CN103592381B - 高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高效液相色谱检测检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法。该方法包括：1）色谱柱的填料为SinoChrom ODS-BP；流动相为10：90的乙腈和离子对缓冲溶液，离子对缓冲溶液为1升二次蒸馏水+1.7克十二烷基磺酸钠+1.0ml磷酸；紫外可见检测器的检测波长为254nm；柱温30℃，流动相速度1.0mL/min；2）标准样品用乙腈配制成含有磺酸苯肼硫酸盐系列0.05～0.3mg/mL的标准溶液，待测样品用乙腈溶解后，经超声过滤，得待测溶液；3）将标准溶液和待测溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。本发明操作简便，灵敏度高，重复性好，检测结果可靠。本法能快速有效地分离杂质。

Description

高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法
技术领域
本发明属于磺酸苯肼硫酸盐系列的质量评价方法，具体涉及一种磺酸苯肼硫酸盐系列的检测方法。
背景技术
目前，检测苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐采用亚硝酸钠为标准溶液的重氮反应滴定法，但是该类方法操作繁琐，而且检测结果的准确性、灵敏度和重现性无法满足实际工作的需要。
发明内容
本发明的目的就是要克服现有技术所存在的不足，提供一种高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法。
为实现上述目的，本发明高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法，高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法，包括下述步骤：
1)色谱条件：所用色谱柱的填料为SinoChrom ODS-BP，其尺寸为250mm柱长×4.6mm内径，5μm粒径；流动相为体积比为10：90的乙腈和离子对缓冲溶液，所述离子对缓冲溶液为1升二次蒸馏水+1.7克十二烷基磺酸钠+1.0ml磷酸；紫外可见检测器的检测波长为254nm；柱温为30℃，流动相速度为1.0mL/min；
2)溶液的配制：标准样品用乙腈配制成含有磺酸苯肼硫酸盐系列0.05～0.3mg/mL的标准溶液，待测样品用乙腈溶解后，经超声过滤定容，制得待测溶液；
3)测定：将标准溶液和待测溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。
本发明的有益效果在于：相对于采用亚硝酸钠为标准溶液的重氮反应滴定法，具有操作简便、灵敏度高、重复性好、检测结果可靠的特点。本发明能快速有效地分离杂质。
附图说明
图1为采用本发明检测方法所得苯肼-2-磺酸硫酸盐标样的色谱图。
图2为采用本发明检测方法所得苯肼-3-磺酸硫酸盐标样的色谱图。
图3为采用本发明检测方法所得苯肼-4-磺酸硫酸盐标样的色谱图。
图4为采用本发明检测方法所得液相色谱基线图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述。
本发明实施例中所用的苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐系列标准样品为美国USP公司产品，其纯度99.9％。流动相乙腈、磷酸为色谱级，十二烷基磺酸钠为分析纯，样品系湖北神舟化工有限公司生产。
本发明实施例中所用的仪器为岛津高效液相色谱仪，SPD-10AVP Plus紫外可见检测器，LC—10AT VP PLUS单元低、高压溶剂输送泵，7725i型手动进样器，HS2000色谱工作站。
检测波长的确定：在200～400nm波长范围内扫描，发现在254nm处有最大吸收，故选254nm为检测波长，在该波长处检测灵敏度较高。
流动相的确定：对苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐进行液相色谱分析时，如采用甲醇-水流动相等体系，分离效果明显不如使用乙腈：离子对缓冲溶液体系，选择了乙腈：离子对缓冲溶液作为流动相，经试验样品稳定不发生变化，分离效果好。故流动相优选乙腈：离子对缓冲溶液体积比为10：90。
经过试验，本发明的液相色谱条件：所用色谱柱的填料为SinoChrom ODS-BP，其尺寸为250mm柱长×4.6mm内径，5μm粒径；流动相为体积比为10：90的乙腈和离子对缓冲溶液，离子对缓冲溶液为1升二次蒸馏水+1.7克十二烷基磺酸钠+1.0mL磷酸；紫外可见检测器的检测波长为254nm；柱温为30℃，流动相速度为1.0mL/min，分析时间20.0min。
标准工作曲线的绘制：
