CN103547271A - 载脂蛋白ciii（apociii）表达的调节 - Google Patents

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Abstract

本文提供了用于在动物中降低ApoCIII mRNA和蛋白的表达的方法、化合物和组合物。本文还提供了用于在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率并减少血浆脂质和血浆葡萄糖的方法、化合物和组合物。所述方法、化合物和组合物可用于治疗、预防、延迟或改善心血管疾病或代谢性疾患或其症状中的任何一种或多种。

Description

载脂蛋白CIII(APOCIII)表达的调节
序列表
本申请与电子格式的序列表一同提交。序列表以于2012年4月27日创建的命名为BIOL0130WOSEQ.TXT的文件来提供，其大小为8Kb。序列表的电子格式中的信息以其整体通过引用并入本文。
发明领域
本文提供了用于在动物中降低载脂蛋白CIII（ApoCIII）mRNA和蛋白的表达和升高HDL或HDL活性的方法、化合物和组合物。而且，本文提供了用于在动物中减少ApoCIII相关疾病或病症的方法、ApoCIII抑制剂化合物和ApoCIII抑制剂组合物。
背景
脂蛋白是由被两亲性蛋白、磷脂和胆固醇包被所围绕的酰基甘油和胆固醇酯的非极性核心组成的球状的、胶团样的颗粒。基于功能和物理性质已将脂蛋白分类为5种宽泛的种类：乳糜微粒、极低密度脂蛋白（VLDL）、中密度脂蛋白（IDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）。乳糜微粒将饮食脂质从肠转运到组织。VLDL、IDL和LDL均将三酰基甘油和胆固醇从肝转运到组织。HDL将内源性胆固醇从组织转运到肝。
脂蛋白颗粒经历连续的代谢过程并具有可变的性质和组成。脂蛋白密度增加，但不增加颗粒直径，因为其外层包被物的密度小于其内核的密度。已知脂蛋白的蛋白成分为载脂蛋白。在多种人类脂蛋白中至少9种载脂蛋白是大量分布的。
载脂蛋白C-III（ApoCIII）是HDL和富甘油三酯（TG）脂蛋白的成分。升高的ApoCIII与高甘油三酯血症相关联。因此，ApoCIII在高甘油三酯血症中具有作用，是冠状动脉病的风险因子（Davidsson等,J.Lipid Res.2005.46:1999-2006）。ApoCIII显示了通过凭借脂蛋白脂肪酶的抑制和通过干扰脂蛋白与细胞表面葡糖胺聚糖基质结合两者来抑制脂解作用而对富甘油三酯脂蛋白进行清除（(Shachter,Curr.Opin.Lipidol.,2001,12,297-304）。
在1984年三个研究组克隆了编码人载脂蛋白C-III（也称作APOC3、APOC-III、ApoCIII和APO C-III）的基因（Levy-Wilson等,DNA,1984,3,359-364；Protter等,DNA,1984,3,449-456；Sharpe等,Nucleic Acids Res.,1984,12,3917-3932）。编码序列被3个内含子所隔开（Protter等,DNA,1984,3,449-456）。人类ApoCIII基因位于载脂蛋白A-1基因的3’方向约2.6kb，且该两种基因是会聚转录的（Karathanasis,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1985,82,6374-6378）。还从具有异常高水平的血清载脂蛋白C-III的患者中克隆了含Thr74到Ala74的突变的人载脂蛋白C-III的变体。因为Thr74是O-糖基化的，因此Ala74突变体导致了缺少碳水化合物部分的血清ApoCIII的水平升高（(Maeda等,J.Lipid Res.,1987,28,1405-1409）。后来鉴定了可调节Apo CIII表达的其它变体或多态型。多态型中的一些提高了ApoCIII。升高的ApoCIII水平与升高的甘油三酯水平和诸如心血管疾病、代谢综合征、肥胖和糖尿病之类的疾病相关联（Chan等,Int JClin Pract,2008,62:799-809；Onat等,Atherosclerosis,2003,168:81-89；Mendivil等,Circulation,2011,124:2065-2072）。
