CN102327368B - 三白草根茎总有效部位及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种三白草根茎总有效部位提取物,它含有三白草根茎总木脂素和总脂肪酸,其重量百分比为10%~90%。本发明还提供了提供一种三白草根茎总有效部位的制备方法和用途。本发明三白草根茎总有效部位提取物可用于制备胰岛素增敏剂类药物制剂,具有良好的胰岛素增敏作用,可将其制成口服片剂、胶囊等多种剂型,适用于胰岛素抵抗相关疾病(如II型糖尿病、高血压、肥胖、非酒精性脂肪肝、心脑血管血栓性疾病)的治疗,具有疗效显著、价格低廉、使用方便等优点。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药提取物及其制备方法和用途,具体地说,涉及一种三白草根茎总有效部位提取物及其制备方法,以及它在制备胰岛素增敏剂类药物制剂中的用途。
背景技术
近20年来,科学研究发现II型糖尿病、高血压、肥胖、非酒精性脂肪肝、心脑血管血栓性疾病属于代谢综合征,其共同基础为胰岛素抵抗。代谢综合征又称为胰岛素抵抗综合征。
随着环境和生活方式的变化,代谢综合征发病率高,增长趋势迅猛。如II型糖尿病,目前发病率比4年前增加30%,全球现有2.5亿患者,我国有4000万,预计2025年全球将达3.8亿,我国达到1亿;又如肥胖症,欧美60%的成人超重,我国超过20%,部分发达地区已达到50%;非酒精性脂肪肝在欧美的发病率超过20%,我国超过10%。代谢综合征的严重后果是心脑血管血栓性疾病,该疾病高居全球死亡原因的首位,全球因该病死亡的人数已达每年2500万。代谢综合征具有发病率、致残率和死亡率高,而其知晓率、就医率及控制率低的特点,已成为社会的沉重负担,严重影响人们的健康和生活质量。
代谢综合征目前缺乏长期有效、副作用少的治疗方法,根据代谢综合征的理论,其治疗策略应针对胰岛素抵抗,以防治动脉粥样硬化为中心;改善胰岛素敏感性,理论上是防治代谢综合征的关键。有关专家指出,胰岛素增敏剂将在II型糖尿病、高血压、非酒精性脂肪肝的治疗中发挥重要作用。目前,胰岛素增敏剂品种很少,以噻唑二烷酮类药物为首选,但这些药物中,有约25%原发性失效及导致肝损害、浮肿、增加体重、骨折、心衰等副作用;又由于这些药物上市不久,其疗效及安全性还有待进一步验证。因此,迫切需要新的胰岛素增敏剂,不损害乃至改善肝肾病变的胰岛素增敏剂尤为重要。
三白草Saururus Chinensis(Lour.)baill是三白草科多年生草本植物,主要分布在我国中南、西南地区,四季均可采收,资源丰富。中国药典(2005)收载的中药三白草为三白草的干燥地上部分,具有清热解毒、利尿消肿之功效,用于小便不利,淋沥涩痛,白带,尿路感染,肾炎水肿;外治疮疡肿毒,湿疹。三白草在韩国等也作为民间常用药物,用于治疗水肿、黄疸、淋病等。三白草提取物方面,叶蕻芝等报道了三白草多糖的降糖作用(叶蕻芝等,三 白草多糖微波提取及其对糖尿病治疗的实验研究.福建中医学院学报,2004;14(6):28-30);.三白草总黄酮提取物具有降糖作用(叶蕻芝等,三白草黄酮类化合物对糖尿病治疗作用的实验研究.福建中医学院学报,2004;14(3):33-36);Chang W.Choi等报道了三白草提取物的抗氧剂活性及自由基清除作用(Plant Science,2002;163:1161-1168);专利CN 1486733公开了三白草提取物在防治前列腺疾病中的用途;专利CN 101234156公开了三白草总黄酮提取物的制备方法;专利CN 101019958公开了三白草总有效部位在制备保肝、抗乳腺增生、尿路感染、盆腔炎等药物中的用途;专利CN 101254253公开了三白草木脂素提取物在制备保肝药品及保健品中的应用。目前已开发出三白草肝炎颗粒、三白草肝炎糖浆等复方保肝中药。活性成分方面,人们已从三白草中分离出挥发油、黄酮、木脂素、生物碱、鞣质等成分,发现其具有抗炎、去毒、降糖、保肝、利尿等活性(Sang Hyun Sung等.Hepatoprotective Diastereomeric Lignans from Saururus chinensis Herbs.J.Nat.Prod,2000;63:1019-1021;Tae Chul Moon等.Mesodihydroguaiaretic acid isolated from Saururus chinensis inhibits cyclooxygenase-2 and 5-lipoxygenase in mouse bone marrow-derived mast cells.Arch Pharm Res,2008;31(5):606-610)。
