CN107632158A - 测定样品中半胱氨酸的方法及试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提出了一种测定样品中半胱氨酸的方法及试剂盒，该检测方法包括：首先，在存在诱导剂的条件下，将所述样品、DNA分子和菁染料进行混合，以便获得检测混合物，所述诱导剂适于诱导所述DNA分子形成G‑四链体结构；再对所述检测混合物进行吸光度和圆二色性至少之一的检测；基于所述检测的结果，最终确定所述样品中含有半胱氨酸的浓度。本发明所提出的测定样品中半胱氨酸的方法及试剂盒，能够高效、灵敏、快捷地测定出样品中半胱氨酸的浓度，可以实现可视化检测等效果，操作简单且测试成本低廉。

Description

测定样品中半胱氨酸的方法及试剂盒

技术领域

本发明涉及检测领域，具体的，本发明涉及一种测定样品中半胱氨酸的方法及试剂盒。

背景技术

半胱氨酸，是一种含有巯基的常见氨基酸，在人体的许多生理过程中起到重要的作用，因此广泛地被应用于生物医药和食品等领域。另外，人体中半胱氨酸的含量出现异常，会导致各种疾病的产生，所以精准地检测半胱氨酸的浓度在临床诊断和观察细胞功能方面具有重要的应用。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题至少之一。

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

本发明的发明人在研究过程中发现，现有技术中测定半胱氨酸浓度的方法主以高效液相色谱法和荧光偏振免疫检测法为主。高效液相法(HPLC)，多采用柱前衍生化荧光技术进行检测，但是由于衍生化处理例如溴化二胺衍生化的产物较多会产生较多杂峰，需要进行柱后衍生化处理，操作较为复杂且十分耗时。荧光偏振免疫检测法(FPIA)价格昂贵而在短期内不宜普及使用。本发明的发明人经过深入研究发现，半胱氨酸能够诱导DNA的G-四链体构象发生变化，进一步改变DNA与菁染料的结合能力，从而使菁染料在吸收光谱和圆二色谱的特征信号出现相应的变化。

有鉴于此，本发明的一个目的在于提出一种能够高效、灵敏或快捷地测定样品中半胱氨酸的方法。

在本发明的第一方面，本发明的一个目的在于提出一种测定样品中半胱氨酸的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：(1)在存在诱导剂的条件下，将所述样品、DNA分子和菁染料进行混合，以便获得检测混合物，所述诱导剂适于诱导所述DNA分子形成G-四链体结构；(2)对所述检测混合物进行吸光度和圆二色性至少之一的检测；(3)基于所述检测的结果，确定所述样品中含有半胱氨酸的浓度。

发明人意外地发现，采用本发明实施例的检测方法，通过半胱氨酸诱导DNA的G-四链体构象发生变化，进一步改变DNA与菁染料的结合能力，从而使菁染料在吸收光谱和圆二色谱的特征信号出现相应的变化。由此，本发明的检测方法能够高效、灵敏、快捷地测定出样品中的半胱氨酸，通过比色和偏光两种方法可以实现可视化检测，检测体系成分简单，操作便捷且测试成本低廉。

本发明的发明人意外地发现，在银离子存在的环境下，DNA分子被银离子诱导形成稳定的G-四链体，G-四链体能够解聚菁染料J-聚集体，在吸收光谱和圆二色谱上表现出菁染料的单体和H-聚集体的特征；加入半胱氨酸后，半胱氨酸能够与银离子结合，进而使G-四链体解聚成双链螺旋结构，随着G-四链体的解聚而DNA分子不能再使菁染料J-聚集体解聚，从而菁染料在吸收光谱和圆二色谱上表现出J-聚集体的特征。因此，根据菁染料在吸收光谱和圆二色谱上的信号变化，可以定量地检测样品中半胱氨酸的浓度水平。

另外，根据本发明上述实施例的测定样品中半胱氨酸的方法，还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，所述样品包括但不限于尿液。发明人意外地发现，本发明的方法能够有效地应用于尿液等样品。通常而言，尿液中的成分复杂，通过常用的分析手段例如HPLC等会有大量的噪音数据，导致无法精准地检测半胱氨酸的浓度。

根据本发明的实施例，所述样品中半胱氨酸的含量不超过50微摩尔/升，优选不超过20微摩尔/升。发明人通过深入研究发现，当样品中半胱氨酸的含量不超过50微摩尔/升，优选不超过20微摩尔/升时，在应用于本发明实施例的方法时，半胱氨酸含量与检测结果之间存在线性关系，由此，能够进一步高效、灵敏、快捷地测定出样品中半胱氨酸的浓度，可以实现可视化检测，操作简单且测试成本低廉。

根据本发明的实施例，所述DNA分子具有选自

5’-GGGTACGCTCTTCAAAAGAAGACCCTACCCAAAGGGTAGGGCGGGTTGGGA-3’(SEQ ID NO：1)、

5’-AGGGACGGGACCCCCCCCCAAAACCGCCCGCCTGTGGAGGGT-3’(SEQ ID NO：2)和

5’-TTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGGAGGGAGGGAGGGAGGGA-3’(SEQ ID NO：3)至少之一的核苷酸序列。

本领域技术人员能够理解的是，DNA分子含有几组鸟嘌呤碱基G的重复序列，通过DNA分子内或分子间的四个鸟嘌呤碱基G的相互作用，可以平面堆叠成一种特殊的二级结构即G-四链体结构。发明人经过研究发现，DNA分子的序列对于本发明实施例的检测方法的检测效率会有显著的影响。为了进一步提高根据本发明实施例的检测方法的效率，发明人经过实验筛选获得了上述DNA分子，从而能够高效、灵敏、快捷地测定出样品中的半胱氨酸，可以实现可视化检测，操作简单且测试成本低廉。

根据本发明的实施例，所述检测混合物中，所述DNA分子的浓度为0.2-50微摩尔/升，优选为0.5-30微摩尔/升，更优选为1-10微摩尔/升。根据本发明的实施例，在步骤(1)中，所述诱导剂携带银离子、钾离子和钠离子的至少之一。根据本发明的实施例，所述银离子是由可溶性银盐提供的，所述银盐为选自硝酸银、醋酸银和氟化银的至少之一。根据本发明的实施例，所述检测混合物中银离子的浓度为1-100微摩尔/升，优选2-50微摩尔/升，更优选5-30微摩尔/升。本发明的发明人经过深入研究发现，DNA分子的浓度、诱导剂的类型以及诱导剂的浓度会显著地影响根据本发明实施例的检测方法的检测效率。本发明人经过多次实验发现，通过采用上述条件能够进一步高效、灵敏、快捷地测定出样品中的半胱氨酸，可以实现可视化检测，操作简单且测试成本低廉。

根据本发明的实施例，所述菁染料具有下列结构：

关于该菁染料的制备和详细描述，参见Chemical Communication,2016,52,7302-7305；Analyst,2015,140,7170-7174，在此不再赘述。

根据本发明的实施例，所述检测混合物中菁染料的浓度为2-30微摩尔/升，优选2-20微摩尔/升。由此，能够进一步高效、灵敏、快捷地测定出样品中半胱氨酸的浓度，可以实现可视化检测，操作简单且测试成本低廉。本领域技术人员能够理解的是，菁染料作为一类异常灵敏的感光物质，起初常用于照相化学领域，同时在生物分析领域也是分析检测中一种主要的荧光探针，具有较高的灵敏性和响应性。

发明人发现，通过采用上述菁染料，菁染料J-聚集体能够以G-四链体为手性模板，转化形成有手性信号的H-聚集体和单体，同时在吸收光谱上表现出H-聚集体和单体的吸收信号。因此，以菁染料的超分子聚集体为探针的识别基团，反应灵敏度高。由此，能够高效、灵敏、快捷地测定出样品中的半胱氨酸，可以实现可视化检测，操作简单且测试成本低廉。

根据本发明的实施例，所述检测混合物进一步包括：缓冲液，所述缓冲液的pH为6.2-8.2，优选6.8-8.0，更优选7.4。由此，能够进一步高效、灵敏、快捷地测定出样品中半胱氨酸的浓度，可以实现可视化检测，操作简单且测试成本低廉。

根据本发明的实施例，所述缓冲液为选自三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液的至少之一。由此，能够进一步高效、灵敏、快捷地测定出样品中半胱氨酸的浓度，可以实现可视化检测，操作简单且测试成本低廉。

根据本发明的实施例，在所述步骤(3)中，通过外标法能够确定所述样品中半胱氨酸的浓度。由此，能够进一步高效、灵敏、快捷地测定出样品中半胱氨酸的浓度，可以实现可视化检测，操作简单且测试成本低廉。

本领域技术人员能够理解的是，可采用多种不同的谱图数据处理方法获得样本中半胱氨酸的浓度，例如本实施例选择的外标法，先对一系列已知浓度的半胱氨酸标准溶液进行检测并绘制出标准曲线，再检测并获得待测样本的色谱图，将所测样品的色谱信号响度与标准曲线对比，即可推算出待测样品中的半胱氨酸浓度。由此，能够高效、灵敏、快捷地测定出样品中半胱氨酸的浓度。

在本发明的第二方面，本发明的一个目的在于提出一种检测样本中半胱氨酸的试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括：菁染料；DNA分子，所述DNA分子适于形成G-四链体结构；以及诱导剂，所述诱导剂适于诱导所述DNA分子形成所述G-四链体结构；任选地，所述试剂盒进一步包括缓冲液，所述缓冲液为选自三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液的至少之一。其中，所述菁染料、所述DNA分子、所述缓冲液和所述诱导剂是如本发明第一方面中任一项所述的。

发明人意外地发现，采用本发明实施例检测样品中半胱氨酸的试剂盒，能够从19种与半胱氨酸结构相似的其他氨基酸中特异性地识别出半胱氨酸，成本低廉，操作简单，通过将试剂盒中3～4种试剂按比例混合即可高效、灵敏、快捷地进行检测，并且各试剂成分简单、种类少、稳定性好而利于试剂盒的长时间储存，同时该检测体系在缓冲液中操作而不会污染环境。根据本发明的实施例，所述菁染料、所述DNA分子、所述诱导剂和所述缓冲液的至少两种是设置于相同的容器中。本领域技术人员能够理解的是，前面针对测定样品中半胱氨酸的方法所描述的特征和优点，仍适用于该检测样品中半胱氨酸的试剂盒，在此不再赘述。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1是根据本发明一个实施例的半胱氨酸浓度与吸光度的标准曲线图；

图2是根据本发明另一个实施例的半胱氨酸浓度与吸光度的标准曲线图；

图3是根据本发明另一个实施例的半胱氨酸浓度与圆二色谱强度的标准曲线图；

图4是根据本发明另一个实施例的半胱氨酸浓度与圆二色谱强度的标准曲线图；

图5是根据本发明另一个实施例的半胱氨酸浓度与圆二色谱强度的标准曲线图；

图6是根据本发明另一个实施例的半胱氨酸浓度与圆二色谱强度的标准曲线图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，本技术领域人员会理解，通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的试剂、生物材料等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

一般方法

除非明确说明，在下列实施例中采用下述测试条件：

可见光谱仪型号：Agilent 8453UV-visible spectrophotometer；

圆二色谱仪型号：Jasco-815；

试剂：能够形成G-四链体的DNA(由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成)，DNA序列5’-GGGTACGCTCTTCAAAAGAAG ACCCTACCCAAAGGGTAGGGCGGGTTGGGA-3’(购自英淮捷基公司，可由商业途径直接获得)；

菁染料：结构式如下所示

配置标准溶液：用pH6.2-8.2的缓冲溶液溶解半胱氨酸，配置成一系列浓度梯度(0、2、5、10和15微摩尔/升)的半胱氨酸溶液，分别向每个浓度梯度的半胱氨酸溶液中加入一定量的DNA和银离子反应0.1-3小时，得到一系列构型不同的DNA体系；分别向所述DNA体系中的每一个加入相同的一定量的菁染料J-聚集体，反应0.1-3小时，得到一系列标准溶液样本；

配置待测溶液：将待测样品加入到和标准溶液中相同量的DNA和银离子，反应0.1-3小时的相同时间，得到一系列构型不同的DNA体系；分别向该所述DNA体系中的每一个加入和标准溶液中相同量的菁染料J-聚集体，反应0.1-3小时，得到测试溶液；

实施例1

在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，对一系列标准溶液和尿样1、2进行检测。区别在于：在该实施例中采用的Tris-HCl缓冲液(pH8.0)；配置标准溶液过程中，两次混合后的反应时间均为0.2小时，最后得到DNA分子浓度为4微摩尔/升、银离子浓度为10微摩尔/升、菁染料浓度为4微摩尔/升的一系列不同半胱氨酸浓度的标准溶液样本；待测试样品，分别为5.8微摩尔/升的尿样1和4.6微摩尔/升的尿样2；测试条件采用656nm处吸光度。