分别称取标准样品苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐20.0mg置于25mL容量瓶中，加乙腈充分溶解定容。摇匀，吸取该溶液3.0ml移入25mL容量瓶中，加乙腈充分溶解定容。配制浓度为0.08mg/mL、0.10mg/mL、0.15mg/mL、0.20mg/mL、0.25mg/mL苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐标准溶液，取20.0μL标准溶液注入高效液相色谱仪，按色谱条件进行测定分析，测得苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐标准溶液的相关峰面积。以色谱峰的峰面积为纵坐标，与其对应的浓度为横坐标作图，绘制标准工作曲线。
图1所示的苯肼-2-磺酸硫酸盐标样色谱图，其保留时间10.173min；图2所示的苯肼-3-磺酸硫酸盐标样色谱图，其保留时间7.348min；图3所示的苯肼-4-磺酸硫酸盐标样色谱图，其保留时间1.840min。
回归方程为y＝78.3x-38300.0；相关系数R2＝0.9997，结果表明苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐在0.8～2.5μg范围内色谱峰面积与进样量呈良好的线性关系。
待测样品的测定：
称取待测样品1.250g用乙腈充分溶解后，用乙腈定容到25mL容量瓶中。超声波超5min，用针头过滤器过滤，吸取该溶液1.0mL至25mL容量瓶，加乙腈充分溶解定容，制得待测溶液，备用。取20.0μL待测溶液注入高效液相色谱仪，按色谱条件进行测定，记录色谱图并进行分析。
精密度试验结果
在上述色谱条件下，取浓度为0.1mg/mL苯肼-2-磺酸硫酸盐的标准溶液重复5次进样，进样量为10μL，峰面积的RSD为0.70％。
在上述色谱条件下，取浓度为0.1mg/mL苯肼-3-磺酸硫酸盐的标准溶液重复5次进样，进样量为10μL，峰面积的RSD为0.69％。
在上述色谱条件下，取浓度为0.1mg/mL苯肼-4-磺酸硫酸盐的标准溶液重复5次进样，进样量为10μL，峰面积的RSD为0.68％。
加标回收率试验结果
将苯肼-2-磺酸硫酸盐样品分成5份，分别加入不同浓度标准品，每个浓度做3个平行样，平均回收率为98.3％，结果见表1。
表1苯肼-2-磺酸硫酸盐测定方法的回收率(n＝3)
样品 理论值//μg 测量值//μg 回收率//％
1 8230.702 8122.386 98.7
2 8384.782 8228.359 98.1
3 8538.862 8386.964 98.2
4 8692.942 8528.825 98.1
5 8847.022 8693.772 98.3
将苯肼-3-磺酸硫酸盐样品分成5份，分别加入不同浓度标准品，每个浓度做3个平行样，平均回收率为98.4％，结果见表2。
表2苯肼-3-磺酸硫酸盐测定方法的回收率(n＝3)
样品 理论值//μg 测量值//μg 回收率//％
1 8230.702 8115.470 98.6
2 8384.782 8242.240 98.3
3 8538.862 8376.620 98.1
4 8692.942 8562.550 98.5
5 8847.022 8696.620 98.3
将苯肼-4-磺酸硫酸盐样品分成5份，分别加入不同浓度标准品，每个浓度做3个平行样，平均回收率为98.2％，结果见表3。
表3苯肼-4-磺酸硫酸盐测定方法的回收率(n＝3)
样品 理论值//μg 测量值//μg 回收率//％
1 8230.702 8066.090 98.0
2 8384.782 8228.359 98.1
3 8538.862 8410.780 98.5
4 8692.942 8528.825 98.1
5 8847.022 8705.470 98.4
其他成分对测定结果的影响：
分别取不含苯肼-2-磺酸硫酸盐、苯肼-3-磺酸硫酸盐、苯肼-4-磺酸硫酸盐的空白样品，称取样品1.250g用乙腈充分溶解后，用乙腈定容到25ml容量瓶中。超声波超5min，用针头过滤器过滤，吸取该溶液1.0ml至25ml容量瓶，加乙腈充分溶解定容。处理后进样，结果表明其他成分对样品的含量测定均没有干扰，如图4所示。

Claims (1)

1.一种高效液相色谱检测磺酸苯肼硫酸盐系列的方法，其特征在于，包括下述步骤：
1）色谱条件：所用色谱柱的填料为SinoChrom ODS-BP，其尺寸为250mm柱长×4.6mm内径，5μm粒径；流动相为体积比为10：90的乙腈和离子对缓冲溶液，所述离子对缓冲溶液为1升二次蒸馏水+1.7克十二烷基磺酸钠+1.0ml磷酸；紫外可见检测器的检测波长为254nm；柱温为30℃，流动相速度为1.0mL/min；
2）溶液的配制：标准样品用乙腈配制成含有磺酸苯肼硫酸盐系列0.05～0.3mg/mL的标准溶液，待测样品用乙腈溶解后，经超声过滤定容，制得待测溶液；
3）测定：将标准溶液和待测溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。
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