CN103622959A - 黄连碱或其盐在制备防治脂肪肝损伤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了黄连碱或其盐在制备防治脂肪肝损伤药物中的应用。黄连碱经药理研究证实具有降脂、改善脂质代谢的作用，能抑制肝细胞甘油三酯堆积；对实验性高脂血症有明显降低血中甘油三酯和胆固醇及LDL-C作用，降低肝组织中甘油三酯含量；并减轻肝组织脂肪堆积引起的肝损害；对皮质醇过度使用所致脂肪肝，能减少肝脏甘油三酯堆积和谷氨酸转氨酶GPT及谷草转氨酶（GOT）活性升高、减轻肝损害，有优良的防治脂肪肝作用，部分指标比降脂药辛伐他汀、非诺贝特和护肝药硫普罗宁、肝泰乐等有明显优势，可应用于临床脂肪肝性疾病。

Description

黄连碱或其盐在制备防治脂肪肝损伤药物中的应用

技术领域

本发明属于药物学领域，具体涉及天然化合物黄连碱或其盐在制备防治脂肪肝损伤药物中的应用。

背景技术

肝脏是脂肪代谢的重要场所。当肝脏对脂肪合成能力增加和/或转运入血的能力下降时，脂类物质（主要为三酰甘油）在肝内蓄积过多，超过肝脏重量的5%，或在组织学上50%以上的肝实质脂肪化时，即为脂肪肝(osteoporosis) 。脂肪肝不是一个独立的疾病，而是由多种疾病和原因引起的肝脏脂肪性变。最常见原因为肥胖、酒精中毒、糖尿病；其次为营养失调、药物中毒、妊娠、遗传等。  　　脂肪肝是中、老年人中的常见病，多发病、，其主要症状及危害有肝纤维化和肝硬化。随着我国人民物质生活的不断改善，我国脂肪肝的发病率逐年升高，已占到平均人口的10%，在肥胖、嗜洒和糖尿病人群中可高达50%～60%，其中约25%的患者发生肝纤维化，1.5%～8.0%的患者发展为肝硬化。因此，脂肪肝的防治对阻止慢性肝病进展和改善预后是十分重要的。      按其病因脂肪肝可分特发性（原发性）和继发性二大类。原发型分幼年型、成年型、经绝期、老年性；继发性是药物或营养因素和其它疾病引发，诸如内分泌紊乱，和过度使用皮质类固醇和肝肾疾病等均可引发继发性脂肪肝。

目前，防治脂肪肝症的药物三大类： ①降脂药，以减少脂肪在肝脏的进一步积聚：贝特类都属于这一类；②抗肝损害药。如肝泰乐等：可增强肝脏解毒功能，降低脂肪蓄积，③中药如月见草油丸等。现代医学防治脂肪肝常用贝特类吉非罗齐、肝泰乐、复方二氯酯酸二异丙胺片(利肝能) 等，存在价格昂贵，毒副作用多，远期疗效不肯定等缺点。

黄连碱，英文名称 Coptisine，化学名称 Bis [1, 3] benzodioxolo [5, 6-a:4', 5'-g] quinolizinium, 6, 7-dihydro-，分子式 C19H14NO4，分子量 320.32，其结构如式I所示。黄连碱来源天然中药材如罂粟科植物白屈菜 (Chelidonium majus L)根、延胡索 （Corydalis uanhusuo W. T. Wang ）块茎）、丽春花(Papaver rhoeas L)全草和毛茛科植物黄连 （Coptis japonica Makino）根等。目前未见有黄连碱抑制肝脏脂质堆积，防治脂肪肝形成和抗脂肪肝损伤作用报道。

