CN103735572A - 一种具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物，该组合物由硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、碳酸钙、透明质酸钠按规定比例制备而成。经动物功能试验证明，本发明组合物具有增加骨密度、抗炎镇痛的功能，在改善骨质疏松、修复关节软骨的同时，还能补充骨骼日常所需的钙质，全面解决关节问题，适合关节炎患者使用，同时适合中老年人群预防骨质疏松及骨关节软骨组织损伤或退行性病变。

Description

一种具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种组合物，特别是一种具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物及其制备方法。

背景技术

骨质疏松和骨关节炎是中老年人常见疾病，患病人群在我国占有很大比例，已经成为影响我国人民健康的一个重要问题。全世界约有2亿骨质疏松症患者，其发病率跃居常见病、多发病的第7位，且年平均增长率呈快速增长的势头。临床上对该病的治疗，多以口服钙剂及补充维生素D为主，钙的摄入可以减缓骨的丢失，改善骨矿化，但临床研究表明，除了补钙，患者还应同时进行提高骨密度、增强骨强度和预防骨折的综合治疗。

近年来，随着人们对骨质疏松发病机制研究的深入，具有增加骨密度、防止软骨细胞损伤、促进软骨基质的修复和重建、改善关节活动、抗炎镇痛作用的物质，因其独特、安全可靠的作用机制，越来越受到人们青睐，人们更倾向于选择纯天然、绿色、副作用小，效果好的产品。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有增加骨密度、抗炎镇痛作用，服用方便，无副作用的组合物及其制剂的制备方法。

本发明的技术解决方案是：具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物是由以下原料(按照质量百分比)制成：硫酸软骨素10-60％、盐酸氨基葡萄糖10-60％、碳酸钙10-50％、透明质酸钠1-10％。本发明组合物的口服片剂制剂拟订商品名称：维固康牌增加骨密度片。

增加骨密度片的制备方法是将硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、碳酸钙、透明质酸钠和赋形剂混合均匀，制粒，压片，包衣，即得。

本发明优选剂型为口服片剂，但不限于此，本发明组合物还可加入制备不同剂型时所需的各种常规辅料，如崩解剂、润滑剂、粘合剂、抗氧剂、络合剂等药用载体，以常规的制剂方法制成任何一种常用的口服剂型，如分散片、颗粒剂、胶囊剂、含化片、口嚼片等其他剂型。

本发明配方中各原料的主要作用阐述如下：

1、硫酸软骨素

硫酸软骨素是动物体内分布最广泛的一种细胞外基质糖胺多糖，主要作为膳食补充剂用于保护关节。硫酸软骨素作为结缔组织的重要组成部分，能够结合水分子用于润滑和支撑关节，使关节活动自如；由于明显的亲软骨性，它可优先进入软骨组织，保护软骨。因此，主要用于骨关节炎的治疗。它还可以通过缓解各种症状达到修复软骨、促进软骨再生。

药理药效及临床研究显示，本品具有以下作用：(1)润滑及支撑关节作用；(2)保护软骨组织；(3)修复软骨、促进软骨再生。因此，硫酸软骨素一方面可以通过保护软骨达到治疗骨关节炎的作用，另一方面还可以通过缓解各种症状达到修复软骨、促进软骨再生。

2、盐酸氨基葡萄糖

盐酸氨基葡萄糖是甲壳素经盐酸水解得到的一种氨基单糖。它天然存在于人体特别是关节软骨中，是合成氨基聚糖的基本物质及关节软骨中蛋白多糖的组成成分，作为关节软骨的营养补充剂被广泛使用。科学研究表明，30岁以后，随着年龄的增长，人体内氨糖含量逐渐降低，关节软骨的磨损不断累积，所以中老年人易患骨关节炎等疾病。在欧美医学界，盐酸氨基葡萄糖是唯一被认可的对骨关节疾病具有治疗作用的营养保健品。

