CN103798362B - 盐酸特比萘芬在柑橘采后防腐保鲜中的应用 - Google Patents

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张立
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Abstract

本发明公开了盐酸特比萘芬在柑橘采后防腐保鲜中的应用,其过程是将柑橘果实浸泡在50-150mg/l盐酸特比萘芬溶液中2-5min,再按常规贮藏方式贮藏即可。盐酸特比萘芬毒性小,用量少,通过使果实自身积累抗氧化物质角鲨烯以及抗菌物质法尼醇,提高果实抗性,保持果皮的新鲜程度,有效地延长了果实贮藏保鲜能力。同时,短期贮藏时,经处理果实的Vc含量显著高于对照果实,长期贮藏后,经处理的果实品质总体均高于对照果实。本发明尤其适用于本身不积累角鲨烯和法尼醇的柑橘栽培品种,同时实现防腐和保鲜的效果。

Description

盐酸特比萘芬在柑橘采后防腐保鲜中的应用
技术领域
本发明属于水果采后贮藏保鲜剂领域,具体涉及盐酸特比萘芬在柑橘采后防腐保鲜中的应用。
背景技术
柑橘是世界及我国南方的第一大水果,但果实在贮藏过程中逐渐衰老,抗性降低,引起大量烂果。尽管目前存在多种柑橘防腐保鲜剂,但大多都有毒性,存在安全隐患,且不能同时达到防腐和保鲜的效果。因此,找到一种无毒、高效,同时实现防腐和保鲜两种功效的药剂对柑橘产业的发展具有重要意义。目前柑橘常用的杀菌剂为咪酰胺、抑霉唑以及双胍盐等,这些药剂主要通过富集在果实体内,直接杀死病原菌。2,4-D作为一种常用的保鲜剂,在柑橘中也得到广泛的应用。但这些药剂在国际上存在不同程度的争议。
针对以上问题,申请人通过对比柑橘五大栽培品种类型成熟果实表面蜡质成分,测定并分析纽荷尔脐橙、温州蜜柑和椪柑成熟果皮组织脂类物质,最终找到了一种安全无毒的柑橘防腐保鲜剂--盐酸特比萘芬。在医学上,盐酸特比萘芬因其能干扰真菌细胞膜中麦角固醇的合成,达到杀灭和抑制真菌的作用,被广泛地用于抗真菌药,其作为植物防腐保鲜剂,诱导植物自身产生抗性,还未见报道。
发明内容
本发明目的是在于提供了盐酸特比萘芬在柑橘采后防腐保鲜中的应用,中文名:盐酸特比萘芬;英文名:terbinafine hydrochloride;分子式:C21H25N.HCl;分子量:327.90;CAS号:78628-80-5。分子式如下:
该药剂用量少,安全,效果明显,同时实现采后防腐和保鲜。本药品适用于夏橙、温州蜜柑和椪柑等。
为了达到上述目的,本发明采取以下技术措施:
本发明通过以下技术方案实现,其具体步骤是:
本发明的发明思路如下:本实验室通过对比柑橘五大栽培品种成熟果实表面蜡质成分,发现纽荷尔脐橙、沙田柚以及柠檬蜡质中法尼醇和角鲨烯明显积累,而在宽皮柑橘类果实椪柑和温州蜜柑中并不积累。进一步的,申请人提取了纽荷尔脐橙、温州蜜柑和椪柑成熟果皮其他组织脂类物质并进行测定,发现法尼醇和角鲨烯在纽荷尔脐橙有色层中大量积累,在白皮层中含量则很低,而温州蜜柑和椪柑果皮中则没有这些物质。因此申请人采用角鲨烯环氧合酶的专一抑制剂盐酸特比萘芬对柑橘进行处理,诱导果实果皮积累角鲨烯和法尼醇,以达到保鲜的目的。
盐酸特比萘芬在柑橘采后防腐保鲜中的应用,其应用过程如下:
1、选择完全达到商业采收成熟度,果实大小、色泽一致、健康无瑕疵的成熟柑橘果实,清洗果面灰尘等杂质;
2、配制浓度为50-150mg/l的盐酸特比萘芬溶液,浸果2-5min;
3、果实晾干后,单果套袋贮藏。
如上所述的方案中,步骤2)中盐酸特比萘芬的最佳浓度是80mg/l,最佳浸果时间为3min.
与现有技术相比,本发明具有以下优点和效果:
