CN103694293A - 一种檵木中银椴苷的提取纯化方法及检测方法 - Google Patents

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冯育林
魏慧珍
张武岗
杨世林
金浩鑫
吕尚
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Abstract

本发明涉及一种檵木中银椴苷的提取纯化方法及检测方法，取檵木药材粉末，60%乙醇回流，提取物采用大孔树脂进行分离纯化，70%乙醇洗脱物以甲醇溶解，减压硅胶柱层析，乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱，流份A以甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱。反复ODS柱层析，甲醇水梯度洗脱，再经MCI-gel柱层析，甲醇/水梯度洗脱，得银椴苷。经核磁及质谱鉴定为银椴苷C30H26O13，经本发明检测方法测定，含量为96.14%。

Description

一种檵木中银椴苷的提取纯化方法及检测方法
技术领域
本发明涉及一种檵木中银椴苷的提取纯化方法及检测方法，特别是涉及一种白花檵木中银椴苷的检测方法。
背景技术
银椴苷（Tiliroside），又名山奈酚-3-0-β-D-（6‘’-0-反式-对羟基桂皮酰基）吡喃葡萄糖苷，是一种黄酮类化合物，为黄色针晶，mp.246~248℃，分子式C30H26O13，分子量594.52。研究显示银椴苷在植物中分布比较普遍，在白花檵木、红花檵木、地桃花、巴西甘薯叶、蜀葵花、白头翁地上部分等植物中均有分离得到，其中在白花檵木茎中含量达0.018%，白花檵木叶中含量达0.13%；红花檵木茎中含量达0.0018%，红花檵木叶中含量达0.12%。据报道，银椴苷具有较强的抗氧化性、清除自由基活性和抗炎活性，对补体系统的补体途径显示出非常有潜力的抗补体活性（IC50=5.4×10-5M），其活性甚至比公认的补体系统抑制剂迷迭香酸活性还强。
银椴苷的提取分离方法一般都采用95%乙醇回流提取、浓缩后用水混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇等非极性溶剂萃取，这些分离纯化工艺都需经过反复柱层析步骤，存在分离时间长、重现性差、使用大量有毒溶剂等缺点。本发明克服了以上现有技术中的不足，提供了一种从檵木中提取分离高纯度的银椴苷的新方法。同时建立了其检测方法，该检测方法未见文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种檵木中银椴苷的提取纯化方法及检测方法，以克服现有工艺的不足，填补檵木中银椴苷检测的空白，更好地满足研发需要。
为实现以上目的，本发明采用以下技术方案：
一种檵木中银椴苷的提取纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取檵木药材，粉碎，以8倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 小时，合并提取液，回收溶剂，减压干燥；
（2）提取物采用大孔树脂进行分离纯化，得水洗脱物、10%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物；
（3）70%乙醇洗脱物，甲醇溶解，硅胶拌样后进行减压硅胶柱层析，乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱，共得10个流份(Fr.A~J)；
（4）取Fr.A，甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶得Lor-4，上层溶液，挥干溶剂，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱，共得8个流份(Fr.A1~8)。取Fr.A6反复ODS柱层析，甲醇/水梯度洗脱，再经柱层析，甲醇/水梯度洗脱，即得到高纯度银椴苷。银椴苷ESI质谱图见附图1，核磁氢谱图见附图2，核磁碳谱图见附图3，高效液相色谱图见附图4。
步骤（2）中大孔树脂型号为HPD 400。
步骤（3）中硅胶为100-200目，减压硅胶为300-400目。
步骤（3）、（4）中乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱比例为：1:0~1:1。
步骤（4）中最后阶段层析柱型号为MCI-gel，甲醇/水梯度洗脱比例为：1:0~1:1。
采用上述技术方案的有益效果是：采用乙酸乙酯/甲醇、甲醇/水梯度洗脱，与以往技术相比，具有分离能力强、样品损失少、产品质量优等特点。
一种檵木中银椴苷的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）精密称取上述自制银椴苷5.13mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得每1ml中含0.0252mg的溶液，摇匀，得银椴苷对照溶液；
（2）取檵木药材粉碎，过4号筛，取白花檵木药材粉末1g，精密称定，置平底烧瓶瓶中，精密加入甲醇约50ml，称定重量，回流提取1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即供试品溶液。
（3）以上两种溶液各取10μl注入高效液相色谱仪测定，色谱条件为：Waters高效液相色谱仪(Waters2695分离单元，Waters2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站)；Cosmosil C18色谱柱（4.6×250mm 5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（55：45）；检测波长320nm；流速1.0ml/min。在此色谱条件下，银椴苷峰型较好，并且能够较好的分离。以本发明检测方法测定白花檵木中银椴苷高效液相色谱图见附图5。
 