在基因的启动子区中已鉴定了5种多态型：C（位于基因的第-641位）变成A、G（位于基因的第-630位）变成A、T（位于基因的第-625位）缺失、C（位于基因的第-482位）变成T以及T（位于基因的第-455位）变成C。这些多态型均与3’非翻译区中的SstI多态型连锁不平衡。SstI多态性位点使S1和S2等位基因区分开来，且S2等位基因已同升高的血浆甘油三酯水平相关联（Dammerman等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,1993,90,4562-4566）。ApoCIII启动子被胰岛素下调，且该多态性位点消除了胰岛素调控。因此由于失去胰岛素调控导致的ApoCIII的可能的过表达可能是与S2等位基因相关联的高甘油三酯的发生的促进因子（Li等,J.Clin.Invest.,1995,96,2601-2605）。T（基因的第-455位）变成C的多态型已与冠状动脉病的升高的风险相关联（Olivieri等,J.Lipid Res.,2002,43,1450-1457）。已与升高的ApoCIII和/或甘油三酯表达相关联的人ApoCIII基因中的其它多态型包括：C（第1100位）变成T、C（第3175位）变成G、T（第3206位）变成G、C（第3238位）变成G等。（Tilly等,J.LipidRes.,2003,44:430-436；Waterworth等,Arterioscler Thromb Vasc Biol,2000,20:2663-2669；Petersen等,N Engl J Med,2010,362:1082-1089）。
除胰岛素之外，已鉴定了ApoCIII基因表达的其它调控子。核孤独受体rev-erbα的应答元件已位于ApoCIII启动子区域中的基因的第-23至第-18位。Rev-erbα降低了ApoCIII启动子活性（Raspe等,J.Lipid Res.,2002,43,2172-2179）。基因第-86位至第-74位的ApoCIII启动子区域为两个核因子CIIIb1和CIIIB2所识别（Ogami等,J.Biol.Chem.,1991,266,9640-9646）。ApoCIII表达还被经由类视黄醇X受体起作用的类视黄醇上调，且类视黄醇X受体丰度的改变影响ApoCIII转录（Vu-Dac等,J.Clin.Invest.,1998,102,625-632）。特异性蛋白1（Sp1）和肝细胞核因子-4（HNF-4）已显示协同作用以经由HNF-4结合位点反式激活载脂蛋白C-III启动子（Kardassis等,Biochemistry,2002,41,1217-1228）。HNF-4还与SMAD3-SMAD4结合作用以反式激活ApoCIII启动子（Kardassis等,J.Biol.Chem.,2000,275,41405-41414）。
转基因和基因敲除小鼠已进一步确定了ApoCIII在脂解作用中的作用。转基因小鼠中ApoCIII的过表达导致了高甘油三酯血症和受损的VLDL-甘油三酯的清除（de Silva等,J.Biol.Chem.,1994,269,2324-2335；Ito等,Science,1990,249,790-793）。完全缺乏ApoCIII蛋白的敲除小鼠与野生型小鼠相比较表现出显著降低的血浆胆固醇和甘油三酯水平并受到保护以防患上餐后高甘油三酯血症（Maeda等,J.Biol.Chem.,1994,269,23610-23616）。
已鉴定总血浆ApoCIII水平为血清甘油三酯的主要决定因素，并且流行病学研究已证明ApoCIII和具有ApoCIII成分的ApoB脂蛋白可独立地预测冠心病（Sacks等,Circulation.2000.102:1886-1892；Lee等,Arterioscler Thromb Vasc Biol.2003.23:853-858）。研究还证明ApoCIII是富甘油三酯脂蛋白和其在包括内脏肥胖症、胰岛素抗性和代谢综合征的高甘油三酯血症状态中的残留物的清除的关键决定因素（Mauger等,J.Lipid Res.2006.47:1212-1218；Chan等,Clin.Chem.2002.278-283；Ooi等,Clin.Sci.2008.114:611-624）。
高甘油三酯血症是与心脏代谢疾病（Hegele等2009,Hum MolGenet,18:4189-4194；Hegele和Pollex2009,Mol Cell Biochem,326:35-43）以及最严重的形式的急性胰腺炎的发生（Toskes1990,Gastroenterol Clin North Am,19:783-791；Gaudet等2010,Atherosclerosis Supplements,11:55-60；Catapano等2011,Atherosclerosis,217S:S1-S44；Tremblay等2011,J Clin Lipidol,5:37-44）的风险升高相关联的常见临床特征。心脏代谢疾病的例子包括但不限于糖尿病、代谢综合征/胰岛素抗性和遗传疾患，诸如家族性乳糜微粒血症、家族性混合性高脂血症和家族性高甘油三酯血症。
高甘油三酯血症是富甘油三酯（TG）脂蛋白：VLDL和较低程度上的乳糜微粒（CM）的产生增加和/或分解代谢减少或延迟的结果。边界高TG（150-199mg/dL）常见于一般群体中且是代谢综合征/胰岛素抗性状态的常见成分。对于高TG（200-499mg/dL）也是相同的，不同的是随着血浆TG水平升高，潜在的遗传因素起着越来越重要的病因学作用。非常高的TG（≥500mg/dL）也最常与升高的CM水平相关联，且伴随急性胰腺炎的风险升高。若TG超过880mg/dL（>10mmol），则胰腺炎的风险被认为是临床上显著的，并且欧洲动脉粥样硬化学会/欧洲心脏病学学会（EAS/ESC）2011指南规定：预防急性胰腺炎的行为是强制性的（Catapano等2011,Atherosclerosis,217S:S1-S44）。根据EAS/ESC2011指南，高甘油三酯血症是近10%的所有胰腺炎病例的原因，且胰腺炎的发生会在TG水平介于440-880mg/dL之间时发生。基于来自临床研究的证明升高的TG水平是动脉粥样硬化CVD的独立风险因素的证据，来自国家胆固醇教育计划成人治疗组III（NCEP2002,Circulation,106:3143-421）和美国糖尿病协会（ADA2008,Diabetes Care,31:S12-S54.）两者的指南为降低心血管风险推荐目标TG水平小于150mg/dL。