药理药效及临床研究显示，本品具有以下作用：(1)润滑关节、保护软骨组织；(2)缓解关节疼痛，抑制及消退关节变性形成；(3)促进钙吸收，预防骨质疏松。因此，盐酸氨基葡萄糖不仅可以用于治疗和预防全身各种关节的骨性关节炎，还可以通过促进钙的吸收起到预防骨质疏松的作用。

3、透明质酸钠

透明质酸钠是广泛存在于人及动物各种组织的高分子物质，是一种高黏性物质，具有非常好的生物相容性。透明质酸钠作为关节滑液的主要成分，赋予滑液良好的黏弹性，对维持关节正常生理功能至关重要。具有参与细胞外液中电解质及水分调节、润滑关节、抗御感染、参与创伤愈合等多种生理功能，对关节的保护、营养及功能的发挥均起重要的作用。

药理药效及临床研究显示，本品具有以下作用：(1)对关节腔润滑及缓冲应力；(2)减少关节内渗液；(3)修复损伤的软骨。因此，透明质酸钠是治疗骨关节炎的一种安全、理想、有效的药物，对骨性关节炎可以起到良好的治疗作用。

4、碳酸钙

钙是构成动物骨骼组织的重要矿物质成分，而且在机体各种生理学和生物化学过程中起着重要作用。骨主要有钙、磷以羟磷灰石的形式沉积于胶原基质中，大量临床实践及流行病学调查的研究表明，钙摄入不足可能是骨质疏松的危险因素。碳酸钙是《维生素、矿物质化合物名单》中的物品，是法规允许使用的钙源。

虽然钙是增加骨密度的主要成分，但钙的吸收受很多因素影响，所以大部分人群在日常补钙时经常出现“易补难收”的情况。据研究，年龄因素对钙吸收的影响最大，处于生长发育期的儿童和青少年人钙的吸收能力强，年龄增加，钙的吸收率就下降。婴幼儿可高达50～60％，儿童青少年30～40％，成年人20～30％，中年人10～20％，60岁以上低于10％。所以，中老年人群最容易出现骨质疏松，补充钙质的同时更应该注重钙的吸收。

综上所述，硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、透明质酸钠、碳酸钙四种成分，在增加骨密度方面均能起到较好的疗效。相关文献报道，若配合使用会起到更好的协同作用，更容易促进钙的吸收，能够更好地增加骨密度。此外，硫酸软骨素与盐酸氨基葡萄糖配合使用，具有止痛，促进软骨再生的功效，对不同时期软骨损伤均有一定的保护和治疗作用，可以较好地延缓骨关节炎的进展；透明质酸钠与盐酸氨基葡萄糖配合使用，具有改善关节的功能；透明质酸和硫酸软骨素配合使用，可明显缓解骨关节炎患者的临床症状。

有鉴于此，我们经过反复深入的研究对比试验，确定了将上述四种成分，按照一定比例组合在一起，完成了具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的本发明组合物，并将其制成保健食品——维固康牌增加骨密度片。本发明产品安全有效。经动物功能试验证明，本组合物能显著提高大鼠的股骨重量、骨钙含量、股骨中点密度和股骨远心端骨密度，且均不低于碳酸钙对照组。依据《保健食品检验与评价技术规范(2003年版)》判定标准，表明本发明组合具有增加骨密度功能。

毒理试验证明，分别以人体每日推荐量的25倍、50倍、100倍本发明组合物经灌胃给予大鼠，连续30天，各剂量组动物体重增加、进食量及食物利用率与阴性对照药组相比均无显著性差异(P＞0.05)，血液学指标、血生化指标、脏器绝对重量及脏/体比值与阴性对照组相比无显著差异(P＞0.05)，病理组织学检查，本发明组合物对受检脏器无明显损伤。

本发明组合物的服用方法是：以口服片为例，每日2次，每次2片。具有增加骨密度的保健功能，适合中老年人长期服用。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明的配伍筛选及功效作用进行详细说明。

实施例一单一成分碳酸钙增加骨密度的功能性评价

钙是构成动物骨骼组织的重要矿物质成分，碳酸钙是《维生素、矿物质化合物名单》中的物质，是法规允许使用的钙源。为表明碳酸钙增加骨密度的有效性，对碳酸钙进行了如下相关性试验。

