CN103638161A - 金茵清热口服液制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种金茵清热口服液处方组成、制备方法及其应用，所述的口服液的制备原料包括如下重量份的原料：茵陈20-40份 栀子5-15份 大黄5-15份 甘草3-7份 生黄芪10-30份 丹参10-20份 金银花10-20份 连翘5-15份。本发明所述的口服液可以用于治疗内毒素血症、急性肝炎、上呼吸道感染所致的高热不退、咽喉肿痛、黄疸、大便秘结或小便短赤等症。

Description

金茵清热口服液制备方法及其应用

技术领域

本发明属于中药领域，具体而言，涉及金茵清热口服液处方组成、制备方法及其应用。

背景技术

近年来，尽管抗生素不断更新，但革兰氏阴性菌感染所致的高病死率并没能得到控制，究其原因，是因为抗生素在杀灭细菌的同时，往往诱发内毒素的释放，从而引起内毒素血症的产生，加重病情。内毒素是存在于革兰氏阴性细菌胞壁外膜中的一种生物活性成分，在革兰氏阴性细菌感染的发病机理中起十分重要的作用。在化疗药物十分发达的今日，其不仅是革兰氏阴性细菌败血症死亡率达50％左右的主要原因，其还是许多危急难治性疾病如急性肺衰、肾衰、肝衰、急性DIC等的主要病因，因此，寻找能拮抗、中和及破坏内毒素的有效药物已成为当前国内外研究的热点之一。

从中医学的角度看，邓文龙等强调了细菌内毒素是中医致病之“毒”的一个重要物质基础。余林中等从中医的病因病机理论出发，认为由外侵入的细菌、病毒、内毒素等外来致病因素可视为“外毒”。因此，以中医药理论及临床为基础，从中药中筛选有效的抗内毒素药物具有重大的实际意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药口服液，为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案。

本发明一方面涉及一种口服液，所述的口服液的制备原料包括如下重量份的原料：茵陈20-40份 栀子5-15份 大黄5-15份 甘草3-7份 生黄芪10-30份 丹参10-20份 金银花10-20份 连翘5-15份。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的口服液的制备原料包括如下重量份的原料：茵陈25-35份栀子8-12份 大黄8-12份 甘草4-6份 生黄芪15-25份 丹参12-18份 金银花12-18份 连翘8-12份。

在本发明的另外一个优选实施方式中，所述的口服液的制备原料包括或者不包括其它中药和／或西药活性成分。

本发明另一方面还涉及上述口服液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)大黄的提取：取大黄药材15-25倍重量的水，煮沸后加入大黄温浸2次，每次15-25min，合并提取液加入其它药材提取液中；

(2)水提：将方中其它药材用水浸泡0.5小时以上，然后与上述大黄的药渣混合，加8-15倍量水煎煮2次，每次1-2小时，滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.08；

(3)醇沉：在上述浓缩液中加95％的乙醇至醇沉浓度为60％，然后放置20小时以上，滤取上清液，回收乙醇至无醇味；

(4)口服液配制：将上述提取得的大黄提取液与其它药材提取液混合浓缩至100％(g.ml^-1生药)，加适量的吐温-80助溶，再加适量的苯甲酸钠、矫味剂蔗糖和／或甜叶菊苷。

本发明另一方面还涉及上述口服液在治疗内毒素血症、急性肝炎、上呼吸道感染所致的高热不退、咽喉肿痛、黄疸、大便秘结或小便短赤中的药物中的应用。

金茵清热口服液是申请人结合国内外研究成果，自主研制的以茵陈蒿汤与大承气汤合方的加减方，其用于内毒素血症疗效显著。

具体实施方式

以下结合实施例详细描述本发明内容：

实施例1：

处方

茵陈30g  栀子10g  大黄10g  甘草5g  生黄芪20g丹参15g  金银花15g  连翘10g

2.制备工艺

1.大黄的提取：取大黄药材20倍的水，煮沸后加入大黄温浸2次，每次20min,合并提取液加入其它药材提取液中。

2.水提：将方中其它药材用水浸泡1小时与上述大黄的药渣混合，加10倍量水煎煮2次，每次1.5小时。滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.08。

3.醇沉：在上述浓缩液中加95％的乙醇至醇沉浓度为60％，然后放置24小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味。

4.口服液配制：将上述提取得的大黄提取液与其它药材提取液混合浓缩至100％(g.ml^-1生药)，加适量的吐温-80助溶，再加适量的苯甲酸钠、矫味剂甜叶菊苷。

药效学实验

1、金茵清热口服液体外抗内毒素作用的实验研究

1材料

1.1药物与试剂金茵清热口服液实施例(含茵陈、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。全部药材均购自十堰市太和医院，并经过湖北中医学院陈科力教授鉴定。冻干大肠杆菌内毒素工作标准品(北京生物制品检验所，150EU／支，批号2004-11)；鲎试剂(TAL)(湛江安度斯生物技术公司，0.1mL／支，λ=0.25Eu／mL，批号0502121)；细菌内毒素检查用水(湛江安度斯生物有限公司，2mL／支，批号：0504120)。内毒素定量测定试剂盒(上海伊华生物制品有限公司)；内毒素(LPS，E ColiO111B4，5mg/支，购自Sigma公司)；多粘菌素B(5mg/支，购自Sigma公司)；透射电镜(日本日立，型号H-600)。无热原枪头，购自北京金山川公司。

1.2玻璃仪器处理所用玻璃仪器使用前均用洗夜浸泡一夜，常水洗净，蒸馏水冲洗3遍，烤箱烤干，然后250℃干热灭菌2h备用。

2方法与结果

2.1鲎试剂试管凝集反应

2.1.1鲎试剂灵敏度复核按《中国药典》2005年版(二部)细菌内毒素检查法复核灵敏度。结果鲎试剂灵敏度的测定值符合规定，可用于实验。

2.1.2药液处理实验前，量取金茵清热口服液适量，减压真空抽干，然后用等体积0.1MpH7.2的Tris缓冲液溶解残渣，按5倍倍比稀释配成系列浓度药液，并以3500rpm离心10min，用时取上清液进行实验。

2.1.3实验操作将内毒素工作标准品用内毒素检查用水溶解并配成2EU／mL的溶液，取此溶液0.1mL分别加入到0.hnLpH7.2的Tris缓冲液及系列浓度药液中，摇匀，37℃水浴30min，冷至室温后取0.1mL加入至0.1mL鲎试剂安培中(双管)，保鲜膜封口，摇匀，于37℃水浴温孵60min。另取0.25Eu／mL内毒素溶液0.2mL，直接加入到鲎试剂安培中，溶解鲎试剂作阳性对照管；取内毒素检查用水0.2mL，直接加入到鲎试剂安培中，溶解鲎试剂作阴性对照管；阳性对照管、阴性对照管与样品管同时于37℃水浴温孵60min。保温和拿取过程中应避免受到振动造成假阴性结果。