ApoCIII基因敲除的小鼠具有正常的肠脂质吸收和肝VLDL三酰基甘油分泌，但从血浆快速清除VLDL三酰基甘油和VLDL胆固醇酯可解释所观察到的血脂过少症（Gerritsen等,J.Lipid Res.2005.46:1466-1473；Jong等,J.Lipid Res.2001.42:1578-1585）。具有ApoCIII的VLDL颗粒被认为在鉴定高甘油三酯血症中的冠心病的高风险中起着重要作用（Campos等,J.Lipid Res.2001.42:1239-1249）。全基因组关联研究发现Lancaster Amish人中天然存在的ApoCIII无效突变展示了有利的脂质分布和明显的心脏保护，而无明显的不利作用（Pollin等,Science.2008.322:1702-1705）。观察到突变载体具有较低的空腹和餐后血清甘油三酯和LDL-胆固醇，和较高水平的HDL-胆固醇。
脂蛋白的HDL种类包含最致密和最小尺寸的异源和多分散性颗粒群（Havel和Kane.In,The Metabolic&Molecular Bases of InheritedDisease.第8版.McGraw-Hill,New York,2001:2705–16）。HDL是脂质（胆固醇、甘油三酯和磷脂）和蛋白（载脂蛋白和酶）的大分子复合物。HDL的表面主要含有载脂蛋白A、C和E。这些载脂蛋白中的一些功能在于将HDL从外周组织指引到肝脏。血清HDL水平可能受潜在的遗传因素影响（Weissglas-Volkov和Pajukanta,J Lipid Res,2010,51:2032-2057）。
流行病学研究已表明HDL的水平升高能预防心血管疾病或冠心病（Gordon等,Am.J.Med.1977.62:707-714）。HDL-胆固醇的这些作用与甘油三酯和LDL-胆固醇浓度无关。在临床实践中，低的血浆HDL-胆固醇更常与会升高血浆甘油三酯的其它疾患相关联，所述疾患例如有向心性肥胖、胰岛素抗性、2型糖尿病和肾病（慢性肾衰竭或肾病蛋白尿）（Kashyap.Am.J.Cardiol.1998.82:42U-48U）。
目前，没有已知的可影响ApoCIII功能的直接治疗剂。已假定了贝特类药物的降血脂作用通过其中过氧化物酶体增生物激活受体（PPAR）介导HNF-4从载脂蛋白C-III启动子发生的位移从而导致载脂蛋白C-III的转录抑制的机制而发生（Hertz等,J.Biol.Chem.,1995,270,13470-13475）。抑制素种类的降血脂药物还通过一种未知的机制来降低甘油三酯水平，这种机制导致脂蛋白脂肪酶mRNA增加，并导致载脂蛋白C-III的血浆水平降低（Schoonjans等,FEBS Lett.,1999,452,160-164）。因此，对能够有效抑制载脂蛋白C-III功能的另外的药剂仍存在长期需求。
反义技术正作为一种降低某些基因产物的表达的有效方式而兴起，且因此会被证明在有关调节ApoCIII的大量治疗、诊断和研究应用中是特别有用的。
我们先前在US20040208856（美国专利7,598,227）、US20060264395（美国专利7,750,141）和WO2004/093783中已公开了用于通过反义化合物抑制ApoCIII的组合物和方法。在本申请中，我们公开了如下意外结果：ApoCIII的反义抑制导致了HDL水平的升高和餐后甘油三酯水平的降低。该结果将是有用的，例如，可用于治疗、预防、延迟、减少或改善任何一种或多种疾病，诸如心血管疾病（例如，冠心病或动脉粥样硬化疾病）。例如，已鉴定升高的餐后（非空腹）甘油三酯水平是心血管疾病的重要风险因素（Bansal等,JAMA,2007,298:309-16；Nordestgaard等,JAMA,2007,298:299-308）。并且，在本申请中，ApoCIII表达的抑制意外地导致了乳糜微粒清除率升高且因此在预防乳糜微粒血症中是重要的（Chait等,1992,Adv InternMed.1992,37:249-73），乳糜微粒血症是由乳糜微粒甘油三酯的不适清除导致的血脂异常状态。严重形式的乳糜微粒血症会导致胰腺炎，它是一种会危及生命的病症。通过抑制肠ApoCIII，将会降低对脂蛋白脂肪酶的抑制，且将会提高乳糜微粒甘油三酯清除率，从而预防胰腺炎。
发明概述
本文提供了通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物而升高HDL水平的方法。
