CN103718830B - 一种工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法 - Google Patents
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Abstract
一种工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法，包括以下步骤：（1）保存菌种准备；（2）保护剂准备；（3）保存操作步骤：1）用无菌操作用接种针将母种种源带菌丝的琼脂切成黄豆大小的切片，装入无菌试管中，每个无菌试管装4-6个琼脂切片，然后加入保护剂，至覆盖琼脂切片，封盖，用记号笔作好标记；2）在塑料瓶底、盖和侧壁打孔，将装有琼脂切片的无菌试管放入塑料瓶中，然后将所述塑料瓶放入超低温冰柜，按照每1分钟降低1±0.1℃的速度，降低温度至-80～-150℃。本发明工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法，使杏鲍菇菌种处于极缓慢生理代谢状态，一般保存3～5年，其优良遗传特性仍可保持不变。
Description
技术领域
本发明涉及一种杏鲍菇菌种保存方法，尤其是涉及一种工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法。
背景技术
杏鲍菇菌种是杏鲍菇工厂化生产的重要因素。菌种内在质量的高低及遗传性状的优劣决定着食用菌的生产能力，是内因。在相同的栽培条件下，良种比一般品种可增产三成以上，甚至成倍增长。但选择出的优良菌种，如果管理不好，就会引起衰退，或被杂菌污染，造成减产，因此，保藏菌种和选育菌种具有同等重要的意义。在生产中，由于原种和栽培种数量大，不易保藏，菌种生产者通常以母种形式保藏，栽培前再进行扩接用于生产。杏鲍菇菌种通过保藏，适当控制其生长环境，使优良菌种不衰退，不变异，不死亡，不被杂菌污染，以保证其在生产上可以长期应用。
现有菌种的保藏方法很多，常用的有低温保藏法、液体石蜡保藏法、麦粒保藏法、盐水保藏法等，对于生理特性变异快的蘑菇菌糸（2n）采用以上保藏方法需反复地斜面继代培养，保藏菌株遗传特性容易发生变化（劣化），长期保存非常困难，保存效果差，不适合用于工厂化杏鲍菇生产用菌种长期保存。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种可不改变遗传特性，能长期保存且保存效果好的工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法，包括以下步骤：
（1）保存菌种准备
将菌种常规接种于普通培养基上，经25±1℃3～5天培养后生长出典型菌落待用；杏鲍菇的菌种根据离接种源的位置不同培养特性就有差异，为保证培养特性一致性，接种菌块在同心圆上切取；
（2）保护剂准备
采用甘油或二甲基亚砜作为保护剂，使用前用蒸馏水将甘油或二甲基亚砜稀释成体积浓度为10～12%的甘油水溶液或二甲基亚砜水溶液，装入三角瓶，瓶口塞好棉塞，高压灭菌冷却后使用；
（3）保存操作步骤
1）用无菌操作用接种针将母种种源带菌丝的琼脂切成黄豆大小的切片，装入无菌试管中，每个无菌试管装4-6个琼脂切片，然后加入步骤（2）所述保护剂，至覆盖琼脂切片，封盖，用记号笔作好标记；
2）在塑料瓶底、盖和侧壁打孔，将装有琼脂切片的无菌试管放入塑料瓶中，然后将所述塑料瓶放入超低温冰柜，按照每1分钟降低1±0.1℃的速度，降低温度至-80～-150℃。
需要使用菌种时，将装有琼脂切片的无菌试管取出，放入38～40℃的水浴中来回漂荡，直至冰块融化，打开试管，取出载有种源带菌丝的琼脂切片，转管移植。
本发明工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法，使杏鲍菇菌种处于极缓慢生理代谢状态，一般保存3～5年，其优良遗传特性仍可保持不变。
