CN103565756B - 一种米铂冻干制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种米铂冻干制剂的制备方法。该冻干制剂含有活性成分米铂，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、对映异构体或外消旋体、前药或类似物，其特征在于，将活性成分采用混合溶剂叔丁醇和甲醇溶解，并冻干该溶液，得到无菌注射用冻干制剂。本发明制备得到的米铂无菌冻干制剂，形成的球形颗粒圆整，大小均一，可容易的混悬于碘化油中，且形成的混悬剂不易分层、粘度不随时间延长而增加。

Description

一种米铂冻干制剂的制备方法

技术领域

本发明涉及一种脂溶性铂类的无菌注射用制剂及其制备方法，具体涉及米铂的无菌注射用冻干制剂的制备方法。

背景技术

米铂(Miriplatin，SM11355)是一种脂溶性铂类金属络合物，化学名是(SP-4-2)-[(1R,2R)-1,2-环己二胺-N,N′]二(十四烷酰氧基)合铂(II)，具有如下式I的结构：

米铂为白色至微黄色结晶性粉末，在氯仿，二氯甲烷中溶解，在乙醇中微溶，在甲醇中极微溶，在水、乙腈中几乎不溶。

米铂可用于治疗或辅助治疗肝细胞癌、恶性淋巴瘤、非小细胞肺癌、小细胞肺癌或表面膀胱癌等病症。米铂作为一种脂溶性铂类络合物，极低的水溶性使其难以制备成常规注射剂。在治疗肝癌时，将米铂用碘化油(罂粟籽油的脂肪酸酯的碘加成物，以下简称为碘化油)混悬后，用导管经肝动脉灌注后，可达到良好的治疗效果。由于肝细胞癌的血液供应与正常肝组织不同，其肿瘤血液供应的90%以上来源于肝动脉，10%左右来源于门静脉；而正常肝组织血液供应80%以上来源于门静脉。米铂采用碘化油混悬后，经导管肝动脉灌注，大部分药物直接进入肿瘤血管，仅有小部分药物进入正常肝组织血管。由于肿瘤组织的血管缺乏弹力层和肌层，常发生不规则扭曲，不能冲刷出粘滞的碘化油，且肿瘤组织缺乏能清除碘化油的单核巨噬系统和淋巴系统，使得碘化油选择性聚集于肝癌组织，既能有效阻断肝细胞癌的血液供应，也可将药物靶向地输送至肿瘤细胞中，保持肿瘤部位较高的局部药物浓度，而正常组织中较低的药物浓度，提高抗肿瘤疗效，降低毒副作用。

临床试验显示，肝细胞癌患者经米铂治疗，患者的TEV(肿块消失或肿瘤100%坏死率)达26.5%(22/83)；2年生存率达75.9%，3年生存率达58.4%。且由于给药操作未发生肝血管损伤，可以多次给药(J.Clin.Oncol.2009，27(15s)：4583)。另一组16例患者参加的临床试验数据显示，肝癌患者CR率达56％(9/16)(Invest.New.Drug.2004，22(2)：169-176)，耐受性好。

米铂是无菌注射制剂，通过混悬入碘化油中而给药。因此，需要将非无菌原料通过制剂工艺处理为无菌制剂。JP3255025A公开了采用叔丁醇和氯仿制备米铂冻干制剂的方法，该制剂混悬于碘化油(罂粟籽油的脂肪酸酯的碘加成物)中，长时间放置时出现粘度随时间延长而增加、混悬液分离成两层的问题。

CN1571666A公开了一种注射用冻干制剂及制备方法，该冻干制剂是通过将顺[((1R，2R)－1，2－环己烷二胺－N，N’)二(R¹)]铂(II)溶解在2－甲基－2－丙醇中并冻干该溶液而获得的，所述制剂具有大约3－25μm的中心粒径分布和至多40μm的D90％值。该制剂采用2－甲基－2－丙醇（即叔丁醇）作为溶剂冻干样品，通过添加一定量的水（1.0~6.0mg/mL），使得冻干的样品呈近似球形的颗粒，在混悬入碘化油中给药时，药物在碘化油中均匀混悬不易分层，可使药物有足够的时间不沉降，以进入肿瘤病灶而不在正常血管中滞留。但在冻干过程中，含水量需精确的控制，过低的含水量导致冻干产品为无定形粉末，过高含水量则使产品形成针状结晶，这两种形态，均会导致药物在碘化油中不能很好的混悬而分层。由于药物对水非常敏感，在含水量稍高时会立即析出针状结晶，冻干过程需加入极微量的水（1.0~6.0mg/mL），在与叔丁醇混匀之前，水在局部过浓会导致针状晶体的形成，进而影响药物的混悬。同时需要在装瓶后瞬时冷冻样品以保证粒径的均匀性，这些都导致了制备过程中可操作性降低、风险增加。

