CN103558327A - 利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法 - Google Patents
利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103558327A CN103558327A CN201310560050.0A CN201310560050A CN103558327A CN 103558327 A CN103558327 A CN 103558327A CN 201310560050 A CN201310560050 A CN 201310560050A CN 103558327 A CN103558327 A CN 103558327A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cordycepic acid
- reference substance
- cordyceps sinensis
- solution
- need testing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法，主要包括下述步骤①供试品溶液制备；②对照品溶液制备；③建立标准曲线；④供试品溶液的色谱分析，得到供试品溶液中虫草酸的峰面积，带入标准曲线中计算即得到供试品溶液中虫草酸的含量；本发明的检测方法通过提取冬虫夏草中化学物质，采用HPLC-ELSD利用各物质间的分配系数将各物质分开，ELSD检测器检测虫草酸的含量，检测过程中排出干扰，经加样回收试验验证，检测结果准确。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药材的检测方法，具体是利用高效液相色谱法（High Performance LiquidChromatography\HPLC）检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法。
背景技术
冬虫夏草，是麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体，是一种传统的名贵滋补中药材，有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。药理学现代研究结果中，青海冬虫夏草含有虫草酸约7%，糖类28.9%，脂肪约8.4%，蛋白质约25%。冬虫夏草中82.2%为不饱和脂肪酸，此外，尚含有维生素B12、麦角脂醇、六碳糖醇、多种生物碱等。
据文献资料报道：北冬虫夏草中虫草酸的含量为3.09克，野生的虫草为5.54克，虫草酸是一种D-甘露醇，甘露醇能提高血浆渗透压，导致组织内的水分进入血管内，从而减轻组织水肿，补充血浆。虫草酸多用于脑水肿，防治急性肾功能衰竭，有调节心、脑、血管的作用，促进人体的新陈代谢、改善人体的微循环、降血脂、降血压。因此，虫草酸含量的高低也是判断冬虫夏草质量的重要指标之一。
查阅文献资料得知：冬虫夏草中虫草酸含量的检测方法主要是采用传统的显色方法或者测定吸光度的方法，这样会由于杂质的干扰而影响检测结果的准确性。
发明内容
本发明的目的就是为了解决现有虫草酸含量检测方法由于杂质干扰导致检测结果准确度较低的问题，提供一种能够将虫草酸与冬虫夏草中其余化学物质分离开来，再对虫草酸进行准确定量的一种利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法。
本发明的检测方法，由下述步骤组成：
①供试品溶液制备冬虫夏草原药材35℃下鼓风干燥3天后，初磨至毫米级，再用南京南大球磨机粉碎至0.1μm级；称取0.1g冬虫夏草药材样品至具塞锥形瓶中，精密称定，加入水25mL，称定重量，超声提取30min，称重，补足减失重量，以0.45μm滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液备用；
②对照品溶液制备精密称取55.51mg虫草酸对照品于50mL容量瓶中，以水溶解定容，摇匀，即得浓度为1093.547mg/L的虫草酸对照品溶液原液，再分别精密量取对照品原液0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL置于10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得到浓度分别为54.67735mg/L、109.3547mg/L、218.7094mg/L、437.4188mg/L、656.1282mg/L的对照品溶液；
③建立标准曲线虫草酸的色谱分析采用氨基色谱柱，流动相为乙腈-水，体积比为83:17，流速1.0mL/min，进样体积：10μL，柱温：30℃，蒸发光散射检测器进行检测，漂移管温度为100℃，雾化气体流速为2.5L/min；在上述色谱条件下进行对照品溶液的色谱分析，得到各浓度对照品溶液的虫草酸色谱峰的峰面积，以浓度的对数为横坐标，相对应的色谱峰面积的对数为纵坐标建立标准曲线；
