CN103602727B - 一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法 - Google Patents

一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103602727B
CN103602727B CN201310511792.4A CN201310511792A CN103602727B CN 103602727 B CN103602727 B CN 103602727B CN 201310511792 A CN201310511792 A CN 201310511792A CN 103602727 B CN103602727 B CN 103602727B
Authority
CN
China
Prior art keywords
detection
primer
ralstonia solanacearum
dna
mediated isothermal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201310511792.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103602727A (zh
Inventor
王胜坤
康丽华
马海宾
陆俊锟
江业根
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Research Institute of Tropical Forestry of Chinese Academy of Forestry
Original Assignee
Research Institute of Tropical Forestry of Chinese Academy of Forestry
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Research Institute of Tropical Forestry of Chinese Academy of Forestry filed Critical Research Institute of Tropical Forestry of Chinese Academy of Forestry
Priority to CN201310511792.4A priority Critical patent/CN103602727B/zh
Publication of CN103602727A publication Critical patent/CN103602727A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103602727B publication Critical patent/CN103602727B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2531/00—Reactions of nucleic acids characterised by
    • C12Q2531/10—Reactions of nucleic acids characterised by the purpose being amplify/increase the copy number of target nucleic acid
    • C12Q2531/119—Strand displacement amplification [SDA]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法。本发明针对青枯菌16srRNA特异性靶基因设计和筛选了一套特异性检测引物组以及含有该检测引物组的检测试剂盒和利用该检测试剂盒通过环介导等温扩增的检测方法，进而确定待检测样品中是否存在青枯菌的检测方法。本发明的检测试剂盒和检测方法具有灵敏度高、特异性强、准确率好、检测时间短的优点，从样品处理到报告结果只需花4h不需要PCR仪和电泳仪，操作过程简单，比其他PCR技术具有更高的特异性。特别适合林业部门和企业自检使用。

