CN103792229B - 一种铅离子浓度检测方法及试剂盒 - Google Patents

一种铅离子浓度检测方法及试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种溶液中铅离子浓度的检测方法及试剂盒。所述方法包括：将待测液体样品加入含有菁染料溶液和能够形成G-四链体的DNA分子的样本溶液中，混合后得测试溶液样本，然后利用可根据溶液颜色的变化判断测试溶液样本中铅离子浓度的技术，进而检测出液体样品中铅离子的浓度。本发明提供的检测方法及试剂盒所涉及的反应体系成分简单，反应体系本身可带有大量的钠离子，反应也简单，铅离子是整个反应的“引发剂”，保证了检测的精确度、测试灵敏度高，特异性好，精确度好。

Description

一种铅离子浓度检测方法及试剂盒
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体而言涉及一种铅离子浓度检测方法及试剂盒。
背景技术
铅是一种具有神经毒性的重金属元素,在人体内无任何生理功用,其理想的血铅浓度为零。然而,由于环境中铅的普遍存在,绝大多数人体中均存在一定量的铅,铅在体内的量超过一定水平就会对健康引起难以恢复的损害。人体血铅检测是了解人体铅污染的的最佳途径。
现有技术中测定铅离子浓度的方法主要有：双硫腙络合比色法、原子吸收分光光度法、溶出伏安法。
双硫腙络合比色法是早期广泛使用的一种测铅方法。主要原理是样品经消化后，在pH8.5-9.0时，铅离子与双硫腙生成红色络合物，溶于三氯甲烷，加入柠檬酸铵，氰化钾和盐酸羟胺等，防止铁、铜、锌等离子干扰，与标准系列比较定量。该法繁琐、费时，所用试剂氰化钾和三氯甲烷毒性大，影响人体健康。
原子吸收光谱法主要包括火焰原子吸收光谱法、石墨炉无焰原子吸收光谱法、氢化物发生原子吸收光谱法。其中火焰原子吸收光谱法测定铅的灵敏度较低,直接用于测定试样中微量铅，提高灵敏度是关键。石墨炉原子吸收光谱法测定铅具有很高的灵敏度。但由于铅是低温易挥发性元素，对实际样品的分析,基体干扰往往比较严重。需要选用合适的基体改进剂,以提高铅的灰化温度，减少其挥发损失，或增加基体的挥发性。氢化物发生法是一种低温原子化法，铅的氢化物生成反应只有在氧化剂或螯合剂存在下才有较高的效率。
阳极溶出伏安法：铅离子在一定的还原电位下，被还原富集在工作电极上，之后工作电极电位从负向正快速扫描，当电极电位达到电极上金属的氧化电位时，金属被氧化而产生氧化电流，在一定的实验条件下，氧化电流峰与铅的浓度成正比，依此原理进行定量分析。溶出伏安法特性：通过控制还原电位和扫描电位范围，溶出伏安法可一次测多个金属；而通过控制富集时间、扫描速率、电解质等实验条件，可改变测量的灵敏度。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种用于检测液体样品中铅离子浓度的方法。
所述方法包括以下步骤：将待测液体样品加入含有菁染料溶液和能够形成G-四链体的DNA分子的样本溶液中，混合后得测试溶液样本，然后利用可根据溶液颜色的变化判断测试溶液样本中铅离子浓度的技术，进而检测出液体样品中铅离子的浓度。
所述方法为非疾病诊断目的的方法。
所述方法中，所述DNA分子的核酸序列中含有下述核苷酸序列：
GGYGGZGGMGG
其中：Y、Z和M独立地代表一个或多个任意碱基。
所述方法中，所述DNA分子的核酸序列可选自以下序列：
5’-GGGTAGGGCGGGTTGGG-3’；5’-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3’；5’-GGGTGGGTGGGTGGGT-3’；5’-TGGGTAGGGCGGGTTGGG-3’；5’-GGGTTGGGCGGGATGGG-3’；5’-GGGTTGGGCGGGATGGGTG-3’；5’-TGGGTGGGTGGGTGGG-3’；5’-GGGTGGGTGGGTGGGTT-3’。
所述DNA分子为单链。
所述方法中，所述菁染料为式I的化合物，
其中：R为O；n为3或4或5或6。
所述方法中，所述样本溶液的溶剂选自pH值为6.2-8.2的缓冲溶液；优选的，所述样本溶液的溶剂选自pH值为6.2、7.0、7.2或8.2的缓冲溶液；所述测试溶液样本中，所述DNA分子的浓度为：0.05-30μmol/L；优选1-10μmol/L；再优选1.8或3或9μmol/L；所述测试溶液样本中，所述菁染料的浓度为：1-30μmol/L；优选3-20μmol/L；再优选3或9或18μmol/L
所述缓冲溶液选自Tris-HCl缓冲、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液液、硼酸-硼砂缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸钠-磷酸氢钠缓冲液、磷酸钾-磷酸氢钾缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液或磷酸钠缓冲液。
所述Tris-HCl缓冲液中可含1mMKCl。
所述Tris-HCl缓冲、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液液、硼酸-硼砂缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的浓度为1mM～10mM；优选2mM～10mM；再优选5mM～10mM。
