CN103599073A - 一种负载有靶向抗癌药物的plga微米颗粒的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种负载有靶向抗癌药物的PLGA微米颗粒的制备方法。本发明把吉西他滨转化成4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C18)，可以使其更稳定更均匀的复合到聚乳酸-羟基乙酸共聚物微米颗粒中，同时不减弱吉西他滨的细胞内药物活性。荧光标记的GEM-C18-聚乳酸-羟基乙酸共聚物微米颗粒对非恶性癌(SV-HUC-1)、低级或高级癌(5637，HT-1376)的尿路上皮细胞粘附力与抗增殖和抗代谢效应都有显著的提高。本发明产品在靶向杀灭癌细胞以及癌症治疗方面具有临床应用前景。

Description

一种负载有靶向抗癌药物的PLGA微米颗粒的制备方法

技术领域

本发明涉及一种PLGA微米颗粒的制备，尤其涉及一种负载有可以用于靶向治疗的抗癌药物吉西他滨的PLGA微米颗粒的制备。

背景技术

根据流行病学趋势预警，膀胱癌是一种严重的内科病情。通过膀胱灌注可以使药物很好的进入到治疗位点，但是膀胱灌注治疗中尿路上皮细胞对药物的生物利用度较低，而且由于病人的依从性和实际操作性，单次膀胱灌注治疗的最长时间限制在120min以内。各种不同的先进策略如新颖的APIs和装置辅助方法可用来优化药物接触。

核苷类似物吉西他滨，由于其光谱抗肿瘤活性及良好的安全性特点，用作新一代化疗，吉西他滨本身作为一种前体药物，需要通过核苷转运(Hentl)和特定激酶作用下在细胞内转化成具有活性的三磷酸形式，来使DNA断裂，引起凋亡，但转运蛋白和激酶的表达或活性水平变化，会造成吉西他滨在敏感性及耐药性方面的严重缺陷；同时吉西他滨半衰期较短，需要相当高的注射剂量。双亲性吉西他滨的药代动力学和药理学特点有了改善，它的优点包括不依赖于蛋白运载而主要靠基于扩散的跨膜摄取和对于脱氨的低易感性，这两点都被证明和其在体内外活性水平的增强直接相关。但是转化为亲脂性衍生物后，吉西他滨在水溶液环境中的溶解性非常有限。

发明内容

吉西他滨也已被做成脂质体或颗粒运输体系。在很多情况下，根据所使用的生物材料，载药平台决定了药物的整体性能，可能会实现持续释放和对酶降解的低易感性，并可以通过表面修饰生物分子实现靶向。通过膀胱内灌注治疗直接进入到尿路上皮组织，已成为降低膀胱癌高复发率的一个非常有前景的手段。

本发明结合一种具有药理学上优势的前体药物方法和药代动力学上有利的聚糖靶向运载体系，用来增强吉西他滨对于尿路上皮细胞的治疗效果。把吉西他滨转化成其4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C18)，可以使其更稳定更均匀的复合到聚乳酸-羟基乙酸共聚物微米颗粒中，同时不减弱吉西他滨的细胞内药物活性。具体制备步骤如下：

(1)4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C₁₈)的合成与分离：将100mg硬脂酸、119ul(0.5mmol)三丁基胺溶解到5ml四氢呋喃中并冷却到-10℃，65ul(0.5mmol)异丁基氯甲酸溶解到5ml四氢呋喃中，将其滴加到上述冷却好的溶液中，反应混合物在充氮气条件下搅拌30min；将吉西他滨(148mg，0.5mmol)和硫代巴比妥酸(TBA)(119μl，0.5mmol)的5ml无水DMF溶液小心加入，混合物在室温下搅拌36h，酰化完成后蒸发掉多余的溶剂，剩余物溶解在10mL的二氯甲烷和乙醇(94/6，V/V)的混合溶剂中；混合物离心，悬浮液用硅凝胶色谱纯化。

(2)聚乳酸-羟基乙酸共聚物负载GEM-C₁₈微米颗粒的制备：500μg的PLGA和100mg的GEM-C₁₈溶解到3mL乙基醋酸中然后冷却到4℃；含有PLGA和GEM-C₁₈的有机相用超声分散50s的方法分散到含有稳定剂的5.0mL的水溶液中，得到的乳液稀释到100mL后磁力搅拌2h以蒸发掉有机相；悬浮液在不大于200mbar的压力下旋转蒸发30min完成颗粒的硬化和剩余溶剂的去除。GEM-C₁₈-PLGA-MP用多次离心的方法从聚合物中分离出来，每次2800～3500rpm离心15～30min后重新分散到同样体积的4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸缓冲液中。