Description

一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法
技术领域：
本发明属于生物检测领域，具体涉及一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法。
背景技术：
植物青枯病是由青枯菌Ralstonia solanacearum(Smith)Yabuuchi et al引起的一种维管束病害，可侵染多种植物如花生、桉树、木麻黄等，给农业和林业生产造成了很大的经济损失。青枯病不仅可通过发病植株传播，也可通过潜伏侵染植株传播。与发病植株比起来，潜伏侵染植株的传播作用更加有威胁。发病植物从外观上容易辨认，可通过加强植物检疫进行防控，然而，处在青枯病潜伏期的植物从外观上很难与正常植株分开，所以潜伏期植物对青枯病的传播作用应该更加引起重视。
目前，植物组织中青枯菌的检测主要沿用传统的分离培养方法，需要进行纯培养和生化鉴定等多个步骤，检测周期长，灵敏性低，不能实现大批量植物组织的快速检测，特别是组培苗的快检。近年来发展的PCR技术虽能提高检测效率，但是需要专用PCR仪和专业操作人员和电泳观测结果，在基层的林业部门难以大规模推广应用。
LAMP技术是2000年Notomi等开发的一种新型核酸扩增技术，针对待测靶基因的6个区域设计4-6条特异性引物，在BstDNA聚合酶的作用下，在65℃左右等温条件1h内可以进行特异高效快速的核酸扩增，达到109拷贝，扩增结果可直接观察焦磷酸镁沉淀或者加入显色剂进行判断。LAMP方法与PCR技术相比，检测时间短，具有更高的灵敏度和特异性，操作简单，仅仅需要普通水浴锅就可以完成检测。近年来已广泛用于各种病原检测。尽管已有针对青枯菌Flic基因建立LAMP方法的文献报道，但是由于仅用于水样品，且灵敏度有限，以此建立的LAMP方法在实际应用中具有一定的局限性。
发明内容：
本发明的目的是提供一种快速、特异好、灵敏高的利用环介导等温扩增检测青枯菌的检测引物组，利用该检测引物组可以特异性的检测青枯菌。
本发明的利用环介导等温扩增检测青枯菌的检测引物组，其特征在于，由下列引物组成：
上游外引物F3（5’-3’）：GGATTAATTCGATGCAACGC（如SEQ ID NO.1所示）；
下游外引物B3（5’-3’）：CTTCCTCCGGTTTGTCAC（如SEQ ID NO.2所示）；
上游内引物FIP（5’-3’）：GCAGCACCTGTGTCCACTTACATGCCACTAACGAAGC（如SEQ ID NO.3所示）；
下游内引物BIP（5’-3’）：CAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGTAGCAACTAGAGACAAGG（如SEQ ID NO.4所示）。
本发明的第二个目的是提供一种非疾病的诊断和治疗目的的青枯菌的检测方法，其特征在于，提取样品中的细菌DNA，然后通过环介导等温扩增的方法用上述检测引物组对细菌DNA进行选择性扩增，确认是否存在有扩增产物。
所述的样品可以为植物组织或者细菌培养物。
所述的通过环介导等温扩增的方法用上述检测引物组对细菌DNA进行选择性扩增具体为：环介导等温扩增体系为体系总体积25μL，包括2.5μL10×Thermopol反应缓冲液、0.4μL10mM dNTPs、0.5μL10uM上游外引物F3、0.5μL10uM下游外引物B3、1μL40uM上游内引物FIP、1μL40uM下游内引物BIP、0.6μL100mM MgSO4、12.5μL2M甜菜碱、4μL灭菌双蒸水ddH2O，1μL8U/μL Bst DNA聚合酶和1μL细菌DNA模板，反应条件为在温度为60～65℃孵育45～60min。
所述的确认是否存在有扩增产物可以利用电泳检测、荧光显色检测或浊度检测环介导等温扩增反应产物是否具有扩增产物，优选用荧光显色检测，具体是在80℃终止反应1～2min，在扩增反应管中加入SYBR GreenⅠ显色剂，1～5min后观察结果，如果颜色为橙色，则样品青枯菌阴性，无青枯菌，如果颜色为绿色，则样品青枯菌阳性，含有青枯菌。
所述的10×Thermopol反应缓冲液是现有技术中的物质，可以从试剂公司购买到，其含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）、100mmol/L氯化钾（KCl）、100mmol/L硫酸铵（NH4）2SO4、20mmol/L硫酸镁（MgSO4）和1%曲拉通X-100（TtitonX-100），余量为水。
本发明的第三个目的是提供一种青枯菌的检测试剂盒，包括环介导等温扩增试剂和检测引物组，其特征在于，所述的检测引物组由下列引物组成：
上游外引物F3（5’-3’）：GGATTAATTCGATGCAACGC（如SEQ ID NO.1所示）；
下游外引物B3（5’-3’）：CTTCCTCCGGTTTGTCAC（如SEQ ID NO.2所示）；
上游内引物FIP（5’-3’）：GCAGCACCTGTGTCCACTTACATGCCACTAACGAAGC（如SEQ ID NO.3所示）；
下游内引物BIP（5’-3’）：CAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGTAGCAACTAGAGACAAGG（如SEQ ID NO.4所示）。
本发明针对青枯菌16srRNA特异性靶基因设计和筛选了一套特异性检测引物组以及含有该检测引物组的检测试剂盒和利用该检测试剂盒通过环介导等温扩增的检测方法，进而确定待检测样品中是否存在青枯菌的检测方法。本发明的检测试剂盒和检测方法具有灵敏度高、特异性强、准确率好、检测时间短的优点，从样品处理到报告结果只需花4h不需要PCR仪和电泳仪，操作过程简单，比其他PCR技术具有更高的特异性。特别适合林业部门和企业自检使用。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
1、样品增菌液（TTC-LB增菌液）
样品增菌液包括培养基和抑菌剂两部分。其中，培养基为LB肉汤，抑菌剂为TTC（氯代三苯基四氮唑）。
配制方法：
（1）TTC抑菌剂配制
称取15mg TTC干粉，加入10mL纯水溶解，0.22um膜过滤除菌。
（2）培养基配制
称取21g LB培养基干粉，用1000mL蒸馏水，搅拌加热煮沸至充分溶解，分装三角瓶，每瓶100mL，121℃高压灭菌15min，冷却至40℃，加入1mL TTC抑菌剂，由此得到样品增菌液。
2、LAMP快速检测系列试剂
（1）环介导等温扩增反应液：含有10×Thermopol反应缓冲液、300-500uM dNTP s（四种脱氧核苷酸的混合物）、4-6mL硫酸镁（MgSO4）、0.1-0.3uM外引物（F3/B3），1-2uM内引物（FIP/BIP）、0.8-1M甜菜碱。