所述菁染料溶液的溶剂选自甲醇或DMSO。
所述菁染料溶液中菁染料的浓度为100μM～1.2mM；优选200μM～1.2mM；再优选200μM～600μM。
所述方法中，所述技术包括下述1）或2）：
1）肉眼观察法：
比较测试溶液样本的颜色与各标准溶液样本的颜色，测试溶液样本中的铅离子浓度即为颜色最接近的标准溶液样本中的铅离子浓度；将所得的测试溶液样本中的铅离子浓度除以稀释度，即得相应的待测液体样品中的铅离子浓度；
2）光谱仪检测法：
利用光谱仪检测各标准溶液样本的吸光度，并绘制标准曲线；利用光谱仪检测测试溶液样本的吸光度后，根据测试溶液样本的吸光度值在上述标准曲线上即可找到对应的测试溶液样本中的铅离子浓度值；将所得的测试溶液样本中的铅离子浓度除以稀释度，即得相应的待测液体样品中的铅离子浓度；
所述稀释度为待测液体样品与测试溶液样本的体积比值；
所述标准溶液样本为将不同量的Pb(NO3)2溶液加入含有菁染料溶液和能够形成G-四链体的DNA分子的样本溶液中，混合后并用与样本溶液的溶剂一样的溶剂定容后，所得的一系列具有浓度梯度的已知铅离子浓度的溶液。
所述标准曲线的绘制方法具体可为：以各标准溶液样本的吸光度值，或变换波长收集范围后检测得到共2个吸光度值的比值为纵坐标，以各标准溶液样本的铅离子浓度为横坐标做图，即得标准曲线。
所述光谱仪具体可为紫外吸收光谱仪或荧光光谱仪。
采用所述紫外吸收光谱仪检测时，收集的吸收光波长范围为550nm-650nm或450nm-549nm；优选的，收集的吸收光波长具体为590nm、584nm、580nm、540nm或500nm，采用所述荧光光谱仪检测时，激发波长为560nm，收集的吸收光波长范围为570～650nm；优选的，所述收集的吸收光波长具体为580nm或630nm。
本发明的另一个目的是提供一种检测液体样品中铅离子浓度的试剂盒，包括菁染料、能够形成G-四链体的DNA分子和pH值为6.2-8.2的缓冲溶液。
本发明的还一个目的是提供能够形成G-四链体的DNA分子、菁染料或所述试剂盒在检测液体样品中铅离子浓度或制备检测液体样品中铅离子浓度的产品中的应用。
所述试剂盒或所述应用中，所述DNA分子的核酸序列中含有下述核苷酸序列：
GGYGGZGGMGG
其中：Y、Z和M独立地代表一个或多个任意碱基，G代表鸟嘌呤碱基。
所述DNA分子的核酸序列可选自以下序列：
5’-GGGTAGGGCGGGTTGGG-3’；5’-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3’；5’-GGGTGGGTGGGTGGGT-3’；5’-TGGGTAGGGCGGGTTGGG-3’；5’-GGGTTGGGCGGGATGGG-3’；5’-GGGTTGGGCGGGATGGGTG-3’；5’-TGGGTGGGTGGGTGGG-3’；5’-GGGTGGGTGGGTGGGTT-3’；
所述DNA分子为单链。
所述试剂盒或所述应用中，所述菁染料为式I的化合物，
其中：R为O；n为3或4或5或6。
优选的，所述缓冲溶液选自pH值为6.2、7.0、7.2或8.2的缓冲溶液。
所述缓冲溶液选自Tris-HCl缓冲、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液液、硼酸-硼砂缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸钠-磷酸氢钠缓冲液、磷酸钾-磷酸氢钾缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液或磷酸钠缓冲液。
所述Tris-HCl缓冲液中可含1mMKCl。
所述Tris-HCl缓冲、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液液、硼酸-硼砂缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液的浓度为1mM～10mM；优选2mM～10mM；再优选5mM～10mM。
所述菁染料在使用前可用甲醇或DMSO配制成菁染料的甲醇或DMSO溶液。
所述菁染料的甲醇或DMSO溶液中，菁染料的浓度为100μM～1.2mM；优选200μM～1.2mM；再优选200μM～600μM。
所述试剂盒还包括标准溶液样本，所述标准溶液样本为将不同量的含铅化合物溶液加入含有菁染料溶液和能够形成G-四链体的DNA分子的样本溶液中，混合后并用与样本溶液的溶剂一样的溶剂定容后，所得的一系列具有浓度梯度的已知铅离子浓度的溶液。
所述标准溶液样本中铅离子浓度的范围优选在0至10mg/L的范围；所述菁染料在样溶液本中的浓度在1至30μmol/L的范围；所述DNA分子在样本溶液中的浓度在0.05至30μmol/L的范围。
本发明的还一个目的是提供一种式I所示的化合物：
其中式I中：R为O；n为3或4或5或6；
或，式Ⅴ所示的化合物：
其中式Ⅴ中：n为3或4或5或6；Ts为对甲苯璜酰基。
本发明的再一个目的是提供所述式I化合物的制备方法，包括以下步骤：
1）2-甲基-苯并噻唑和化合物1在150℃加热过夜；反应产物以二氯甲烷和甲醇为溶剂通过硅胶色谱柱纯化得到化合物4；
所述二氯甲烷和甲醇的体积比优选为7:1；
所述硅胶优选100-200目；