下面结合实施例详细说明本发明。
具体实施例：
实施例1:
取白花檵木药材12 kg，粉碎，以10倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，回收溶剂，减压干燥。提取物采用HPD 400大孔树脂进行分离纯化，得水洗脱物、10%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物。70%乙醇洗脱物（456.8 g），甲醇溶解，100-200目硅胶拌样后进行减压硅胶（300-400目）柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得10个流份(Fr.A-J)。取Fr.A（75.2g），甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶得Lor-4，上层溶液，挥干溶剂，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得8个流份(Fr.A1-8)。取Fr.A6反复ODS柱层析，甲醇水梯度洗脱，再经MCI-gel柱层析，甲醇水梯度洗脱，得银椴苷。经本发明检测方法测定，其含量为95.22%。
实施例2:
取白花檵木药材12 kg，粉碎，以8倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，回收溶剂，减压干燥。提取物采用HPD 400大孔树脂进行分离纯化，得水洗脱物、10%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物。70%乙醇洗脱物（365.4 g），甲醇溶解，100-200目硅胶拌样后进行减压硅胶（300-400目）柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得10个流份(Fr.A-J)。取Fr.A（60.15g），甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶得Lor-4，上层溶液，挥干溶剂，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得8个流份(Fr.A1-8)。取Fr.A6反复ODS柱层析，甲醇水梯度洗脱，再经MCI-gel柱层析，甲醇水梯度洗脱，得银椴苷。经本发明检测方法测定，其含量为95.38%。
实施例3:
取白花檵木药材15 kg，粉碎，以10倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，回收溶剂，减压干燥。提取物采用HPD 400大孔树脂进行分离纯化，得水洗脱物、10%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物。70%乙醇洗脱物（685.2 g），甲醇溶解，100-200目硅胶拌样后进行减压硅胶（300-400目）柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得10个流份(Fr.A-J)。取Fr.A（112.8g），甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶得Lor-4，上层溶液，挥干溶剂，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得8个流份(Fr.A1-8)。取Fr.A6反复ODS柱层析，甲醇水梯度洗脱，再经MCI-gel柱层析，甲醇水梯度洗脱，得银椴苷。经本发明检测方法测定，其含量为95.55%。
实施例4:
取白花檵木药材15 kg，粉碎，以8倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，回收溶剂，减压干燥。提取物采用HPD 400大孔树脂进行分离纯化，得水洗脱物、10%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物。70%乙醇洗脱物（576.2 g），甲醇溶解，100-200目硅胶拌样后进行减压硅胶（300-400目）柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得10个流份(Fr.A-J)。取Fr.A（98.8g），甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶得Lor-4，上层溶液，挥干溶剂，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得8个流份(Fr.A1-8)。取Fr.A6反复ODS柱层析，甲醇水梯度洗脱，再经MCI-gel柱层析，甲醇水梯度洗脱，得银椴苷。经本发明检测方法测定，其含量为95.73%。
实施例5:
取白花檵木药材17 kg，粉碎，以8倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，回收溶剂，减压干燥。提取物采用HPD 400大孔树脂进行分离纯化，得水洗脱物、10%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物。70%乙醇洗脱物（516.2 g），甲醇溶解，100-200目硅胶拌样后进行减压硅胶（300-400目）柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得10个流份(Fr.A-J)。取Fr.A（98.75 g），甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶得Lor-4，上层溶液，挥干溶剂，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯：甲醇梯度洗脱（1:0-1:1），共得8个流份(Fr.A1-8)。取Fr.A6反复ODS柱层析，甲醇水梯度洗脱，再经MCI-gel柱层析，甲醇水梯度洗脱，得银椴苷。经本发明检测方法测定，其含量为96.14%。
附图说明
图1为以本发明提取纯化方法所得银椴苷ESI质谱图。
图2为以本发明提取纯化方法所得银椴苷核磁氢谱图。
图3为以本发明提取纯化方法所得银椴苷核磁碳谱图。
图4为以本发明检测方法测定银椴苷高效液相色谱图。
图5为以本发明检测方法测定白花檵木中银椴苷高效液相色谱图。