1材料和方法

1.1实验动物和环境：Wistar雄性大鼠，体重约60-75克。实验环境温度22℃±2℃，相对湿度50％±10％。

1.2剂量设置和受试给予方式

低钙基础饲料配方如下表1：

表1低钙基础饲料配方(Ca²⁺计，150mg/100g)

成分	％	成分	％
				酪蛋白	10.0	混合盐	2.6
黄豆粉	15.0	混合维生素	1.0
				小麦面粉	54.0	氯化胆碱	0.2
玉米油或花生油	4.0	dl-蛋氨酸	0.2
				纤维素	2.0	淀粉	11.0

剂量设置：在《维生素、矿物质的种类和用量》中规定钙的有效剂量和安全剂量250mg-1000mg/天之间，剂量安全有效。因此，在试验中设置了4个碳酸钙剂量组如下表2。

表2不同碳酸钙剂量组

组别	每日碳酸钙用量(mg)	实际钙含量(mg)
			碳酸钙1组	625	250
碳酸钙2组	1250	500
			碳酸钙3组	1875	750
碳酸钙4组	2500	1000

受试各组均喂低钙基础饲料，饮用去离子水。经口每日一次灌胃给予大鼠受试，灌胃体积按1ml/100g.bw计。低钙对照组以等体积的去离子水代替受试物溶液灌胃。连续给予3个月后测试增加骨密度功能的各项指标。

1.3主要仪器：NORLAND STRATEC型双能X线骨密度仪。

1.4实验方法

1.4.1体重测定：禁食12小时后，测定体重。每周测定动物体重一次。

1.4.2股骨重量测定：动物喂养3个月后处死，剥离出右侧股骨，于105℃烤箱中烤至恒重，称量骨干重。

1.4.3骨钙含量及饲料中钙含量测定：低钙基础饲料样品经均匀混合，在烘箱中烘干，置干燥器冷却，取出研磨。取大鼠右侧股骨在105℃烘干至恒重，称量骨干重，然后粉碎、研磨。用EDTA滴定法测定低钙基础饲料和股骨样品中钙含量。低钙基础饲料中钙含量为146.0mg/100g，符合实验要求。

1.4.4股骨骨密度测定：用美国产NORLAND STRATEC型双能X线骨密度仪测量股骨中点及股骨远心端的骨密度。

1.5实验数据统计：采用SPSS统计软件进行各实验组与对照组的单因素方差分析和组间比较。

2实验结果

2.1对大鼠体重的影响

表3实验大鼠的初始体重

组别	动物数(只)	体重(g)	P值
				低钙对照组	9	70.51±4.40
碳酸钙1组	9	68.19±6.48	P＞0.05
				碳酸钙2组	9	68.62±4.92	P＞0.05
碳酸钙3组	9	69.99±5.59	P＞0.05
				碳酸钙4组	9	68.44±4.81	P＞0.05

表3可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

表4实验大鼠第4周时体重

组别	动物数(只)	体重(g)	P值
				低钙对照组	9	164.78±14.04
碳酸钙1组	9	164.48±11.67	P＞0.05
				碳酸钙2组	9	163.89±19.49	P＞0.05
碳酸钙3组	9	166.54±12.29	P＞0.05
				碳酸钙4组	9	171.30±14.42	P＞0.05

表4可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

表5实验大鼠第8周时体重

组别	动物数(只)	体重(g)	P值
				低钙对照组	9	200.10±13.62
碳酸钙1组	9	204.68±17.00	P＞0.05
				碳酸钙2组	9	200.59±20.81	P＞0.05
碳酸钙3组	9	205.00±22.86	P＞0.05
				碳酸钙4组	9	214.31±17.60	P＞0.05

表5可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

表6实验大鼠终末体重

组别	动物数(只)	体重(g)	P值
				低钙对照组	9	231.92±11.41
碳酸钙1组	9	233.06±18.51	P＞0.05
				碳酸钙2组	9	232.30±19.75	P＞0.05
碳酸钙3组	9	238.62±20.17	P＞0.05
				碳酸钙4组	9	243.81±18.48	P＞0.05