发明内容

本发明的目的在于提供黄连碱在制备防治脂肪肝损伤药物中的应用。

本发明所采取的技术方案是： 

黄连碱或其药学上可接受的盐在制备防治脂肪肝损伤产品中的应用。

所述脂肪肝损伤是指原发性脂肪肝、继发性脂肪肝、高脂血症引起的脂肪肝，药物或糖代谢综合征引起的脂肪肝。

所述防治脂肪肝损伤产品包括药物、保健品。

一种用于防治脂肪肝损伤的药物，其主要成分为黄连碱或其药学上可接受的盐。

所述黄连碱药学上可接受的盐是指其与酸或碱形成的可药用的盐。

所述用于防治脂肪肝损伤的药物还含有药学上可以接受的载体和/或辅料。

所述辅料包括润滑剂、填充剂、粘合剂、崩解剂。

所述脂肪肝损伤是指原发性脂肪肝、继发性脂肪肝、高脂血症引起的脂肪肝，药物或糖代谢综合征引起的脂肪肝。

所述药物为口服制剂、外用剂型或注射液。

所述口服制剂包括片剂、胶囊、散剂、滴丸、丸剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆、酏剂、茶或油；所述外用剂型包括：酊剂，茶、油、霜或膏剂；所述注射剂包括粉针剂或水针剂。

本发明的有益效果是：本发明提供了一种防治脂肪肝性疾病的新药物。动物体内试验表明，黄连碱对实验性高脂血症脂肪肝有明显降脂，改善脂质代谢的作用，能抑制肝细胞甘油三酯堆积；明显降低血中甘油三酯、胆固醇及低密度脂蛋白（LDL-C），明显降低肝组织中甘油三酯含量；并减轻肝组织脂肪堆积引起的肝损害；对皮质醇过度使用所致脂肪肝，能减少肝脏甘油三酯堆积和谷氨酸转氨酶 GPT及谷草转氨酶（GOT）活性升高、减轻肝损害，有优良的防治脂肪肝作用；并且没有观察到明显的副作用，增加了用药的安全性。黄连碱防治脂肪肝部分指标药效优于降脂药辛伐他汀、非诺贝特和护肝药硫普罗宁、肝泰乐等，达到了减少服用量而不降低药效的目的。可应用于临床脂肪肝性疾病。

本发明与其它脂肪肝治疗药物相比较：

（1）服用量少，约为120 ～240 mg/天；

（2）安全系数高，达200倍。

综上所述，黄连碱药物的疗效确切，安全无明显毒副作用，单独使用或与其它药物复配都有良好的应用前景。

附图说明

图1为黄连碱处理肝细胞油红O染色（×400），其中，A为正常组、B为模型组、C为黄连碱（0.01 μg/mL）处理组、D为黄连碱（0.04 μg/mL）处理组、E为黄连碱（0.2 μg/mL）处理组、F为黄连碱（1.0 μg/mL）处理组、G为黄连碱（5.0 μg/mL）处理组、H为黄连碱（25.0 μg/mL）处理组；

图2为黄连碱对高脂饮食性大鼠脂肪肝损害的病理切片结果（×100），其中，A为模型组、B为正常组、 C为吉非罗齐组、D为黄连碱20 mg/kg组、E为黄连碱40 mg/kg组、F为黄连碱10 mg/kg组、G为硫普罗宁组、H为辛伐他汀组。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。

以下实施例中所用黄连碱盐酸盐（HLJY），由成都植标化纯生物技术有限公司提供，批号：130106；黄连碱（HLJ），由广东药学院中医药研究院提供，批号：120503，用HPLC方法测定含黄连碱>98.01%。

实施例1 黄连碱对HepG2肝细胞甘油三酯蓄积的抑制作用

1、黄连碱对肝细胞增殖活力的影响

常规培养HepG2细胞至80%长满培养皿，黄连碱用DMSO和PBS溶解后按确定的不同加到培养细胞中，作用于HepG2细胞24h后，经MTT检测发现：细胞的存活率随着黄连碱作用浓度的增加而降低（表1）；当黄连碱作用浓度为50.0 μg/mL时，肝细胞存活率明显降低（P<0.01）；当作用浓度为25.0 μg/mL时，对肝细胞的生长有一定影响；当作用浓度小于10.0 μg/mL时，黄连碱对肝细胞的生长没有明显的影响（P>0.05）；说明黄连碱在0-10.0 μg/mL浓度范围内，对HepG2细胞繁殖生长影响很小，在该浓度范围内选择给药浓度是安全的。