其中10×Thermopol缓冲液含有200mM pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）、100mM氯化钾（KCl）、100mM硫酸铵（NH4）2SO4、20mM硫酸镁（MgSO4）和1%曲拉通X-100（TtitonX-100），余量为水。
检测引物组：
上游外引物F3（5’-3’）：GGATTAATTCGATGCAACGC（如SEQ ID NO.1所示）；
下游外引物B3（5’-3’）：CTTCCTCCGGTTTGTCAC（如SEQ ID NO.2所示）；
上游内引物FIP（5’-3’）：GCAGCACCTGTGTCCACTTACATGCCACTAACGAAGC（如SEQ ID NO.3所示）；
下游内引物BIP（5’-3’）：CAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGTAGCAACTAGAGACAAGG（如SEQ ID NO.4所示）。
（2）Bst DNA聚合酶：每微升含有8个活性单位（8U/μL）
（3）显色剂：10%的荧光染料SYBR GREENⅠ
上述环介导等温扩增（LAMP）反应液每管23μL的最佳组成为：2.5μL10×Thermopol反应缓冲液、0.4μL10mMdNTPs、0.5μL10uM上游外引物为F3、0.5μL10uM下游外引物为B3、1μL40uM上游内引物为FIP、1μL40uM下游内引物为BIP、0.6μL100mM MgSO4、12.5μL2M甜菜碱、4μL灭菌双蒸水ddH2O。
实施例1：感病桉树组织中青枯菌的检测
1、植物组织处理
取5g维管束组织加入10mL无菌水，研碎，得到样品处理液，进行细菌DNA提取。
2、细菌DNA的提取
取1mL样品处理液12000r/min离心5min，弃上清，收集菌体，加入50μLTE充分悬浮混匀，于100℃水浴10min，冰浴3min，12000r/min离心5min，取上清备用，得到待检测模板DNA。
3、LAMP扩增
环介导等温扩增（LAMP）反应液每管25μL的组成为：2.5μL10×Thermopol反应缓冲液、0.4μL10mM dNTPs、0.5μL10uM上游外引物F3、0.5μL10uM下游外引物B3、1μL40uM上游内引物FIP、1μL40uM下游内引物BIP、0.6μL100mM MgSO4、12.5μL2M甜菜碱、1μL BstDNA聚合酶、1μL待检测模板DNA和4μL灭菌双蒸水ddH2O，于恒温水浴锅上60℃孵育60min，80℃终止反应1-2min，取出反应管。
以不加DNA作为阴性对照，以加青枯菌的DNA的作为阳性对照。
4、显色剂观察
在反应管中加入1μL显色剂（10%的SYBR GreenⅠ显色剂），直接用肉眼观察颜色变化，待检测样品反应管颜色变为绿色，阴性对照反应管颜色变为橙色，阳性对照反应管颜色变为绿色，由此说明待检测样品（感病桉树组织）中含有青枯菌。该结果与传统生化鉴定方法检测结果吻合，证明此方法数据可靠。
实施例2：健康木麻黄植物组织青枯菌检测
1、植物组织处理
取5g维管束组织加入10mL无菌水，无菌研碎，得到样品处理液。
2、细菌DNA的提取
将样品处理液加入到100ml TTC-LB增菌液中37℃培养6-8h，取1ml增菌培养液，12000r/min离心5min，弃上清，收集菌体，加入50μL TE充分悬浮混匀，于100℃水浴10min，冰浴3min，12000r/min离心5min，取上清备用，得到待检测模板DNA。
3、LAMP扩增
环介导等温扩增（LAMP）反应液每管25μL的组成为：2.5μL10×Thermopol反应缓冲液、0.4μL10mM dNTPs、0.5μL10uM上游外引物F3、0.5μL10uM下游外引物B3、1μL40uM上游内引物FIP、1μL40uM下游内引物BIP、0.6μL100mM MgSO4、12.5μL2M甜菜碱、1μL BstDNA聚合酶、1μL待检测模板DNA和4μL灭菌双蒸水ddH2O，于恒温水浴锅上65℃孵育45min，80℃终止反应1-2min，取出反应管。
以不加DNA作为阴性对照，以加青枯菌的DNA的作为阳性对照。
4、显色剂观察
在反应管中加入1μL显色剂（10%的SYBR GreenⅠ显色剂），直接用肉眼观察颜色变化，待检测样品（健康木麻黄植物组织）反应管颜色变为橙色，阴性对照反应管颜色变为橙色，阳性对照反应管颜色变为绿色，由此说明待检测样品中不含有青枯菌。该结果与传统生化鉴定方法检测结果吻合，证明此方法数据可靠。
实施例3：特异性实验
收集青枯菌及非青枯菌41株（试验菌株见表1），将菌株分别在营养肉汤（NB）30℃培养24h后，取1mL菌液，于12000r/min离心5min，弃上清，收集菌体，加入50μL TE充分悬浮混匀，于100℃水浴10min，冰浴3min，12000r/min离心5min，取上清备用，得到待检测模板DNA。
环介导等温扩增（LAMP）反应液，每管25μL的组成为：2.5μL10×Thermopol反应缓冲液、0.4μL10mM dNTPs、0.5μL10uM上游外引物F3、0.5μL10uM下游外引物B3、1μL40uM上游内引物FIP、1μL40uM下游内引物BIP、0.6μL100mM MgSO4、12.5μL2M甜菜碱、1μLBst DNA聚合酶、1μL待检测模板DNA和4μL灭菌双蒸水ddH2O，于恒温水浴锅上63℃孵育50min，80℃终止反应1-2min，取出反应管。
反应管中加入1μL显色剂（10%的SYBR GreenⅠ显色剂），直接用肉眼观察颜色变化，如果颜色为橙色，则样品青枯菌阴性，无青枯菌，如果颜色为绿色，则样品青枯菌阳性，含有青枯菌。结果如表1所示。
表1：试验所用菌株及测试结果
+：青枯菌阳性；-：青枯菌阴性
由表1可以看出，本发明中的LAMP方法具有较好的特异性，只有青枯菌菌株扩增阳性，其他非菌株为阴性。
实施例4：灵敏度实验
将青枯菌在LB中30℃培养24h后，取1mL菌液，用灭菌生理盐水进行10倍梯度稀释，选取适宜的3个稀释度进行平板计数。取经平板计数分别为1.72×100cfu/mL、1.72×101cfu/mL、1.72×102cfu/mL、1.72×103cfu/mL浓度菌液各1mL，参照实施例3的方法提取细菌DNA，进行LAMP扩增，验证该方法的灵敏度。经过3次重复实验，其中2次实验结果灵敏度为1.72×101cfu/mL，1次实验结果灵敏度为1.58×102cfu/mL，因此确定本发明的LAMP方法的最低检测限为1.72×101cfu/mL～1.58×102cfu/mL，具有较高的灵敏度。