如阳性对照管形成坚实凝胶而阴性对照管仍为流动液，则该结果可信。将样品管轻轻从水浴箱中取出，缓缓倒转180度时，管内凝胶变形，不能保持完整而从管壁滑脱者为有拮抗内毒素作用，计为：“-”；如管内凝胶不变形，不从管壁滑脱者为无拮抗内毒素作用，计为：“+”。结果见表1。

结果金茵清热口服液在浓度为0.1：125g/mL仍有抗鲎试剂试管凝集反应现象，说明该制剂体外有直接抗内毒素的作用。

2.2电镜观察

按lopes氏方法制成电镜滴片。用0.1MpH7.2的Tris缓冲液溶解O111B4内毒素，浓度为2mg／mL,取此样品于三支试剂中，分别加入缓冲液、口服液、多粘菌素B(25μg/mL)各0.2ml,摇匀，37℃水溶温育60min。取各样品液适量，加1滴3.8％磷钨酸铀，15min后，取该溶液滴于铜网上，以滤纸吸去多余液体，于红外灯下烤干后进行电镜观察，放大倍数100000倍。

电镜下观察到正常内毒素超微结构呈链状式网状，这种结构不因37℃60min而发生改变；金茵清热口服液和内毒素作用后，这种链状盘绕结构崩解而呈短片状。经金茵清热口服液作用后的内毒素结构变化与经多粘菌素B处理后其内毒素结构变化相同。

3讨论

3.1采用鲎试剂试管凝集反应来测试中草药拮抗内毒素作用是简易的方法，可用于抗内毒素药物的筛选研究方法与手段。刘庆增等、刘云海等均用此法对中药抗内毒素作用进行了研究。实验结果显示，金茵清热口服液稀释0.1：125g／mL仍有抗鲎试剂试管凝集反应现象，说明该制剂体外有直接抗内毒素的作用。但鲎试验只是间接检测内毒素的方法，影响蛋白凝固反应的因素很多，尤其是中药复方提取液干更是如此，为进一步印证其作用，于是进行了电镜观察。因为研究表明，内毒素在体内产生生物效应须具备大分子复合物的临床大小，当其裂解为亚单位时，生物效应减低。结果金茵清热口服液和多粘菌素B均能使内毒素网状结构崩解，从而表明金茵清热口服液体外有直接灭活内毒素的作用。

3.2本实验提示，金茵清热口服液对细菌内毒素的直接破坏、中和为其主要作用方式之一。其对抗内毒素的作用是以破坏、降解内毒素形态的直接方式，而不是对内毒素活性的暂时性抑制，这一点，电镜观察已得到印证。据目前国内外报道，虽然多粘菌素B对内毒素水平有一定影响，但因其肾毒性极大，临床应用受到限制。目前，消除微生物毒素尚缺乏肯定有效的药物。实验表明，金茵清热口服液对内毒素有明显的直接减毒作用，对其进行开发利用将为临床内毒素血症的治疗提供了新的方法和手段。

2、金茵清热口服液兔含药血清药理学研究

现在文献报道的中药对内毒素的体外灭活作用研究均采用中药制剂体外直接加入，但由于外加中药浓度较高，还有中药制剂中如蛋白质、pH、无机离子等的干扰，往往使研究结果出现较大偏差。通常情况下，药物有效成分只有吸收进入血液后才起作用，此外，中药常能增强人体免疫力，激活多种免疫因子，增加血液中内毒素中和蛋白，因此用含药血清进行研究更具实际意义。

金茵清热口服液依据传统中医理论，结合现代药理研究方，对其进行了兔血清药理学研究。

1材料

1.1药物与试剂实施例金茵清热口服液(含茵陈、栀子、大黄、甘草等)，每mL含生药量1g。内毒素(LPS，ColiO111B4)购自中国生物制品所，临用前用内毒素检查用水配成2IU／mL的溶液。无热原试管，洁净试管使用前在马辐式炉中经250度高温烘烤3小时。无热原枪头，购自北京金山川公司。内毒素测定试剂盒，上海伊华公司。

1.2实验动物日本大耳白兔，雌雄均用，体重1.5～2kg。

2方法与结果

2.1空白血清灭活作用取家兔5只，实验前，禁食15小时，但可自由饮水。实验当日，灌服10mL／kg的生理盐水，然后，自耳中央动脉采血1.5mL于无热原试管中，采完血后，立即压迫止血。2小时后,3000转／分离心取血清。取每只兔血清0.2mL加入内毒素液0.2mL，混匀；同时以血清加入等体积无热原水作空白，37℃水浴温孵。其间，经常摇动，时长共60min。取温孵后血清0.1mL，按内毒素测定试剂盒说明书操作，测定血清内毒素含量，并计算灭活率。

灭活率=(C温孵-C空白)／C标准*100％

2.2用药后血清灭活作用上述取血后的兔休息一日后，于第二天间隔灌服金茵清热口服液10mL／kg，共2次。第三天，首先给兔灌服金茵清热口服液10mL／kg一次，2小时后，再灌服等体积药液一次。1小时后，自耳中央动脉采血1.5mL，以后操作按2.1项下进行。结果见下表。

下表正常兔血清对外加LPS的灭活率的影响

3讨论

3.1血清药理学研究方法首先由日本学者Hiriko Iwama于1987年在日本召开的第一界和汉医药学会上提出。其在对小柴胡汤致有丝分裂的研究中发现，小柴胡汤浓缩液直接加到细胞培养基中有致有丝分裂作用，而含小柴胡汤血清无此作用，这一结果表明某些药物体内外实验结果不具同一性，说明体外的一些有效成分通过机体后并不能发挥作用，而体外实验中不存在的药理作用，体内因新物质的产生可表现出来。因此，用中药进行体外灭活内毒素实验时，有必要进行血清药理学的验证，以排除中药本身理化性质的干扰。

3.2研究表明，正常情况下，机体对内毒素有一定的清除作用。本实验结果表明，正常血清对内毒素有一定的灭活作用。用药后，含药血清对外加内毒素灭活能力增强，可以说明用药后，机体对内毒素直接灭活作用增强。

3.3既然正常情况下，机体对内毒素有一定的清除作用，在考查药物应用于机体后机体对内毒素的直接作用时，应综合考虑机体对药物的反应，包括体内各种免疫因子和药物吸收后新物质的产生，这两者都可能有助于药物对内毒素的灭活，故没有对血清进行灭活处理。

3.4人体正常情况下，内毒素含量小于0.1IU／mL，大于0.1IU／mL时则为内毒素血症。本实验采用新鲜血清直接与2IU／mL作用，是因为内毒素血症重症时，内毒素血中含量一般为0.5IU／mL。