所述过夜具体为12h；
2）化合物3和4溶于乙醇，再加入三乙胺，加热回流3小时后自然冷却至室温；反应产物过滤后，以二氯甲烷和甲醇为溶剂通过硅胶色谱柱纯化，然后在甲醇中重结晶，即得；
所述室温具体为26-30℃；优选27℃；
所述二氯甲烷和甲醇的体积比优选为20:1-7:1；
所述硅胶优选100-200目；
所述重结晶具体为重结晶2次；
所述化合物1、3和4分别依次为式Ⅱ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物：
其中式Ⅱ和式Ⅴ中：n为3或4或5或6；Ts为对甲苯璜酰基。
本发明提供的溶液中铅离子浓度的检测方法及试剂盒的有益效果包括：
反应体系成分简单，反应也简单，铅离子是整个反应的“引发剂”，保证了检测的精确度。
反应体系本身可带有大量的钠离子，这种情况可保证样本中钠离子所能引起的环境的变化忽略不计。
使用菁染料超分子探针，反应灵敏度高，有颜色变化，可实现肉眼观测。
总之，实验证明本发明的测定方法，完全可以通过紫外吸收光谱仪或荧光光谱仪，测定出样本中铅离子的浓度水平，测试灵敏度高，特异性好，精确度好。同时，还可通过溶液颜色的变化，用肉眼判断铅离子浓度水平的高低。此外，本发明提供的铅离子检测试剂盒，稳定性好，长时间存放之后仍然能够准确检测各种类型样品中铅离子的含量。
附图说明
图1为实施例1得出的铅离子浓度标准曲线。
图2为实施例2得出的铅离子浓度标准曲线。
图3为实施例3得出的铅离子浓度标准曲线。
图4为实施例4得出的铅离子浓度标准曲线。
图5为实施例5得出的铅离子浓度标准曲线。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中所用铅标准溶液购自阿拉丁试剂公司，浓度为1000μg/mL，介质为1%硝酸。
下述实施例中所用的血清样本1-4和尿液样本1-4获自解放军307医院，均是在患者的知情同意下进行下述检测的。
下述实施例中所用的菁染料化合物TC-P3的结构式如式I-1所示：
其中式I-1中：R为O；n为3。
菁染料化合物TC-P3的具体制备方法如下：
1）将聚合度为3的聚（乙二醇）（0.5mM）加入对甲基苯磺酰氯(1mM)，溶解于10ml二氯甲烷中冰浴，加入氢氧化钾(4mM)反应1小时，得到化合物1（收率70%)；
2）2-甲基萘并[1,2-d]噻唑(10.0mmol)和1,3-丙磺酸内酯(12.3mmol)混合后在140℃下密封加热过夜（具体为12h）。反应产物用丙酮冲洗后在甲醇中重结晶得到化合物2（收率84.7%)；
3）化合物2(6.2mmol)和N,N′-二苯基甲脒(12.1mmol)加入无水醋酸(10mL)加热回流3小时。溶剂通过旋转蒸发仪除去。反应产物以二氯甲烷/甲醇(体积比为20:1)为溶剂通过硅胶色谱柱(100-200目)纯化得到黄色固体产物化合物3(收率54%)；
4）2-甲基-苯并噻唑(7.0mmol)和化合物1（1.8mmol）在150℃加热过夜。反应产物以二氯甲烷/甲醇(体积比为7:1)为溶剂通过硅胶色谱柱(100-200目)纯化得到化合物4(收率85%)；
5）化合物3(0.16mmol)和4(0.32mmol)溶于乙醇(5mL)，再加入三乙胺（0.38mmol），加热回流3小时后自然冷却至室温（具体为27℃）。反应产物过滤后，以二氯甲烷/甲醇(体积比为20:1-7:1)为溶剂通过硅胶色谱柱(100-200目)纯化，然后在甲醇中重结晶两次，得到最终产物TC-P3(收率30%)。
上述菁染料化合物TC-P3的合成过程中，所得化合物1-4分别依次为式Ⅱ-1、式Ⅲ、式Ⅳ和式Ⅴ-1所示的化合物：
其中式Ⅱ-1和式Ⅴ-1中：n为3；Ts为对甲苯璜酰基。
下述实施例中所用的菁染料化合物TC-P4、TC-P5和TC-P6的具体制备方法同TC-P3，不同的是将原料聚合度为3的聚（乙二醇）分别替换为聚合度为4、5或6的聚（乙二醇）。所得菁染料化合物TC-P4、TC-P5和TC-P6的结构式如式I-2所示：
其中式I-2中：R为O；当式I-2为TC-P4时，n为4；当式I-2为TC-P5时，n为5；当式I-2为TC-P6时，n为6。
上述菁染料化合物TC-P4、TC-P5和TC-P6的合成过程中，相应的，所得中间体化合物1和4分别为式Ⅱ-2或式Ⅴ-2所示的化合物：
其中式Ⅱ-2和式Ⅴ-2中：Ts为对甲苯璜酰基；当原料为聚合度为4的聚（乙二醇），终产物为TC-P4时，n为4；当原料为聚合度为5的聚（乙二醇），终产物为TC-P5时，n为5；当原料为聚合度为6的聚（乙二醇），终产物为TC-P6时，n为6。
以上菁染料化合物合成过程所用原料，如无特别说明，均可购自Sigma公司。
下述实施例中所用的能够形成G-四链体的DNA单链均购自上海英骏生物技术有限公司。
实施例1、血清样本中铅离子浓度的检测
在本实施例中使用的能够形成G-四链体的DNA单链的核苷酸序列为5’-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3’；
血清样本中铅离子浓度的检测过程如下：
（一）制备标准溶液样本和测试溶液样本
1）DNA母液的配制：将具有上述核苷酸序列的单链DNA分子溶解于含1mMKCl的pH值6.2的10mMTris-HCl缓冲液中，制备成DNA浓度为200μmol/L的DNA母液，备用。
2）样本溶液的配制：取浓度为200μmol/LTC-P3的甲醇溶液300μL，加入17.4ml含1mMKCl的Tris-HCl缓冲液（pH值6.2）,然后再加入步骤1）配制好的DNA母液300μL混匀，即为配制好的样本溶液；把上述样本溶液平均分成10份，每份样本溶液为1.8mL。
3）标准溶液样本的配制：取步骤2）配制好的其中6份样本溶液，分别加入一定量的浓度为0.8mg/L的Pb(NO3)2水溶液，然后用水定容至2mL，得到铅离子的浓度分别为0、5、10、25、50、80μg/L的标准溶液样本。
4）测试溶液样本的配制：取步骤2）配制好的另外4个样本溶液，分别加入含Pb2+浓度依次分别为58μg/L、131μg/L、96μg/L、253μg/L的血清样本1-4各200μL，得到4个测试溶液样本，血清样本体积占测试溶液样本总体积的10%。
以上步骤3）和步骤4）配制的标准溶液样本和测试溶液样本于阴暗处放置、备用。
（二）检测分析
检测过程如下述1)或2）所述：
1）肉眼观察上述标准溶液样本和测试溶液样本颜色的变化。
2）将上述标准溶液样本和测试溶液样本分别利用紫外吸收光谱仪进行分析。
上述1)或2）的检测过程均在室温环境下进行，不需额外条件。
（三）结果分析
1）肉眼观察结果分析：
标准溶液样本的颜色如下：0-80μg/L的标准溶液样本的颜色，随着Pb(NO3)2浓度的增加从红色逐渐转变为无色。
将测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色进行比较，根据测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色接近程度，可判断出测试溶液样本中的Pb2+浓度，即测试溶液样本中的Pb2+浓度与其颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度接近，然后将该颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度除以稀释度10%，即得相应的血清样本中的Pb2+浓度。
按上述方法，可判断血清样本1铅离子浓度在50μg/L左右，血清样本2铅离子浓度在100μg/L左右，血清样本3铅离子浓度在100μg/L左右，血清样本4铅离子浓度在250μg/L左右。该结果与血清样本的实际浓度接近。
2）紫外吸收光谱仪结果分析
以标准溶液样本在584nm处的吸光度（A1）为纵坐标，以标准溶液样本的铅离子浓度为横坐标做图，得到铅离子浓度的标准曲线，如图1所示。
用测试溶液样本的584nm处的吸光度可以在图1的标准曲线上找到对应的测试溶液样本中的铅离子浓度值，将该值除以稀释度10%，即得到血清样本的铅离子浓度值，结果见表1。
表1
本发明方法检测结果（μg/L） 实际浓度（μg/L）
血清样本1 53 58
血清样本2 120 131
血清样本3 89 96
血清样本4 241 253
实施例2、血清样本中铅离子浓度的检测
在本实施例中使用的能够形成G-四链体的DNA单链的核苷酸序列为5’-GGGTAGGGCGGGTTGGG-3’；
血清样本中铅离子浓度的检测过程如下：
（一）制备标准溶液样本和测试溶液样本
1）DNA母液的配制：将具有上述核苷酸序列的单链DNA分子溶解于10mMpH值为8.2的硼酸-硼砂缓冲液中，制备成浓度为200μmol/L的DNA母液，备用。
2）样本溶液的配制：取浓度为600μmol/LTC-P4的DMSO溶液300μL，加入19.2ml的硼酸-硼砂缓冲液（pH值8.2）,然后再加入步骤1）配制好的DNA母液300μL混匀，即为配制好的样本溶液；把上述样本溶液平均分成10份，每份样本溶液为1.98mL。
3）标准溶液样本的配制：取步骤2）配制好的其中6份样本溶液，分别加入一定量的浓度为800μg/L的Pb(NO3)2水溶液，然后用水定容至2mL，得到铅离子的浓度分别为0、0.5、1、2.5、5、8μg/L的标准溶液样本。
4）测试溶液样本的配制：取步骤2）配制好的另外4个样本溶液，分别加入含Pb2+浓度依次分别为58μg/L、131μg/L、96μg/L、253μg/L的血清样本1-4各20μL，得到4个测试溶液样本，血清样本体积占测试溶液样本总体积的1%。
以上步骤3）和步骤4）配制的标准溶液样本和测试溶液样本于阴暗处放置、备用。
（二）检测方法
检测过程如下述1)或2）所述：
1）肉眼观察上述标准溶液样本和测试溶液样本颜色的变化。
2）将上述标准溶液样本和测试溶液样本分别利用紫外吸收光谱仪进行分析。
上述1)或2）的检测过程均在室温环境下进行，不需额外条件。
（三）结果分析
1）肉眼观察结果分析：
标准溶液样本的颜色如下：0-8μg/L的标准溶液样本的颜色，随着Pb2+浓度的增加从红色逐渐转变为无色。
将测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色进行比较，根据测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色接近程度，可判断出测试溶液样本中的Pb2+浓度，即测试溶液样本中的Pb2+浓度与其颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度接近，然后将该颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度除以稀释度1%即得相应的血清样本中的Pb2+浓度。
按上述方法，可判断血清样本1铅离子浓度在50μg/L左右，血清样本2铅离子浓度在100μg/L左右，血清样本3铅离子浓度在100μg/L左右，血清样本4铅离子浓度在250μg/L左右。该结果与血清样本的实际浓度接近。
2）紫外吸收光谱仪结果分析
以标准样本溶液在580nm处的吸光度与540nm处吸光度的比值（A1/A2）为纵坐标，以标准样本溶液的铅离子浓度为横坐标做图，得到铅离子浓度的标准曲线，如图2所示。
用测试溶液样本的580nm处的吸光度与540nm处吸光度的比值可以在图2的标准曲线上找到对应的测试溶液样本中的铅离子浓度值，将该值除以1%即得血清样本的铅离子浓度值，结果见表2。
表2
本发明方法检测结果（μg/L） 实际浓度μg/L
血清样本1 52 58
血清样本2 126 131
血清样本3 87 96
血清样本4 245 253
实施例3、尿液样本中铅离子浓度的检测
在本实施例中使用的能够形成G-四链体的DNA单链的核苷酸序列为5’-GGGTGGGTGGGTGGGT-3’；
尿液样本中铅离子浓度的检测过程如下：
（一）制备标准溶液样本和测试溶液样本
1）DNA母液的配制：将具有上述核苷酸序列的单链DNA分子溶解于2mM的pH值为7.2的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液中，制备成浓度为600μmol/L的DNA母液，备用。
2）样本溶液的配制：取浓度为1.2mmol/LTC-P5的DMSO溶液300μL，加入17.4ml的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液（pH值7.2）,然后再加入步骤1）配制好的DNA母液300μL混匀，即为配制好的样本溶液；把上述样本溶液平均分成10份，每份样本溶液为1.8mL。
3）标准溶液样本的配制：取步骤2）配制好的其中6份样本溶液，分别加入一定量的浓度为600μg/L的Pb(NO3)2水溶液，然后用水定容至2mL，得到铅离子的浓度分别为0、5、10、20、40、60μg/L的标准溶液样本。
4）测试溶液样本的配制：取步骤2）配制好的另外4个样本溶液，分别加入含Pb2+浓度依次分别为17μg/L、43μg/L、80μg/L、127μg/L的尿液样本1-4各200μL，得到4个测试溶液样本，尿液样本体积占测试溶液样本总体积的10%。
以上步骤3）和步骤4）配制的标准溶液样本和测试溶液样本于阴暗处放置、备用。
（二）检测方法
检测过程如下述1)或2）所述：
1）肉眼观察上述标准溶液样本和测试溶液样本颜色的变化。
2）将上述标准溶液样本和测试溶液样本分别利用紫外吸收光谱仪进行分析。
上述1)或2）的检测过程均在室温环境下进行，不需额外条件。
（三）结果分析
1）肉眼观察结果分析：
标准溶液样本的颜色如下：0-60μg/L的标准溶液样本的颜色，随着Pb2+浓度的增加从红色逐渐转变为无色。
将测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色进行比较，根据测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色接近程度，可判断出测试溶液样本中的Pb2+浓度，即测试溶液样本中的Pb2+浓度与其颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度接近，然后将该颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度除以稀释度10%即得相应的尿液样本中的Pb2+浓度。
按上述方法，可判断尿液样本1铅离子浓度在20μg/L左右，尿液样本2铅离子浓度在50μg/L左右，尿液样本3铅离子浓度在100μg/L左右，尿液样本4铅离子浓度在130μg/L左右。该结果与尿液样本的实际浓度接近。
2）紫外吸收光谱仪结果分析
以标准样本在540nm处的吸光度（A2）为纵坐标，以标准样本的铅离子浓度为横坐标做图，得到铅离子浓度的标准曲线，如图3所示。
用测试溶液样本的540nm处的吸光度值可以在图3的标准曲线上找到对应的测试溶液样本中的铅离子浓度值，将该值除以10%即得尿液样本的铅离子浓度值，结果见表3。
表3
本发明方法检测结果（μg/L） 实际浓度μg/L
尿液样本1 15 17
尿液样本2 38 43
尿液样本3 74 80
尿液样本4 120 127
实施例4、尿液样本中铅离子浓度的检测
在本实施例中使用的能够形成G-四链体的DNA单链的核苷酸序列为5’-GGGTTGGGCGGGATGGG-3’；
尿液样本中铅离子浓度的检测过程如下：
（一）制备标准溶液样本和测试溶液样本
1）DNA母液的配制：将KCl、具有上述核苷酸序列的单链DNA分子溶解于10mM的pH值为7.0的Tris-HCl缓冲液中，制备成DNA浓度为120μmol/L、KCl浓度为1mM的DNA母液，备用。
2）样本溶液的配制：取浓度为200μmol/LTC-P6菁染料的甲醇溶液300μL，加入19.2ml的Tris-HCl缓冲液（pH值7.0）,然后再加入步骤1）配制好的DNA母液300μL混匀，即为配制好的样本溶液；把上述样本溶液平均分成10份，每份样本溶液为1.98mL。
3）标准溶液样本的配制：取步骤2）配制好的其中6份样本溶液，分别加入一定量的浓度为200μg/L的Pb(NO3)2水溶液，然后用水定容至2mL，得到铅离子的浓度分别为0、0.2、0.5、1、1.5、2μg/L的标准溶液样本。
4）测试溶液样本的配制：取步骤2）配制好的另外4个样本溶液，分别加入含Pb2+浓度依次分别为17μg/L、43μg/L、80μg/L、127μg/L的尿液样本1-4各20μL，得到4个测试溶液样本，尿液样本体积占测试溶液样本总体积的1%。
以上步骤3）和步骤4）配制的标准溶液样本和测试溶液样本于阴暗处放置、备用。
（二）检测方法
检测过程如下述1)或2）所述：
1）肉眼观察上述标准溶液样本和测试溶液样本颜色的变化。
2）将上述标准溶液样本和测试溶液样本分别利用荧光光谱仪进行分析，荧光光谱激发波长为560nm。
上述1)或2）的检测过程均在室温环境下进行，不需额外条件。
（三）结果分析
1）肉眼观察结果分析：
标准溶液样本的颜色如下：0-2μg/L的标准溶液样本的颜色，随着Pb2+浓度的增加从红色逐渐转变为无色。
将测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色进行比较，根据测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色接近程度，可判断出测试溶液样本中的Pb2+浓度，即测试溶液样本中的Pb2+浓度与其颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度接近，然后将该颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度除以稀释度1%即得相应的尿液样本中的Pb2+浓度。
按上述方法，可判断尿液样本1铅离子浓度在20μg/L左右，尿液样本2铅离子浓度在50μg/L左右，尿液样本3铅离子浓度在100μg/L左右，尿液样本4铅离子浓度在130μg/L左右。该结果与尿液样本的实际浓度接近。
2）荧光光谱仪结果分析
以标准样本在580nm处的荧光强度（FI）为纵坐标，以标准样本的铅离子浓度为横坐标做图，得到铅离子浓度的标准曲线，如图4所示。
用测试溶液样本的580nm处的荧光强度值可以在图4的标准曲线上找到对应的测试溶液样本中的铅离子浓度值，将该值除以1%即得尿液样本的铅离子浓度值，结果见表4。
表4
本发明方法检测结果（μg/L） 实际浓度μg/L
尿液样本1 15 17
尿液样本2 39 43
尿液样本3 76 80
尿液样本4 120 127
实施例5、水溶液样本中铅离子浓度的检测
在本实施例中使用的能够形成G-四链体的DNA单链的核苷酸序列为5’-TGGGTGGGTGGGTGGG-3’；
水溶液样本中铅离子浓度的检测过程如下：
（一）制备标准溶液样本和测试溶液样本
1）DNA母液的配制：将具有上述核苷酸序列的单链DNA分子溶解于5mM的pH值为6.2的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中，制备成DNA浓度为200μmol/L的DNA母液，备用。
2）样本溶液的配制：取浓度为200μmol/LTC-P4的甲醇溶液300μL，加入9.4ml的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（pH值6.2）,然后再加入步骤1）配制好的DNA母液300μL混匀，即为配制好的样本溶液；把上述样本溶液平均分成10份，每份样本溶液为1mL。
3）标准溶液样本的配制：取步骤2）配制好的其中6份样本溶液，分别加入一定量的浓度为20mg/L的Pb(NO3)2水溶液，然后用水定容至2mL，得到铅离子的浓度分别为0、2、4、6、8、10mg/L的标准溶液样本。
4）测试溶液样本的配制：取步骤2）配制好的另外4个样本溶液，分别加入含Pb(NO3)2浓度依次分别为1mg/L、2mg/L、5mg/L、8mg/L的水溶液样本1-4各1mL，得到4个测试溶液样本，水溶液样本体积占测试溶液样本总体积的50%。
以上步骤3）和步骤4）配制的标准溶液样本和测试溶液样本于阴暗处放置、备用。
（二）检测方法
检测过程如下述1)或2）所述：
1）肉眼观察上述标准溶液样本和测试溶液样本颜色的变化。
2）将上述标准溶液样本和测试溶液样本分别利用紫外吸收光谱仪进行分析。
上述1)或2）的检测过程均在室温环境下进行，不需额外条件。
（三）结果分析
1）肉眼观察结果分析：
标准溶液样本的颜色如下：0-10mg/L的标准溶液样本的颜色，随着Pb2+浓度的增加从红色逐渐转变为无色。
将测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色进行比较，根据测试溶液样本的颜色与标准溶液样本的颜色接近程度，可判断出测试溶液样本中的Pb2+浓度，即测试溶液样本中的Pb2+浓度与其颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度接近，然后将该颜色最接近的标准溶液样本中的Pb2+浓度除以稀释度50%即得相应的水溶液样本中的Pb2+浓度。
按上述方法，可判断水溶液样本1铅离子浓度在1mg/L左右，水溶液样本2铅离子浓度在2mg/L左右，水溶液样本3铅离子浓度在5mg/L左右，水溶液样本4铅离子浓度在8mg/L左右。该结果与水溶液样本的实际浓度接近。
2）紫外吸收光谱仪结果分析
以标准样本在580nm处的吸光度（A1）为纵坐标，以标准样本的铅离子浓度为横坐标做图，得到铅离子浓度的标准曲线，如图5所示。
用测试溶液样本的584nm处的吸光度值可以在图5的标准曲线上找到对应的测试溶液样本中的铅离子浓度值，将该值除以50%即得水溶液样本的铅离子浓度值，结果见表5。
表5
本发明方法检测结果（μg/L） 实际浓度μg/L
水溶液样本1 956 1000
水溶液样本2 1926 2000
水溶液样本3 4893 5000
水溶液样本4 7548 8000

Claims (15)

1.一种用于检测液体样品中铅离子浓度的方法，所述方法包括以下步骤：将待测液体样品加入含有菁染料溶液和能够形成G-四链体的DNA分子的样本溶液中，混合后得测试溶液样本，然后利用可根据溶液颜色的变化判断测试溶液样本中铅离子浓度的技术，进而检测出液体样品中铅离子的浓度；所述方法为非疾病诊断目的的方法；
所述菁染料为式I的化合物，
其中：R为O；n为3或4或5或6。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述DNA分子的核酸序列中含有下述核苷酸序列：
GGYGGZGGMGG
其中：Y、Z和M独立地代表一个或多个任意碱基。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述DNA分子的核酸序列选自以下序列：
5’-GGGTAGGGCGGGTTGGG-3’；5’-GTGGGTAGGGCGGGTTGG-3’；5’-GGGTGGGTGGGTGGGT-3’；5’-TGGGTAGGGCGGGTTGGG-3’；5’-GGGTTGGGCGGGATGGG-3’；5’-GGGTTGGGCGGGATGGGTG-3’；5’-TGGGTGGGTGGGTGGG-3’；5’-GGGTGGGTGGGTGGGTT-3’。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：
所述样本溶液的溶剂选自pH值为6.2-8.2的缓冲溶液；
所述测试溶液样本中，所述DNA分子的浓度为：0.05-30μmol/L；所述测试溶液样本中，所述菁染料的浓度为：1-30μmol/L；
所述缓冲溶液选自Tris-HCl缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸钠-磷酸氢钠缓冲液、磷酸钾-磷酸氢钾缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液或磷酸钠缓冲液；
所述菁染料溶液的溶剂选自甲醇或DMSO；所述菁染料溶液中菁染料的浓度为100μM～1.2mM。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述样本溶液的溶剂选自pH值为6.2、7.0、7.2或8.2的缓冲溶液。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述测试溶液样本中，所述DNA分子的浓度为1-10μmol/L。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述测试溶液样本中，所述DNA分子的浓度为1.8或3或9μmol/L。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述测试溶液样本中，所述菁染料的浓度为3-20μmol/L。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述测试溶液样本中，所述菁染料的浓度为3或9或18μmol/L。
10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述技术包括下述1)或2)：
1)肉眼观察法：
比较测试溶液样本的颜色与各标准溶液样本的颜色，测试溶液样本中的铅离子浓度即为颜色最接近的标准溶液样本中的铅离子浓度；将所得的测试溶液样本中的铅离子浓度除以稀释度，即得相应的待测液体样品中的铅离子浓度；
2)光谱仪检测法：
利用光谱仪检测各标准溶液样本的吸光度，并绘制标准曲线；利用光谱仪检测测试溶液样本的吸光度后，根据测试溶液样本的吸光度值在上述标准曲线上即可找到对应的测试溶液样本中的铅离子浓度值；将所得的测试溶液样本中的铅离子浓度除以稀释度，即得相应的待测液体样品中的铅离子浓度；
所述稀释度为待测液体样品与测试溶液样本的体积比值；
所述标准溶液样本为将不同量的Pb(NO3)2溶液加入含有菁染料溶液和能够形成G-四链体的DNA分子的样本溶液中，混合后并用与样本溶液的溶剂一样的溶剂定容后，所得的一系列具有浓度梯度的已知铅离子浓度的溶液。
11.一种检测液体样品中铅离子浓度的试剂盒，包括菁染料、能够形成G-四链体的DNA分子和pH值为6.2-8.2的缓冲溶液；
所述菁染料为式I的化合物，
其中：R为O；n为3或4或5或6。
12.权利要求11所述的试剂盒在检测液体样品中铅离子浓度或制备检测液体样品中铅离子浓度的产品中的应用。
13.一种式I所示的化合物：
其中式I中：R为O；n为3或4或5或6。
14.式Ⅴ所示的化合物：
其中式Ⅴ中：n为3或4或5或6；Ts为对甲苯璜酰基。
15.权利要求13所述式I所示的化合物的制备方法，包括以下步骤：
