CN103773824B - 一种细菌纤维素发酵培养基及利用该培养基生产细菌纤维素的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种细菌纤维素发酵培养基及利用该培养基生产细菌纤维素的方法，属于生物技术领域。本发明的每升细菌纤维素发酵培养基中含有蔗糖25～35g，牛肉膏4～5g，磷酸氢二钠4～5g，柠檬酸0.8～1.0g，乙醇8～10g，其余为酿酒丢糟水解液，pH值为5.5～6.5。利用该培养基生产细菌纤维素的方法，包括以下步骤：1）将木糖葡糖酸醋杆菌进行活化、扩培，得木糖葡糖酸醋杆菌种子液，将木糖葡糖酸醋杆菌种子液接入细菌纤维素发酵培养基进行发酵，得细菌纤维素发酵液；2）取细菌纤维素发酵液中的细菌纤维素膜，处理后即得细菌纤维素产品。该方法具有成本低、工艺简单、便于工业化生产等优点，稳定性及重现性都较好，发酵所得细菌纤维素产量大于10g/L，适宜进行大规模生产。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种利用酿酒丢糟发酵生产细菌纤维素的方法。
背景技术
细菌纤维素是由生长在液态含糖基质中的细菌产生的，并分泌到基质中的纤维素成分，是由葡萄糖以β-1,4糖苷键连接而成的高分子聚合物，在生物医学材料、药学材料、渗透气化膜、燃料电池、造纸及其纤维素衍生物等领域具有广泛应用前景。然而细菌纤维素培养基成本高、产量和产率低等问题却是其工业化生产和推广应用的瓶颈。利用各种废渣、废液进行细菌纤维素的生产，降低其生产成本，是促进其工业化生产及应用的有效途径。
发明内容
本发明的目的在于一种工艺简单、稳定性好，且能够批量生产的利用酿酒丢糟发酵生产细菌纤维素的方法。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种细菌纤维素发酵培养基，每升该培养基中含有蔗糖25～35g，牛肉膏4～5g，磷酸氢二钠4～5g，柠檬酸0.8～1.0g，乙醇8～10g，其余为酿酒丢糟水解液，pH值为5.5～6.5；
所述的酿酒丢糟水解液是将酿酒丢糟干燥、粉碎后加水，充分混匀，然后加入终浓度为20～25EGU/g的纤维素酶进行一级水解，得到一级水解液，再加入终浓度为20～25KNU/g的淀粉酶进行二级水解，得到二级水解液，再加入终浓度为10～15AGU/g的糖化酶进行三级水解，得到三级水解液，最后加入终浓度为0.08～0.10AU/g的碱性蛋白酶进行四级水解制得的。
按照1g：（8～10）mL的料液比，向粉碎后的酿酒丢糟中加水。
所述的一级水解是在pH值为5～6，温度为50～60℃的条件下，水解4～6h后，升温、灭酶；所述的二级水解是在pH值为5.5～6.5，温度为60～70℃的条件下，水解40～60min后，升温、灭酶；所述的三级水解是在pH值为4～5、温度为60～70℃的条件下，水解30～40h后，升温、灭酶；所述的四级水解是在pH值为8～9、温度为60～70℃的条件下水解5～10h后，升温、灭酶。
所述的升温、灭酶是在90～100℃下，灭酶10～15min。
所述的干燥、粉碎是取新鲜酿酒丢糟，在100～110℃下干燥处理10～12h，然后粉碎过10～20目筛网。
一种利用细菌纤维素发酵培养基生产细菌纤维素的方法，包括以下步骤：