3、小鼠内毒素血症病理模型的建立

内毒素(LPS)病理模型常用的动物有兔、大鼠、小鼠、猪、狗、羊、猴、大猩猩，其中兔、猴、大猩猩对内毒素敏感，小鼠、大鼠对LPS不敏感。大型动物虽对LPS敏感，但价格较高，不利于大规模的应用。从经济性、适用性、可大量应用等方面考虑，小鼠LPS病理模型的建立为最佳选择。由于小鼠对LPS不敏感，其半数致死量为26mg／Kg，因此，首先要对小鼠增敏，常用的方法有预先给小鼠注射D-氨基半乳糖(1)、放线菌素D(1，2)、卡介苗(3)等，但在实际操作中，D-氨基半乳糖、放线菌素D价贵且不易购买，卡介苗造模需时10天，因而有必要寻找一种价廉物美的增敏剂。研究表明，醋酸铅(PbAC)给大鼠静注后，可因对肝脏网状内皮系统的阻断及其特有的作用，可使动物对LPS敏化10万倍(3，4)。但PbAC能否对小鼠增敏国内外未见报道。我们以PbAC为增敏剂制作了小鼠内毒素病理模型，为中药处方筛选及其它药效学研究打下基础。

1材料LPS(Sigma公司)，PbAC(分析纯)

2.动物小鼠(昆明种)，雌雄各半，18-22g

3方法与结果精确称取LPS，用生理盐水配成0.4mg/mL的溶液。精确称取PbAC，用双蒸水配成4mg／mL的溶液。将小鼠30只分成3组，一组给小鼠腹腔注射PbAC溶液0.1mL／10g；一组小鼠腹腔注射LPS溶液0.1mL／10g；第3组，首先，给小鼠腹腔注射PbAC溶液0.1mL／10g，1.5小时后，在小鼠腹腔的另一侧注射LPS溶液0.1mL／10g，以上3组注射完毕后，均观察3天，计数每组死亡鼠只数，并计算死亡率。结果见下表。

下表小鼠保护性试验结果(死亡率)

3讨论

3.1在制备大、小鼠内毒素病理模型时，常采用尾静脉注射给药，然而在实践操作过程中，即使是专业实验人员，也不能保证高的成功率。因此，有必要建立一种简便实用的病理模型以进行抗内毒素药物筛选研究，结果表明，我们所建立的小鼠腹腔注射内毒素病理模型是一种全新的简便实用的病理模型。

3.2由于大、小鼠对内毒素不敏感，所以在制备LPS病理模型时，常应用增敏剂。从国内外文献看，PbAC只用于给大鼠增敏，尚无给小鼠增敏的报道。从我们的实验结果看，PbAC对小鼠增敏明显，结果准确可靠。不过其增敏的效果远没达到10万倍，原因可能是大鼠用的是尾静脉注射，而我们给小鼠用的腹腔注射；再有一个原因就是大、小鼠之间对PbAC的敏感性不同。

3.3文献(5)介绍，给PbAC后1小时再给LPS，敏感性增高更甚。考虑到我们给小鼠用的是腹腔注射，PbAC吸收会比静脉注射慢，故采用1.5小时后再给LPS。实验结果证明，这种间隔是可行的。

3.4PbAC或LPS用量的确定是多次实验摸索的结果，减少PbAC或LPS的量，小鼠的死亡率均会下降。

3.5实验观察到，小鼠的死亡高峰出现在第二天，第三天死亡数最少。

4、金茵清热口服液对内毒素血症小鼠保护性研究

感染性休克和继发的多器官功能不全综合征(MODS)是脓毒症患者死亡的主要原因。文献报道，感染性休克的死亡率高达40％～60％，内毒素或脂多糖(LPS)在这种感染引起的全身炎症反应综合征中发挥重要的作用。20世纪80年代以来，内毒素性休克和MODS发生的分子机制的研究已取得了许多新的进展，特别是LPS信号转导通路的深入研究，导致一系列阻断LPS信号通路和对抗各种单一介质的治疗制剂的产生，如抗LPS抗体、抗肿瘤坏死因子(TNF)抗体、抗凝血酶III、激活蛋白C、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂、内皮素拮抗剂等，这些制剂在动物实验研究中都显示出一定的疗效。然而，多中心临床研究发现，迄今为止，还没有一种制剂能够显著降低死亡率。一些学者认为，机体内炎症反应一旦发生，要打断级联的炎症反应，仅仅依靠上述拮抗剂、某一单抗等来影响机体炎症调节网络的某一环节，是难以达到调节炎症反应的目的，而使用多种单抗又不现实。因此，多靶点的药物治疗可能是内毒素性休克防治的重要研究方向。中药具有多靶点作用，对内毒素性多器官功能障碍的防治具有重要价值。近10年来，国内学者深入研究了复方中药对内毒素性休克的防治作用，获得了大量研究资料，但能显著降低死亡率的复方并不多见。

金茵清热口服液是我们结合国内外研究成果，自主研制的以茵陈蒿汤与大承气汤合方的加减方，主要用于内毒素血症。为进一步探讨其作用机制、验证其疗效，我们研究了金茵清热口服液对内毒素引起的小鼠死亡率的影响，现报道如下。

1材料

实施例金茵清热口服液(含茵陈、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。D-氨基半乳糖、大肠杆菌脂多糖(LPS，E Colio111B4)均购自美国Sigma公司，实验时用生理盐水配制；全部药材均购自十堰市太和医院中药库，并经过湖北中医学院博士生导师陈科力教授鉴定为正品后入药。昆明种小白鼠，体重(22±2)g，♀

兼有(购自中科院武汉实验动物中心)

2方法与结果

2.1以PbAC增敏的内毒素病理模型精确称取LPS，用生理盐水配成0.4mg/mL的溶液。精确称取PbAC，用双蒸水配成4mg／mL的溶液。将小鼠30只分成3组，第1组，给小鼠灌胃生蓝盐水0.2mL／10g，腹腔注射生理盐水0.1mL／10g；第2组，首先，给小鼠灌胃生理盐水0.2mL／10g后，立刻腹腔注射PbAC溶液0.1mL／10g，1.5小时后，给小鼠灌胃生理盐水0.2mL／10g后，立刻在小鼠腹腔的另一侧注射LPS溶液0.1mL／10g；第3组，首先，给小鼠灌胃金茵清热口服液0.2mL／10g后，立刻腹腔注射PbAC溶液0.1mL／10g，1.5小时后，再给小鼠灌胃金茵清热口服液0.2mL／10g后，立刻在小鼠腹腔的另一侧注射LPS溶液0.1mL／10g；，以上3组注射完毕后，均观察3天，计数每组死亡鼠只数，并计算死亡率。结果见下表1。