表1 MTT法检测黄连碱对肝细胞生长活性的影响（

±s，n=6）

Table 1 MTT results of cosptine

2、黄连碱对肝细胞内甘油三酯蓄积的影响

为了观察黄连碱对细胞脂质沉积的作用，我们将不同浓度的黄连碱（0.01、0.04、0.2、1.0、5.0、25 .0 μg/mL）作用于HepG2细胞24h，采用甘油三酯试剂盒测定细胞内甘油三酯含量。结果显示，黄连碱在0.2-25 μg/mL浓度范围内，与模型组相比，各给药组细胞内甘油三酯含量明显降低（p<0.01），对细胞内甘油三酯的堆积抑制率达50%。抑制率显著高于阳性对照吉非罗齐100μg/mL组（P<0.05），说明其抑制FFA诱导的细胞内脂质沉积效果优于阳性药-吉非罗齐。且黄连碱在0.01-0.2μg/mL浓度范围内抑制效果呈剂量依赖性，在0.04 μg/mL浓度时就要达到显著抑制水平（P<0.05）。（见表2）。

表2 不同浓度黄连碱对肝细胞内甘油三酯蓄积的影响（

±SD，n=6）

Table2 Effect of coptisine on TG accumulation in HepG2 cells 

值被表达为平均± SD (n =6) and 单位为 μmol/g 蛋白. ^# 表示与正常组比较，# # P＜0.01呈显著性抑制. * 表示与模型组比较，*P＜0.05，** P＜0.01，呈显著性抑制。

MTT实验结果表明 黄连碱对培养HepG2肝细胞生长繁殖无明显影响的浓度为10 μg/ml，而有效抑制肝细胞内甘油三酯堆积所需的黄连碱浓度仅为0.20 μg/mL，其安全系数：10 μg/ml/0.2 μg/mL=50倍，黄连碱对HepG2肝细胞的安全性是很高的

3、采用油红O染色观察不同浓度的黄连碱（0.01、0.04、0.2、1.0、5.0、25 .0 μg/mL）作用于HepG2细胞24h的细胞影响，结果显示：正常对照组：细胞边缘清晰，核大，细胞内少见橘红色脂滴；模型组：与对照组相比，细胞内可见较多橘红色脂滴存在，且大部分细胞内含多个脂滴；黄连碱组：与模型组相比，黄连碱浓度大于0.2 μg/mL浓度后，黄连碱处理组细胞内脂滴明显减少（见图1）。

实施例2 黄连碱对实验性大鼠血脂异常的作用

实验动物：雄性SD（Sprague Dawley）大鼠，SPF级，体重180±20 g。

实验方法：适应性饲养一周后，将大鼠按体重随机分为正常对照组和造模组，其中正常对照组10只，喂基础饲料；造模组大鼠高脂饲料饲养20天后进行眼眶后静脉丛取血，与喂饲高脂饲料前比较，测定模型组受试动物血中TC、TG，选取显著升高的作为高脂血症造模成功的大鼠。

将血清TG升高值大于50%者纳入实验，将高血脂大鼠分为高血脂模型组、阳性药辛伐他汀，吉非罗齐组、黄连碱盐酸盐、黄连碱不同剂量组和硫普罗宁组，每组10只。正常对照组及高血脂模型组给予等体积生理盐水，实验处理：正常对照组和模型组大鼠分别按照l0 ml/kg体重灌胃给予生理盐水，阳性对照药辛伐他汀按2 mg/kg BW给药，黄连碱盐酸盐组分别按10，20，40 mg /kgBW剂量，黄连碱组按20 mg /kg BW剂量、硫普罗宁100 mg /kg BW吉非罗齐 100 mg /kg BW剂量均配成给药体积为10 ml/kg体重的适宜浓度灌胃给药，每天1次，连续30天，于末次给药2h后，眼静脉丛取血测定血脂， 麻醉处死大鼠，剖腹摘取肝脏，部分制匀浆测定甘油三酯含量，部分肝制成切片，进行病理学镜检，实验结果表3及图2。

1、黄连碱对大鼠血脂的影响

表3  黄连碱对大鼠血脂、肝脂的影响  （± SD，n=10）

注：与高脂模型组比较，^* P＜0.05，^** P＜0.01。

与空白对照组比较，^△P＜0.05，^△△P＜0.01。 

表3结果表明，本发明的黄连碱盐酸盐或天然黄连碱对高脂喂养导致的实验性大鼠的血脂代谢异常均有显著的调节作用，而且对模型动物的TG异常，黄连碱比化学降脂药物辛伐他汀和吉非罗齐及护肝药硫普罗宁的降脂作用有优势。