Claims (5)

1.一种利用环介导等温扩增检测青枯菌的检测引物组，其特征在于，由下列引物组成：
上游外引物F3：GGATTAATTCGATGCAACGC；
下游外引物B3：CTTCCTCCGGTTTGTCAC；
上游内引物FIP：GCAGCACCTGTGTCCACTTACATGCCACTAACGAAGC；
下游内引物BIP：CAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGTAGCAACTAGAGACAAGG。
2.一种非疾病的诊断和治疗目的的青枯菌的检测方法，其特征在于，提取样品中的细菌DNA，然后通过环介导等温扩增的方法用权利要求1所述的检测引物组对细菌DNA进行选择性扩增，确认是否存在有扩增产物。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的样品为植物组织或者细菌培养物。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述的通过环介导等温扩增的方法用权利要求1所述的检测引物组对细菌DNA进行选择性扩增具体为：环介导等温扩增体系为体系总体积25μL，包括2.5μL10×Thermopol反应缓冲液、0.4μL10mM dNTPs、0.5μL10uM上游外引物F3、0.5μL10uM下游外引物B3、1μL40uM上游内引物FIP、1μL40uM下游内引物BIP、0.6μL100mM MgSO4、12.5μL2M甜菜碱、4μL灭菌双蒸水，1μL8U/μL Bst DNA聚合酶和1μL细菌DNA模板，反应条件为在温度为60～65℃孵育45～60min。
5.一种青枯菌的检测试剂盒，包括环介导等温扩增试剂和检测引物组，其特征在于，所述的检测引物组由下列引物组成：
上游外引物F3：GGATTAATTCGATGCAACGC；
下游外引物B3：CTTCCTCCGGTTTGTCAC；
上游内引物FIP：GCAGCACCTGTGTCCACTTACATGCCACTAACGAAGC；
下游内引物BIP：CAGCTCGTGTCGTGAGATGTTCGTAGCAACTAGAGACAAGG。
CN201310511792.4A 2013-10-25 2013-10-25 一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法 Expired - Fee Related CN103602727B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310511792.4A CN103602727B (zh) 2013-10-25 2013-10-25 一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310511792.4A CN103602727B (zh) 2013-10-25 2013-10-25 一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103602727A CN103602727A (zh) 2014-02-26
CN103602727B true CN103602727B (zh) 2015-03-11