在-80℃～-150℃状态下，杏鲍菇可保存36个月～60个月。因此，超低温保存菌种法，可满足科研与生产的需要，且简便可行。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步说明。
本实施例包括以下步骤：
（1）保存菌种准备
将菌种常规接种于普通培养基上，经25±1℃4天培养后生长出典型菌落，在同心圆上切取接种菌块；
（2）保护剂准备
采用甘油作为保护剂，使用前用蒸馏水将甘油稀释成体积浓度为10%的甘油水溶液，装入三角瓶，瓶口塞好棉塞，高压灭菌冷却后使用；
（3）保存操作步骤
1）用无菌操作用接种针将母种种源带菌丝的琼脂切成黄豆大小的切片，装入无菌试管中，每个无菌试管装5个琼脂切片，然后加入步骤（2）所述保护剂，至覆盖琼脂切片，封盖，用记号笔作好标记；
2）在塑料瓶底、盖和侧壁打孔，将装有琼脂切片的无菌试管放入塑料瓶中，然后将所述塑料瓶放入超低温冰柜，按照每1分钟降低1±0.1℃的速度，降低温度至-80℃。
需要使用菌种时，将装有琼脂切片的无菌试管取出，放入38～40℃的水浴中来回漂荡，直至冰块融化，打开试管，取出载有种源带菌丝的琼脂切片，转管移植。
本发明工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法，使杏鲍菇菌种处于极缓慢生理代谢状态，保存4年，其优良遗传特性仍保持不变。
实施例2
本实施例包括以下步骤：
（1）保存菌种准备
将菌种常规接种于普通培养基上，经25±1℃3天培养后生长出典型菌落，在同心圆上切取接种菌块；
（2）保护剂准备
采用二甲基亚砜作为保护剂，使用前用蒸馏水将二甲基亚砜稀释成体积浓度为12%的二甲基亚砜水溶液，装入三角瓶，瓶口塞好棉塞，高压灭菌冷却后使用；
（3）保存操作步骤
1）用无菌操作用接种针将母种种源带菌丝的琼脂切成黄豆大小的切片，装入无菌试管中，每个无菌试管装5个琼脂切片，然后加入步骤（2）所述保护剂，至覆盖琼脂切片，封盖，用记号笔作好标记；
2）在塑料瓶底、盖和侧壁打孔，将装有琼脂切片的无菌试管放入塑料瓶中，然后将所述塑料瓶放入超低温冰柜，按照每1分钟降低1±0.1℃的速度，降低温度至-140℃。
需要使用菌种时，将装有琼脂切片的无菌试管取出，放入38～40℃的水浴中来回漂荡，直至冰块融化，打开试管，取出载有种源带菌丝的琼脂切片，转管移植。
本发明工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法，使杏鲍菇菌种处于极缓慢生理代谢状态，保存5年，其优良遗传特性仍保持不变。
Claims (1)
1.一种工厂化生产用杏鲍菇菌种超低温保存方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）保存菌种准备
将菌种常规接种于普通培养基上，经25±1℃3～5天培养后生长出典型菌落待用；杏鲍菇的菌种根据离接种源的位置不同培养特性就有差异，为保证培养特性一致性，接种菌块在同心圆上切取；
（2）保护剂准备
采用甘油或二甲基亚砜作为保护剂，使用前用蒸馏水将甘油或二甲基亚砜稀释成体积浓度为10～12%的甘油水溶液或二甲基亚砜水溶液，装入三角瓶，瓶口塞好棉塞，高压灭菌冷却后使用；
（3）保存操作步骤
1）用无菌操作用接种针将母种种源带菌丝的琼脂切成黄豆大小的切片，装入无菌试管中，每个无菌试管装4-6个琼脂切片，然后加入步骤（2）高压灭菌冷却后的体积浓度为10～12%的甘油水溶液或二甲基亚砜水溶液，至覆盖琼脂切片，封盖，用记号笔作好标记；
2）在塑料瓶底、盖和侧壁打孔，将装有琼脂切片的无菌试管放入塑料瓶中，然后将所述塑料瓶放入超低温冰柜，按照每1分钟降低1±0.1℃的速度，降低温度至-80～-150℃。
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