CN1571666A公开的方法中，叔丁醇的熔点为25.5℃，在生产过程中，为了防止米铂溶液发生凝固或者局部凝固，需要控制生产环境温度为28~35℃。另外，叔丁醇易吸湿，在配料过程中，环境湿度要求在5~40%之间。生产所需的这种温湿度环境，既不符合制药行业GMP（Good Manufacturing Practice，温度应控制在18～26℃；相对湿度控制在45％～65%）规范的要求，又不适合操作人员长时间工作，该生产方式还会导致生产成本异乎寻常的增高。

CN102266297A公开了一种米铂冻干制剂的制备方法，通过使用叔丁醇和无水乙醇的混合溶剂，可降低对生产环境的温度要求，保证米铂溶液在生产过程中于室温环境下不发生凝固或局部凝固；同时产品中心粒径分布为10~25μm，混悬在碘化油注射液中后24h内沉降系数及粘度均无明显变化。但本发明人采用该专利描述方法制备冻干样品，将所得冻干样品加入碘化油混悬，将混悬液放置3h后，仍有分为两层的趋势，不能达到所述的技术效果。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种米铂冻干制剂的制备方法。所得到的米铂冻干样品混悬于碘化油中，放置数天不分层，且形成的混悬剂的粘度不随时间延长而增加。

术语说明：

米铂，化学名：(SP-4-2)-[(1R,2R)-1,2-环己二胺-N,N′]二(十四烷酰氧基)合铂(II)，具有式I的结构。

米铂冻干制剂，指含有活性成分(SP-4-2)-[(1R,2R)-1,2-环己二胺-N,N′]二(十四烷酰氧基)合铂(II)、其药学上可接受的盐、溶剂合物、对映异构体或外消旋体，前药或类似物的冻干制剂。其中，溶剂合物是水合物或醇合物。

本发明的技术方案如下：

一种冻干制剂的制备方法，该冻干制剂含有活性成分米铂，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、对映异构体或外消旋体、前药或类似物，其特征在于，将活性成分采用混合溶剂叔丁醇和甲醇溶解，并冻干该溶液，得到无菌注射用冻干制剂。

所述的米铂的溶剂合物是米铂的水合物或醇合物。

根据本发明优选的，所述的活性成分是米铂一水合物。

根据本发明优选的，按照米铂的重量计，所述活性成分在混合溶剂的浓度为0.5~10mg/ml。

根据本发明优选的，所述混合溶剂中叔丁醇的量占溶剂总体积比为99.5%～90%，甲醇的量占溶剂总体积比为0.5%～10%。

根据本发明，进一步优选的，所述混合物溶剂中叔丁醇的量占溶剂总体积比为92～99.5%，甲醇的量占溶剂总体积比为0.5~8%。

根据本发明，更进一步优选的，所述混合物溶剂中叔丁醇的量占溶剂总体积比为92.5~98%，甲醇的量占溶剂总体积比为2~7.5%。

根据本发明，最优选的，所述混合物溶剂中叔丁醇的量占溶剂总体积比为95%，甲醇的量占溶剂总体积比为5%。

根据本发明，所述的冻干制剂的制备方法，包括步骤如下：

（1）按配比，将活性成分加入到温度为30～50℃的叔丁醇中，经高速剪切或研磨，使料液形成包含活性成分微小颗粒的混悬液，继续搅拌使活性成分完全溶解；按配比，加入甲醇，搅拌均匀；

（2）将溶液温度维持在25～50℃，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄明，灌装于西林瓶中，半加塞，装盘；

（3）冻干步骤；

（4）冻干完成后，充氮，压塞。按现有技术即可。

根据本发明优选的，所述步骤（2）中将溶液温度维持在25℃～30℃，进行过滤灌装。

根据本发明优选的，所述步骤（3）中的冻干步骤为，先降温至-30℃以下，并维持低温2~3h，使样品充分冻结实，再开启真空系统，使前箱真空度达到133Pa以下，将冻干层板升温至-2~0℃，进行升华干燥至无溶剂。优选将冻干层板升温至-1℃，进行升华干燥。

本发明米铂冻干制剂的制备方法制得的冻干成品的中心粒径分布为0.5～20μm，优选的冻干成品的中心粒径分布为0.5～5μm，混悬在碘化油注射液中放置24小时、甚至数天混悬液都不会分层，且粘度无明显变化。