表1以PbAC增敏的内毒素病理模型小鼠死亡率

2.2以D-氨基半乳糖增敏的内毒素病理模型小鼠模型制备及给药方法取小鼠30只，随机分为金茵清热口服液组、造模对照组、地塞米松对照组。实验前，禁食15小时，但可自由饮水。造模对照组左侧腹腔注入D-胺基半乳糖700mg／kg，右侧注入内毒素0.6mg／kg，给小鼠灌服生理盐水0.2mL／10g；金茵清热口服液组，造模前后给小鼠灌胃金茵清热口服液0.2mL／10g。地塞米松对照组，造模前肌注地塞米松4mg/kg。均观察3天，计数每组死亡鼠只数，并计算死亡率。结果见下表2。

表2以D-氨基半乳糖增敏的内毒素病理模型小鼠死亡率

3讨论

3.1用金茵清热口服液后，以PbAC增敏的内毒素病理模型小鼠死亡率降为0％，是我们多次实验摸索的结果，证明金茵清热口服液对PbAC增敏的内毒素病理模型小鼠有良好的防护作用。

用金茵清热口服液后，对D-胺基半乳糖增敏的内毒素病理模型小鼠死亡率降为20％，证明金茵清热口服液对D-胺基半乳糖增敏的内毒素病理模型小鼠也有良好的防护作用。

3.2目前，国内进行中药对内毒素血症小鼠保护性实验时，基本上均是给药3-5天后再造模，需时长，给药次数多，不利于药物的筛选；我们在造模的同时给药，大大节省时间，提高工作效率。此外，从国内外文献看，一般常用D-胺基半乳糖为增敏剂制备内毒素病理模型，但D-胺基半乳糖价贵，制模成本高，重复性较差，不利于药物的筛选性研究。

3.3当前，中药抗内毒素性休克的研究多数注重某些指标和部分临床症状的改善，能显著降低内毒素性休克动物死亡率的复方并不多见。其治则主要是清热解毒、通里攻下、祛淤开闭、凉血化淤、益气养阴和回阳救逆等。但由于内毒素血症是一个动态变化的过程，故守某一治则均是不合临床实际的。到目前为此，国内外尽管花费大量人力、物力，但仍没能找到有效抗内毒素的药物，因而，从当前实际情况出发，最好的治疗方法之一就是将内毒素尽快排出体外，消除内毒素对机体的不良刺激。我们根据最新国内外研究成果，提出了通过利胆排毒来防治内毒素性疾病的设想。以此设想出发，结合传统中医理论，我们将茵陈蒿汤与大承气汤合方的基础上进行加减，研制了一个新复方制剂----金茵清热口服液。因茵陈蒿汤常用于湿热黄疸之症，有明显的利胆作用；大承气汤则有通俯、利尿、活血、解毒等多种作用。

5、金茵清热口服液对小鼠在体肠推进的影响

金茵清热口服液是以茵陈蒿汤与大承气汤合方的加减方。大承气汤常用于里实热结，痞、满、燥、实之症。为此，对金茵清热口服液的泻下药理作用进行了研究，现报道如下。

1材料

金茵清热口服液实施例(含茵陈、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。全部药材均购自十堰市太和医院，并经过湖北中医学院陈科力教授鉴定。小鼠体重(22±2)g，♀

兼有(购自中科院武汉实验动物中心)。

2方法和结果

2.1对正常小鼠排便时间和数量的影响取小鼠20只随机分为2组，禁食不禁水，24h后，用金茵清热口服液、生理盐水分别制成5％活性炭混悬液，各组分别灌服以上2组混悬液0.2mL／10g。各组小鼠分别置于铺有滤纸的钟罩内进行观察，记录给药后到开始排黑粪的时间，粪便性状和数目，连续观察6h，每组取平均值进行比较，结果见表31。

表3金茵清热口服液对小鼠排黑粪的影响(x±s，n＝10)

注：与生理盐水组比较，P<0.01

2.2对正常小鼠小肠推进的影响取小鼠20只，按2.1项操作。给药20min后，颈椎脱臼处死，剖开腹腔，迅速取出整个肠道于玻璃板上，轻轻剥离，不加牵引地平铺直后，测量炭末头端在肠管内的移动距离和小肠全长(自幽门至回盲部)。以炭头末端在肠管内的移动距离占小肠全长的百分率为炭末推进百分率。结果见表4。

表4金茵清热口服液对小鼠小肠推进的影响(x±s，n=10)

注：与生理盐水组比较，

P＜0.01；

3讨论

实验结果表明，金茵清热口服液使正常小鼠排便时间加快，频度增加。小鼠小肠推进作用表明，与生理水组比较，推进速度大为加快。金茵清热口服液的泻下作用可能是促进肠蠕动的结果。实验中要注意开始给药至处死动物的时间必须准确，以免造成实验误差。实验动物体重越相近越好。取出肠道后，先用水浸湿，再平铺桌上，以免肠管与台面粘着。剪取肠道时应避免牵拉，否则将影响长度测量的准确性。

6、金茵清热口服液的抗炎作用研究

对内毒素致病机制的研究表明，内毒素诱发的炎性细胞因子对组织细胞的损害远远超过内毒素本身对机体的直接影响，因而研制抗炎性细胞因子的制剂并探讨其疗效成为人们关注的焦点。金茵清热口服液是以茵陈蒿汤与大承气汤合方的加减方，主要用于内毒素血症。为进一步探讨其作用机制，我们对金茵清热口服液的抗炎作用进行了研究，现报道如下。

1材料

实施例金茵清热口服液(含茵陈、金银花、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。全部药材均购自十堰市太和医院，并经过湖北中医学院陈科力教授鉴定。二甲苯、醋酸(A、R级)；伊文斯蓝(生化试剂)；电子分析天平；Backman分光光度仪。昆明种小白鼠，体重(22±2)g，♀兼有(购自中科院武汉实验动物中心)

2方法与结果

2.1对二甲苯所致小白鼠耳肿胀的影响取体重18～22g小白鼠20只，雌雄兼有，随机分为两组，每组10只，给药组灌服金茵清热口服液0.2mL／10g体重，对照组灌服等容量的生理盐水。每天给药1次，连续3d，末次给药后1h，两组小白鼠左耳涂抹二甲苯0.1mL／只，20min后脱臼处死，剪下左右两耳，用直径9mm打孔器沿左右耳同一部位打下左右耳片，立即用万分之一电子分析天平称重。以两耳片重之差值作为炎性肿胀程度指标，比较给药组与对照组间的差异，并求出肿胀抑制率。结果见表5。

表5对二甲苯所致小白鼠耳肿胀的影响(x±s)