④供试品溶液的色谱分析按步骤③中所述的色谱条件进行供试品溶液的色谱分析，得到供试品溶液的虫草酸色谱峰的峰面积，带入标准曲线中计算即得到供试品溶液中虫草酸的含量。
本发明的检测方法通过提取冬虫夏草中化学物质，采用HPLC-ELSD利用各物质间的分配系数将各物质分开，ELSD检测器检测虫草酸的含量，检测过程中排出干扰，经加样回收试验验证，检测结果准确。
附图说明
图1是虫草酸标准曲线图；
图2是批号为20130506-1的虫草酸色谱图；
图3是批号为20130506-2的虫草酸色谱图；
图4是批号为20130506-3的虫草酸色谱图；
图5是批号为20130506-4的虫草酸色谱图；
图6是批号为20130506-5的虫草酸色谱图；
图7是批号为20130506-6的虫草酸色谱图。
具体实施方式
实施例1
①供试品溶液制备冬虫夏草原药材35℃下鼓风干燥3天后，初磨至毫米级，再用南京南大球磨机粉碎至0.1μm级；称取0.1g冬虫夏草药材样品至具塞锥形瓶中，精密称定，加入水25mL，称定重量，超声提取30min，称重，补足减失重量，以0.45μm滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液备用；
②对照品溶液制备精密称取55.51mg虫草酸对照品于50mL容量瓶中，以水溶解定容，摇匀，即得浓度为1093.547mg/L的虫草酸对照品溶液原液，再分别精密量取对照品原液0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL置于10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得到浓度分别为（Ⅰ）54.67735mg/L（Ⅱ）109.3547mg/L（Ⅲ）218.7094mg/L（Ⅳ）437.4188mg/L（Ⅴ）656.1282mg/L的五份对照品溶液；
③建立标准曲线虫草酸的色谱分析采用氨基色谱柱，流动相为乙腈-水，体积比为83:17，流速1.0mL/min，进样体积：10μL，柱温：30℃，蒸发光散射检测器进行检测，漂移管温度为100℃，雾化气体流速为2.5L/min；在上述色谱条件下分别对上述五份对照品溶液进行色谱分析，得到各浓度的对照品溶液的虫草酸色谱峰的峰面积，以浓度的对数为横坐标，相对应的色谱峰面积的对数为纵坐标建立标准曲线；标准曲线图如图1中所示。相关数据如表1中所示：
表1虫草酸标准曲线建立相关数据
| 序号 | （Ⅰ） | （Ⅱ） | （Ⅲ） | （Ⅳ） | （Ⅴ） |
| 浓度mg/L | 54.67735 | 109.3547 | 218.7094 | 437.4188 | 656.1282 |
| 峰面积 | 1319673 | 2780532 | 5840334 | 12146622 | 19625960 |
④供试品溶液的色谱分析按步骤③中所述的色谱条件进行供试品溶液的色谱分析，共平行做六个样品，样品编号分别为20130506-1、20130506-2、20130506-3、20130506-4、20130506-5、20130506-6，分别得到各样品中虫草酸的峰面积，上述六个样品的虫草酸色谱图分别参见图2、图3、图4、图5、图6，图7，带入标准曲线中计算即得到各样品中虫草酸的含量，具体结果如表2中所示。
表2六个供试品溶液中的虫草酸含量
| 序号 | 峰面积 | 浓度（mg/L) | 取样量（g） | 含量（%） |
| 20130506-1 | 6558095 | 374.846 | 0.1016 | 9.22 |
| 20130506-2 | 6154428 | 357.165 | 0.1089 | 8.20 |
| 20130506-3 | 6365444 | 366.441 | 0.1049 | 8.73 |
| 20130506-4 | 7232749 | 403.827 | 0.1065 | 9.48 |
| 20130506-5 | 5407249 | 323.681 | 0.1052 | 7.69 |
| 20130506-6 | 520.4272 | 314.398 | 0.1048 | 7.50 |
加样回收试验
①重复性试验样品测定称取同一冬虫夏草样品6份，按照实施例1中的步骤①制备重复性试验样品的供试品溶液。按照实施例1步骤③中所述的色谱条件对制备的重复性供试品溶液进行色谱分析，得到各供试品溶液中虫草酸的峰面积，带入标准曲线中计算得到各供试品溶液中虫草酸的含量。计算得出冬虫夏草药材重复性样品中虫草酸的平均含量为12.31%。
②加样回收实验样品的制备称取经过测定虫草酸含量的冬虫夏草样品六份，编号为1、2、3、4、5、6，每份0.05g至具塞锥形瓶中，精密称定。每份精确取样量如表3中所示。分别在1和2、3和4、5和6号样品中加入浓度为1093.547mg/L的虫草酸对照品溶液5mL、6mL、7mL，然后用水补足至25mL，称定重量，超声提取30min，称重，补足减失重量，以0.45μm滤膜过滤，作为加样回收实验的供试品溶液样品备用；