本发明人令人意外地发现，并经过大量实验证实，溶解米铂的溶剂由叔丁醇和甲醇组成，冻干形成的米铂注射用制剂，在扫描电子显微镜下观察，为球形颗粒，且形态非常圆整。所形成的球形颗粒可容易地混悬于碘化油中，且形成的混悬液放置数天也不会随时间延长而分层，既方便临床给药，也能保证给药后，药物在体内不与碘化油发生分离，而导致非靶向性给药。

本发明包含米铂活性成分的冻干制剂的制备方法，溶剂中使用甲醇，其凝固点为-97℃，叔丁醇和甲醇混合溶液中甲醇所占体积比大于2%时，凝固点低于15℃。因此，可降低米铂制剂对生产环境的温度和湿度的要求，米铂溶液在生产过程中于室温环境下不发生凝固或者局部凝固，在GMP要求的温度应18～26℃、相对湿度控制在45％～65%下，不会形成针状结晶。冻干成品的中心粒径分布为0.5～20μm，混悬在碘化油注射液中后放置24小时、甚至数天混悬液也不会分层，且粘度无明显变化。本发明中，所述混合溶剂中甲醇的量占溶剂总体积比，优选为0.5%～10%。米铂在甲醇中溶解度（约0.6mg/mL）远低于叔丁醇（约6mg/mL），本发明人试验研究发现当甲醇所占比例大于10%时，米铂在混合溶剂中溶解度降低，使得冻干相同剂量的制剂，需要更大体积的溶剂。另外，当甲醇所占比例大于10%时，凝固点低于-16℃，凝固点过低会导致在溶液凝固前析出晶体，使冻干样品的混悬稳定性变差。当混合溶液中甲醇所占体积比小于0.5%时，冻干样品的形态不规则，大小不均一，混悬稳定性较差。

本发明包含米铂的冻干制剂的制备方法操作简单，安全可控，易于工业化大生产。同时，制备得到的米铂无菌冻干制剂，形成的球形颗粒圆整，大小均一，可容易的混悬于碘化油中，且形成的混悬剂的粘度不随时间延长而增加。

附图说明

图1是实施例1制备的米铂冻干制剂在扫描电子显微镜下的形态。

图2是对比例制备的米铂冻干制剂在扫描电子显微镜下的形态。

图3是活性成分米铂一水合物原料在扫描电子显微镜下的形态。

图4：实施例1、2、6冻干制剂和原料药在碘化油中混悬液，粘度随时间的变化曲线。

具体实施方式

下面通过实施例和实验例对本发明进一步的描述，然而，本发明的范围并不仅限于实施例和实验例。本领域的专业人员所能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。

除非有明确的说明，下面实施例和试验中所用的材料以及试验方法是本领域公知的。

实施例1：米铂无菌冻干制剂的制备

量取叔丁醇1662.5ml，加入至广口试剂瓶中，溶液温度通过水浴控制在30℃-50℃，再称取7.165g米铂一水合物（相当于米铂7.0g），加入试剂瓶中，高速剪切机剪切或搅拌使之溶解均匀，然后量取87.5ml甲醇（体积比5%），加入至广口试剂瓶中，搅拌均匀后将溶液温度维持在25℃～30℃，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄清透明，按照17.5ml/支的装量灌装于30ml西林瓶中，半加塞，装盘置于冻干机中冻干。冻干曲线为，先逐渐降温至-30℃以下，并维持低温2h，使样品充分冻结实，再开启真空系统，使前箱真空度达到133Pa以下，将冻干机层板逐渐升温至-1℃，进行升华干燥至无溶剂；最后逐渐升温至41℃，并保持5-7h后，充氮，压塞、出箱。

所得米铂冻干制剂在扫描电子显微镜下的形态如图1所示，中心粒径分布为0.5～5μm。

实施例2：米铂无菌冻干制剂的制备

量取叔丁醇1662.5ml，加入至广口试剂瓶中，溶液温度通过水浴控制在30℃-50℃，再称取7.0g米铂，加入试剂瓶中，高速剪切机剪切或搅拌使之溶解均匀，然后量取87.5ml甲醇（体积比5%），加入至广口试剂瓶中，搅拌均匀后将溶液温度维持在室温，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄清透明，按照17.5ml/支的装量灌装于30ml西林瓶中，半加塞。开启冻干机，使冻干机板层温度降至-40℃，装箱，冻干。冻干及后续操作条件如实施例1。