表6可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2股骨重量

表7各组动物股骨重量

组别	动物数(只)	股骨重量(g)	P值
				低钙对照组	9	0.3384±0.0420
碳酸钙1组	9	0.3874±0.0747	P＞0.05
				碳酸钙2组	9	0.4084±0.0403*	P＜0.05
碳酸钙3组	9	0.4151±0.0530*	P＜0.05
				碳酸钙4组	9	0.4184±0.0352*	P＜0.05

与低钙对照组比较^*P＜0.05

由表7可见，与低钙对照组相比，碳酸钙2、3、4组股骨重量差异均有统计学意义(P＜0.05)。4种碳酸钙剂量组股骨重量较低钙对照组均呈现增加趋势，碳酸钙1组较低钙对照组、碳酸钙2组较碳酸钙1组增加趋势明显，而碳酸钙2、3、4组之间增加趋势不明显。

2.3骨钙含量

表8各组动物股骨钙含量

组别	动物数(只)	股钙重量(mg/g)	P值
				低钙对照组	9	207.77±13.48
碳酸钙1组	9	213.66±12.84	P＞0.05
				碳酸钙2组	9	219.99±11.89*	P＜0.05
碳酸钙3组	9	220.41±12.61*	P＜0.05
				碳酸钙4组	9	220.92±14.42*	P＜0.05

与低钙对照组比较^*P＜0.05

由表8可见，与低钙对照组相比，碳酸钙2、3、4组骨钙含量差异均有统计学意义(P＜0.05)。4种碳酸钙剂量组骨钙含量较低钙对照组均呈现增加趋势，碳酸钙1组较低钙对照组、碳酸钙2组较碳酸钙1组增加趋势明显，而碳酸钙2、3、4组之间增加趋势不明显。

2.4股骨骨密度

表9各组动物股骨中点骨密度

与低钙对照组比较^*P＜0.05

由表9可见，与低钙对照组相比，碳酸钙2、3、4组股骨中点骨密度差异均有统计学意义(P＜0.05)。4种碳酸钙剂量组股骨中点骨密度较低钙对照组均呈现增加趋势，碳酸钙1组较低钙对照组、碳酸钙2组较碳酸钙1组增加趋势明显，而碳酸钙2、3、4组之间增加趋势不明显。

表10各组动物股骨远心端骨密度

与低钙对照组比较^*P＜0.05

由表10可见，与低钙对照组相比，碳酸钙2、3、4组股骨远心端骨密度差异均有统计学意义(P＜0.05)。4种碳酸钙剂量组股骨远心端骨密度较低钙对照组均呈现增加趋势，碳酸钙1组较低钙对照组、碳酸钙2组较碳酸钙1组增加趋势明显，而碳酸钙2、3、4组之间增加趋势不明显。

3小结

按照法定钙的有效剂量和安全剂量设置的4组碳酸钙剂量组，与低钙对照组相比，均能提高大鼠的股骨重量、骨钙含量、股骨中点密度和股骨远心端骨密度，且呈现增加趋势，碳酸钙2、3、4组股骨重量差异均有统计学意义(P＜0.05)。碳酸钙1组较低钙对照组、碳酸钙2组较碳酸钙1组增加趋势明显，而碳酸钙2、3、4组之间增加趋势不明显。本实验表明，每日摄入一定剂量的钙，可以增加骨密度，预防骨质疏松，当每日钙服用量增加到一定量后，其骨密度不再明显增加。

实施例二本发明组合物增加骨密度的功能性评价

硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、透明质酸钠、碳酸钙四种成分不同配比制成的组合物，其增加骨密度的作用效果有一定差异。为表明本发明的增加骨密度的有效性，考察不同配比的组方增加骨密度的作用效果，确定了本组合物中四种成分的最佳配比。对本发明进行了如下相关性试验。

