍量药材重量的75%的乙醇回流提取2次,每次3小时,滤过,滤液通过已处理好的大孔树脂柱,再用75%的乙醇洗脱5倍柱体积,收集流出液及洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,沉淀干燥,得紫穗槐根药物组合物415g,总黄酮含量为89.6%。
实例2 紫穗槐根药物组合物的制备方法
紫穗槐根10kg,切片,先用8倍量50℃去离子水浸泡3次,每次4小时,滤过,滤渣用8倍量药材重量的85%的乙醇回流提取3次,每次2小时,滤过,滤液通过已处理好的大孔树脂柱,再用85%的乙醇洗脱5倍柱体积,收集流出液及洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,沉淀干燥,得紫穗槐根药物组合物442g,总黄酮含量为82.9%。
Claims (7)
1.一种从紫穗槐根中提取的药物组合物的制备方法,其特征在于:紫穗槐根切片,先用4-10倍量40-70℃去离子水浸泡2-3次,每次1-5小时,滤过,滤渣用6-10倍量药材重量的60-85%的乙醇回流提取2-3次,每次2-3小时,滤过,滤液通过已处理好的聚酰胺柱或大孔树脂柱,再用60-85%的乙醇洗脱4-6倍柱体积,收集流出液及洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,沉淀干燥,得紫穗槐根药物组合物。
2.根据权利要求1所述的紫穗槐根药物组合物制备方法,其特征在于:紫穗槐根切片,先用6倍量60℃去离子水浸泡3次,每次3小时,滤过,滤渣用6倍量药材重量的75%的乙醇回流提取2次,每次3小时,滤过,滤液通过已处理好的大孔树脂柱,再用75%的乙醇洗脱5倍柱体积,收集流出液及洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,沉淀干燥,得紫穗槐根药物组合物。
3.根据权利要求1和2 所述的紫穗槐根药物组合物,其特征在于:总黄酮的含量不少于80%。
4.一种口服药物制剂,其特征在于:含有权利要求1-3中任意一项所述的治疗有效剂量的紫穗槐根药物组合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂。
5.根据权利要求4所述的药物制剂,其特征在于:所述的口服制剂选自片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、混悬剂、滴丸剂、口服液等制剂中的一种。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的紫穗槐根药物组合物,在制备具有α-糖苷酶抑制作用的药物中的应用。
7.根据权利要求1-5任意一项所述的紫穗槐根药物组合物,在制备具有脂肪酶抑制作用的药物中的应用。
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