③按照实施例1步骤③中所述的色谱条件对加样回收实验样品进行色谱分析，得到加样回收实验样品中虫草酸的含量，然后根据虫草酸对照品的添加量及样品中虫草酸的含量，计算出添加对照品的回收率。计算得到添加虫草酸对照品的平均回收率为99.99%。说明本发明的检测方法准确度高。
加样回收实验的相关数据如表3中所示：
表3加样回收实验的相关数据
Claims (1)
1.利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法，其特征在于由下述步骤组成：
①供试品溶液制备 冬虫夏草原药材35℃下鼓风干燥3天后，初磨至毫米级，再用南京南大球磨机粉碎至0.1μm级；称取0.1g冬虫夏草药材样品至具塞锥形瓶中，精密称定，加入水25mL，称定重量，超声提取30min，称重，补足减失重量，以0.45μm滤膜过滤，取滤液作为供试品溶液备用；
②对照品溶液制备 精密称取55.51mg虫草酸对照品于50mL容量瓶中，以水溶解定容，摇匀，即得浓度为1093.547mg/L的虫草酸对照品溶液原液，再分别精密量取对照品原液0.5mL、1.0mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL置于10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得到浓度分别为54.67735mg/L、109.3547 mg/L、218.7094 mg/L、437.4188 mg/L、656.1282 mg/L的对照品溶液；
③建立标准曲线 虫草酸的色谱分析采用氨基色谱柱，流动相为乙腈-水，体积比为83:17，流速1.0mL/min，进样体积：10μL，柱温：30℃，蒸发光散射检测器进行检测，漂移管温度为100℃，雾化气体流速为2.5L/min；在上述色谱条件下进行对照品溶液的色谱分析，得到各浓度对照品溶液的虫草酸色谱峰的峰面积，以浓度的对数为横坐标，相对应的色谱峰面积的对数为纵坐标建立标准曲线；
④供试品溶液的色谱分析 按步骤③中所述的色谱条件进行供试品溶液的色谱分析，得到供试品溶液的虫草酸色谱峰的峰面积，带入标准曲线中计算即得到供试品溶液中虫草酸的含量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310560050.0A CN103558327A (zh) | 2013-11-12 | 2013-11-12 | 利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310560050.0A CN103558327A (zh) | 2013-11-12 | 2013-11-12 | 利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103558327A true CN103558327A (zh) | 2014-02-05 |
Family
ID=50012635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310560050.0A Pending CN103558327A (zh) | 2013-11-12 | 2013-11-12 | 利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103558327A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008170428A (ja) * | 2006-12-12 | 2008-07-24 | Keio Gijuku | 糖及び糖アルコールのｈｐｌｃ分析 |
| CN102445514A (zh) * | 2011-09-26 | 2012-05-09 | 江西济民可信集团有限公司 | 一种中药制剂金水宝胶囊的检测方法 |
| CN102967670A (zh) * | 2012-11-22 | 2013-03-13 | 黄宏南 | 一种测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉中虫草素、腺苷、甘露醇的方法 |
-
2013
- 2013-11-12 CN CN201310560050.0A patent/CN103558327A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008170428A (ja) * | 2006-12-12 | 2008-07-24 | Keio Gijuku | 糖及び糖アルコールのｈｐｌｃ分析 |
| CN102445514A (zh) * | 2011-09-26 | 2012-05-09 | 江西济民可信集团有限公司 | 一种中药制剂金水宝胶囊的检测方法 |
| CN102967670A (zh) * | 2012-11-22 | 2013-03-13 | 黄宏南 | 一种测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉中虫草素、腺苷、甘露醇的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 刘怀永 等: "HPLC-ELSD法测定蝙蝠蛾被毛孢菌丝体粉末胶囊中甘露醇的含量", 《海峡药学》, vol. 25, no. 10, 15 October 2013 (2013-10-15), pages 79 - 80 * |