1）将木糖葡糖酸醋杆菌活化，得活化的木糖葡糖酸醋杆菌，将活化的木糖葡糖酸醋杆菌扩大培养，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液，按照每100mL接种3～6mL的接种量将木糖葡糖酸醋杆菌种子液接种至细菌纤维素发酵培养基中，在28～32℃下，发酵8～10d，得到细菌纤维素发酵液；
2）将细菌纤维素发酵液液面上层的细菌纤维素膜取出，水洗后，于80～90℃下，在碱性溶液中浸泡20～40min，然后取出，反复冲洗至细菌纤维素膜呈透明状，吸干水分，干燥至恒重，得到细菌纤维素。
步骤1）所述的活化是将木糖葡糖酸醋杆菌接种于活化培养基中，在28～32℃下，一次培养28～32h，得到木糖葡糖酸醋杆菌一次培养菌种，将该木糖葡糖酸醋杆菌一次培养菌株再次接种于活化培养基中，在28～32℃下，二次培养28～32h，得到活化的木糖葡糖酸醋杆菌；其中，所述的活化培养基中含有蔗糖40～50g/L，牛肉膏10～15g/L，磷酸氢二钠4～5g/L，柠檬酸0.8～1.0g/L，乙醇8～10g/L，琼脂15～20g/L，调节pH值为5.5～6.5。
步骤1）所述的扩大培养是将活化的木糖葡糖酸醋杆菌接种于扩培培养基中，在温度为28～32℃，转速为150～200rpm的条件下，振荡培养18～22h，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液；其中，所述的扩培培养基中含有蔗糖40～50g/L，牛肉膏10～15g/L，磷酸氢二钠4～5g/L，柠檬酸0.8～1.0g/L，乙醇8～10g/L，调节pH值为5.5～6.5。
步骤2）所述的碱性溶液为质量浓度为1.0～1.5%的NaOH溶液。
步骤2）所述的干燥是在100～110℃下进行；冲洗是用蒸馏水反复冲洗。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明公开的细菌纤维素发酵培养基以酿酒丢糟为原料，酿酒丢糟中主要含有纤维素、淀粉、蛋白质等成分，原料处理过程中，分别采用纤维素酶水解酿酒丢糟中纤维素为还原糖，采用淀粉酶、糖化酶水解酿酒丢糟中淀粉为还原糖，采用碱性蛋白酶水解酿酒丢糟中蛋白质为氨基酸，作为木糖葡糖酸醋杆菌发酵生产细菌纤维素的营养基质，因此，该培养基的利用减少了传统工艺中蔗糖、牛肉膏等昂贵的培养基原料用量，节省了发酵培养基制备成本，同时能够有效解决酿酒过程中产生的大量丢糟引起的环境污染问题，酿酒丢糟的综合利用、附加值的提升和开展酒类清洁生产提供了一条新的途径。
本发明还公开了利用酿酒丢糟制成的细菌纤维素发酵培养基发酵生产细菌纤维素的方法，该方法操作简便，便于工业化生产，稳定性及重现性都较好，通过该方法生产的细菌纤维素产量大于10g/L，适宜进行大规模生产。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
本发明所述的菌种：木糖葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacterxylinus)，购自中国农业微生物菌种保藏管理中心，菌株号accc10215。
一种生产细菌纤维素的方法，包括以下步骤：
（1）木糖葡糖酸醋杆菌的活化
制备木糖葡糖酸醋杆菌活化培养基，活化培养基的配方包括蔗糖40g/L，牛肉膏10g/L，磷酸氢二钠4g/L，柠檬酸0.8g/L，乙醇8g/L，琼脂15g/L，调节pH值为5.5。接种木糖葡糖酸醋杆菌accc10215于活化培养基，在28℃培养28h，将培养后的菌种再次接种于相同的、新的活化培养基中，于28℃培养28h，制得活化的木糖葡糖酸醋杆菌；