2、HLJ对实验性大鼠高脂血症大鼠肝损害的作用

实验样本肝切片病理检查结果显示：高脂模型组肝细胞脂肪变性、水样变性及坏死和炎症细胞浸润，空泡化等，而辛伐他汀、吉非罗齐和黄连碱组肝细胞脂肪变性、水样变性及坏死和炎症细胞浸润等病理表现均有所减轻，明显轻于模型组，接近正常水平，其中以黄连碱中、高剂量组效果最好（见图2）。由此可见，黄连碱对非酒精性脂肪肝有显著的防治作用。

实施例3黄连碱对氢化可的松诱发大鼠脂肪肝的影响

皮质醇类药物过度使用是药源性脂肪肝的重要发病原因之一。本研究采用成年雄性大鼠，皮下注射氢化可的松（36mg/kg）复制的皮质醇类药物过度诱发的药源性脂肪肝症模型，用不同剂量的HLJ进行防治，并与硫普罗宁和肝泰乐进行比较研究，旨在探讨黄连碱治疗皮质醇类药物过度使用诱发脂肪肝症的疗效，为黄连碱的进一步开发研究提供科学的依据。

1. 材料与方法

（1）药物：黄连碱盐酸盐（HLJY），由四川天然植物研究院提供，批号：130106；黄连碱（HLJ），由广东药学院中医药研究院提供，批号：120503；阳性药硫普罗宁(由河南新谊药业股份有限公司提供，批号：2012024，该药用于治疗脂肪肝症已载入药典，肝泰乐（江苏天士力帝益药业有限公司）。

（2）动物：选用成年雄性SD大鼠80只，体重200～250g，广东省医学实验动物中心提供，合格证号：12A018。

2. 实验方法

将80只大鼠编号称重后随机分为8组，每组10只，取其中一组皮下注射生理盐水作为正常对照组、一组皮下注射氢化可的松（36 mg/kg）作为模型组、另6组皮下注射氢化可的松（36 mg/kg）再分别灌胃HLJY低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）, HLJ 20 mg/kg 、硫普罗宁和肝泰乐各100 mg/kg。各组分别灌胃给药1次/天，正常对照组和氢化可的松组给予等体积生理盐水，连续给药30天。 所有大鼠均在同等条件下喂养，自由摄水，控制食量。

3. 观察指标

肝脏甘油三酯（TG）含量和肝谷氨酸转氨酶 GPT和谷草转氨酶（GOT）活性。

4. 统计学处理

所有数据均采用均数±标准差（x±SD）表示，用SPSS统计软件进行分析，组间比较用方差分析，显著性差异用q检验。

5. 实验结果

服用各剂量黄连碱防治氢化可的松诱发大鼠脂肪肝，能显著降低氢化可的松诱发大鼠脂肪肝甘油三酯含量（TG）、肝转氨酶GPT和GOT活性升高；与模型组比较，差异有显著性（p<0.05～0.01）；并且优于硫普罗宁和肝泰乐组。说明黄连碱对皮质醇过度使用所致脂肪肝，能减少肝中甘油三酯堆积，并减轻肝损害，有优良的防治作用。

表4 黄连碱对氢化可的松诱发脂肪肝大鼠肝TG含量变化的影响（X±SD）n=10

注：与正常组比较，^*P<0.05，^** P<0.01；与模型组比较，^▲P<0.05，^▲▲P<0.01。

以上药理实验研究数据表明：黄连碱或其盐酸盐都具有降脂、改善脂质代谢的作用，能抑制肝细胞甘油三酯堆积；对实验性高脂血症有明显降低血中甘油三酯和胆固醇及LDL-C作用，降低肝组织中甘油三酯含量；并减轻肝组织脂肪堆积引起的肝损害；对皮质醇过度使用所致脂肪肝，能减少肝脏甘油三酯堆积和谷氨酸转氨酶 GPT及谷草转氨酶（GOT）活性升高、减轻肝损害，有优良的防治脂肪肝作用，比降脂药辛伐他汀、非诺贝特和护肝药硫普罗宁、肝泰乐等有明显优势，可应用于临床脂肪肝性疾病。