荧光标记的GEM-C18-聚乳酸-羟基乙酸共聚物微米颗粒，表面修饰麦胚凝集素(WGA)或者人血清蛋白(HSA)对非恶性癌(SV-HUC-1)、低级或高级癌(5637，HT-1376)的尿路上皮细胞粘附力与抗增殖和抗代谢效应都有显著的提高。与麦胚凝集素修饰的GEM-C18-聚乳酸-羟基乙酸共聚物微米颗粒更广泛更持久的结合，会引起药理特征的变化，显著提高细胞毒性，还可以在短时间限制(120min)内使灌输给药有最大响应。在靶向杀灭癌细胞以及癌症治疗方面具有临床应用前景。

具体实施方式

为了加深对本发明的理解，下面结合具体实例对本发明做进一步的详述：

(1)4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C₁₈)的合成与分离：将100mg硬脂酸、119ul(0.5mmol)三丁基胺溶解到5ml四氢呋喃中并冷却到-10℃，65ul(0.5mmol)异丁基氯甲酸溶解到5ml四氢呋喃中，将其滴加到上述冷却好的溶液中，反应混合物在充氮气条件下搅拌30min；将吉西他滨(148mg，0.5mmol)和硫代巴比妥酸(TBA)(119μl，0.5mmol)的5ml无水DMF溶液小心加入，混合物在室温下搅拌36h，酰化完成后蒸发掉多余的溶剂，剩余物溶解在10mL的二氯甲烷和乙醇(94/6，V/V)的混合溶剂中；混合物离心，悬浮液用硅凝胶色谱纯化。

(2)聚乳酸-羟基乙酸共聚物负载GEM-C₁₈微米颗粒的制备：500μg的PLGA和100mg的GEM-C₁₈溶解到3mL乙基醋酸中然后冷却到4℃；含有PLGA和GEM-C₁₈的有机相用超声分散50s的方法分散到含有稳定剂的5.0mL的水溶液中，得到的乳液稀释到100mL后磁力搅拌2h以蒸发掉有机相；悬浮液在不大于200mbar的压力下旋转蒸发30min完成颗粒的硬化和剩余溶剂的去除。GEM-C₁₈-PLGA-MP用多次离心的方法从聚合物中分离出来，每次2800rpm离心30min后重新分散到同样体积的4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸缓冲液中。

Claims (3)

1.一种负载有靶向抗癌药物的PLGA微米颗粒的制备方法，其步骤如下：

(1)4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C₁₈)的合成与分离：

将100mg硬脂酸、119ul(0.5mmol)三丁基胺溶解到5ml四氢呋喃中并冷却到-10℃，65ul(0.5mmol)异丁基氯甲酸溶解到5ml四氢呋喃中，将其滴加到上述冷却好的溶液中，反应混合物在充氮气条件下搅拌30min；将吉西他滨(148mg，0.5mmol)和硫代巴比妥酸(TBA)(119μl，0.5mmol)的5ml无水DMF溶液小心加入；混合物在室温下搅拌36h，酰化完成后蒸发掉多余的溶剂，剩余物溶解在10mL的二氯甲烷和乙醇(94/6，V/V)的混合溶剂中，混合物离心，悬浮液用硅凝胶色谱纯化；

(2)聚乳酸-羟基乙酸共聚物负载GEM-C₁₈微米颗粒的制备：

500μg的PLGA和100mg的GEM-C₁₈溶解到3mL乙基醋酸中然后冷却到4℃；含有PLGA和GEM-C₁₈的有机相用超声分散50s的方法分散到含有稳定剂的5.0mL的水溶液中，得到的乳液稀释到100mL后磁力搅拌2h；悬浮液在不大于200mbar的压力下旋转蒸发30min，GEM-C₁₈-PLGA-MP用多次离心的方法从聚合物中分离出来，每次2800～3500rpm离心15～30min后重新分散到4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸缓冲液中。

2.如权利要求1所述的PLGA微米颗粒的制备方法，其特征在于：所述4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸缓冲液与GEM-C₁₈-PLGA-MP的体积比为1：1。

3.如权利要求1所述的PLGA微米颗粒的制备方法，其特征在于：所述离心速度和时间分别为2800rpm和30min。