| 张萍 等: "高效液相色谱-蒸发光散射检测器法测定松茸中甘露醇的含量", 《武警医学院学报》, vol. 20, no. 4, 15 April 2011 (2011-04-15), pages 298 - 299 * |
| 朱方剑 等: "HPLC-ELSD法测定乌灵菌粉中甘露醇的含量", 《中国药事》, vol. 27, no. 5, 20 May 2013 (2013-05-20), pages 534 - 536 * |
| 杨昕 等: "HPLC-ELSD法测定不同来源人工蛹虫草子实体中甘露醇的含量", 《药物分析杂志》, vol. 29, no. 10, 31 October 2009 (2009-10-31), pages 1668 - 1671 * |
| 高文分 等: "HPLC-ELSD法测定玉屏风颗粒中甘露醇的含量", 《云南中医中药杂志》, vol. 32, no. 12, 20 December 2011 (2011-12-20), pages 59 - 60 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105738546B (zh) | 毛郁金药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
| CN102091118B (zh) | 大花红景天药材的检测方法 | |
| CN107607649B (zh) | 一种黑骨藤的检测方法 | |
| CN104922196A (zh) | 小槐花总黄酮提取物的制备及质量检测方法 | |
| CN103869041A (zh) | 一种止咳口服药物组合物的质量控制方法 | |
| CN107703233A (zh) | 一种腺苷含量的检测方法 | |
| CN104849363A (zh) | 鱼腥草破壁饮片的指纹图谱构建及其质量检测方法 | |
| CN106324167B (zh) | 一种uplc测定黄芪提取物中黄酮类成分的方法 | |
| CN104007205A (zh) | 一种治疗消渴病的药物制剂的检测方法 | |
| CN103575821A (zh) | 一种糖敏灵制剂中14种化学成分的检测方法 | |
| CN109633003A (zh) | 一种测定远志中远志口山酮ⅲ和3,6，-二芥子酰基蔗糖含量的方法 | |
| CN102435693B (zh) | 一种控制参麦注射液制备过程中的中间体质量的方法 | |
| CN105510452B (zh) | 益肝明目口服液的多指标成分含量测定、指纹图谱构建和制备方法 | |
| CN102293827A (zh) | 一种樟树根及含有樟树根的制剂的质量检测方法 | |
| CN104483435A (zh) | 一种天麻灵芝颗粒的检测方法 | |
| CN107941955B (zh) | 一种同时快速检测椰岛鹿龟酒中9种功能活性成分的方法 | |
| CN103884789B (zh) | 一种快速测定灵芝产品中多糖肽的方法 | |
| Wu et al. | Simultaneous determination of nine flavonoids in beagle dog by HPLC with DAD and application of Ginkgo biloba extracts on the pharmacokinetic | |
| CN105675734A (zh) | 一种复方丹参浸膏中低聚糖成分的含量测定方法 | |
| CN103558161A (zh) | 冬虫夏草中虫草酸含量的近红外检测方法 | |
| CN103558327A (zh) | 利用高效液相色谱法检测冬虫夏草中虫草酸含量的方法 | |
| CN105334273B (zh) | 一种地枫皮的检测方法 | |
| CN104280476B (zh) | 藏药坐珠达西的3种成分检测及其化学代谢物轮廓分析方法 | |
| Wu et al. | Quantitative and chemical profiles analysis of the root of Morinda officinalis based on reversed-phase high performance liquid chromatography combined with chemometrics methods | |
| Revathi et al. | Development and validation of RP-HPLC method for content analysis of Didanosine in dosage form |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140205 |