本发明通过盐酸特比萘芬处理柑橘成熟果实实验证实了盐酸特比萘芬能有效地提高柑橘防腐保鲜能力,证实其在柑橘采后处理中的应用前景。同时,盐酸特比萘芬是一种无毒的化学试剂,价格便宜,用量少,在临床上已经使用多年,因此,可确定其安全性。这是国内外首次将该试剂应用于柑橘果实采后处理中。该药品尤其适用于本身不积累角鲨烯和法尼醇的柑橘栽培品种,因为角鲨烯主要存在于油类丰富的器官中,而柑橘果皮油胞中积累大量的油类物质,利于角鲨烯体内的贮藏。该药品同时实现防腐和保鲜的效果。
盐酸特比萘芬能有效地提高柑橘贮藏保鲜能力,而且是通过果皮中积累的角鲨烯和法尼醇有达到该效果。因此,在不积累这些物质的柑橘品种中,我们可以通过角鲨烯环氧化酶专一抑制剂盐酸特比萘芬处理果实模拟部分自身积累的品种,进而达到防腐保鲜的能力。
附图说明
图1为角鲨烯体外抑制指状青霉菌实验示意图。
CK:0g/l(sq/正己烷),S1:50g/l,S2:150,S3:200g/l。
图2法尼醇和角鲨烯体内抑菌示意图
A:法尼醇体内抑菌对照;
B:法尼醇体内抑菌处理;
C:角鲨烯体内抑菌对照;
D:角鲨烯体内抑菌处理。
图3为特比萘芬处理后果皮积累角鲨烯含量示意图。
A:夏橙对照果皮有色层角鲨烯色谱图;
B:夏橙处理后果皮有色层角鲨烯色谱图;
C:温州蜜柑对照果皮有色层角鲨烯色谱图;
D:温州蜜柑处理后果皮有色层角鲨烯色谱图;
黑框标记为角鲨烯GC-MS出峰时间。
图4为特比萘芬处理后果实外观示意图。
A:对照用0.5‰无水乙醇处理果实贮藏5个月;
B:80mg/l盐酸特比萘芬处理果实后贮藏5个月。
具体实施方式
本发明利用利用GC-MS(气相色谱质谱联用)(Theromofisher,ISQ)测定果皮中角鲨烯和法尼醇以及完整果实表面蜡质含量;手持测糖仪(ATAGO PAL-1,日本,单位:Brix%)测定可溶性固形物;采用酸碱中和滴定法测定果实可滴定酸含量;采用2,6-二氯酚靛酚法测定果实维生素C含量。所得试验数据应用SAS软件ANOVA程序作差异显著性测验(P<0.05)。
实施例1:
盐酸特比萘芬在柑橘采后防腐保鲜中的应用,其应用过程是:
1、选择夏橙成熟果实,清洗果面灰尘等杂质;
2、配制盐酸特比萘芬溶液,称取1.60g盐酸特比萘芬固体粉末,加入10ml无水乙醇溶解粉末,将此溶解液倒入20L水中;对照组则只加入10ml溶剂无水乙醇于20L水中。
3、将果实完全浸入以上溶液中处理3min;
4、自然晾干,用厚度为0.02mm聚乙烯薄膜果袋单果包装,将供试材料分成2份,两种贮藏方式进行贮藏:
1)常规通风库贮藏,用于统计果实品质、蜡质、果面新鲜程度、果皮含水量以及腐烂率等差异;
2)用塑料袋密封后进行通风库贮藏,用于观察果面新鲜程度,统计失水率以及腐烂率;
结果如下:
表1对照组和盐酸特比萘芬处理贮藏30d后生理品质差异
表2对照组和盐酸特比萘芬处理贮藏60d后生理品质差异
在常规通风库贮藏下,贮藏30d后,对照和处理果实的可固、可滴定酸、果皮含水量以及出汁率等品质指标没有显著性差异,处理果实的Vc含量显著高于对照果实(见表1)。
贮藏60d后,处理组的果实可滴定酸、果皮含水量以及出汁率等品质指标均显著高于对照组,可固和Vc相对对照组果实差异不显著(见表2)。
以上数据说明该处理在长期贮藏后提高了果实品质。
在通风换气较好的第一种贮藏方式下,贮藏150d后,对照果实腐烂率为35%,处理组果实腐烂率为28%,不仅显著降低了果实腐烂率,果皮新鲜程度也更高(图4)。
在换气较差的第二种贮藏方式下,尽管果实失水率差异不显著,但在120d,对照果实腐烂率100%,而处理后的果实则腐烂率为0%。
这是由于该贮藏方式下,果实不能很好地与外界进行气体交换,更多产生自由基等损害物质,导致果实最终腐烂。GC-MS分析发现,常规通风库贮藏方式下,处理和对照果实在贮藏过程中蜡质均没有积累角鲨烯和法尼醇。但处理后果皮有色层中法尼醇和角鲨烯含量是对照的10倍左右(见表1和表2)。果皮中这些积累的角鲨烯能有效清除自由基和携氧能力(Naziri等.Enhanced Squalene Production by Wild-Type Saccharomyces cerevisiae StrainsUsing Safe Chemical Means,J Agric Food Chem,2011,59(18):9980-9989),有效延长了果实寿命,在缺氧的环境下,这种效果就更加明显。因此,该试验表明盐酸特比萘芬处理对长期放置在通风散气不是非常好的贮藏库非常有效。
实施例2:
本发明分别在体外和果实体内接种指状青霉菌,观察腐烂率以及菌丝生长状况。由于法尼醇在体外有着显著的抑菌效果(Liu,P等,Farnesol induces apoptosis and oxidative stress inthe fungal pathogen Penicillium expansum,Mycologia,2010,102(2):311-318),因此未对法尼醇只进行体外抑菌实验
体外抗菌(见图1)
1配制PDA培养基,待其冷至50℃以下时,加入5ml3.8×106CFU/ml的指状青霉菌孢子悬浮液;
2用打孔器打孔,加入50ul0,50,150,200g/l角鲨烯(溶剂为正己烷)。
3将皿放置于28℃培养,观察孔周围抑菌圈的大小。
体内抑菌(见图2)
1果实表面消毒:将夏橙成熟果实用自来水清洗干净,在2%NaClO溶液中浸泡2min,再用蒸馏水润洗3遍,晾干。
2接种:在果实赤道部对称均匀打约4mm深,3mm宽小孔,每孔接种5ul1×105CFU/ml的青霉菌。再在果实一面的孔中加入对照溶剂(法尼醇对照为0.1%甲醇水溶液,角鲨烯对照为溶剂正己烷),果实的另一面孔中加入角鲨烯或法尼醇溶液。并做好标记,在处理的一面用黑线标记出来。
3发病观察:薄膜覆盖,保湿RH90%~95%,室温(30℃)并防止与其他处理的果实交叉感染。
结果表明:法尼醇体内也能显著抑制指状青霉生长,而角鲨烯无论体外或者体内抑菌效果均不明显。因此,盐酸特比萘芬处理后,法尼醇在果皮中的积累能有效地抑制指状青霉菌的生长,而角鲨烯则没有直接的抗菌作用,但是它可通过清除自由基从而保持果皮的新鲜程度。
实施例3:
盐酸特比萘芬在柑橘采后防腐保鲜中的应用,其应用过程是:
1、选择温州蜜柑果实,清洗果面灰尘等杂质;
2、配制盐酸特比萘芬溶液,称取1.60g和3.20g盐酸特比萘芬固体粉末,加入10ml无水乙醇溶解粉末,将此溶解液倒入20L水中;
3、将果实完全浸入其中处理3min;
4、晾干后不套袋常温保存,贮藏过程中比较对照(对照的处理同实施例1)和不同浓度处理果实新鲜程度以及腐烂率,并用GC-MS测定果实表面蜡质以及果皮脂质成分。
5、对照和处理果实品质差异不显著,贮藏120d后,对照果实腐烂率为20%,处理组果实腐烂率为11.7%,显著降低了果实腐烂率,果皮新鲜程度也更高。与夏橙相似,果实蜡质成分以及含量没有显著差异,但果皮中大量累积角鲨烯和法尼醇(图3)。不同浓度处理没有显著差异,因此,用低浓度处理即可。
结论:通过对两种柑橘品种夏橙以及温州蜜柑,申请人发现盐酸特比萘芬处理果实后,该药物通过抑制果皮中鲨烯环氧化酶,使果皮油胞中积累角鲨烯和法尼醇,从而提高果实抗性,提高保鲜和抗病能力。该药品适用于柑橘果实,尤其是自身果皮不积累角鲨烯和法尼醇的品种如温州蜜柑、椪柑以及夏橙等。

Claims (3)

1.盐酸特比萘芬在制备柑橘采后防腐保鲜剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,其应用过程是将柑橘浸泡在50-150mg/l盐酸特比萘芬溶液中2-5min。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于:所述的盐酸特比萘芬为有效浓度为80mg/l的溶液。
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