CN103655601A - 一种用于膀胱灌洗的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于膀胱灌洗的组合物。以组合物的总体积计，它含有以下必要组份：0.01-0.1w/v%的透明质酸；和0.005-0.2w/v%的壳聚糖；以及余量的磷酸盐缓冲液。

Description

一种用于膀胱灌洗的组合物

技术领域

本发明涉及药物制剂领域，尤其涉及一种用于膀胱灌洗的组合物及其制备方法。

背景技术

自从上世纪70年代就有学者提出膀胱屏障理论，认为膀胱黏膜上皮细胞间的紧密连接特殊的伞状细胞，有助于阻挡细菌、某些分子和离子的作用。膀胱黏膜固有层表面分布了一层葡萄糖氨基聚糖（GAG），它可以阻止有害因子对膀胱黏膜的粘附作用，使膀胱黏膜免于受损。当GAG层受到损伤时，尿液中的刺激物就可以透过膀胱的上皮组织，这会引起即刻疼痛，同时也是一个衰退过程的开始，这个防护屏障的损伤也会加大感染发展和肿瘤病变的风险。与GAG层损伤有关的膀胱疾病有膀胱疼痛综合征、间质性膀胱炎、尿路感染、放射引起的膀胱炎和出血性膀胱炎等。

间质性膀胱炎是一种与排尿功能相关的原因不明的膀胱疼痛性疾病，伴有尿频、尿急、夜尿增多。97%的患者疼痛加重与进食某些食物或饮料有关，膀胱区疼痛因膀胱充盈而加重，膀胱排空后症状缓解或消失。间质性膀胱炎的治疗目前分为非手术治疗和手术治疗，但主要采用非手术治疗。治疗的选择的原则包括饮食调整和行为治疗等治疗措施。药物的选择依据循证医学证据和原则，口服药物和膀胱灌注可同时进行。间质性膀胱炎目前无治愈方法，治疗目的为缓解症状，改善生活质量。由于复发率较高，国内外临床上多主张联合治疗。膀胱水扩张术是目前临床应用较广泛的治疗方法，其有效性源于肌肉输入神经末梢的破坏，最明显的效果发生在扩张后短时间内，但一般能持续6个月。目前单纯膀胱水扩张60%-70%患者短期疗效满意，但长期疗效欠佳。GAG层可调节膀胱黏膜通透性，又有抗粘附的屏障作用，能够阻止细菌与尿路上皮接触粘附。任何原因破坏了尿路上皮的GAG层，均可导致黏膜上皮通透性的增加，钾离子等尿液中的有害物质渗入膀胱间质，导致肥大细胞激活、释放组织胺，引起炎症反应，出现尿频、尿急、膀胱疼痛等症状，因此膀胱黏膜上皮通透性改变被认为是间质性膀胱炎的原因。

尿路感染是最常见的细菌感染之一，50%的妇女一生中会经历一次尿路感染，且部分患者反复发作，严重影响生活质量，而尿路感染中主要是细菌性膀胱炎以及神经源性造成的细菌性膀胱泌尿系统感染。正常人体泌尿生殖道的黏膜表面存在很多种微生物，这些细菌在数量上是我们人体细胞数量的十倍，在机体免疫功能正常的情况下，这些微生物是不能引起感染的。膀胱上皮细胞在防御机制中担当重要角色，它在尿液与膀胱组织之间形成一层物理屏障，阻挡细菌侵入。正常膀胱上皮细胞能分泌黏蛋白，在膀胱上皮细胞表面覆盖着一层由粘蛋白构成的粘液状物质，其中主要成分为酸性多糖，即GAG层，细菌就黏附在这层物质上，排尿时细菌就随着这些粘蛋白被排出，起到防止细菌直接黏附在上皮细胞和保护膀胱的作用。如果GAG层受损伤，将使膀胱黏膜上皮细胞直接暴露于尿液成分中，在这种情况下，细菌黏附、感染膀胱的机率就会大大增加，因此修复受损的GAG层，对于膀胱抵御细菌入侵，恢复自我保护功能意义重大。

放射治疗盆腔及其周围肿瘤时容易并发放射性膀胱炎，尤其在照射计量过大、患者对放射线敏感时。电离辐射可致膀胱黏膜充血、水肿及溃疡出血、上皮细胞萎缩等损伤，进而导致黏膜屏障的破坏，诱发尿路感染甚至出血性膀胱炎。放射导致的膀胱炎使GAG层受损，出现血尿和相应的膀胱刺激症状。出血性、放射性膀胱炎治疗方法复杂，全身、局部用止血药物效果均不明显，高压氧舱治疗总有效率可达到74%，还有一部分需电凝止血来控制出血率，操作复杂，费用高。