对于三白草地下部分,即三白草根茎,其化学成分及活性,国外也有较多研究报道。三白草根茎主要含木脂素、二萜类、有机酸类,以及氨基酸、糖类和可水解鞣质等,三白草根茎不含黄酮类成分。其木脂素具有抗氧化、ACAT抑制、抗炎、细胞毒等活性(Woo Song Lee等.Antioxidant activities of a new lignan and a neolignan from Saururus chinensis.Bioorganic& Medicinal Chemistry Letters,2004;14:5623-5628;Woo Song Lee等.Human ACAT-1 and-2 inhibitory activities of saucerneol B,manassantin A and B isolated from Saururus chinensis.Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,2004;14:3109-3112;Bang Yeon Hwang等.Lignans from Saururus chinensis inhibiting the transcription factor NF-κB.Phytochemistry,2003;64:765-771;Chang-Seob Seo等.Lignans from the Roots of Saururus chinensis.J.Nat.Prod.,2008;71:1771-1774);还从中分离到两个呋喃二萜对PPARγ有激动作用(Bang Yeon Hwang等.Two New Furanoditerpenes from Saururus chinenesis and Their Effects on the Activation of Peroxisome Proliferator-Activated Receptorγ.J.Nat.Prod,2002;65:616-617);其中一脂肪酸甘油醇具有脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2,导致冠心病和中风的重要因子)抑制活性(Woo Song Lee等.Lp-PLA2 inhibitory activities of fatty acid glycerols isolated from Saururus chinensis roots.Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,2005;15:3573-3575)。今为止尚未见文献记载或研究报道以木脂素和脂肪酸为活性成分的三白草根茎提取物及 其胰岛素增敏作用。
发明内容
针对现有胰岛素增敏剂药物的缺陷,本发明提供一种具有胰岛素增敏作用的三白草根茎总有效部位提取物及其制备方法,该提取物可作为胰岛素增敏药物应用于胰岛素抵抗相关疾病的治疗及预防。
本发明提供一种三白草根茎总有效部位提取物,其含有三白草根茎总木脂素和总脂肪酸,其重量百分比为10~90%;进一步的,所述的三白草根茎总有效部位提取物中含有总木脂素6%-57%、总脂肪酸4%-33%。。更进一步,其三白草根茎总木脂素和总脂肪酸的总重量百分比为40~90%。
本发明所述的三白草根茎总有效部位提取物中,含有一种或几种具有以下化学结构的木脂素和脂肪酸:
三白草酮
三白脂素
三白脂素A
三白脂素B
三白草醇B
三白草醇D
月桂酸
棕榈酸
正十五烷酸
十八烯酸
所述的三白草根茎总有效部位提取物,是从三白草根茎中提取获得。
本发明还提供上述三白草根茎总有效部位提取物的制备方法,包括以下步骤:
a、将三白草根茎经过适当粉碎后,用甲醇或乙醇,或含水醇类,室温或加热提取1~3小时,可重复提取1~3次,然后滤去药渣,滤液在常压或减压下浓缩至无醇味;
b、将上述提取浓缩液补加适量水后用等体积的乙酸乙酯萃取3~5次,萃取液经减压回收乙酸乙酯后,得浸膏,经真空或冷冻干燥成干粉,得三白草根茎总有效部位提取物。
其中,提取溶剂以50~90%乙醇溶液较好。乙醇溶液用量为药材重量的6~12倍,8倍为佳。以上制备的干粉,为浅黄色固体物质,味微苦。其中所含总木脂素和总脂肪酸之和为总重量的10~90%。