Claims (6)

1.一种檵木中银椴苷的提取纯化方法及检测方法，其特征在于：
（1）取檵木药材，粉碎，以8倍量60%乙醇回流提取3次，每次2 小时，合并提取液，回收溶剂，减压干燥；
（2）提取物采用大孔树脂进行分离纯化，得水洗脱物、10%乙醇洗脱物、70%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物；
（3）70%乙醇洗脱物，甲醇溶解，硅胶拌样后进行减压硅胶柱层析，乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱，共得10个流份(Fr.A~J)；
（4）取Fr.A，甲醇溶解，过滤，沉淀反复重结晶得Lor-4，上层溶液，挥干溶剂，再用乙酸乙酯溶解，进行聚酰胺柱层析，乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱，共得8个流份(Fr.A1~8).
取Fr.A6反复ODS柱层析，甲醇/水梯度洗脱，再经柱层析，甲醇/水梯度洗脱，即得到高纯度银椴苷。
2.一种檵木中银椴苷的检测方法，其特征在于：
（1）精密称取权利要求1制备得到的银椴苷5.13mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得每1ml中含0.0252mg的溶液，摇匀，得银椴苷对照溶液；
（2）取檵木药材粉碎，过4号筛，取白花檵木药材粉末1g，精密称定，置平底烧瓶瓶中，精密加入甲醇约50ml，称定重量，回流提取1小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即供试品溶液.
（3）以上两种溶液各取10μl注入高效液相色谱仪测定，色谱条件为：Waters高效液相色谱仪(Waters2695分离单元，Waters2996二极管阵列检测器，Empower色谱工作站)；Cosmosil C18色谱柱（4.6×250mm 5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（55：45）；检测波长320nm；流速1.0ml/min.在此色谱条件下，银椴苷峰型较好，并且能够较好的分离。
3.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：大孔树脂型号为HPD 400。
4.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：硅胶为100-200目，减压硅胶为300-400目。
5.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：乙酸乙酯/甲醇梯度洗脱比例为：1:0~1:1。
6.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于：最后阶段层析柱型号为MCI-gel，甲醇/水梯度洗脱比例为：1:0~1:1。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105001286A (zh) * 2015-07-23 2015-10-28 昆明理工大学 一种藏药绿萝花中银椴苷的提取方法
CN107917967A (zh) * 2016-10-10 2018-04-17 刘浩元 白花檵木叶中几种成分同时测定的一种检测方法
CN115356427A (zh) * 2022-08-24 2022-11-18 海南葫芦娃药业集团股份有限公司 一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1393733A1 (en) * 2002-09-02 2004-03-03 MERCK PATENT GmbH Flavonoid-derivate for the treatment of eczema
CN101693037A (zh) * 2009-10-21 2010-04-14 中国人民解放军第二军医大学 黄酮苷类化合物在制备治疗疟疾的药物中应用
CN102304161A (zh) * 2011-07-06 2012-01-04 南京泽朗医药科技有限公司 一种提取纯化银椴苷的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1393733A1 (en) * 2002-09-02 2004-03-03 MERCK PATENT GmbH Flavonoid-derivate for the treatment of eczema
CN101693037A (zh) * 2009-10-21 2010-04-14 中国人民解放军第二军医大学 黄酮苷类化合物在制备治疗疟疾的药物中应用
CN102304161A (zh) * 2011-07-06 2012-01-04 南京泽朗医药科技有限公司 一种提取纯化银椴苷的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
游璐茜: "檵木叶中化学成分的提取分离及初步研究", 《厦门大学硕士学位论文》, 31 December 2009 (2009-12-31) *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105001286A (zh) * 2015-07-23 2015-10-28 昆明理工大学 一种藏药绿萝花中银椴苷的提取方法
CN107917967A (zh) * 2016-10-10 2018-04-17 刘浩元 白花檵木叶中几种成分同时测定的一种检测方法
CN115356427A (zh) * 2022-08-24 2022-11-18 海南葫芦娃药业集团股份有限公司 一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法
CN115356427B (zh) * 2022-08-24 2024-02-20 海南葫芦娃药业集团股份有限公司 一种清肝止淋汤中黑豆的鉴别方法

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