膀胱黏膜黏附力较差，这是多数药物膀胱灌注疗效差的原因，膀胱表面的黏附力决定于黏膜及聚合物的结构和电荷。因此本领域迫切需要提供更有效的灌洗膀胱的制剂，以替代GAG层和增强膀胱黏膜黏附力。

发明内容

本发明的旨在提供一种用于膀胱灌洗的组合物及其制备方法。

在本发明的第一方面，提供了一种用于膀胱灌洗的组合物，以组合物的总体积计，它含有以下必要组份：

0.01-0.1w/v%的透明质酸；和

0.005-0.2w/v%的壳聚糖；

以及余量的磷酸盐缓冲液。

在另一优选例中，所述透明质酸选自透明质酸钠、透明质酸镁、透明质酸钙或透明质酸锌。

在另一优选例中，所述的壳聚糖是水溶性壳聚糖。

在另一优选例中，所述磷酸盐缓冲液含有氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，以及余量的水；以所述的磷酸盐缓冲液的总体积计，其中含有

0.1-1.0w/v%的氯化钠；

0.01-0.2w/v%的磷酸氢二钠；和

0.01-0.1w/v%的磷酸二氢钠。

在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的组合物的制备方法，所述方法包括步骤：将0.01-0.1w/v%的透明质酸、0.005-0.2w/v%的壳聚糖以及余量的磷酸盐缓冲液混合，得到如上所述的本发明提供的组合物。

在另一优选例中，所述磷酸盐缓冲液是将氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠以及余量的水混合而得到；更优选水为注射用水。

在另一优选例中，所述磷酸盐缓冲液是将氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠以及余量的水混合、灭菌后而得到。

在本发明的第三方面，提供了一种混合物的用途，所述的混合物由透明质酸和水溶性壳聚糖构成，所述的混合物用于制备治疗膀胱疾病的灌洗剂。

在另一优选例中，所述的膀胱疾病包括膀胱疼痛综合征、间质性膀胱炎、尿路感染、放射性膀胱炎和出血性膀胱炎。

据此，本发明提供了更有效的灌洗膀胱的制剂，以替代GAG层和增强膀胱黏膜黏附力。

具体实施方式

发明人经过深入的研究，发现将透明质酸和壳聚糖联用，可以修复、替代GAG层以及增强膀胱黏膜黏附力。在此基础上，完成了本发明。

如本文所用，术语“必要组份”指必要的成分，即透明质酸和壳聚糖。

如本文所用，术语“含有”包括了“包括”、“基本上由……构成”和“由……构成”。

如本文所用，“透明质酸”是指由N-乙酰氨基葡萄糖-D-葡萄糖醛酸为双糖单位组成的直链高分子多糖。可以使用本领域常规的方法得到，例如但不限于，细菌发酵法生产或组织提取，优先选用细菌发酵法原料。本发明使用的透明质酸是透明质酸盐，例如但不限于，透明质酸钠、透明质酸镁、透明质酸钙或透明质酸锌等。透明质酸分子量不小于60万道尔顿，优选为90-150万道尔顿。

如本文所用，“壳聚糖”是天然多糖甲壳素的脱乙酰基产物，学名聚氨基葡糖，是由N-乙酰-D-氨基葡糖单体通过β-1，4-糖苷键连接起来的直链状高分子化合物。壳聚糖是一种含有游离氨基的碱性多糖，其相对分子质量从数十万到数百万不等。本发明优选使用水溶性壳聚糖，即能溶于水的壳聚糖，包括脱乙酰度在50%-60%的壳聚糖，羧化壳聚糖（如羧甲基壳聚糖），壳聚糖盐类（如壳聚糖盐酸盐、壳聚糖季铵盐、壳聚糖乳酸盐和壳聚糖谷氨酸盐等，壳聚糖硫酸酯，壳聚糖寡糖，类透明质酸壳聚糖等。分子量不低于20万道尔顿。

如本文所用，术语“基本上由……构成”指在组合物中，除了含有必要成分或必要组份之外，还可含有少量的且不影响有效成分的次要成分和/或杂质。例如，可以含有抗氧化剂以防止氧化，以及其他本领域常用的添加剂。

本发明提供的组合物以其总体积计，可以含有以下必要组份：

0.01-0.1w/v%的透明质酸；和0.005-0.2w/v%的壳聚糖；以及余量的磷酸盐缓冲液；较佳地，所述的组合物中含有0.02-0.08w/v%的透明质酸；和0.01-0.1w/v%的壳聚糖。在另一优选例中，透明质酸和壳聚糖的配比应不小于1∶2；优选1∶2-1∶0.1；更优选1∶2-1∶0.5。