2.2对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响昆明小鼠20只，雌雄各半，随机分为2组。给药组灌服金茵清热口服液0.2mL／10g体重，对照组灌服等容量的生理盐水。每天给药1次，连续7日，末次给药后30min，尾静脉注射0.5％伊文斯蓝0.1mL／只，随即腹腔注射0.6％的醋酸生理盐水溶液0.2mL／只。20min后脱臼处死，6ml生理盐水分多次冲洗腹腔，收集全部洗液于刻度试管中，并定容至8mL。将冲洗液离心后，在Backman分光光度仪扫描，绘出其紫外吸收光谱。在光谱中找出最大吸收波长为607nm。将样品液在607nm处比色，测吸收度。结果见表6。

表6金茵清热口服液对小鼠毛细血管渗透性的影响

2.3急性毒性试验

取体重18～22g小白鼠20只，雌雄兼有，灌服200％金茵清热口服液0.4mL／10g体重。给药后小鼠自发活动减少，约30min后恢复，自由觅食、饮水，尿呈黄色，1小时后部分小鼠出现稀便。观察7日，20只小鼠无死亡出现，解剖未见明显病变。

3讨论

3.1二甲苯致小白鼠耳肿胀实验观察到，对照组小白鼠左耳明显红肿，厚度增加，左右两耳差异较大，而给药组较小，与对照组比较，差异显著，表明该口服液有抗炎作用。进行此实验时，注意不要用吸水性强的纸包装耳片，以免吸去耳片边渗出的水分；此外，最好能尽快称重，因为时间放长后，水分挥发，影响结果。

3.1毛细血管通透性研究表明，金茵清热口服液能降低醋酸致炎后小鼠腹腔渗出液的伊文斯蓝含量，抑制腹腔毛细血管的通透性，从另一方面表明本品有较好的抗炎作用。

3.2金茵清热口服液的抗炎作用，将有利于消除或减轻内毒素诱发的炎性细胞因子对组织细胞的损害，缓解机体的过度炎症反应、减轻对靶器官的损害。以上研究，为进一步的临床应用及实验观察提供了科学依据。

7、金茵清热口服液对小鼠碳粒廓清试验的影响

巨噬细胞是重要的内毒素清除细胞。肝脾因具有大量的巨噬细胞而成为清除内毒素的主要器官。巨噬细胞清除功能的增强将对肝脾的内毒素清除具有重大影响。金茵清热口服液是主要用于内毒素血症的液体制剂。为进一步探讨其作用机制，我们对金茵清热口服液的免疫作用进行了研究，现报道如下。

1材料

实施例金茵清热口服液(含茵陈、金银花、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。全部药材均购自十堰市太和医院，并经过湖北中医学院博士生导师陈科力教授鉴定为正品后入药。碳酸钠(A.R)，印度墨汁(北京市西中化工厂)；昆明种小白鼠，体重(22±2)g，♀

兼有(购自中科院武汉实验动物中心)。Backman分光光度仪。

2方法与结果

取小白鼠20只，雌雄兼有，随机分为两组，每组10只，称重。给药组灌服金茵清热口服液0.2mL／10g体重，对照组灌服等容量的生理盐水。每天给药1次，连续6d，第6d给药前称重。末次给药后1h,按顺序给各组小白鼠尾静脉注射印度墨汁(4倍生理盐水稀释)0.1ml／10g体重。小白鼠均于注射墨汁后2min及10min，分别准时内眦采血25μl，并迅速加入到2ml0.1％碳酸钠溶液摇匀。将样品液离心后，在Backman分光光度仪上扫描，绘出其紫外吸收光谱。在光谱中找出最大吸收波长为590nm。将样品液在590nm处比色，测吸收度。称取小白鼠体重，同时取小白鼠肝、脾称重，按公式计算吞噬指数(a)。结果见表7和8。

表7金茵清热口服液对小白鼠体重的影响

注：经t检验，各剂量组体重增重与对照组间差异无显著性(P>0.05)

表8金茵清热口服液对小白鼠碳粒廓清的影响

注：*两组比较P<0.05

3讨论

网状内皮系统(RES，单核巨噬细胞系统)是机体最重要的防御系统，它具有迅速吞噬廓清异体颗粒的能力，并能迅速清除体内自身产生的某些有害物质。当静脉注入特定大小的碳粒后，它即可被RES细胞迅速吞噬而从血循环中清除，因此，可以借助测定血流中碳粒的消失速度来反应RES吞噬异物的能力。RES因能迅速清除多种致病物质，如微生物及其毒素、衰老、死亡或突变细胞、抗原抗体复合物等而在多种疾病的发生、发展或预后中起重要作用，RES是机体保持内环境稳定的一个重要的系统。研究发现，金茵清热口服液能明显增强小鼠巨噬细胞的吞噬活力，使单位时间内血液中碳粒清除速率加快，说明金茵清热口服液有提高机体免疫功能的能力，这将有利于金茵清热口服液对内毒素血症的治疗。

8、金茵清热口服液的保肝利胆作用研究

金茵清热口服液是以茵陈蒿汤与大承气汤合方的加减方。茵陈蒿汤常用于湿热黄疸之症，有明显的利胆作用。为进一步探讨其作用机制，我们对金茵清热口服液的保肝利胆药理作用进行了研究，现报道如下。

1材料

1.1实施例金茵清热口服液(含茵陈、金银花、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。全部药材均购自十堰市太和医院，并经过湖北中医学院博士生导师陈科力教授鉴定为正品后入药。四氯化碳(A、R上海长江化工厂出品)。

1.2动物Wister大鼠，体重180-200g，♀兼有(购自中科院武汉实验动物中心)。实验前15h禁食不禁水。

2方法与结果

2.1口服液对胆汁分泌的影响取雄性大白鼠8只，每鼠腹腔注射30mg/Kg戊巴比妥，进行麻醉，然后仰位固定于大白鼠解剖台上，再沿腹中线切口，打开腹腔，翻转十二指肠，找到胆管，在胆管下穿线，结扎乳头部，向肝脏方向作“V”形切口，插入塑料管，可见有淡黄色胆汁流出，结扎固定，待胆汁流出稳定后，观察药前20min内胆汁流出的总滴数作为对照，再向十二指肠管内注射中药口服液1mL／100g体重，从给药后20min开始观察纪录第20～40min，40～60min内胆汁流出的总滴数，与药前比较，进行统计学处理，结果药前20min胆汁流出总滴数(x±s，下同)为15.5±3.5，药后20～40min较药前增加4.5±1.5，P<0.05；药后40～60min较药前增加5.5±2.5，P<0.05。说明中药口服液对大白鼠有显著的促进胆汁分泌的作用。

2.2金茵清热口服液对CCL4引起大白鼠肝损伤的保护作用取大白鼠16只，称重，编号，随机分为2组，每组8只，一组灌胃金茵清热口服液1ml／100g体重，连续灌胃5d；另一组灌胃等体积的生理盐水，也连续5d，作对照组。两组均于第5天灌胃药液后1h，灌胃CCL4油溶液(CCL4：芝麻油为0.4：0.6)0.4mL／100g体重，24h后断头取血，测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量，结果见表9。