实施例3：米铂无菌冻干制剂的制备

量取叔丁醇1697.5ml，加入至广口试剂瓶中，溶液温度通过水浴控制在30℃-50℃，再称取7.165g米铂一水合物，加入试剂瓶中，高速剪切机剪切或搅拌使之溶解均匀，然后量取52.5ml甲醇（体积比3%），加入至广口试剂瓶中，搅拌均匀后将溶液温度维持在25℃～28℃，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄清透明，按照17.5ml/支的装量灌装于30ml西林瓶中，半加塞，冻干。冻干及后续操作条件如实施例1。

实施例4：米铂无菌冻干制剂的制备

量取叔丁醇1627.5ml，加入至广口试剂瓶中，溶液温度通过水浴控制在30℃-50℃，再称取7.165g米铂一水合物，加入试剂瓶中，高速剪切机剪切或搅拌使之溶解均匀，然后量取122.5ml甲醇（体积比7%），加入至广口试剂瓶中，搅拌均匀后将溶液温度维持在25℃～26℃，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄清透明，按照17.5ml/支的装量灌装于30ml西林瓶中，半加塞，冻干。冻干及后续操作条件如实施例1。

实施例5：无菌冻干制剂的制备

量取叔丁醇1575ml，加入至广口试剂瓶中，溶液温度通过水浴控制在30℃-50℃，再称取7.165g米铂一水合物，加入试剂瓶中，高速剪切机剪切或搅拌使之溶解均匀，然后量取175ml甲醇（体积比10%），加入至广口试剂瓶中，搅拌均匀后将溶液温度维持在25℃～30℃，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄清透明，按照17.5ml/支的装量灌装于30ml西林瓶中，半加塞，冻干。冻干及后续操作条件如实施例1。

实施例6：无菌冻干制剂的制备

量取叔丁醇1741.25ml，加入至广口试剂瓶中，溶液温度通过水浴控制在30℃-50℃，再称取7.165g米铂一水合物，加入试剂瓶中，高速剪切机剪切或搅拌使之溶解均匀，然后量取8.75ml甲醇（体积比0.5%），加入至广口试剂瓶中，搅拌均匀后将溶液温度维持在25℃～30℃，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄清透明，按照17.5ml/支的装量灌装于30ml西林瓶中，半加塞，冻干。冻干及后续操作条件如实施例1。

对比例：按CN102266297A的实施例1的方法制备含米铂的冻干制剂。

量取叔丁醇1750ml，加入至广口试剂瓶中，溶液温度通过水浴控制在30-35℃，称取7.0g米铂，高速剪切机剪切使之溶解均匀，然后量取30ml乙醇加入至广口试剂瓶中，搅拌均匀后将溶液温度维持在室温条件（20-25℃），在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄清透明，按照17.5ml/支的装量灌装于30ml西林瓶中，半加塞、装箱，冻干。冻干曲线为，先逐渐降温至-40℃，继续冷冻4h，同时冷凝器开启直至温度达-45℃以下，再开启真空系统，使前箱真空度达到133Pa以下，该温度维持至溶剂抽干；将冻干箱导热油温度在2小试内升温至-1℃，维持7h，进行升温干燥；最后将冻干箱导热油温度在1小时内升温至40℃，维持7小时后，关闭中隔阀，在前箱真空度无明显下降后，出箱。

实验例1：米铂冻干制剂及原料的形态观察

将适量实施例1、对比例所制备的无菌注射用制剂，粘贴于载台上的导电碳胶带，用洗耳球吹除多余粉末，真空镀金后，采用SUPRA55场发射扫描电子显微镜（德国蔡司公司）测定表面形态。结果分别如图1、图2所示。本发明所制备的米铂无菌注射用制剂为颗粒均匀的球形颗粒、大小均一，叔丁醇-乙醇溶液所制备的米铂注射用制剂，形态不规则。

将适量活性成分米铂一水合物原药，采用SUPRA55场发射扫描电子显微镜（德国蔡司公司），同法测定表面形态。结果如图3所示，米铂一水合物原料为针状结晶。

实验例2：米铂冻干制剂粒径的检测

分别将20mg实施例1-4、对比例中所制备的米铂冻干制剂，加入3ml肉豆蔻酸异丙酯中，轻摇以形成混悬液。采用本领域技术人员熟悉的Mastersizer2000型激光粒度仪(Malvern公司),以肉豆蔻酸异丙酯为测定分散介质，样品分散于Hydro SM小容量手动样品分散装置中测定粒径，设置样品折光率为2.40，分散介质折光率为1.436，样品的粒径分布见表1所示。表1表明，实施例1-4所制备的注射制剂，粒径呈正态分布，平均粒径2~5μm之间，分布均匀，较小的粒径更易于药物在碘化油中的分散。对比例制备的样品平均粒径为17.336μm。