（2）木糖葡糖酸醋杆菌的扩培
制备木糖葡糖酸醋杆菌扩培培养基，扩培培养基的配方包括蔗糖40g/L，牛肉膏10g/L，磷酸氢二钠4g/L，柠檬酸0.8g/L，乙醇8g/L，调节pH值为5.5，接种活化的木糖葡糖酸醋杆菌于扩培培养基中，在150r/min、28℃下培养18h，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液；
（3）细菌纤维素发酵培养基的制备
取新鲜酿酒丢糟，100℃干燥处理10h，辗槽粉碎后过10目筛网，得粉碎后的酿酒丢糟，按照1g：8ml的料液比，向粉碎后的酿酒丢糟中加自来水充分混匀后，加纤维素酶至终浓度为20EGU/g，在pH值为5、温度为50℃的条件下一级水解4h，反应结束后升温至90℃维持10min灭纤维素酶，得一级水解液；向一级水解液中加淀粉酶至终浓度为20KNU/g，在pH值为5.5、温度为60℃的条件下二级水解40min，反应结束后升温至90℃维持10min灭淀粉酶，得二级水解液；向二级水解液中加糖化酶至终浓度为10AGU/g，在pH值为4、温度为60℃三级水解30h，反应结束后升温至90℃维持10min灭糖化酶，得三级水解液；向三级水解液中加碱性蛋白酶至终浓度为0.08AU/g，在pH值为8.0、温度为60℃下水解5h，反应结束后升温至90℃维持10min灭蛋白酶，得酿酒丢糟水解液；
按照每升该培养基中含有蔗糖25g，牛肉膏4g，磷酸氢二钠4g，柠檬酸0.8g，乙醇8g，其余为酿酒丢糟水解液，调节pH值为5.5，得细菌纤维素发酵培养基；
（4）细菌纤维素的发酵
取种龄为18h的木糖葡糖酸醋杆菌种子液，按照每100mL接种3mL的接种量，将木糖葡糖酸醋杆菌种子液接入细菌纤维素发酵培养基中，在28℃静态发酵8d后结束发酵，得细菌纤维素发酵液；
（5）细菌纤维素膜的处理
取细菌纤维素发酵液中的细菌纤维素膜，蒸馏水冲洗，于80℃下，在质量浓度为1%的NaOH溶液中浸泡20min，然后将细菌纤维素膜取出后，用蒸馏水反复冲洗至凝胶膜透明无色，用干燥滤纸吸干表面水分，100℃干燥至恒重，得细菌纤维素产品，细菌纤维素发酵产量为10.25g/L。
实施例2
一种生产细菌纤维素的方法，包括以下步骤：
（1）木糖葡糖酸醋杆菌的活化
制备木糖葡糖酸醋杆菌活化培养基，活化培养基的配方包括蔗糖45g/L，牛肉膏13g/L，磷酸氢二钠4.5g/L，柠檬酸0.9g/L，乙醇9g/L，琼脂17g/L，调节pH值为6.0。接种木糖葡糖酸醋杆菌accc10215于活化培养基，在28℃培养28h，将培养后的菌种再次接种于相同的、新的活化培养基中，于28℃培养28h，制得活化的木糖葡糖酸醋杆菌；
（2）木糖葡糖酸醋杆菌的扩培
制备木糖葡糖酸醋杆菌扩培培养基，扩培培养基的配方包括蔗糖45g/L，牛肉膏13g/L，磷酸氢二钠4.5g/L，柠檬酸0.9g/L，乙醇9g/L，调节pH值为6.0，接种活化的木糖葡糖酸醋杆菌于扩培培养基中，在180r/min、30℃下培养20h，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液；
（3）细菌纤维素发酵培养基的制备
取新鲜酿酒丢糟，105℃干燥处理11h，辗槽粉碎后过20目筛网，得粉碎后的酿酒丢糟，按照1g：9ml的料液比，向粉碎后的酿酒丢糟中加自来水充分混匀后，加纤维素酶至终浓度为23EGU/g，在pH值为5.5、温度为55℃的条件下一级水解5h，反应结束后升温至95℃维持12min灭纤维素酶，得一级水解液；向一级水解液中加淀粉酶至终浓度为23KNU/g，在pH值为6.0、温度为65℃的条件下二级水解50min，反应结束后升温至95℃维持13min灭淀粉酶，得二级水解液；向二级水解液中加糖化酶至终浓度为13AGU/g，在pH值为4.5、温度为65℃三级水解35h，反应结束后升温至95℃维持13min灭糖化酶，得三级水解液；向三级水解液中加碱性蛋白酶至终浓度为0.09AU/g，在pH值为8.5、温度为65℃下水解7h，反应结束后升温至95℃维持13min灭蛋白酶，得酿酒丢糟水解液；
按照每升该培养基中含有蔗糖30g，牛肉膏4.5g，磷酸氢二钠4.5g，柠檬酸0.9g，乙醇9g，其余为酿酒丢糟水解液，调节pH值为6.0，得细菌纤维素发酵培养基；
（4）细菌纤维素的发酵
取种龄为20h的木糖葡糖酸醋杆菌种子液，按照每100mL接种4mL的接种量，将木糖葡糖酸醋杆菌种子液接入细菌纤维素发酵培养基中，在30℃静态发酵9d后结束发酵，得细菌纤维素发酵液；
（5）细菌纤维素膜的处理
取细菌纤维素发酵液中的细菌纤维素膜，蒸馏水冲洗，于85℃下，在质量浓度为1.3%的NaOH溶液中浸泡30min，然后将细菌纤维素膜取出后，用蒸馏水反复冲洗至凝胶膜透明无色，用干燥滤纸吸干表面水分，105℃干燥至恒重，得细菌纤维素产品，细菌纤维素发酵产量为10.78g/L。
实施例3
一种生产细菌纤维素的方法，包括以下步骤：
（1）木糖葡糖酸醋杆菌的活化
制备木糖葡糖酸醋杆菌活化培养基，活化培养基的配方包括蔗糖50g/L，牛肉膏15g/L，磷酸氢二钠5g/L，柠檬酸1.0g/L，乙醇10g/L，琼脂20g/L，调节pH值为6.5。接种木糖葡糖酸醋杆菌accc10215于活化培养基，在32℃培养32h，将培养后的菌种再次接种于相同的、新的活化培养基中，于32℃培养32h，制得活化的木糖葡糖酸醋杆菌；
（2）木糖葡糖酸醋杆菌的扩培
制备木糖葡糖酸醋杆菌扩培培养基，扩培培养基的配方包括蔗糖50g/L，牛肉膏15g/L，磷酸氢二钠5g/L，柠檬酸1.0g/L，乙醇10g/L，调节pH值为6.5，接种活化的木糖葡糖酸醋杆菌于扩培培养基中，在200r/min、32℃下培养22h，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液；
（3）细菌纤维素发酵培养基的制备
取新鲜酿酒丢糟，110℃干燥处理12h，辗槽粉碎后过20目筛网，得粉碎后的酿酒丢糟，按照1g：10mL的料液比，向粉碎后的酿酒丢糟中加自来水充分混匀后，加纤维素酶至终浓度为25EGU/g，在pH值为6.0、温度为60℃的条件下一级水解6h，反应结束后升温至100℃维持15min灭纤维素酶，得一级水解液；向一级水解液中加淀粉酶至终浓度为25KNU/g，在pH值为6.5、温度为70℃的条件下二级水解60min，反应结束后升温至100℃维持15min灭淀粉酶，得二级水解液；向二级水解液中加糖化酶至终浓度为15AGU/g，在pH值为5、温度为70℃三级水解40h，反应结束后升温至100℃维持15min灭糖化酶，得三级水解液；向三级水解液中加碱性蛋白酶至终浓度为0.10AU/g，在pH值为9.0、温度为70℃下水解10h，反应结束后升温至100℃维持15min灭蛋白酶，得酿酒丢糟水解液；
按照每升该培养基中含有蔗糖35g，牛肉膏5g，磷酸氢二钠5g，柠檬酸1g，乙醇10g，其余为酿酒丢糟水解液，调节pH值为6.5，得细菌纤维素发酵培养基；
（4）细菌纤维素的发酵
取种龄为22h的木糖葡糖酸醋杆菌种子液，按照每100mL接种6mL的接种量，将木糖葡糖酸醋杆菌种子液接入细菌纤维素发酵培养基中，在32℃静态发酵10d后结束发酵，得细菌纤维素发酵液；
（5）细菌纤维素膜的处理
取细菌纤维素发酵液中的细菌纤维素膜，蒸馏水冲洗，于90℃下，在质量浓度为1.5%的NaOH溶液中浸泡40min，然后将细菌纤维素膜取出后，用蒸馏水反复冲洗至凝胶膜透明无色，用干燥滤纸吸干表面水分，110℃干燥至恒重，得细菌纤维素产品，细菌纤维素发酵产量为10.45g/L。
实施例4
一种生产细菌纤维素的方法，包括以下步骤：
（1）木糖葡糖酸醋杆菌的活化
制备木糖葡糖酸醋杆菌活化培养基，活化培养基的配方包括蔗糖45g/L，牛肉膏15g/L，磷酸氢二钠4.5g/L，柠檬酸0.89g/L，乙醇9g/L，琼脂18g/L，调节pH值为6.0。接种木糖葡糖酸醋杆菌accc10215于活化培养基，在30℃培养28h，将培养后的菌种再次接种于相同的、新的活化培养基中，于30℃培养28h，制得活化的木糖葡糖酸醋杆菌；
（2）木糖葡糖酸醋杆菌的扩培
制备木糖葡糖酸醋杆菌扩培培养基，扩培培养基的配方包括蔗糖45g/L，牛肉膏15g/L，磷酸氢二钠4.5g/L，柠檬酸0.9g/L，乙醇9g/L，调节pH值为6.0，接种活化的木糖葡糖酸醋杆菌于扩培培养基中，在170r/min、30℃下培养18h，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液；
（3）细菌纤维素发酵培养基的制备
取新鲜酿酒丢糟，105℃干燥处理10h，辗槽粉碎后过10目筛网，得粉碎后的酿酒丢糟，按照1g：9mL的料液比，向粉碎后的酿酒丢糟中加自来水充分混匀后，加纤维素酶至终浓度为23EGU/g，在pH值为5.5、温度为55℃的条件下一级水解5h，反应结束后升温至95℃维持10min灭纤维素酶，得一级水解液；向一级水解液中加淀粉酶至终浓度为23KNU/g，在pH值为6.0、温度为65℃的条件下二级水解40min，反应结束后升温至95℃维持10min灭淀粉酶，得二级水解液；向二级水解液中加糖化酶至终浓度为13AGU/g，在pH值为4.5、温度为65℃三级水解30h，反应结束后升温至95℃维持13min灭糖化酶，得三级水解液；向三级水解液中加碱性蛋白酶至终浓度为0.09AU/g，在pH值为8.5、温度为65℃下水解5h，反应结束后升温至95℃维持10min灭蛋白酶，得酿酒丢糟水解液；
按照每升该培养基中含有蔗糖30g，牛肉膏4.5g，磷酸氢二钠4.5g，柠檬酸0.9g，乙醇9g，其余为酿酒丢糟水解液，调节pH值为6.0，得细菌纤维素发酵培养基；
（4）细菌纤维素的发酵
取种龄为18h的木糖葡糖酸醋杆菌种子液，按照每100mL接种4mL的接种量，将木糖葡糖酸醋杆菌种子液接入细菌纤维素发酵培养基中，在30℃静态发酵8d后结束发酵，得细菌纤维素发酵液；
（5）细菌纤维素膜的处理
取细菌纤维素发酵液中的细菌纤维素膜，蒸馏水冲洗，于85℃下，在质量浓度为1.0%的NaOH溶液中浸泡20min，然后将细菌纤维素膜取出后，用蒸馏水反复冲洗至凝胶膜透明无色，用干燥滤纸吸干表面水分，105℃干燥至恒重，得细菌纤维素产品，细菌纤维素发酵产量为10.65g/L。
实施例5
一种生产细菌纤维素的方法，包括以下步骤：
（1）木糖葡糖酸醋杆菌的活化
制备木糖葡糖酸醋杆菌活化培养基，活化培养基的配方包括蔗糖40g/L，牛肉膏10g/L，磷酸氢二钠4g/L，柠檬酸0.8g/L，乙醇8g/L，琼脂15g/L，调节pH值为5.5。接种木糖葡糖酸醋杆菌accc10215于活化培养基，在28℃培养32h，将培养后的菌种再次接种于相同的、新的活化培养基中，于28℃培养32h，制得活化的木糖葡糖酸醋杆菌；
（2）木糖葡糖酸醋杆菌的扩培
制备木糖葡糖酸醋杆菌扩培培养基，扩培培养基的配方包括蔗糖40g/L，牛肉膏10g/L，磷酸氢二钠4g/L，柠檬酸0.8g/L，乙醇8g/L，调节pH值为5.5，接种活化的木糖葡糖酸醋杆菌于扩培培养基中，在150r/min、28℃下培养22h，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液；
（3）细菌纤维素发酵培养基的制备
取新鲜酿酒丢糟，100℃干燥处理12h，辗槽粉碎后过20目筛网，得粉碎后的酿酒丢糟，按照1g：8mL的料液比，向粉碎后的酿酒丢糟中加自来水充分混匀后，加纤维素酶至终浓度为20EGU/g，在pH值为5.0、温度为50℃的条件下一级水解6h，反应结束后升温至90℃维持15min灭纤维素酶，得一级水解液；向一级水解液中加淀粉酶至终浓度为20KNU/g，在pH值为5.5、温度为60℃的条件下二级水解60min，反应结束后升温至95℃维持15min灭淀粉酶，得二级水解液；向二级水解液中加糖化酶至终浓度为10AGU/g，在pH值为4.0、温度为60℃三级水解40h，反应结束后升温至90℃维持15min灭糖化酶，得三级水解液；向三级水解液中加碱性蛋白酶至终浓度为0.08AU/g，在pH值为8.0、温度为60℃下水解10h，反应结束后升温至90℃维持15min灭蛋白酶，得酿酒丢糟水解液；
按照每升该培养基中含有蔗糖25g，牛肉膏4g，磷酸氢二钠4g，柠檬酸0.8g，乙醇8g，其余为酿酒丢糟水解液，调节pH值为5.5，得细菌纤维素发酵培养基；
（4）细菌纤维素的发酵
取种龄为22h的木糖葡糖酸醋杆菌种子液，按照每100mL接种3mL的接种量，将木糖葡糖酸醋杆菌种子液接入细菌纤维素发酵培养基中，在28℃静态发酵10d后结束发酵，得细菌纤维素发酵液；
（5）细菌纤维素膜的处理
取细菌纤维素发酵液中的细菌纤维素膜，蒸馏水冲洗，于80℃下，在质量浓度为1.0%的NaOH溶液中浸泡40min，然后将细菌纤维素膜取出后，用蒸馏水反复冲洗至凝胶膜透明无色，用干燥滤纸吸干表面水分，100℃干燥至恒重，得细菌纤维素产品，细菌纤维素发酵产量为10.52g/L。
综上所述，本发明利用酿酒丢糟发酵生产细菌纤维素，一方面可以解决酿酒丢糟大量产生而引起的环境污染问题，为酿酒丢糟的综合利用、附加值的提升和酒类的清洁化生产提供新途径，同时也为细菌纤维素的大规模生产找到一种廉价原料，为其生产成本的降低及大规模生产提供可能，因此该技术具有重要意义。
Claims (7)
1.一种细菌纤维素发酵培养基，其特征在于，每升该培养基中含有蔗糖25～35g，牛肉膏4～5g，磷酸氢二钠4～5g，柠檬酸0.8～1.0g，乙醇8～10g，其余为酿酒丢糟水解液，pH值为5.5～6.5；