总木脂素的含量采用分光光度法测定,方法如下:
空白溶液的配制:精密吸取10mL甲醇,置于10mL棕色容量瓶中,作为空白溶液。
对照品溶液的配制与标准曲线的制备:精密称取三白脂素B(manassantinB)对照品1mg,置于10mL棕色容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密吸取0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.5mL,置于另一10mL棕色容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液,于282nm波长处测定吸光度A。以对照品溶液的浓度为横坐标(X),以相应的吸光度A为纵坐标(Y),得回归方程:Y=50.911X-0.0027,相关系数γ=0.9997。
供试品溶液的配制:精密称取三白草根茎总有效部位提取物100mg,以 甲醇为溶剂,配制成浓度适宜的溶液,定容,摇匀,作为供试品溶液。
含量测定:取空白溶液、供试品溶液于282nm波长处测定吸光度A。计算三白草根茎总有效部位提取物中总木脂素的含量。
总脂肪酸的含量采用滴定法测定,方法如下:
脂肪酸的浸出:将10g三白草根茎总有效部位提取物样品装入滤纸筒内,滤纸筒口用脱脂棉封好后放入索氏抽提器内,用石油醚在水温约75℃的水浴上抽提4h。回收溶剂。取下已知质量的接收瓶擦干水迹后在103℃干燥箱内干燥至恒重。两次称量结果相差不超过5mg。
测定:用100mL乙醚、95%乙醇等体积混合液洗涤接收瓶。将浸出油全部转移到200mL锥形瓶中,加入1%酚酞指示剂2~3滴,用0.1N碱液(即0.1mol/L氢氧化钾或氢氧化钠95%乙醇标准溶液,需在5d前配制,使用前过滤,用苯二甲酸氢钾准确标定),滴定至溶液呈粉红色(持续1min)记下所用体积V。
结果计算:脂肪酸含量按下式计算:
脂肪酸含量(%)=[(V·C×282)/(1000(m1-m0))]×100%
式中:V-标准碱液的体积,mL;
C-碱液的标定浓度,mol/L;
282-脂肪酸的平均摩尔质量,g/mol;
m1-接收瓶和浸出油质量,g;
m0-接收瓶质量,g。
三白草根茎总有效部位提取物参照文献(Sang Hyun Sung等.NewTetrahydrofuran-Type Sesquilignans of Saururus chinensis Root.Chem.Pharm.Bull.,2001;49(9):1192-1194;李人久等.三白草科植物的化学及药理研究.国外医药-植物药分册,1997;12(5):207)可分离鉴定和制备得到:三白草酮、Verrucosin、三白脂素、三白脂素A、三白脂素B、三白草醇B、三白草醇D等多种木脂素成分,以及月桂酸、棕榈酸、正十五烷酸、十八烯酸等多种脂肪酸成分。
上述三白草根茎总有效部位提取物,用于制备胰岛素增敏剂类药物的药物制剂中,该药物制剂中含有上述三白草根茎总有效部位或为含有三白草根茎总有效部位的复方,即配伍有其它胰岛素增敏剂类的西药或中药活性成分。所述制剂是口服片剂、胶囊、口服液或注射液。
片剂:包括普通片、薄膜片、肠溶片等。用上述总有效部位提取物干粉,加入适量稀释剂如淀粉、糊精、甘露醇、微晶纤维等,适量的粘合剂如水、乙醇、淀粉浆、明胶、纤维素等,适量的崩解剂如干淀粉、羧甲基淀粉钠、海藻酸钠等,以及适量的润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、聚乙二醇等,按常规 湿法制粒,干燥后整粒或干法制粒后压片。如是包薄膜衣片,可用成膜材料如纤维素类、聚乙二醇类等,按常规包衣,分装入密闭瓶或铝塑板中。
胶囊剂:包括普通胶囊剂、肠溶胶囊剂等。将上述总有效部位提取物干粉加入适量辅料如淀粉、碳酸钙、甘露醇、氧化镁、微粉硅胶等,适量润滑剂如滑石粉、硬脂酸镁、乙二醇酯,聚硅酮类等,以及适量的黏合剂如矿物油、食用油等,混合成干粉或制成颗粒,填充入胶囊,分装入密闭铝塑包装中。以上各剂型可加入适量甜味剂,如D-木糖、木糖醇、麦芽糖醇、甜叶菊素、天冬甜母等。
口服液:口服液制备过程中,用上述三白草根茎总有效部位提取物干粉加入药用添加剂,如悬浮剂(如山梨醇糖浆、纤维素衍生物、葡萄糖/蔗糖糖浆、明胶、硬脂酸铝胶或氢化食用脂肪);乳化剂(如卵磷脂、阿拉伯胶或失水山梨醇-油酸酯);非水载体(例如杏仁油、油状酯、乙醇或精炼植物油);以及防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。根据需要,液体制剂还可以含有已知的缓冲剂、矫味剂和芳香成分、染料和甜味剂。