某些实施方案提供了在动物中预防、治疗、改善心血管疾病、疾患或病症、延迟其发作或降低其风险的方法，其包括向该动物施用靶向ApoCIII的化合物。施用于该动物的该化合物通过升高该动物的HDL水平而预防、治疗、改善心血管疾病、疾患或病症、延迟其发作或降低其风险。
某些实施方案提供了在动物中降低心血管疾病的风险的方法，其包括向该动物施用治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补。在某些实施方案中，ApoCIII核酸如SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2中所示。在某些实施方案中，所述化合物包含由12至30个连接的核苷组成，并具有包含ISIS304801（SEQ ID NO:3）的至少8个连续的核碱基的核碱基序列的修饰的寡核苷酸。在另外的实施方案中，施用于动物的化合物通过升高HDL水平降低了心血管疾病的风险。
某些实施方案提供了在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，其包括向该动物施用治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补。在某些实施方案中，ApoCIII核酸如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示。在某些实施方案中，所述化合物包含由12至30个连接的核苷组成，并具有包含ISIS304801（SEQ ID NO:3）的至少8个连续的核碱基的核碱基序列的修饰的寡核苷酸。在另外的实施方案中，施用于动物的化合物在该动物中通过升高该动物的HDL水平来预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状。
某些实施方案提供了通过向动物施用由ISIS304801（SEQ ID NO:3）组成的化合物以升高该动物的HDL水平而升高该动物的HDL水平的方法。
某些实施方案提供了通过向动物施用由ISIS304801（SEQ ID NO:3）组成的化合物以通过升高该动物的HDL水平而在该动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状，从而在该动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法。
某些实施方案提供了通过向动物施用具有SEQ ID NO:3（ISIS304801）的序列的修饰的寡核苷酸而升高该动物的HDL水平的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由10个连接的脱氧核苷组成的间隙区段；由5个连接的核苷组成的5’翼状区段；由5个连接的核苷组成的3’翼状区段；其中所述间隙区段紧邻5’翼状区段和3’翼状区段定位并位于两者之间，且其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键，其中所述修饰的寡核苷酸升高该动物的HDL水平。
某些实施方案提供了通过向动物施用具有ISIS304801（SEQ IDNO:3）的序列的修饰的寡核苷酸而在该动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含：由10个连接的脱氧核苷组成的间隙区段；由5个连接的核苷组成的5’翼状区段；由5个连接的核苷组成的3’翼状区段；其中所述间隙区段紧邻5’翼状区段和3’翼状区段定位并位于两者之间，且其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键，其中所述修饰的寡核苷酸通过升高动物的HDL水平而预防、治疗、改善或减少患有心血管疾病的动物的至少一个症状。
某些实施方案提供了通过向动物施用包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物而升高该动物的HDL水平的方法，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补，以升高该动物的HDL水平。
某些实施方案提供了通过向动物施用包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物而在该动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补，以通过升高该动物的HDL水平而在该动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状。
某些实施方案提供了通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物而降低CETP水平的方法。在某些实施方案中，所述化合物包含由12至30个连接的核苷组成，并具有与ApoCIII核酸互补的核碱基序列的修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，核碱基序列包含ISIS304801（SEQID NO:3）的至少8个连续的核碱基。在某些实施方案中，所述化合物由ISIS304801（SEQ ID NO:3）的核碱基组成。