Family

ID=50120990

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310511792.4A Expired - Fee Related CN103602727B (zh) 2013-10-25 2013-10-25 一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103602727B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105296479B (zh) * 2015-11-25 2018-05-22 广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 一种桑树青枯病鉴定的特异性引物及其应用
CN112779342A (zh) * 2019-11-11 2021-05-11 杨雷亮 香蕉细菌性枯萎病菌环介导等温扩增检测方法
CN117867152B (zh) * 2024-03-08 2024-05-24 云南英茂现代农业有限公司 一种用于检测青枯菌的核酸引物组、包含其的产品及应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7262010B2 (en) * 2002-10-30 2007-08-28 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Real-time PCR primers and probes for identification of Ralstonia solanacearum race 3, biovar 2 in potato and other plants
AU2011270885B2 (en) * 2010-06-22 2016-05-19 University Of Hawaii Sequence specific real-time monitoring of loop-mediated isothermal amplification (LAMP)
CN102465173A (zh) * 2010-11-08 2012-05-23 中国农业科学院植物保护研究所 青枯菌2号小种的特异性pcr检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN103602727A (zh) 2014-02-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106434891A (zh) 快速恒温检测志贺氏菌的方法、引物及试剂盒
CN102154451B (zh) 阪崎肠杆菌的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和检测试剂盒
CN102134601B (zh) 铜绿假单胞菌的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和检测试剂盒
Huang et al. Loop-mediated isothermal amplification method for the rapid detection of Ralstonia solanacearum phylotype I mulberry strains in China
CN105018644B (zh) 一种呼吸道病原体检测试剂盒
Dugan et al. Detection of Bacillus anthracis from spores and cells by loop-mediated isothermal amplification without sample preparation
CN105039541A (zh) 用于河流弧菌lamp-lfd检测的引物和探针序列及引物和探针的应用
CN103602727B (zh) 一种快速检测青枯菌的检测引物组、检测试剂盒和检测方法
CN102337344B (zh) 一种定量检测土壤中大肠杆菌的方法及其检测试剂盒
CN102643919B (zh) 一种食品中副溶血弧菌活菌的检测试剂盒及检测方法
US20220098645A1 (en) Fast and portable microfluidic detection system as an alternative to salmonella's classical culture method
Ou et al. Direct detection of viable but non-culturable (VBNC) Salmonella in real food system by a rapid and accurate PMA-CPA technique
CN103820554A (zh) 检测番茄溃疡病菌的交叉引物恒温扩增试剂盒及专用引物
CN101570780B (zh) 肉制品中布氏菌检测试剂盒及检测方法
CN105296479B (zh) 一种桑树青枯病鉴定的特异性引物及其应用
CN102676664A (zh) 同时检测多种水产品致病菌的荧光定量pcr引物和探针及检测方法
CN104513857A (zh) 副溶血性弧菌的环介导等温扩增检测引物组、检测方法和试剂盒
CN102373293B (zh) 柯萨奇病毒a16型rt-lamp核酸检测试剂盒
CN106893764A (zh) 一种青枯菌的lamp检测引物组合及其lamp检测试剂盒和lamp方法
CN104946754A (zh) 一种定量检测土壤中青枯菌的方法及其检测试剂盒
CN104561267A (zh) 检测罗非鱼无乳链球菌的环介导等温扩增反应引物
CN110878373A (zh) 一种致病疫霉菌的重组酶聚合酶扩增检测试剂盒及其应用
CN103436623A (zh) 一种食品中沙门氏菌活菌的快速检测试剂盒及使用方法
Kamusoko et al. Purification and amplification of DNA from cellulolytic bacteria: Application for biogas production from crop residues
CN104195254A (zh) 基于环介导等温扩增技术检测木贼镰孢菌的方法和引物组合物

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20150311

Termination date: 20211025

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee