CN103787864A - 一种从海洋微藻发酵液中提取dha的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,属于微生物油脂提取技术领域。其解决了现有技术中DHA提取率低,产品质量差的问题,本发明采用酶法破壁处理,离心分离提取毛油、精炼纯化等工艺步骤提取DHA,其中酶法破壁可提高细胞破壁率,充分释放细胞所含DHA,使DHA提取率大大提高,减少损耗浪费,降低生产成本;离心分离步骤不会加入其它有害物质,保证了DHA的质量;精炼提纯步骤可进一步提高DHA成品的纯度和品质。本发明方法可提高DHA的提取率,总提取率均在80%以上,减少浪费,降低生产成本,同时可提高DHA藻油质量,产品性能安全。
Description
技术领域
本发明涉及微生物油脂的提取技术领域,具体涉及一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法。
背景技术
DHA,全名二十二碳六烯酸,俗称脑黄金,是一种对人体非常重要的多不饱和脂肪酸,属于Omega-3不饱和脂肪酸家族中的重要成员。DHA是神经系统细胞生长及维持的一种主要元素,是大脑和视网膜的重要构成成分,在人体大脑皮层中含量高达20%,在眼睛视网膜中所占比例最大,约占50%,因此,对胎婴儿智力和视力发育至关重要。DHA的主要作用:促进胎儿大脑发育、促进视网膜光感细胞的成熟、增进大脑细胞之发育、用于癌症治疗、抑制发炎、降低血脂肪、预防心脏血管疾病、改善老人痴呆等。
早期DHA产品多以富含DHA和EPA的深海鱼油(通常为金枪鱼油)为原料制得,以二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)混合形式存在,我们通常叫做Omega-3或多烯酸乙脂,目前最先进的产品是用富含DHA且不含EPA的海洋微藻菌株通过生物发酵工艺后提取制得。
目前,实际生产中应用的和分离微藻DHA的方法主要有低温分级法、尿素包合法、溶剂法、超临界气体萃取法等。其中,低温分级法需要有大型制冷设备,耗能高,提取效率低;尿素包合法是一种比较简便有效的分离方法,但在实际生产中应用时,存在溶剂损耗大、排水和因尿素添加物而引起的废物处理等问题;超临界气体萃取法能分离出高纯度的DHA,但对碳数相同而双键数不同的脂肪酸的分离效果较差,且设备投资大,技术要求高,耗能亦较大;有机溶剂提取法是目前国内外广泛应用的微藻油脂提取法,但所用溶剂大多易燃,溶剂蒸汽有一定的毒性,此外,溶剂法提取的油脂中残留有溶剂,故其产品质量较差。
发明内容
为了解决上述现有技术中存在的问题,本发明提出了一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,该方法采用酶法破壁、离心分离等步骤提取DHA,提高了DHA提取率、减少损耗,并且产品质量安全。
本发明技术方案包括:
一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,包括以下步骤:
a)将海洋微藻发酵液进行酶法破壁处理,得到破壁后的发酵液;
b)向步骤a)得到的发酵液中加入一定量的酒精,用离心机进行离心分离去除水分,得到破壁细胞和藻油;
c)将步骤b)得到的破壁细胞和藻油再次经过高速离心分离,去除固体残渣,得到DHA毛油;
d)对步骤c)得到的DHA毛油进行精炼纯化,得到DHA藻油成品。
作为本发明的一个优选方案,上述步骤a)中,选用碱性蛋白酶进行酶法破壁处理,上述碱性蛋白酶的加入量为海洋微藻发酵液干物质的0.1~1%,上述酶法破壁中,温度为50~70℃,pH8~9,搅拌破壁为6~10h。
所述步骤b)中,离心机离心分离转速≥3000rpm,即分离因素Fr≥1000,离心时间为5~20min。
优选的,上述步骤c)中,离心机离心分离转速≥10000rpm,即分离因素Fr≥10000,离心时间为5~20min。
上述步骤d)中,对DHA毛油进行精炼纯化后,再依次经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭工序,得到DHA藻油成品。
本发明所带来的有益技术效果、;
本发明提出了一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,采用酶法破壁,离心分离提取毛油再经过精炼纯化等工艺步骤提取DHA,其中酶法破壁步骤可提高细胞破壁率,充分释放细胞所含DHA,使DHA提取率大大提高,减少损耗浪费,降低生产成本;离心分离步骤不会加入其它有害物质,保证了DHA的质量;精炼提纯步骤可进一步提高DHA成品的纯度和品质。
本发明可提高微藻发酵生产DHA的提取总收率,总提取率均在80%以上,减少浪费,降低生产成本,同时可提高DHA藻油质量,产品性能安全。
具体实施方式
本发明提出了一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,为了使本发明的技术方案更加清楚、明确,下面结合具体实施例对本发明做进一步清楚、完整的说明。
本发明所选原料除特别说明外,均可通过商业渠道购买得到。
本发明,一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,包括以下步骤:
a)将海洋微藻发酵液进行酶法破壁处理,得到破壁后的发酵液,其中,酶选用碱性蛋白酶,碱性蛋白酶的加入量为海洋微藻发酵液干物质的0.1~1%,上述酶法破壁中,温度为50~70℃,pH8~9,搅拌破壁为6~10h;
b)向步骤a)得到的发酵液中加入一定量的酒精,用离心机进行离心分离去除水分,得到破壁细胞和藻油,离心过程中,离心机离心分离转速≥3000rpm,即分离因素Fr≥1000,离心时间为5~20min;
c)将步骤b)得到的破壁细胞和藻油再次经过高速离心分离,去除固体残渣,得到DHA毛油,离心机离心分离转速≥10000rpm,即分离因素Fr≥10000,离心时间为5~20min;
d)对步骤c)得到的DHA毛油进行精炼纯化,经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭等工序,得到DHA藻油成品。
下面结合具体实施例详细说明。
实施例1:
将发酵结束的DHA微藻发酵液1L(初始总酯含量为9.7%)调节温度至50℃,pH8.0,按发酵液干物质的1%加入碱性蛋白酶进行细胞破壁预处理,搅拌破壁9h后镜检破壁率90%;按发酵液体积为100%,加入95%酒精1L混匀;用离心机3000rpm进行离心分离去除水分,离心10min后得破壁细胞和藻油;将得到的藻油和细胞碎片经过高速离心机10000rpm分离去除破壁细胞等固体残渣,离心10min,得到DHA毛油;再对DHA毛油进行精炼纯化,经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭等工序,最后得到DHA藻油成品80g,总酯提取率为82.5%。
实施例2:
将发酵结束的DHA微藻发酵液1L(初始总酯含量为9.7%)调节温度至57℃,pH8.4,按发酵液干物质的0.5%加入碱性蛋白酶进行细胞破壁预处理,搅拌破壁7h后镜检破壁率100%;按发酵液体积为90%,加入85%酒精1L混匀;用离心机3000rpm进行离心分离去除水分,离心5min后得破壁细胞和藻油;将得到的藻油和细胞碎片经过高速离心机10000rpm分离去除破壁细胞等固体残渣,离心5min,得到DHA毛油。再对DHA毛油进行精炼纯化,经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭等工序,最后得到DHA藻油成品78g,总酯提取率为80.4%。
实施例3:
将发酵结束的DHA微藻发酵液1L(初始总酯含量为10.2)调节温度至60℃,pH8.4,按发酵液干物质的0.5%加入碱性蛋白酶进行细胞破壁预处理,搅拌破壁8h后镜检破壁率100%;按发酵液体积为100%,加入95%酒精1L混匀;用离心机4000rpm进行离心分离去除水分,离心10min后得破壁细胞和藻油;将得到的藻油和细胞碎片经过高速离心机12000rpm分离去除破壁细胞等固体残渣,离心10min,得到DHA毛油;再对DHA毛油进行精炼纯化,经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭等工序,最后得到DHA藻油成品85.6g,总酯提取率为83.9%。
实施例4:
与实施例1不同之处在于:将发酵结束的DHA微藻发酵液1L(初始总酯含量为10.2)调节温度至70℃,搅拌破壁6h,总酯提取率为81.9%。
实施例5:
与实施例1不同之处在于:与实施例1不同之处在于:将发酵结束的DHA微藻发酵液1L(初始总酯含量为10.2)调节温度至70℃,搅拌破壁10h,总酯提取率为82.5%。
现有技术中大部分DHA的提取率都在80%以下,从本实施例1~5可以看出,按照本发明方法提取的DHA,其提取率都在80%以上。
Claims (5)
1.一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,其特征在于:包括以下步骤:
a)将海洋微藻发酵液进行酶法破壁处理,得到破壁后的发酵液;
b)向步骤a)得到的发酵液中加入一定量的酒精,用离心机进行离心分离去除水分,得到破壁细胞和藻油;
c)将步骤b)得到的破壁细胞和藻油再次经过高速离心分离,去除固体残渣,得到DHA毛油;
d)对步骤c)得到的DHA毛油进行精炼纯化,得到DHA藻油成品。
2.根据权利要求1所述的一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,其特征在于:所述步骤a)中,选用碱性蛋白酶进行酶法破壁处理,所述碱性蛋白酶的加入量为所述海洋微藻发酵液干物质的0.1~1%,所述酶法破壁中,温度为50~70℃,pH8~9,搅拌破壁为6~10h。
3.根据根据权利要求1或2所述的一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,其特征在于:所述步骤b)中,离心机离心分离转速≥3000rpm,即分离因素Fr≥1000,离心时间为5~20min。
4.根据权利要求3所述的一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,其特征在于:所述步骤c)中,离心机离心分离转速≥10000rpm,即分离因素Fr≥10000,离心时间为5~20min。
5.根据权利要求3所述的一种从海洋微藻发酵液中提取DHA的方法,其特征在于:所述步骤d)中,对DHA毛油进行精炼纯化后,再依次经过脱胶、脱酸、脱色、脱臭工序,得到DHA藻油成品。
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