该实施例所得到的半胱氨酸浓度与吸光度的标准曲线如图1所示。图1中，吸光度选择的是吸收光谱图中656nm处吸收峰的强度。

该实施例所得到的待测溶液的吸收光谱图中，菁染料的单体、H-聚集体和J-聚集体对应的吸收峰分别在580nm、545nm和656nm处。通过待测溶液的吸收光谱图中656nm处吸收峰的强度，与标准曲线图1进行对比即可推算出待测样品中，尿样1和尿样2的半胱氨酸测试浓度分别为5.7和4.7微摩尔/升，分别与尿样的实际浓度5.8和4.6微摩尔/升吻合。

实施例2

在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，对一系列标准溶液和尿样3、4进行检测。区别在于：在该实施例中采用的柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液(pH6.8)；配置标准溶液过程中，加入DNA后的反应时间均为0.5小时，而加入菁染料后的反应时间为0.4小时，最后得到DNA分子浓度为10微摩尔/升、银离子浓度为13微摩尔/升、菁染料浓度为7微摩尔/升的一系列不同半胱氨酸浓度的标准溶液样本；待测试样品，分别为8.8微摩尔/升的尿样3和3.9微摩尔/升的尿样4；测试条件采用548nm处吸光度。

该实施例所得到的半胱氨酸浓度与吸光度的标准曲线如图2所示。图2中，吸光度选择的是吸收光谱图中545nm处吸收峰的强度。

该实施例所得到的待测溶液的吸收光谱图中，通过545nm处吸收峰的强度，与标准曲线图2进行对比即可推算出待测样品中，尿样3和尿样4的半胱氨酸测试浓度分别为8.6和4.0微摩尔/升，与尿样的实际浓度8.8和3.9微摩尔/升吻合。

实施例3

在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，对一系列标准溶液和尿样5、6进行检测。区别在于：在该实施例中采用的咪唑-盐酸缓冲液(pH7.8)；配置标准溶液过程中，加入DNA后的反应时间均为1小时，而加入菁染料后的反应时间为0.7小时，最后得到DNA分子浓度为7微摩尔/升、银离子浓度为16微摩尔/升、菁染料浓度为3微摩尔/升的一系列不同半胱氨酸浓度的标准溶液样本；待测试样品，分别为11.8微摩尔/升的尿样5和7.9微摩尔/升的尿样6；测试条件采用590nm处的圆二色谱信号强度。

该实施例所得到的半胱氨酸浓度与圆二色谱强度的标准曲线如图3所示。图3中，圆二色谱手性信号选择的是590nm处的强度。

该实施例所得到的待测溶液的圆二色谱图中，手性信号的位置分别在544nm和590nm处。通过待测溶液的圆二色谱图中590nm处色谱峰的强度，与标准曲线图3进行对比即可推算出待测样品中，尿样5和尿样6的半胱氨酸测试浓度分别为11.5和7.7微摩尔/升，与尿样的实际浓度11.8和7.9微摩尔/升吻合。

实施例4

在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，对一系列标准溶液和尿样7、8进行检测。区别在于：在该实施例中采用的磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液(pH7.5)；配置标准溶液过程中，加入DNA后的反应时间均为0.1小时，而加入菁染料后的反应时间为0.4小时，最后得到DNA分子浓度为11微摩尔/升、银离子浓度为18微摩尔/升、菁染料浓度为4微摩尔/升的一系列不同半胱氨酸浓度的标准溶液样本；待测试样品，分别为10.8微摩尔/升的尿样7和8.9微摩尔/升的尿样8；测试条件采用544nm处的圆二色谱信号强度。

该实施例所得到的半胱氨酸浓度与圆二色谱强度的标准曲线如图4所示。图4中，圆二色谱手性信号选择的是544nm处的强度。

该实施例所得到的待测溶液的圆二色谱图中，通过544nm处色谱峰的强度，与标准曲线图4进行对比即可推算出待测样品中，尿样7和尿样8的半胱氨酸测试浓度分别为10.9和8.7微摩尔/升，与尿样的实际浓度10.8和8.9微摩尔/升吻合。

实施例5

在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，对一系列标准溶液和尿样9、10进行检测。区别在于：在该实施例中采用的柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液(pH7.0)；配置标准溶液过程中，加入DNA后的反应时间均为0.3小时，而加入菁染料后的反应时间为0.3小时，最后得到DNA分子浓度为11微摩尔/升、银离子浓度为11微摩尔/升、菁染料浓度为8微摩尔/升的一系列不同半胱氨酸浓度的标准溶液样本；待测试样品，分别为3.8微摩尔/升的尿样9和6.9微摩尔/升的尿样10；测试条件采用590nm处圆二色谱强度。

