CN103667263A - 一种幼海蜇基因组dna的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种腔肠动物门水母体基因组DNA的提取方法，更具体的说涉及一种幼海蜇基因组DNA提取方法。具体为：取幼海蜇触手，放入95%酒精中脱水后，放入离心管中，按照CTAB法提取幼海蜇DNA。本发明提供一种简单、快速幼海蜇DNA的提取方法，适合大规模DNA提取，取样品方便快捷，幼海蜇不需处死，该方法提取DNA纯度高，能满足后续PCR等分子生物学实验的要求，有利于选择育种基础群体家系选育、分子标记辅助育种等后续研究。

Description

一种幼海蜇基因组DNA的提取方法
技术领域
本发明涉及腔肠动物门水母体一种组织DNA的提取方法，更具体的说涉及一种幼海蜇基因组DNA提取方法。
背景技术
DNA提取是分子生物学研究最基础的技术，高质量的DNA是开展分子生物学后续研究的重要保证。对于水产动物基础群体家系选育、分子标记辅助育种和遗传多样性等方面的研究，要求尽量保证群体个体成活并需要大量的研究个体，目前许多DNA提取方法已经不能很好地满足这种要求；已报道的海蜇基因组DNA提取方法，操作复杂，耗时长，不利于大规模样本的提取，而且无法保证个体的成活；幼海蜇是选择育种研究中最重要的发育阶段，其含水量高、自溶和再生等生物学特点，高质量的DNA提取难度较大，实验研究中我们对幼海蜇不同组织器官进行基因组DNA的提取，发现DNA提取效果差异显著，本发明提供一种简单快速的幼海蜇DNA提取方法。
发明内容
本发明目的是提供一种简单、经济快速的幼海蜇DNA的提取方法，克服现有DNA提取方法存在的缺陷，由于幼海蜇不同组织因其细胞结构及所含的成分不同，从而导致不同组织器官基因组DNA提取效果存在明显差异，本发明选择幼海蜇触手为研究对象，幼海蜇不需处死，适合大规模DNA的提取，该方法提取DNA纯度高，能满足后续PCR等分子生物学实验的要求。
一种幼海蜇基因组DNA提取方法，包括以下步骤：
1）取幼海蜇触手2～4根，放入95%酒精中脱水后，用CTAB提取液消化至溶液澄清；
2）对步骤1）制备的样品用CTAB法提取DNA。
优选的，对于上文技术方案中，所述的CTAB法提取DNA的步骤如下：
①样品抽提：向样品消化液中加入等体积饱和酚、再加入等体积氯仿-异戊醇溶液混匀，上下震荡离心，吸取上清液，再加入氯仿-异戊醇溶液混匀，离心吸取上清液；
②沉淀：向步骤①上清液中加入2倍体积无水乙醇混匀，放入-20℃冰箱20min，离心弃上清液；
③洗涤：用70%的乙醇洗涤2次后晾干；
④溶解：晾干后加入50uL的1%TE溶解，加入RNA酶2uL，-20℃保存待用。
优选的，对于上文技术方案中，所述的触手与CTAB法中所用的CTAB提取液的比例为0.01g:300ul，50～55℃消化0.7～1.0小时。
上述技术方案中使用的溶液配制方法如下：
CTAB提取液的配制：3mL浓度为2%的CTAB溶液、30uL浓度为20mg/mL的蛋白酶K。
2%的CTAB溶液配制：称取1g CTAB溶解于20mL重蒸馏水中，移取8mL1M Tris-HCl（pH8.0）和10mL0.5M EDTA（pH8.0）于溶液中，再称取1gNaCl加入到溶液中，并向溶液中加入100uL0.5%β–巯基乙醇，加重蒸馏水，定容至50mL。
氯仿-异戊醇溶液的配制：向24mL氯仿中加入1mL异戊醇。
有益效果：
本发明的幼海蜇基因组DNA提取方法，只需少量幼海蜇触手，取样品方便、无需研磨和剪碎等繁琐操作，耗时短，更适合大规模基因组DNA提取；海蜇再生能力强，取少量触手对个体成活无影响，更利于选择育种基础群体家系选育、分子标记辅助育种等后续研究。