注射液:用上述三白草根茎总有效部位提取物干粉,加入药用辅剂,如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂和/或调节溶液渗透压的试剂,可配制成注射剂,优选肌肉、静脉注射液。
本发明还提供一种药物组合物,其含有三白草根茎总有效部位提取物,或者三白草总有效部位提取物与其它胰岛素增敏剂类西药或中药活性成分配伍成的复方。
按照本发明,可以将上述三白草根茎总有效部位提取物与其它中药和/或其它化学药物共同组成中药复方或中西药复方制剂,并按照常规方法制成口服片剂、胶囊、口服液、注射液等多种剂型。
本发明提取物是三白草根茎提取物,不含有黄酮类成分,含有木脂素和脂肪酸类成分,且由于本发明提取物是三白草根茎部位醇提后的乙酸乙酯萃取成分,不含有多糖类成分。三白草根茎总有效部位提取物具有良好的胰岛素增敏作用,可将其制成口服片剂、胶囊、口服液、注射液等多种剂型,适用于胰岛素抵抗相关疾病(如II型糖尿病、高血压、肥胖、非酒精性脂肪肝、心脑血管血栓性疾病)的治疗,具有疗效显著、价格低廉、使用方便等优点。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1:三白草根茎总有效部位提取物的制备
三白草根茎1000g,粉碎后加甲醇8L,加热回流提取1.5小时,滤渣再加6升甲醇,加热回流提取1小时,过滤。合并两次滤液,真空浓缩得浸膏87g。用2L热水将浸膏溶散,然后用等体积的乙酸乙酯萃取4次,萃取液经减压回收乙酸乙酯后,得浸膏,真空成干粉,得22g三白草根茎总有效部位提取物A,其所含总木脂素和总脂肪酸之和为总有效部位提取物总重量的90%(其中总木脂素占57%,总脂肪酸占33%)。
实施例2:三白草根茎总有效部位提取物的制备
三白草根茎1000g,粉碎后加90%乙醇溶液8L,加热回流提取1.5小时,滤渣再加6升70%乙醇溶液,加热回流提取1小时,过滤。合并两次滤液,浓缩至无醇味。将浓缩液补加适量水后用等体积的乙酸乙酯萃取4次,萃取液经减压回收乙酸乙酯后,得浸膏,真空成干粉,得30g三白草根茎总有效部位提取物B,其所含总木脂素和总脂肪酸之和为总有效部位提取物总重量的62%(其中总木脂素占39%,总脂肪酸占23%)。
实施例3:三白草根茎总有效部位提取物的制备
三白草根茎1000g,粉碎后加70%乙醇溶液8L,加热回流提取1.5小时,滤渣再加6升50%乙醇溶液,加热回流提取1小时,过滤。合并两次滤液,浓缩至无醇味。将浓缩液补加适量水后用等体积的乙酸乙酯萃取4次,萃取液经减压回收乙酸乙酯后,得浸膏,真空成干粉,得43g三白草根茎总有效部位提取物C,其所含总木脂素和总脂肪酸之和为总有效部位提取物总重量的40%(其中总木脂素占24%,总脂肪酸占16%)。
实施例4:三白草根茎总有效部位提取物的制备
三白草根茎1000g,粉碎后加20%乙醇溶液8L,加热回流提取1.5小时,滤渣再加6升20%乙醇溶液,加热回流提取1小时,过滤。合并两次滤液,浓缩至约2L。将浓缩液用等体积的乙酸乙酯萃取4次,萃取液经减压回收乙酸乙酯后,得浸膏,真空成干粉,得58g三白草根茎总有效部位提取物D,其所含总木脂素和总脂肪酸之和为总有效部位提取物总重量的10%(其中总木脂素占6%,总脂肪酸占4%)。
实施例5:片剂的制备
取三白草根茎总有效部位提取物、HPMC、乳糖混匀,以75%乙醇为粘合剂制湿颗粒,过22目筛,50℃干燥3h,22目筛整粒,加入硬脂酸镁混匀压片,每片重0.1g。
实施例6 胶囊剂的制备
胶囊组成:三白草根茎总有效部位提取物 0.5g
淀粉 100g
硬脂酸镁 1g(共制成1000粒)
取三白草根茎总有效部位提取物、淀粉、硬脂酸镁混匀,装胶囊。每粒装100mg。
实施例7 注射液的制备
注射液组成:三白草根茎总有效部位提取物 0.5g
吐温80 10ml
氯化钠 8g(共制成1000ml)
取三白草根茎总有效部位提取物,加10%Na2CO3调pH至7.0-7.5,冷藏滤过,加吐温-80,NaCl,加注射用水至1000ml,G3垂熔漏斗(玻璃)滤过,分装,灌封,100℃流通蒸汽灭菌30min即得。
实施例8 口服液的制备