表9对CCL4引起的大白鼠肝损伤的保护作用(U／L，x±s)

注：*代表P<0.01

3讨论

3.1实验结果表明，金茵清热口服液给大鼠注入后能促进大白鼠胆汁分泌，对CCL4引起的大白鼠实验性肝损伤有显著的保护作用，表明该药具有保肝利胆作用。

3.2内毒素机体清除机制研究已表明，肝是清除内毒素的主要器官。肝对血液中内毒素的清除，主要是通过枯否细胞、肝细胞的内吞作用而实现的。内毒素被内吞入细胞后，以微管依赖的囊泡运输方式，穿过肝细胞，运至肝细胞胆小管面，以胞吐的方式排入胆小管中，再经胆道系统排入肠腔内。免疫组化显示，从血液循环中清除的内毒素迅速分布到肝、肺、肾等组织巨噬细胞内。内毒素及其代谢产物经巨噬细胞代谢转运后可逐步由胆道排泄，采用酚／水抽体法从内毒素血症大鼠胆汁中排出的内毒素，发现它对小鼠仍具极强致死活性。因此，金茵清热口服液的保肝利胆作用将有利于肝脏解毒功能的正常和促进内毒素从胆道排出。

9、金茵清热口服液对大鼠胆汁及尿液中内毒素含量的影响

内毒素机体清除机制研究已表明，肝是清除内毒素的主要器官，脾、肠也是重要器官。肝对血液中内毒素的清除，主要是通过枯否细胞、肝细胞的内吞作用而实现的。内毒素被内吞入细胞后，以微管依赖的囊泡运输方式，穿过肝细胞，运至肝细胞胆小管面，以胞吐的方式排入胆小管中，再经胆道系统排入肠腔内。免疫组化显示，从血液循环中清除的内毒素迅速分布到肝、肺、肾等组织巨噬细胞内。内毒素及其代谢产物经巨噬细胞代谢转运后可逐步由胆道排泄，采用酚／水抽体法从内毒素血症大鼠胆汁中排出的内毒素，发现它对小鼠仍具极强致死活性。但从目前文献看，对泌尿道排出内毒素是否是机体清除内毒素的方式与途径未得到认同，不过现有不多的研究资料已显示，尿液中确实含有较高浓度的内毒素。因此，研究胆汁及尿液中内毒素的含量变化对了解机体清除内毒素的功能具有重要意义。

金茵清热口服液为我们课题组依据传统中医理论，结合现代药理研究方法，自创的一种治疗内毒素血症的科研方，再以此方为基础研制而成的口服液制剂。为研究此制剂对内毒素的体内清除及灭活作用，我们对其进行了大鼠胆汁及尿液中内毒素的含量变化研究。

1材料

1.1药物与试剂实施例金茵清热口服液(含茵陈、金银花、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。内毒素(LPS，E.ColiO111B4，5mg／支，购自Sigma)，临用前用生理盐水配成1mg/mL的溶液。无热原试管，洁净试管使用前在马辐式炉中经250℃高温烘烤3h。无热原枪头(购自北京金山川公司)。内毒素测定试剂盒(上海伊华公司)。

1.2动物Wister大鼠，体重180-200g，雄性(购自中科院武汉实验动物中心)。实验前15h禁食不禁水。

2方法与结果

2.1胆汁收集取雄性大白鼠10只，随机分为两组，一组作对照组，一组作用药组。每鼠腹腔注射30mg/Kg戊巴比妥，进行麻醉，然后仰位固定于大白鼠解剖台上，结扎尿道口，再沿腹中线切口，打开腹腔，翻转十二指肠，找到胆管，在胆管下穿线，结扎乳头部，向肝脏方向作“V”形切口，插入塑料管，可见有淡黄色胆汁流出，结扎固定，待胆汁流出稳定后，再进行实验操作并收集胆汁于无热原试管中。对照组每鼠于十二指肠注入生理盐水1mL／100g体重后，先收集30min的胆汁作为空白，然后尾静脉注射内毒素溶液0.1mL／100g，再收集1H的胆汁。用药组每鼠于十二指肠注入金茵清热口服液1mL／100g体重，先收集30min的胆汁作为空白，然后尾静脉注射内毒素溶液0.1mL／100g体重，再收集1H的胆汁。

2.2尿液收集胆汁收集完毕后，取出膀胱收集尿液。

2.3样品处理及测定将收集的胆汁以等量无热原水和0.4mL／L的TRIS-HCL缓冲液稀释400倍，将尿液同法稀释10倍，并以3500rpm离心10min。分别取上清液0.1ml，加入鲎试剂0.05mL，混匀，37℃温育25min；加入鲎三肽0.05mL，混匀，37℃温育3min，然后，依次加入0.5mL亚硝酸钠、0.5mL氨基本磺酸、0.5mL萘乙二胺进行显色反应。按试剂盒要求，同时设空白对照和内毒素标准液对照。反应完毕后，以蒸溜水为空白，在分光光度计上以545m比色。结果见表10。

表10大鼠胆汁及尿液中内毒素含量(EU／mL)

注*P<0.05

3讨论

3.1结果表明，用药后大鼠胆汁及尿液中内毒素含量均降低，其原因可能是中药直接降解内毒素，使循环中内毒素量减少，从而导致排出减少；另一种原因是中药的利胆作用，使胆汁分泌增加，单位体积内内毒素含量下降。

3.2胆道是机体清除内毒素的主要途径之一。实验表明，胆汁中确实存在大量的内毒素。在病理情况下如胆道阻塞不通畅，则会使内毒素停留于体内，引发或加重内毒素血症。因而，中药的利胆作用将促进内毒素的排出，将增强机体清除内毒素的能力，从而有助于内毒素血症的治疗。

3.3尿液中内毒素含量测定表明，尿液中也存在一定量的内毒素，文献资料及我们的研究结果应可以说明，泌尿道排出内毒素也应是机体清除内毒素的方式与途径。中药的利尿作用也将有助于内毒素血症的治疗。

10、金茵清热口服液对家兔内毒素血症的解热作用研究

金茵清热口服液为我们课题组依据传统中医理论，结合现代药理研究方法，自创的一种治疗内毒素血症的科研方，再以此方为基础研制而成的口服液制剂。为研究此制剂的解热作用，我们观察了其对家兔内毒素血症的解热作用。

1材料

1.1药物与试剂实施例金茵清热口服液(含茵陈、金银花、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。内毒素(LPS，E ColiO111B4，5mg/支，购自Sigma公司)，临用前用生理盐水配成1μg／mL的溶液。