表1.米铂冻干制剂粒径分布

实验例3：米铂冻干制剂混悬后的稳定性测定

分别将75mg实施例1-4所制备的米铂无菌冻干制剂加入3.5ml碘化油中，轻轻震荡形成混悬液。静置3h后，分别在上层、下层取样250μl，加入到10ml容量瓶中，用乙醇稀释后定容，震荡均匀后用高效液相色谱检测含量。米铂含量测定条件如下：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈（70：30）为流动相，流速为每分钟1.0ml；检测波长为210nm。称取本品适量，精密称定，加无水乙醇溶解并稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密量取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取米铂一水合物对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

沉降系数=上层料液米铂含量/下层料液米铂含量×100%

实施例1-4所制备的米铂无菌冻干制剂，混悬并放置3h后的稳定性如下表2所示，混悬稳定性良好，未发生上下层分离。

按实施例1-4所制备的米铂无菌冻干制剂混悬液，在放置72h，均未分层。按实施例5-6制备的样品，混悬并放置3h后，混悬液中米铂有沉降的趋势，上层米铂含量降低，下层含量增加，并在24h内（实施例6）或48h内（实施例5）逐渐分为两层。按对比例制备的样品，混悬液放置24h内，混悬液分为2层。

表2.米铂冻干制剂混悬稳定性

实验例4：注射用制剂混悬后的粘度考察

取米铂原料药200mg，及实施例1、实施例2、实施例6的米铂无菌注射制剂各200mg，分别混悬于10ml碘化油(法国Guerbet公司)，采用LVDV II-Pro型Brookfield粘度计，于20℃下，测定各样品在0、1、3、24小时的粘度值，样品的粘度变化情况见图4。图4表明，随着时间延长，混悬有原料药的碘化油粘度显著变化。混悬有实施例1、和实施例2制备的注射制剂的碘化油混悬液，在24小时内，粘度几乎不变。由于样品颗粒较大，粘度也发生较大变化。混悬有实施例6制备的注射制剂的碘化油混悬液，因药物沉降，料液粘度发生较明显变化。

结果表明，本发明所制备的注射制剂，混悬于碘化油注射液中，由于颗粒成球形且粒度均匀，混悬液粘度几乎不变，有利于样品临床给药操作。

本发明还发现，采用以上操作方法，本发明实施例3、4制备的注射用制剂也具有与实施例1和2制备的样品相同或基本上相同的粘度特征。

Claims (9)

1.一种冻干制剂的制备方法，含有活性成分米铂，或其药学上可接受的盐、溶剂合物、对映异构体或外消旋体、前药或类似物，其特征在于，将活性成分采用混合溶剂叔丁醇和甲醇溶解，并冻干该溶液，得到无菌注射用冻干制剂；

所述混合溶剂中叔丁醇的量占溶剂总体积比为99.5%～90%，甲醇的量占溶剂总体积比为0.5%～10%。

2.如权利要求1所述的冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述的活性成分是米铂一水合物。

3.  如权利要求1所述的冻干制剂的制备方法，其特征在于，按照米铂的重量计，所述活性成分在混合溶剂的浓度为0.5~10 mg/ml。

4.  如权利要求1所述的冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述混合物溶剂中叔丁醇的量占溶剂总体积比为92～99.5%，甲醇的量占溶剂总体积比为0.5~8%。

5.如权利要求1所述的冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述混合物溶剂中叔丁醇的量占溶剂总体积比为92.5~98%，甲醇的量占溶剂总体积比为2~7.5%。

6.如权利要求1所述的冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述混合物溶剂中叔丁醇的量占溶剂总体积比为95%，甲醇的量占溶剂总体积比为5%。

7.如权利要求3所述的冻干制剂的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：

（1）按配比，将活性成分加入到温度为30～50℃的叔丁醇中，经高速剪切或研磨，使料液形成包含活性成分微小颗粒的混悬液，继续搅拌使活性成分完全溶解；按配比，加入甲醇，搅拌均匀；

（2）将溶液温度维持在25～50℃，在无菌条件下，用0.22μm的有机微孔滤膜过滤至澄明，灌装于西林瓶中，半加塞，装盘；

（3）冻干步骤；

（4）冻干完成后，充氮，压塞。

8.如权利要求7所述的冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中将溶液温度维持在25℃～30℃，进行过滤灌装。

9. 如权利要求7所述的冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的冻干步骤为，先降温至-30℃以下，并维持低温2~3h，使样品充分冻结实，再开启真空系统，使前箱真空度达到133Pa以下，将冻干层板升温至-2~0℃，进行升华干燥至无溶剂。