附图说明
图1为本发明提取DNA检测电泳图：图中编号1-5为幼海蜇触手提取的DNA；编号6-10为幼海蜇伞状部提取的DNA。上样量均为5uL，其中M为Marker（DL15000）购自于宝生物工程（大连）有限公司。
具体实施方式
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
用本发明的方法提取幼海蜇基因组DNA
1）取新鲜幼海蜇触手2根约0.01g，放入95%酒精中脱水并保存；
2）2根经过步骤1）脱水处理的触手用蒸馏水冲洗，用滤纸吸干表面水分后，无需处理，直接放入1.5mL的离心管中，加入300uLCTAB提取液，放入55℃杂交炉中，消化1.0小时，直至溶液澄清；
3）向样品消化液中加入300uL饱和酚、300uL氯仿和异戊醇（24:1）混匀，上下震荡10min，离心12000rpm10min，吸取上清液500uL；
4）加入500uL氯仿和异戊醇（24:1）混匀，离心12000rpm10min，吸取上清液400uL；
5）加入无水乙醇800uL混匀，放入-20℃冰箱20min，离心12000rpm10min，弃上清液；
6）用70%的乙醇洗涤2次，置于空气中让其自然干燥或者用风筒吹干；晾干后加入50uL的1%TE溶解，加入RNA酶2uL，-20℃保存待用。
本实验提取幼海蜇触手部位基因组DNA琼脂糖电泳如图1（1-5道）所示，DNA主带完整、条带亮、纯度高。
实施例2：
与实施例1不同之处在于：
1）取新鲜幼海蜇伞状部组织约0.01g，放入95%酒精中脱水并保存。
2）伞状部组织用蒸馏水冲洗，用滤纸吸干表面水分，放入1.5mL的离心管中用剪刀剪碎至无明显颗粒状，加入300uLCTAB提取液，放入55℃杂交炉中，消化1.0小时，直至溶液澄清；
本实验提取幼海蜇伞状部组织基因组DNA琼脂糖电泳如图1（6-10道）所示，DNA主带完整，条带较暗，纯度较低。
对比实施例1和2：幼海蜇触手和伞状部基因组DNA提取比较见图1，从图1中可以看出，触手基因组DNA（泳道1-5）质量明显高于伞状部（泳道6-10）。证明本发明相比现有技术的幼海蜇基因组DNA提取方法，仅仅需要少量幼海蜇触手即可，取样品方便、无需现有技术的研磨和剪碎等繁琐操作，耗时短，适合大规模基因组DNA提取；海蜇再生能力强，取少量触手对个体成活无影响，更利于选择育种基础群体家系选育、分子标记辅助育种等后续研究。

Claims (3)

1.一种幼海蜇基因组DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）取幼海蜇触手2～4根，放入95%酒精中脱水后，用CTAB提取液消化至溶液澄清；
2）对步骤1）制备的样品用CTAB法提取DNA。
2.根据权利要求1所述的幼海蜇基因组DNA提取方法，其特征在于：所述的CTAB法提取DNA的步骤如下：
①样品抽提：向样品消化液中加入等体积饱和酚、再加入等体积氯仿-异戊醇溶液混匀，上下震荡离心，吸取上清液，再加入氯仿-异戊醇溶液混匀，离心吸取上清液；
②沉淀：向步骤①上清液中加入2倍体积无水乙醇混匀，放入-20℃冰箱20min，离心弃上清液；
③洗涤：用70%的乙醇洗涤2次后晾干；
④溶解：晾干后加入50uL的1%TE溶解，加入RNA酶2uL，-20℃保存待用。
3.根据权利要求1所述的幼海蜇基因组DNA提取方法，其特征在于：所述的触手与CTAB法中所用的CTAB提取液的比例为0.01g:300ul，50～55℃消化0.7～1.0小时。
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