1.2实验动物日本大耳白兔，雌雄均用，体重1.5～2kg。实验前，将动物置于实温22±2℃的实验室中喂养3天，每天测温3次，以适应实验环境和测温操作。从中选取体温波动不超过0.3℃的动物进行实验。

2方法与结果

2.1模型制备及给药方法取基础体温符合解热实验要求的家兔16只，随机分为金茵清热口服液组、造模对照组和正常对照组。实验前，禁食15小时，但可自由饮水。实验当日测温2次，取平均值作基础体温值。然后，给兔灌服金茵清热口服液10mL／kg或等体积生理盐水。30min后，给金茵清热口服液组、造模对照组各兔耳沿静脉注射内毒素1μg／kg(最低发热剂量10ng／Kg)；正常对照组注射等体积生理盐水。

2.2对发热效应的影响于注射内毒素后0.5h、1h、1.5h、2h、3h、4h、5h各测家兔直肠温度1次，以药前体温均值为基数，计算各兔体温变化情况，以体温变化为纵坐标，注射内毒素后时间为横坐标绘制体温变化曲线统计3h体温反应高度(Δt3)及5h体温反应指数(TR15)，结果见表11。TRI计算参考Milton法。

表11金茵清热口服液对模型动物Δt3和TR15的影响(x±s)

注：与正常对照组比较，ΔP<0.05，ΔΔp<0.01；与造模对照组比较**P<0.01

3讨论

3.1温热病临床主症是高热。有研究表明，内毒素是许多温病卫气营血证表现及传变的物质基础，内毒素也可以在动物身上模拟出与温病临床表现极为相似的病理过程。本实验用大肠杆菌内毒素静脉注射造成家兔内毒素血症模型，观察金茵清热口服液对模型动物的解毒作用。结果表明，灌服该方可明显抑制模型动物的发热效应。

3.2本实验给家兔注射ET后，动物相继出现懒动、胸腹部灼热等症状，但并没有出现多饮、结膜充血、耳廓部灼热等症状。相反出现不欲饮、不欲食、耳廓部冰冷的状况。外周血管，如耳动静脉、腿动静脉均只能采到微量血液，甚至于采不到血液，而这些部位，造模前采血则血流如注。

3.3实验中观察到，个别动物注射ET后，体温不升，反而持续下降，最后于第二天死亡，这可能是动物发生内毒素性休克所致。

3.4一般情况下，兔体温在6个小时后恢复正常。但实验中观察到，约有四分之一的动物出现体温异常变化，造模组表现在24小时后体温又上升，48小时后体温仍很高，最后于第三天死亡；用药组24小时后体温也上升，48小时后体温较高或恢复正常，第三天无死亡现象。

3.5内毒素所致的脓毒症是临床危重患者的主要死亡原因之一，已成为现代危重病医学亟待解决的重大难题。以往脓毒症的不良预后一直归结为诊断错误或不及时，以及抗炎治疗不充分，现在人们认识到脓毒症临床表型及治疗反应不同与其遗传基因背景的差异可能有内在联系。免疫相关基因多态性(polymorphism)在一定程度上决定了机体免疫应答状态的差异，基因多态性与脓毒症关系的研究日益成为人们关注的焦点。这样可以解释为什么在遭受相似程度打击后，有些人群易于发生脓毒症和多器官功能障碍综合征，有的人却病情较轻而易于恢复，或同是脓毒症患者，治疗措施相同，结果却截然不同。

11、金茵清热口服液对家兔内毒素血症的解毒作用

金茵清热口服液为课题组依据传统中医理论，结合现代药理研究方法，研制的一种治疗内毒素血症的口服液制剂。为研究此制剂的对家兔内毒素血症的作用，我们观察了其对家兔LPS及细胞因子的影响。

1材料

1.1药物与试剂实施例金茵清热口服液(含茵陈、金银花、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。全部药材均购自十堰市太和医院，并经过湖北中医学院博士生导师陈科力教授鉴定为正品后入药。内毒素(LPS，E Coli0111B4，5mg／支，购自Sigma公司)，临用前用生理盐水配成1μg／mL的溶液。鲎试剂盒(上海伊华)；全血乳酸测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2实验动物日本大耳白兔，雌雄均用，体重1.5～2kg。实验前，将动物置于实温22±2℃的实验室中喂养3天，每天测温3次，以适应实验环境和测温操作。从中选取体温波动不超过0.3℃的动物进行实验。

2方法与结果

2.1模型制备及给药方法取基础体温符合解热实验要求的家兔20只，随机分为金茵清热口服液组、造模对照组和正常对照组。实验前，禁食15小时，但可自由饮水。实验当日测温2次，取平均值作基础体温值。然后，给兔灌服金茵清热口服液10mL／kg或等体积生理盐水。30min后，给金茵清热口服液组、造模对照组各兔耳沿静脉注射内毒素1μg／kg(最低发热剂量10ng/Kg)；正常对照组注射等体积生理盐水。

2.2血浆内毒素(LPS)及TNFa含量的影响造模后2h采心脏血，分离血浆，用定量检测微量内毒素鲎试验法检测LPS含量，ELTSA法检测TNFa含量。结果见表12。造模后2h，用药组血浆LPS含量比造模对照组明显减少，TNFa水平亦比造模对照组明显偏低。内毒素造模两组动物血浆LPS、TNFa又都明显高于正常对照组。

表12对模型动物血浆LPS及TNFa含量的影响(x±s)

注：与正常对照组比较，ΔΔp<0.01；与造模对照组比较，*P<0.05。

2.3全血乳酸测定造模后3h采心脏静脉血0.5mL于肝素抗凝管中，然后进行以下操作。在编号试管中加入0.3mL蛋白沉淀剂。对号加入0.1mL肝素抗凝全血后轻轻颠倒混匀。静置10min后，3500转／分离心8min，取上清液0.02mL，加入缓冲液1mL，酶试剂0.01mL，显色剂0.2mL，混匀，37水浴准确反应10min，然后加入终止液2mL，混匀；同时以蒸馏水、标准液各0.02mL进行操作。以蒸馏水调零，于530nm处测各管吸收度。按以下公式计算全血乳酸含量。结果见表13。

(标准浓度=3mmol／L；样本稀释倍数＝4倍)

表13对动物全血乳酸含量的影响(x±s)