1)2-甲基-苯并噻唑和化合物1在150℃加热过夜；反应产物以二氯甲烷和甲醇为溶剂通过硅胶色谱柱纯化得到化合物4；
2)化合物3和4溶于乙醇，再加入三乙胺，加热回流3小时后自然冷却至室温；反应产物过滤后，以二氯甲烷和甲醇为溶剂通过硅胶色谱柱纯化，然后在甲醇中重结晶，即得；
所述化合物1、3和4分别依次为式Ⅱ、式Ⅳ和式Ⅴ所示的化合物：
其中式Ⅱ和式Ⅴ中：n为3或4或5或6；Ts为对甲苯璜酰基。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104020165B (zh) * 2014-06-16 2017-02-15 河南省科学院生物研究所有限责任公司 一种测量尿液中含铅量的试剂及其快速检测方法
US10145825B2 (en) 2015-10-12 2018-12-04 Hong Kong Baptist University Luminescent Iridium(III) complex and its uses thereof for the G-quadruplex-based switch-on rapid detection of lead ions
US10151699B2 (en) 2015-10-12 2018-12-11 Hong Kong Baptist University Development of lead ion testing paper with naked-eye observable readout for ten min on-site detection
CN105548170B (zh) * 2016-01-08 2018-08-07 昆明泊银科技有限公司 一种铅离子检测试纸及其制备方法和使用方法
CN107632158A (zh) * 2016-07-18 2018-01-26 中国科学院化学研究所 测定样品中半胱氨酸的方法及试剂盒
CN109799197B (zh) * 2017-11-17 2021-06-25 中国科学院化学研究所 菁染料在检测铅离子中的用途、铅离子检测试剂盒及方法
CN109839359B (zh) * 2018-07-30 2020-04-28 四川大学 一种用于检测Pb2+浓度的试剂盒及检测方法
CN109100339B (zh) * 2018-07-30 2020-03-10 四川大学 用于选择性检测Pb离子和Ag离子浓度的试剂盒及检测方法
CN109100313B (zh) * 2018-07-30 2020-04-28 四川大学 检测Pb离子和Ni离子的试剂盒、检测方法及浓度测定方法
CN108732165A (zh) * 2018-08-15 2018-11-02 山东五洲检测有限公司 一种检测食品中铅含量的试剂及其制备方法
CN114371164A (zh) * 2021-12-08 2022-04-19 成都理工大学 一种基于四聚体DNA染料诱导金纳金聚集的Pb2+和Tl+可视化检测方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102866148A (zh) * 2012-06-18 2013-01-09 中国科学院化学研究所 钾离子浓度检测方法
CN103245652A (zh) * 2013-05-16 2013-08-14 上海交通大学 利用功能核酸形成g-四联体淬灭荧光检测铅离子的方法
CN103305622A (zh) * 2013-06-28 2013-09-18 上海交通大学 利用非标记功能核酸形成g-四联体荧光法检测铅的方法
CN103399062A (zh) * 2013-08-01 2013-11-20 台州学院 一种基于光电化学传感的Pb2+超灵敏检测新方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102866148A (zh) * 2012-06-18 2013-01-09 中国科学院化学研究所 钾离子浓度检测方法
CN103245652A (zh) * 2013-05-16 2013-08-14 上海交通大学 利用功能核酸形成g-四联体淬灭荧光检测铅离子的方法
CN103305622A (zh) * 2013-06-28 2013-09-18 上海交通大学 利用非标记功能核酸形成g-四联体荧光法检测铅的方法
CN103399062A (zh) * 2013-08-01 2013-11-20 台州学院 一种基于光电化学传感的Pb2+超灵敏检测新方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Lead(II)-Induced Allosteric G-Quadruplex DNAzyme as a Colorimetric and Chemiluminescence Sensor for Highly Sensitive and Selective Pb2+ Detection;Tao Li et al;《Anal. Chem》;20100215;第82卷(第4期);第1515-1520页 *
基于G-四联体的纳米探针比色检测铅离子;莫志宏等;《高等学校化学学报》;20101130;第31卷(第11期);第2181-2183页 *

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