本发明提供的组合物中涉及的磷酸盐缓冲液含有氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，以及余量的水；以所述的磷酸盐缓冲液的总体积计，其中含有0.1-1.0w/v%的氯化钠；0.01-0.2w/v%的磷酸氢二钠；和0.01-0.1w/v%的磷酸二氢钠；较佳地，所述磷酸缓冲液中含有0.2-0.8w/v%的氯化钠；0.02-0.04w/v%的磷酸氢二钠；和0.04-0.08w/v%的磷酸二氢钠。

本发明提供的组合物可以通过下述步骤制备得到：

第一步，将磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠和注射用水根据上述本发明提供的组合物中的浓度进行混合，灭菌处理得到磷酸盐缓冲液；

第二步，将透明质酸、壳聚糖和第一步得到的磷酸盐缓冲液根据上述本发明提供的组合物中的浓度进行混合至溶液完全溶解，得到本发明提供的组合物。

上述第一步中，可以使用本领域常规的方法进行灭菌处理，例如但不限于，将磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠和注射用水根据上述本发明提供的组合物中的浓度进行混合后，用已灭菌的微米级（0.2-0.3μm）滤芯在高压下进行除菌过滤，并置于高压蒸汽灭菌锅中，高温（110-130℃）灭菌25-35分钟，得到磷酸盐缓冲液。

上述第二步中，第一步得到的磷酸盐缓冲液由于是经过高温灭菌处理的，因此需冷却后使用，冷却至室温（15-40℃，优选25-30℃）。

上述第二步中，所述透明质酸是除菌干粉；所述壳聚糖是无菌壳聚糖。

在本发明的一种实施方式中，上述第二步是将透明质酸、壳聚糖和第一步得到的磷酸盐缓冲液根据上述本发明提供的组合物中的浓度在百级洁净环境下和密封的情况下进行混合。

在本发明的一种实施方式中，为了得到可直接使用的膀胱灌洗剂，可以将透明质酸、壳聚糖和第一步得到的磷酸盐缓冲液根据上述本发明提供的组合物中的浓度在百级洁净环境下和密封的情况下进行混合至溶液完全溶解后，在无菌条件下进行灌装，得到膀胱灌洗剂。

本发明提供的组合物可用于治疗间质性膀胱炎、尿路感染、放射引起的膀胱炎和出血性膀胱炎等与GAG层损伤有关的膀胱疾病。具体剂量还应考虑病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的优点在于：

1、本发明首次解决了透明质酸和壳聚糖的生物结合问题并加以应用。

2、本发明提供的组合物在治疗膀胱疾病时可缓解患者症状，提高患者生活质量。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

下述实施例中的透明质酸购自上海昊海生物科技股份有限公司医用级选用的透明质酸分子量在90-150万道尔顿之间。

下述实施例中的壳聚糖购自上海其胜生物制剂有限公司医用级壳聚糖重均分子量不低于20万道尔顿。

下述实施例中配制的膀胱灌洗组合制剂都满足表1中所列主要技术要求。

表1膀胱灌洗组合制剂主要技术要求

项目	技术要求
		pH	6.0-7.0
透光率	在波长660nm处应不小于99.0%
		渗透压摩尔浓度	270-350mOsmol·L-1
动力粘度	100-1500Pa·s
		蛋白质含量	不大于0.1%
重金属	不大于10μg/g
		无菌	应无菌
细菌内毒素	应小于0.5EU/ml
		乙醇残留量	不大于100μg/g

实施例1

膀胱灌洗组合制剂的制备方案一

（1）在配制容器中加入注射用水1000ml、磷酸二氢钠0.375g、磷酸氢二钠0.29g、和氯化钠8.75g，待溶液完全溶解后将溶液用已灭菌的0.22μm滤芯在高压下进行除菌过滤，再置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，即得到磷酸盐缓冲液；

（2）上述溶液冷却后，在百级洁净环境下加入透明质酸除菌干粉0.15g和壳聚糖除菌干粉0.25g加入磷酸盐缓冲液中并密封，放置于摇床中振摇直至溶液完全溶解；

（3）在无菌条件下进行灌装，即得含透明质酸和壳聚糖的膀胱灌洗组合制剂产品。

上述方法配制而成的膀胱灌洗组合制剂的检测结果为：pH值为6.6，透光率为100%，渗透压为293mOsmol·L^-1，动力粘度为289Pa·s，蛋白质含量为0%，重金属含量小于10ug/g，无菌结果为无菌，细胞内毒素为小于0.5EU/ml，乙醇残留量为7.1ug/g，完全符合表1中膀胱灌洗组合制剂的主要技术要求。

实施例2

膀胱灌洗组合制剂的制备方案二

（1）在配制容器中加入注射用水1000ml、磷酸二氢钠0.854g、磷酸氢二钠0.315g和氯化钠3.20g，待溶液完全溶解后将溶液用已灭菌的0.22μm滤芯在高压下进行除菌过滤，再置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，即得到磷酸盐缓冲液；

（2）上述溶液冷却后，在百级洁净环境下将透明质酸除菌干粉0.8g和壳聚糖除菌干粉0.55g加入磷酸盐缓冲液中并密封，放置于摇床中振摇直至溶液完全溶解；

（3）在无菌条件下进行灌装，即得含透明质酸和壳聚糖的膀胱灌洗组合制剂产品。

上述方法配制而成的膀胱灌洗组合制剂的检测结果为：pH值为6.5，透光率为99.8%，渗透压为299mOsmol·L^-1，动力粘度为941Pa·s，蛋白质含量为0%，重金属含量小于10ug/g，无菌结果为无菌，细胞内毒素为小于0.5EU/ml，乙醇残留量为15.4ug/g，完全符合表1中膀胱灌洗组合制剂的主要技术要求。

实施例3

膀胱灌洗组合制剂的制备方案三

（1）在配制容器中加入注射用水1000ml、磷酸二氢钠0.715g、磷酸氢二钠0.342g和氯化钠2.0g，待溶液完全溶解后将溶液用已灭菌的0.22μm滤芯在高压下进行除菌过滤，再置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，即得到磷酸盐缓冲液；

（2）上述溶液冷却后，在百级洁净环境下将透明质酸除菌干粉0.5g和壳聚糖除菌干粉1.0g加入磷酸盐缓冲液中并密封，放置于摇床中振摇直至溶液完全溶解；

（3）在无菌条件下进行灌装，即得含透明质酸和壳聚糖的膀胱灌洗组合制剂产品。

上述方法配制而成的膀胱灌洗组合制剂的检测结果为：pH值为6.5，透光率为100%，渗透压为305mOsmol·L^-1，动力粘度为758cm³/g，蛋白质含量为0%，重金属含量小于10ug/g，无菌结果为无菌，细胞内毒素为小于0.5EU/ml，乙醇残留量为10.5ug/g，完全符合表1中膀胱灌洗组合制剂的主要技术要求。

实施例4

膀胱灌洗组合制剂的制备方案四

（1）在配制容器中加入注射用水1000ml、磷酸二氢钠0.715g、磷酸氢二钠0.342g和氯化钠2.0g，待溶液完全溶解后将溶液用已灭菌的0.22μm滤芯在高压下进行除菌过滤，再置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，即得到磷酸盐缓冲液；

（2）上述溶液冷却后，在百级洁净环境下将透明质酸除菌干粉0.5g和壳聚糖除菌干粉0.5g加入磷酸盐缓冲液中并密封，放置于摇床中振摇直至溶液完全溶解；

（3）在无菌条件下进行灌装，即得含透明质酸和壳聚糖的膀胱灌洗组合制剂产品。

上述方法配制而成的膀胱灌洗组合制剂的检测结果为：pH值为6.5，透光率为100%，渗透压为295mOsmol·L^-1，动力粘度为568cm³/g，蛋白质含量为0%，重金属含量小于10ug/g，无菌结果为无菌，细胞内毒素为小于0.5EU/ml，乙醇残留量为8.1ug/g，完全符合表1中膀胱灌洗组合制剂的主要技术要求。

实施例5

膀胱灌洗组合制剂的制备方案五

（1）在配制容器中加入注射用水1000ml、磷酸二氢钠0.715g、磷酸氢二钠0.342g和氯化钠2.0g，待溶液完全溶解后将溶液用已灭菌的0.22μm滤芯在高压下进行除菌过滤，再置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，即得到磷酸盐缓冲液；

（2）上述溶液冷却后，在百级洁净环境下将透明质酸除菌干粉0.5g和壳聚糖除菌干粉1.5g加入磷酸盐缓冲液中并密封，放置于摇床中振摇直至溶液完全溶解；

（3）在无菌条件下进行灌装，即得含透明质酸和壳聚糖的膀胱灌洗组合制剂产品。

上述方法配制而成的膀胱灌洗组合制剂的检测结果为：pH值为6.6，透光率为100%，渗透压为308mOsmol·L^-1，动力粘度为921cm³/g，蛋白质含量为0%，重金属含量小于10ug/g，无菌结果为无菌，细胞内毒素为小于0.5EU/ml，乙醇残留量为15.7ug/g，完全符合表1中膀胱灌洗组合制剂的主要技术要求。

实施例6

膀胱灌洗组合制剂的制备方案六

（1）在配制容器中加入注射用水1000ml、磷酸二氢钠0.715g、磷酸氢二钠0.342g和氯化钠2.0g，待溶液完全溶解后将溶液用已灭菌的0.22μm滤芯在高压下进行除菌过滤，再置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃灭菌30分钟，即得到磷酸盐缓冲液；

（2）上述溶液冷却后，在百级洁净环境下将透明质酸除菌干粉0.5g和壳聚糖除菌干粉2.0g加入磷酸盐缓冲液中并密封，放置于摇床中振摇直至溶液完全溶解；

（3）在无菌条件下进行灌装，即得含透明质酸和壳聚糖的膀胱灌洗组合制剂产品。

上述方法配制而成的膀胱灌洗组合制剂的检测结果为：pH值为6.7，透光率为100%，渗透压为312mOsmol·L^-1，动力粘度为1120cm³/g，蛋白质含量为0%，重金属含量小于10ug/g，无菌结果为无菌，细胞内毒素为小于0.5EU/ml，乙醇残留量为14.7ug/g，完全符合表1中膀胱灌洗组合制剂的主要技术要求。

实施例7

膀胱灌洗组合制剂在间质性膀胱炎治疗中的应用

将60只大鼠分为阴性对照组、透明质酸组、膀胱灌洗组合制剂组（实施例3-6）。通过膀胱内灌注硫酸鱼精蛋白建立间质性膀胱炎动物模型。透明质酸和膀胱灌洗组合制剂组大鼠麻醉，固定，其中透明质酸组灌注0.5g/L透明质酸钠制剂，保留30分钟，隔天1次，连续4次，随后处死。对照组大鼠即时处死。膀胱组织HE染色显示单核炎症细胞，甲苯胺蓝特殊染色显示肥大细胞。表2为各组别单核炎症细胞数和肥大细胞数。

表2各组别单核炎症细胞数和肥大细胞数

在甲苯胺蓝染色实验过程中可以观察到对照组照动物的组织学研究显示胶原蛋白纤维呈条纹结构丧失性破坏，透明质酸组结缔组织表现出了明显的有利变化，而膀胱灌洗组合制剂组结缔组织的变化程度也非常明显。从表2的数据可以看出膀胱灌洗组合制剂组（实施例3和实施例4组）明显优于其他各组，这是由于透明质酸和壳聚糖的配比影响了产品的膀胱灌洗的治疗效果。综合以上实验发明人得出当透明质酸和壳聚糖配比不小于1∶2条件下配制的膀胱灌洗组合制剂能抑制炎症反应、减少细菌黏附，达到治疗间质性膀胱炎的作用，并且优于透明质酸组，证明了加入一定比例壳聚糖的膀胱灌洗组合制剂可以提高透明质酸在间质性膀胱炎的治疗效果。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种用于膀胱灌洗的组合物，其特征在于，以组合物的总体积计，它含有以下必要组份：

0.01-0.1w/v%的透明质酸；和

0.005-0.2w/v%的壳聚糖；

以及余量的磷酸盐缓冲液。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述透明质酸选自透明质酸钠、透明质酸镁、透明质酸钙或透明质酸锌。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的壳聚糖是水溶性壳聚糖。

4.如权利要求1-3任一项所述的组合物，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液含有氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，以及余量的水。

5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，以所述的磷酸盐缓冲液的总体积计，其中含有

0.1-1.0w/v%的氯化钠；

0.01-0.2w/v%的磷酸氢二钠；和

0.01-0.1w/v%的磷酸二氢钠。

6.一种如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征在于，它包括步骤：将0.01-0.1w/v%的透明质酸、0.005-0.2w/v%的壳聚糖以及余量的磷酸盐缓冲液混合，得到如权利要求1所述的组合物。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液是将氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠以及余量的水混合而得到；优选水为注射用水。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液是将氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠以及余量的水混合、灭菌后而得到。

9.一种混合物的用途，所述的混合物由透明质酸和水溶性壳聚糖构成，其特征在于，所述的混合物用于制备治疗膀胱疾病的灌洗剂。

10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述的膀胱疾病包括膀胱疼痛综合征、间质性膀胱炎、尿路感染、放射性膀胱炎和出血性膀胱炎。