本实施例所用实验方法与实施例一相同，低钙对照组配方与实施例一一致，碳酸钙组选用实施例一中的碳酸钙1组。

本发明组合实验组设置如下表11：

表11本发明组合物不同配比处方

	硫酸软骨素	盐酸氨基葡萄糖	碳酸钙	透明质酸钠
					组方1	5.6％	60％	30.7％	3.7％
组方2	20％	45.6％	30.7％	3.7％
					组方3	32.8％	32.8％	30.7％	3.7％
组方4	45.6％	20％	30.7％	3.7％
					组方5	60％	5.6％	30.7％	3.7％

以上各组方中，碳酸钙每日用量为1120mg，实际钙含量448mg。

实验结果如下：

1、对大鼠体重的影响

表12实验大鼠的初始体重

组别	动物数(只)	体重(g)	P值
				低钙对照组	9	67.92±4.76
碳酸钙组	9	68.31±6.56	P＞0.05
				组方1	9	69.32±5.97	P＞0.05
组方2	9	68.89±6.39	P＞0.05
				组方3	9	68.77±7.41	P＞0.05
组方4	9	69.57±6.49	P＞0.05
				组方5	9	68.69±5.61	P＞0.05

表12可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

表13实验大鼠第4周时体重

组别	动物数(只)	体重(g)	P值
				低钙对照组	9	163.58±18.14
碳酸钙组	9	164.59±13.85	P＞0.05
				组方1	9	165.34±16.37	P＞0.05
组方2	9	166.11±17.51	P＞0.05
				组方3	9	165.92±19.63	P＞0.05
组方4	9	162.76±13.54	P＞0.05
				组方5	9	168.02±10.22	P＞0.05

表13可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

表14实验大鼠第8周时体重

组别	动物数(只)	体重(g)	P值
				低钙对照组	9	202.17±11.42
碳酸钙组	9	205.38±12.00	P＞0.05
				组方1	9	201.92±10.91	P＞0.05
组方2	9	205.69±23.46	P＞0.05
				组方3	9	202.75±14.58	P＞0.05
组方4	9	209.27±29.55	P＞0.05
				组方5	9	210.72±16.84	P＞0.05

表14可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

表15实验大鼠终末体重

组别	动物数(只)	体重(g)	P值
				低钙对照组	9	235.35±12.57
碳酸钙组	9	233.76±16.81	P＞0.05
				组方1	9	237.50±11.31	P＞0.05
组方2	9	235.42±18.18	P＞0.05
				组方3	9	233.52±10.11	P＞0.05
组方4	9	236.38±15.86	P＞0.05
				组方5	9	234.66±15.41	P＞0.05

由表15可见，与低钙对照组比较，各组动物体重差异无统计学意义(P＞0.05)。

2、股骨重量

表16各组动物股骨重量

组别	动物数(只)	股骨重量(g)	P值
				低钙对照组	9	0.3384±0.0420
碳酸钙组	9	0.4274±0.0147*	P＜0.05
				组方1	9	0.4421±0.0747**	P＜0.01
组方2	9	0.4597±0.0811**	P＜0.01
				组方3	9	0.4866±0.2395**	P＜0.01
组方4	9	0.4663±0.0549**	P＜0.01
				组方5	9	0.4484±0.0962**	P＜0.01

与低钙对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表16可见，与低钙对照组相比，组方1、组方2、组方3、组方4、组方5及碳酸钙组股骨重量差异均有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。组方1、组方2、组方3、组方4、组方5股骨重量较碳酸酸钙组均明显增加，其中组方3股骨重量较其他组方增加程度更为明显。

3、骨钙含量

表17各组动物股骨钙含量

组别	动物数(只)	股钙重量(mg/g)	P值
				低钙对照组	9	209.77±12.69
碳酸钙组	9	220.99±11.79*	P＜0.05
				组方1	9	226.37±12.84**	P＜0.01
组方2	9	229.20±11.42**	P＜0.01
				组方3	9	234.12±14.18**	P＜0.01
组方4	9	230.91±13.75**	P＜0.01
				组方5	9	228.77±17.12**	P＜0.01