所述的酿酒丢糟水解液是将酿酒丢糟干燥、粉碎后，按照1g：(8～10)mL的料液比，向粉碎后的酿酒丢糟中加水，充分混匀，然后加入终浓度为20～25EGU/g的纤维素酶进行一级水解，得到一级水解液，再加入终浓度为20～25KNU/g的淀粉酶进行二级水解，得到二级水解液，再加入终浓度为10～15AGU/g的糖化酶进行三级水解，得到三级水解液，最后加入终浓度为0.08～0.10AU/g的碱性蛋白酶进行四级水解制得的；
所述的一级水解是在pH值为5～6，温度为50～60℃的条件下，水解4～6h后，升温、灭酶；所述的二级水解是在pH值为5.5～6.5，温度为60～70℃的条件下，水解40～60min后，升温、灭酶；所述的三级水解是在pH值为4～5、温度为60～70℃的条件下，水解30～40h后，升温、灭酶；所述的四级水解是在pH值为8～9、温度为60～70℃的条件下水解5～10h后，升温、灭酶；
所述的升温、灭酶是在90～100℃下，灭酶10～15min。
2.根据权利要求1所述的一种细菌纤维素发酵培养基，其特征在于，所述的干燥、粉碎是取新鲜酿酒丢糟，在100～110℃下干燥处理10～12h，然后粉碎过10～20目筛网。
3.一种利用权利要求1或2所述的细菌纤维素发酵培养基生产细菌纤维素的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将木糖葡糖酸醋杆菌活化，得活化的木糖葡糖酸醋杆菌，将活化的木糖葡糖酸醋杆菌扩大培养，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液，按照每100mL接种3～6mL的接种量将木糖葡糖酸醋杆菌种子液接种至细菌纤维素发酵培养基中，在28～32℃下，发酵8～10d，得到细菌纤维素发酵液；
2)将细菌纤维素发酵液液面上层的细菌纤维素膜取出，水洗后，于80～90℃下，在碱性溶液中浸泡20～40min，然后取出，反复冲洗至细菌纤维素膜呈透明状，吸干水分，干燥至恒重，得到细菌纤维素。
4.根据权利要求3所述的生产细菌纤维素的方法，其特征在于，步骤1)所述的活化是将木糖葡糖酸醋杆菌接种于活化培养基中，在28～32℃下，一次培养28～32h，得到木糖葡糖酸醋杆菌一次培养菌种，将该木糖葡糖酸醋杆菌一次培养菌株再次接种于活化培养基中，在28～32℃下，二次培养28～32h，得到活化的木糖葡糖酸醋杆菌；其中，所述的活化培养基中含有蔗糖40～50g/L，牛肉膏10～15g/L，磷酸氢二钠4～5g/L，柠檬酸0.8～1.0g/L，乙醇8～10g/L，琼脂15～20g/L，调节pH值为5.5～6.5。
5.根据权利要求3所述的生产细菌纤维素的方法，其特征在于，步骤1)所述的扩大培养是将活化的木糖葡糖酸醋杆菌接种于扩培培养基中，在温度为28～32℃，转速为150～200rpm的条件下，振荡培养18～22h，得到木糖葡糖酸醋杆菌种子液；其中，所述的扩培培养基中含有蔗糖40～50g/L，牛肉膏10～15g/L，磷酸氢二钠4～5g/L，柠檬酸0.8～1.0g/L，乙醇8～10g/L，调节pH值为5.5～6.5。
6.根据权利要求3所述的生产细菌纤维素的方法，其特征在于，步骤2)所述的碱性溶液为质量浓度为1.0～1.5％的NaOH溶液。
7.根据权利要求3所述的生产细菌纤维素的方法，其特征在于，步骤2)所述的干燥是在100～110℃下进行；冲洗是用蒸馏水反复冲洗。
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