该实施例所得到的半胱氨酸浓度与圆二色谱强度的标准曲线如图5所示。图5中，圆二色谱手性信号选择的是590nm处的强度。

该实施例所得到的待测溶液的圆二色谱图中，通过590nm处色谱峰的强度，与标准曲线图5进行对比即可推算出待测样品中，尿样9和尿样10的半胱氨酸测试浓度分别为3.9和6.7微摩尔/升，与尿样的实际浓度3.8和6.9微摩尔/升吻合。

实施例6

在该实施例中，按照与一般方法基本相同的方法和条件，对一系列标准溶液和尿样11、12进行检测。区别在于：在该实施例中采用的2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液(pH7.0)；配置标准溶液过程中，加入DNA后的反应时间均为0.1小时，而加入菁染料后的反应时间为0.8小时，最后得到DNA分子浓度为5微摩尔/升、银离子浓度为15微摩尔/升、菁染料浓度为7微摩尔/升的一系列不同半胱氨酸浓度的标准溶液样本；待测试样品，分别为6.7微摩尔/升的尿样11和7.4微摩尔/升的尿样12；测试条件采用590nm处的圆二色谱信号强度。

该实施例所得到的半胱氨酸浓度与圆二色谱强度的标准曲线如图6所示。图6中，圆二色谱手性信号选择的是590nm处的强度。

该实施例所得到的待测溶液的圆二色谱图中，通过590nm处色谱峰的强度，与标准曲线图6进行对比即可推算出待测样品中，尿样11和尿样12的半胱氨酸测试浓度分别为6.6和7.7微摩尔/升，与尿样的实际浓度6.7和7.4微摩尔/升吻合。

总结

综合实施例1～6可得出，本发明所提出的一种测定样品中半胱氨酸的方法，能够高效、灵敏、快捷地测定出样品中的半胱氨酸，通过比色和偏光两种方法可以实现可视化检测，体系成分简单，操作简单且测试成本低廉。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (9)

1.一种测定样品中半胱氨酸的方法，其特征在于，包括：

(1)在存在诱导剂的条件下，将所述样品、DNA分子和菁染料进行混合，以便获得检测混合物，所述诱导剂适于诱导所述DNA分子形成G-四链体结构；

(2)对所述检测混合物进行吸光度和圆二色性至少之一的检测；

(3)基于所述检测的结果，确定所述样品中含有半胱氨酸的浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品包括尿液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA分子具有选自SEQ ID NO：1～3至少之一的核苷酸序列，

任选地，所述检测混合物中，所述DNA分子的浓度为0.2-50微摩尔/升，优选为0.5-30微摩尔/升，更优选为1-10微摩尔/升。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述诱导剂携带银离子、钾离子和钠离子的至少之一，

任选地，所述银离子是由可溶性银盐提供的，所述银盐为选自硝酸银、醋酸银和氟化银的至少之一，

任选地，所述检测混合物中银离子的浓度为1-100微摩尔/升，优选2-50微摩尔/升，更优选5-30微摩尔/升。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述菁染料具有下列结构：

任选地，所述检测混合物中菁染料的浓度为2-30微摩尔/升，优选2-20微摩尔/升。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测混合物进一步包括：

缓冲液，所述缓冲液的pH为6.2-8.2，优选6.8-8.0，更优选7.4。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述缓冲液选自下述至少一种：

三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，通过外标法，确定所述样品中半胱氨酸的浓度。

9.一种检测样本中半胱氨酸的试剂盒，其特征在于，包括：

菁染料；

DNA分子，所述DNA分子适于形成G-四链体结构；以及

诱导剂，所述诱导剂适于诱导所述DNA分子形成所述G-四链体结构；

任选地，所述试剂盒进一步包括：

缓冲液，所述缓冲液为选自三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、三乙醇胺缓冲液、咪唑-盐酸缓冲液、双甘氨肽缓冲液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇缓冲液、磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲液、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钾缓冲液的至少之一；

其中，所述菁染料、所述DNA分子、所述缓冲液和所述诱导剂是如权利要求1～8任一项所述的，

任选地，所述菁染料、所述DNA分子、所述诱导剂和所述缓冲液的至少两种是设置于相同的容器中。