结果表明，口服液组，造模对照组与正常对照组间全血乳酸含量无显著性差异，但有一定的趋势，造模对照组值稍大，口服液组值稍小。

2.3对脏器组织形态的影响造模5h后每组随机处死2只动物，取肝、肾、肺、小肠组织，10％甲醛固定，取材，HE染色，光镜观察。

肉眼观察肝、肾、肺、小肠等内脏器官，肉眼观察无明显变化。

光镜观察造模对照组可见个别部分肝间质轻度水肿；个别部分小肠绒毛轻度破损。金茵清热口服液组未见上述改变。

3讨论

3.1内毒素通过刺激炎症细胞和非炎症细胞产生多种细胞因子，引起机体一系列炎症反应和免疫功能紊乱，其中过度释放的TNF和IL-1在启动全身炎症反应综合征(SIRS)及多器官功能障碍综合征(MODS)中发挥重要作用。降低内毒素血症时的内毒素和细胞因子的水平，将可在很大程度长阻断过度炎症反应造成的器官和组织损伤，改善其预后。本实验表明，金茵清热口服液可显著降低内毒素血症兔血清LPS和TNF水平，这可能是该制剂治疗内毒素血症的机制之一。

3.2利用D-乳酸是胃肠道固有细菌的代谢产物，哺乳动物体内不具备将其快速分解代谢的酶系统，因而其进入机体后不参与代谢反应，利用这一特点，可以通过测定血中D-乳酸含量来作为判断肠黏膜通透性变化的指标。实验结果表明，给兔注射内毒素后，口服液组，造模对照组与正常对照组问全血乳酸含量无显著性差异，但有一定的趋势，造模对照组值稍大，口服液组值稍小。说明给兔注射实验剂量的内毒素没有明显改变兔小肠的通透性，但同时也说明实验所用中药对降低肠黏膜通透性有利。

3.3组织病理学切片结果表明，兔注射内毒素1μg／kg后，光镜下内脏器官损伤不明显，只有个别部分肝、肠组织有轻度变化。临床研究资料表明，从死于脓毒症的病人的及时尸检发现器官紊乱的程度和组织学的坏死之间有严重的不协调，在心脏、肾脏、肝脏和肺，细胞死亡的数量很少。我们的急性模型组织病理学切片结果与临床报道相一致。此外，推测如要观察到光镜下内脏器官的病变，可能要加大内毒素的剂量，或增加内毒素的攻毒次数。

12、金茵清热口服液对内毒素所致兔和小鼠组织病理的影响

在研究金茵清热口服液对家兔内毒素血症的作用时，组织病理学切片结果表明，兔注射内毒素1μg／kg后，光镜下内脏器官损伤不明显，只有个别部分肝、肠组织有轻度变化。推测如要观察到光镜下内脏器官的病变，可能要加大内毒素的剂量，或增加内毒素的攻毒次数。为进一步探讨其作用机制、验证其疗效，我们研究了金茵清热口服液对大剂量内毒素注入引起的兔组织病理的影响，同时也研究了金茵清热口服液对D-胺基半乳糖增敏的内毒素病理模型小鼠组织病理的影响。

1材料

金茵清热口服液实施例(含茵陈、金银花、栀子、大黄、甘草等药味)，每mL含生药量1g。D-氨基半乳糖、大肠杆菌脂多糖(LPS，E Colio111B4)均购自美国Sigma公司，实验时用生理盐水配制；全部药材均购自十堰市太和医院中药库，并经过湖北中医学院陈科力教授鉴定。日本大耳白兔，雌雄均用，体重1.5～2kg。昆明种小白鼠，体重(22±2)g，♀

兼有(购自中科院武汉实验动物中心)

2方法与结果

2.1兔模型制备及给药方法取家兔4只，随机分为金茵清热口服液组、造模对照组。实验前，禁食15小时，但可自由饮水。然后，给兔灌服金茵清热口服液10mL／kg或等体积生理盐水。30min后，给金茵清热口服液组、造模对照组各兔耳沿静脉注射内毒素1200μg／kg(最低发热剂量10ng/Kg)。

5h后处死动物，取心、肝、胃、肾、肺、小肠、直肠组织，4％甲醛固定，取材切片，HE染色，光镜观察。结果见下表14。

2.2小鼠模型制备及给药方法取小鼠15只，随机分为金茵清热口服液组、造模对照组、地塞米松对照组。实验前，禁食15小时，但可自由饮水。造模对照组左侧腹腔注入D-胺基半乳糖600mg/kg，右侧注入内毒素0.5mg/kg，给小鼠灌服生理盐水0.2mL／10g；金茵清热口服液组，造模前后给小鼠灌胃金茵清热口服液0.2mL／10g。地塞米松对照组，造模前肌注地塞米松4mg/kg。

12h后每组取2只小鼠，处死动物，取心、肝、肾、肺组织，4％甲醛固定，取材切片，HE染色，光镜观察。结果见表15。

表14金茵清热口服液对大剂量内毒素注入兔组织病理的影响结果

表15金茵清热口服液对小鼠组织病理的影响结果

3讨论

3.1兔组织病理切片表明，兔耳沿静脉注射内毒素1200μg/kg(最低发热剂量10ng/Kg)时对照组产生明显的病理损伤，而中药组损伤较轻或无损伤，说明所用中药对大剂量内毒素注入有明显的防护作用。

3.2小鼠组织病理切片表明，模型组、地塞米松组均有明显的病理损伤，而中药组损伤较轻或无损伤，说明所用中药对D-胺基半乳糖增敏的内毒素病理模型小鼠病理损伤也有良好的防护作用。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。

Claims (5)

1.一种口服液，所述的口服液的制备原料包括如下重量份的原料：茵陈20-40份 栀子5-15份 大黄 5-15份 甘草3-7份 生黄芪10-30份 丹参10-20份 金银花10-20份 连翘5-15份。

2.根据权利要求1所述的口服液，所述的口服液的制备原料包括如下重量份的原料：茵陈25-35份 栀子8-12份 大黄8-12份 甘草4-6份 生黄芪15-25份 丹参12-18份 金银花12-18份 连翘8-12份。

3.根据权利要求1所述的口服液，所述的口服液的制备原料包括或者不包括其它中药和／或西药活性成分。

4.权利要求1-3任意一项所述的口服液的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)大黄的提取：取大黄药材15-25倍重量的水，煮沸后加入大黄温浸2次，每次15-25min，合并提取液加入其它药材提取液中；

(2)水提：将方中其它药材用水浸泡0.5小时以上，然后与上述大黄的药渣混合，加8-15倍量水煎煮2次，每次1-2小时，滤过，滤液合并，浓缩至相对密度为1.08：

(3)醇沉：在上述浓缩液中加95％的乙醇至醇沉浓度为60％，然后放置20小时以上，滤取上清液，回收乙醇至无醇味；

(4)口服液配制：将上述提取得到的大黄提取液与其它药材提取液混合浓缩至100％(g.ml^-1生药)，加适量的吐温-80助溶，再加适量的苯甲酸钠、矫味剂蔗糖和／或甜叶菊苷。

5.权利要求1-3任意一项所述的口服液在治疗内毒素血症、急性肝炎、上呼吸道感染所致的高热不退、咽喉肿痛、黄疸、大便秘结或小便短赤中的药物中的应用。