实施例4 含黄连碱的防治脂肪肝性疾病的药物的制备工艺

1、黄连碱颗粒剂的制备

称取黄连碱干粉1.0 kg、白糖粉74 kg、糊精25 kg，混匀，加80体积%酒精适量，制粒，干燥、上机包装成2万小包，即得5 g/包，每包含黄连碱50 mg。

2、黄连碱丸剂的制备

称取黄连碱干粉0.5 kg，加淀粉6.5 kg，混匀，加蜂蜜6 kg泛丸成水泛丸，干燥得10 kg干燥丸，包装成10000包，即得1 g/包，每包含黄连碱 50 mg。

3、黄连碱滴丸剂的制备

称取黄连碱干粉1 kg，加聚乙二醇4000 4.5 kg，聚乙二醇2000 4.5 kg 混匀，90℃熔螎后在滴丸机上滴制成丸，干燥得10 kg干燥滴丸，包装成20万包，即得0.5 g/包，每包含黄连碱 50 mg。

4、黄连碱乳剂的制备

称取黄连碱干粉1 kg，加聚乙二醇4000 1 kg，甘油，十二烷基磺酸钠，乳剂辅料，按常规乳剂方法 混匀，90℃熔螎后在均质机上制成黄连碱含量为5%的油包水型黄连碱乳剂,分装。外用。

5. 黄连碱霜剂的制备

称取黄连碱干粉1 kg，加聚乙二醇4000 1 kg，甘油，十二烷基磺酸钠，乳剂辅料，按常规乳剂方法 混匀，90℃熔螎后在均质机上制成黄连碱含量为5%的水包油型黄连碱霜剂，分装。外用。

6、黄连碱粉针剂的制备

称取黄连碱盐酸盐干粉1 kg，加注射用水100 L溶解，再加入附加剂混匀，调pH值至6.0～7.5，过滤，滤液再用微孔滤膜过滤，滤液无菌分装于灭菌西林瓶中，冷冻干燥，压塞，压盖，即得。每支含黄连碱 100 mg。

7、黄连碱注射液的制备

称取黄连碱盐酸盐干粉1 kg，加注射用水加注射用水100 L溶解，再加入附加剂混匀，调pH值至6.0～7.5，过滤，滤液再用微孔滤膜过滤，滤液无菌分装于灭菌西林瓶中，封盖即得。每支含黄连碱 100 mg/2 ml。

上述实施例只是药物与辅料配比和剂型有所不同，可按常规制剂方法制成各种剂型，均具有本发明所述效果。使用时采用口服的方法，黄连碱用量为2～4 mg /kg/d （60～120 mg/次，一日2～3次）。

以上实施例仅为介绍本发明的优选案例，对于本领域技术人员来说，在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进，都应被视为本发明的一部分。

Claims (10)

1.黄连碱或其药学上可接受的盐在制备防治脂肪肝损伤产品中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述脂肪肝损伤是指原发性脂肪肝、继发性脂肪肝、药物性脂肪肝、高脂血症引起的脂肪肝或糖代谢综合征引起的脂肪肝。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括药物、保健品。

4.一种用于防治脂肪肝损伤的药物，其特征在于，所述药物的主要成分为黄连碱或其药学上可接受的盐。

5.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，所述黄连碱药学上可接受的盐是指其与酸或碱形成的可药用的盐。

6.根据权利要求4所述的药物，其特征中在于，所述药物还含有药学上可以接受的载体和/或辅料。

7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述辅料包括润滑剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、增溶剂、和稳定性等。

8.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，所述脂肪肝损伤是指原发性脂肪肝、继发性脂肪肝、药物性脂肪肝、高脂血症引起的脂肪肝或糖代谢综合征引起的脂肪肝。

9.根据权利要求4所述的药物，其特征在于，所述药物为口服制剂、外用剂型或注射液。

10.根据权利要求9所述的药物，其特征在于，所述口服制剂包括片剂、胶囊、散剂、滴丸、丸剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆、酏剂、茶或油；所述外用剂型包括：酊剂，茶、油、霜或膏剂；所述注射剂包括粉针剂或水针剂。

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