取三白草根茎总有效部位提取物20g,与蜂蜜300g、蔗糖50g、苯甲酸钠2g及蒸馏水300ml混合,加热至85~90℃,搅拌使溶解,保温30min,滤过,滤液加水稀释至1000ml,搅匀,灌封(每支10ml),灭菌即得。
实施例9 复方片剂的制备
用三白草根茎总有效部位提取物制备复方制剂,取三白草根茎总有效部位提取物0.5g,山药总多糖200g,人参总皂苷200g,按常规方法,加入相应辅料,制成片剂或胶囊,每粒200mg。
以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例1 三白草根茎总有效部位提取物的胰岛素增敏作用
1)样品
A:实施例1制备的三白草根茎总有效部位提取物,含总木脂素和总脂肪酸之和为90%
B:实施例2制备的三白草根茎总有效部位提取物,含总木脂素和总脂 肪酸之和为62%
C:实施例3制备的三白草根茎总有效部位提取物,含总木脂素和总脂肪酸之和为40%
D:实施例4制备的三白草根茎总有效部位提取物,含总木脂素和总脂肪酸之和为10%
2)方法
用含10%FBS的高糖有酚红DMEM培养基在六孔板中培养3T3-L1细胞,至汇合度达90%进行诱导分化,用含10% FBS,Ins,Dex,IBMX的高糖有酚红DMEM培养基诱导,四天后重新消化接种于24孔板,用含10% FBS的高糖有酚红DMEM培养基培养两天。然后再用含10% FBS和较低浓度Ins较高浓度Dex的高糖有酚红DMEM培养基进行诱导胰岛素抵抗,四天后取10μl培养上清,采用试剂盒法检测葡萄糖水平(GIU),确定细胞胰岛素抗性。然后,换用含待测样品的高糖无酚红DMEM培养基,同时设立正常对照(诱导分化后的正常细胞)和模型对照(诱导分化后的胰岛素抗性细胞)不加样品。继续培养50h后取10μl培养上清,转到酶标板中,采用试剂盒法(成都迈克科技公司产品)检测葡萄糖水平,490nM测定OD值。根据OD值计算效应率,增敏率=[1-(OD样品-OD正常)/(OD模型-OD正常)]×100%,阳性对照为罗格列酮。每个样品单个浓度设双复孔,重复两次。
3)结果和讨论
表1 三白草根茎提取物对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗的增敏作用
由表中可以看出,三白草根茎提取物样品A、B、C、D对3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗均有明显改善作用,其胰岛素增敏活性与提取物中的总木脂素和总脂肪酸含量呈正相关。
Claims (11)
1.一种三白草根茎总有效部位提取物,其特征是:含有三白草根茎总木脂素和总脂肪酸,其重量百分比为10%~90%。
2.根据权利要求1所述的三白草根茎总有效部位提取物,其特征是:它含有总木脂素6%-57%、总脂肪酸4%-33%。
3.根据权利要求1或2所述的三白草根茎总有效部位提取物,其特征是:三白草根茎总木脂素和总脂肪酸的总重量百分比为40~90%。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的三白草根茎总有效部位提取物,其特征是:从三白草Saururus Chinensis(Lour.)baill根茎中提取获得。
6.一种制备权利要求1-5任一项所述的三白草根茎总有效部位提取物的制备方法,包括以下步骤:
a、将三白草根茎经过适当粉碎后,用甲醇或乙醇,或含水醇类,室温或加热提取1~3小时,可重复提取1~3次,然后滤去药渣,滤液在常压或减压下浓缩至无醇味;
b、将上述提取浓缩液补加适量水后用等体积的乙酸乙酯萃取3~5次,萃取液经减压回收乙酸乙酯后,得浸膏,经真空或冷冻干燥成干粉,得三白草根茎总有效部位提取物。
7.权利要求1-5任意一项所述的三白草根茎总有效部位提取物在制备胰岛素增敏剂类药物制剂中的用途。
8.根据权利要求7所述的用途,其特征在于:所述的药物是预防和治疗II型糖尿病、高血压、肥胖、非酒精性脂肪肝、心脑血管血栓性疾病等胰岛素抵抗相关疾病的药物。
9.根据权利要求7或8所述的三白草根茎总有效部位提取物的用途,其特征在于:所述的药物制剂含有权利要求1、2任一项所述的三白草根茎总有效部位的提取物。
10.根据权利要求7-9任意一项所述的三白草根茎总有效部位提取物的用途,其特征在于:所述的药物制剂为口服片剂、胶囊、口服液或注射液。
11.一种药物组合物,其特征在于:其含有权利要求1-5任一项所述的三白草根茎总有效部位提取物。
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