与低钙对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表17可见，与低钙对照组相比，组方1、组方2、组方3、组方4、组方5及碳酸钙组骨钙含量差异均有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。组方1、组方2、组方3、组方4、组方5骨钙含量较碳酸酸钙组均明显增加，其中组方3骨钙含量较其他组方增加程度更为明显。

4、股骨骨密度

表18各组动物股骨中点骨密度

与低钙对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表18可见，与低钙对照组相比，组方1、组方2、组方3、组方4、组方5及碳酸钙组股骨中点骨密度差异均有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。组方1、组方2、组方3、组方4、组方5股骨中点骨密度较碳酸酸钙组均明显增加，其中组方3股骨中点骨密度较其他组方增加程度更为明显。

表19各组动物股骨远心端骨密度

与低钙对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01

由表19可见，与低钙对照组相比，组方1、组方2、组方3、组方4、组方5及碳酸钙组股骨远心端骨密度差异均有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)。组方1、组方2、组方3、组方4、组方5股骨远心端骨密度较碳酸酸钙组均明显增加，其中组方3股骨远心端骨密度较其他组方增加程度更为明显。

5、小结

从实验数据可以看出：(1)4种配比的本发明组合物及碳酸钙组与低钙对照组相比，均能提高大鼠的股骨重量、骨钙含量、股骨中点密度和股骨远心端骨密度，均有统计学意义(P＜0.01，P＜0.05)；(2)4种配比的本发明组合物增加骨密度效果明显优于碳酸钙组；(3)组方2、组方3、组方4的成分配比用量组合，所得组合物对于动物股骨中点及股骨远心端的骨密度具有较为显著的增加作用，明显优于组方1和组方5，尤其是组方3作用最好，四种成分能达到最佳协同作用。

本发明组合物由四种成分以最佳比例组合而成，除具有较好的增加骨密度功能以外，该组合物还具有缓解关节疼痛、修复和促进软骨再生、润滑关节及延缓骨关节炎进展的功能，可明显缓解骨关节炎患者的临床症状。为进一步表明本发明组合物的有效性，还进行了如下相关性试验。

实施例三本发明组合物对于骨关节炎治疗作用的功能性评价

1材料和方法

1.1动物：SD大鼠，清洁级，150-180g，雌雄各半，80只。

1.2试验组设置及受试给予方式

1.2.1样品配制及试验分组

所有受试样品均用0.3％黄原胶研磨配成均匀混悬液备用，受试样品以组方1、组方2、组方3制成的片剂作为试验样品(配比设置见表20)。

表20本发明组合物不同配比设置

	硫酸软骨素	盐酸氨基葡萄糖	碳酸钙	透明质酸钠
					组方1	20％	45.6％	30.7％	3.7％
组方2	32.8％	32.8％	30.7％	3.7％
					组方3	45.6％	20％	30.7％	3.7％

80只大鼠购入饲养1周，测定体重后，随机分为以下5组，每组16只大鼠：(1)对照组(0.3％黄原胶)；(2)模型组(0.3％黄原胶)；(3)组方1；(4)组方2；(5)组方3。1.2.2给予方式：灌胃给药，1ml/100g体重，每天上午给药1次，每周给药7天。

2试验方法

2.1骨关节炎模型的建立

将4％木瓜蛋白酶(生理盐水溶解)与0.3mol/L半胱氨酸溶液(生理盐水溶解)1∶1混置0.5h后，分别在造模的第1、3、7天将混合液100μl注入大鼠右膝关节腔内，对照组同法注射等量生理盐水，造模后正常饲养。各组大鼠连续给药3周，术次给药后禁食过夜，处死1/2(雌雄各4只)进行下列指标检测。

2.2检测指标

各组大鼠连续给药3周，术次给药后禁食过夜，分别处死1/2(雌雄各4只)进行关节大体观察、生化测定、组织病理学检查指标的检测。

2.3数据处理及统计方法

各组数据均以

表示，组间比较采用t检验考察显著性，以P＜0.05作为显著性指标。

3结果

3.1关节大体观察结果

造模3周后，与对照组相比，模型组膝关节无明显关节腔积液，大部分动物出现滑膜肿胀、增厚，颜色加深，股骨内髁关节面，软骨层厚度下降，未见关节面糜烂、软骨严重缺损、关节面溃疡形成、软骨剥脱等严重病变；3个本发明组合物组动物整体而言关节滑膜和软骨的变化状况与模型组相似，但严重程度有一定的减轻，见表21。

表21对大鼠骨关节炎模型关节大体形态的影响(n＝8，

)

组别	关节大体评分
		对照组	0±0
模型组	0.8±0.7
		组方1	0.6±0.5
组方2	0.5±0.7
		组方3	0.6±0.5

3.2对血清MDA和SOD水平的影响

与正常对照组相比，模型组以及各治疗组血清MDA和SOD水平均无显著改变，见表22。

表22对大鼠骨关节炎模型血清MDA和SOD水平的影响(n＝8，

)

组别	MDA(nmol/L)	SOD(NU/ml)
			对照组	6.2±1.5	115.2±12.6
模型组	6.5±2.0	114.1±15.7
			组方1	6.1±1.5	110.7±14.5
组方2	6.3±1.9	117.1±14.7
			组方3	6.4±1.6	114.8±13.7

3.3对关节软骨蛋白聚糖含量的影响

造模3周后，与对照组相比，模型组软骨组织中蛋白聚糖含量明显减少(P＜0.05)。3个本发明组合物组改善较明显(P＜0.05)，见表23。

表23对大鼠骨关节炎模型关节软骨蛋白聚糖含量的影响(n＝8，

)

组别	蛋白聚糖(μg软骨素/mg软骨干重)
		对照组	49.7±14.1
模型组	32.4±6.1＊
		组方1	38.5±6.1#
组方2	39.3±6.7#
		组方3	38.8±8.4#

^*P＜0.05，与对照组比较；#P＜0.05，与模型组比较

3.4组织病理学检查

各组软骨和滑膜组织病理学检查结果表明，各组软骨表面平整，均未见明显增生，模型组滑膜下组织见数量不等的炎细胞浸润，与模型组相比，本发明3组组合物对实验所致大鼠骨关节炎中滑膜病变均有一定的治疗作用。

4小结

本试验造模3周后，大鼠关节滑膜和软骨出现不同程度的病变，软骨蛋白聚糖含量减少，本发明组合物对上述改变有明显的改善作用，提示本品对于木瓜蛋白酶诱导大鼠软骨降解骨关节炎模型具有明显疗效。

实施例四本发明组合物镇痛作用的功能性评价

1.对醋酸致小鼠扭体反应的影响

1.1剂量与分组

选用健康ICR种小白鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，试验共设5组，分别为模型组(0.5％CMC-Na)、阳性药组(阿司匹林200mg/kg)、本发明组合物组(3个组合物配比见表24)，每组10只动物，各组配成相应浓度混悬液，给药体积均为10ml/kg。

表24本发明组合物不同配比设置

	硫酸软骨素	盐酸氨基葡萄糖	碳酸钙	透明质酸钠
					组方1	20％	45.6％	30.7％	3.7％
组方2	32.8％	32.8％	30.7％	3.7％
					组方3	45.6％	20％	30.7％	3.7％

1.2致痛及给药方法

各组动物试验前禁食12h，饮水不限。灌胃给予相应药物30min后，腹腔注射0.6％醋酸(0.2ml/只)，记录注射后15min内小鼠出现扭体的次数。以小鼠出现腰部肌肉反复收缩、拱背、臀部扭转和后肢伸展为扭体反应阳性。按下列公式计算药物抑制扭体百分率：

抑制率(％)＝(对照组扭体数-给药组扭体数)/对照组扭体数×100％

1.3结果

阳性药组和3个本发明组合物组可显著减少小鼠扭体次数，见表25。

表25对醋酸致小鼠扭体反应的影响(n＝10，

)

组别	扭体数
		模型组	31±8
阿司匹林	17±10**
		组方1	20±14**
组方2	19±7**
		组方3	20±14**

^**P＜0.01与模型组比较。

2.对小鼠热痛竖尾痛阈值的影响

2.1剂量与分组

选用健康ICR种小白鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，试验共设5组，分别为模型组(0.5％CMC-Na)、阳性药组(阿司匹林200mg/kg)、本发明组合物组(见表27)，每组10只动物，各组配成相应浓度混悬液，给药体积均为10ml/kg。

2.2致痛及给药方法

健康雄性ICR小鼠，体重18～22g，随机分组，试验前各组小鼠禁食过夜，试验当天各组灌胃相应受试药物(各组配制不同浓度)，给药前及给药后不同时间将小鼠尾下部垂直浸入(50.0±0.5℃)恒温水浴内，浸入长度3cm左右，以尾回缩出水面的潜伏期为测痛指标，作为痛阈值。分别测定给药前的痛阈值2次，取其平均值作为基础痛阈。灌胃给予相应药物后，测定给药后0.5、1、2h各小鼠的痛阈值。

2.3对小鼠热痛竖尾痛阈值的影响

阳性药组和3个本发明组合物可明显提高小鼠热痛阈值(P＜0.05，P＜0.01)，见表26。

表26对小鼠热痛竖尾痛阈值的影响(n＝10，

)

^*P＜0.05，^**P＜0.01与模型组比较。

3小结

本发明组合物可显著减少小鼠扭体次数，可明显提高小鼠热痛阈值。提示本发明组合物具有一定的镇痛作用。

实施例五本发明组合物口服片剂的制备

1配方

2制备工艺：

将硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、碳酸钙、透明质酸钠和微晶纤维素混合均匀，作为底料。将聚维酮K30配制成5％水溶液，作为浆液，制粒。颗粒加入0.5％的硬脂酸镁，混匀，片重为1.1g/片，压制成1000片，包衣，即得。

实施例六本发明组合物口服片剂的制备

1配方

2制备工艺：

将硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、碳酸钙、透明质酸钠和微晶纤维素混合均匀，作为底料。将聚维酮K30配制成5％水溶液，作为浆液，制粒。颗粒加入0.5％的硬脂酸镁，混匀，片重为1.1g/片，压制成1000片，包衣，即得。

实施例七本发明组合物口服片剂的制备

1配方

2制备工艺：

将硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、碳酸钙、透明质酸钠和微晶纤维素混合均匀，作为底料。将聚维酮K30配制成5％水溶液，作为浆液，制粒。颗粒加入0.5％的硬脂酸镁，混匀，片重为1.1g/片，压制成1000片，包衣，即得。

Claims (7)

1.一种具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物，其特征在于该组合物是由以下原料组成：硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、碳酸钙、透明质酸钠；其中各成分用量分别为：硫酸软骨素10-60％、盐酸氨基葡萄糖10-60％、碳酸钙10-50％、透明质酸钠1-10％。

2.如权利要求1所述的具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物，其特征在于各成分用量分别为：硫酸软骨素20-50％、盐酸氨基葡萄糖20-50％、碳酸钙20-40％、透明质酸钠2-7％。

3.如权利要求1所述的具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物，其特征在于各成分用量分别为：硫酸软骨素25-35％、盐酸氨基葡萄糖25-35％、碳酸钙25-35％、透明质酸钠3-4％。

4.如权利要求1所述的具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物，其特征在于各成分用量分别为：硫酸软骨素32.8％、盐酸氨基葡萄糖32.8％、碳酸钙30.7％、透明质酸钠3.7％。

5.如权利要求1、2、3或4所述的具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物，其特征是制成保健食品，剂型为口服片剂。

6.如权利要求5所述的具有增加骨密度、抗炎镇痛作用的组合物制成的保健食品口服片剂，其制备方法是将硫酸软骨素、盐酸氨基葡萄糖、碳酸钙、透明质酸钠和微晶纤维素混合均匀，作为底料；将聚维酮K30配制成5％水溶液，作为浆液，制粒；颗粒加入0.5％的硬脂酸镁，混匀，压片，包衣，即得。

7.如权利要求1、2、3或4所述的组合物，其特征是制成的保健食品还可以是分散片、胶囊剂、颗粒剂、含化片、口嚼片。