某些实施方案提供了通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物而提高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率或HDL的方法。在某些实施方案中，所述化合物包含由12至30个连接的核苷组成，并具有与ApoCIII核酸互补的核碱基序列的修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，核碱基序列包含ISIS304801（SEQ ID NO:3）的至少8个连续的核碱基。在某些实施方案中，所述化合物由ISIS304801（SEQ ID NO:3）的核碱基组成。
某些实施方案提供了预防、延迟或改善胰腺炎的方法，包括：（a）选择患有胰腺炎或处于胰腺炎风险中的动物，和（b）向该动物施用靶向ApoCIII的化合物，其中所述胰腺炎得到预防、延迟或改善。
某些实施方案提供了预防、延迟或改善胰腺炎的方法，包括：（a）选择患有胰腺炎或处于胰腺炎风险中的动物，和（b）向该动物施用靶向ApoCIII的化合物，从而提高乳糜微粒清除率，其中所述胰腺炎得到预防、延迟或改善。
在某些实施方案中，动物患有高甘油三酯血症或处于高甘油三酯血症风险中。在某些实施方案中，高甘油三酯血症是Fredrickson II型、IV型或V型。在某些实施方案中，动物具有导致高甘油三酯血症的遗传缺陷。在某些实施方案中，遗传缺陷是杂合的LPL缺陷或ApoCIII多态型。在某些实施方案中，动物具有≥500mg/dL的甘油三酯水平和杂合的LPL缺陷。
在某些实施方案中，动物具有100-200mg/dL、100-300mg/dL、100-400mg/dL、100-500mg/dL、200-500mg/dL、300-500mg/dL、400-500mg/dL、500-1000mg/dL、600-1000mg/dL、700-1000mg/dL、800-1000mg/dL、900-1000mg/dL、500-1500mg/dL、1000-1500mg/dL、100-2000mg/dL、150-2000mg/dL、200-2000mg/dL、300-2000mg/dL、400-2000mg/dL、500-2000mg/dL、600-2000mg/dL、700-2000mg/dL、800-2000mg/dL、900-2000mg/dL、1000-2000mg/dL、1100-2000mg/dL、1200-2000mg/dL、1300-2000mg/dL、1400-2000mg/dL或1500-2000mg/dL之间的甘油三酯水平。
在某些实施方案中，升高的乳糜微粒清除率增强了餐后甘油三酯的清除和/或降低了餐后甘油三酯。
某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物通过升高HDL水平而用于预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的用途。
某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于在动物中升高HDL水平的用途。
某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来在动物中升高HDL水平的药物的用途。
某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来改善TG与HDL的比率的药物的用途。
发明详述
应理解的是，如要求保护的，上述一般说明和以下的详细描述仅是示例性的和阐释性的，而并非对本发明的限制。在本文中，除非另外明确指明，否则单数的使用包括复数。如本文所用，除非另外指明，否则“或”的使用意味着“和/或”。此外，术语“包括（including）”以及其它形式，例如“包括（includes）”和“包括（included）”的使用，是非限制性的。同样，除非另外特别指明，否则术语诸如“要素”或“组分”涵盖含一个单位的要素和组分，和含一个以上子单位的要素和组分。
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定义
除非提供特定的定义，否则关于本文所描述的分析化学、合成有机化学和医药化学所用的命名及其程序和技术是本领域中熟知和常用的那些。标准计算可用于化学合成和化学分析。当被允许时，所有专利、申请、公布的申请和其它出版物、GENBANK登录号和通过诸如国家生物技术信息中心（NCBI）的数据库可获得的相关的序列信息和贯穿本文的公开内容中提及的其它数据，关于本文所讨论的文献的部分及其整体通过引用并入。
除非另外指明，否则以下的术语具有下面的含义：
“2’-O-甲氧乙基”（也为2’-MOE、2’-O(CH2)2-OCH3和2’-O-(2-甲氧基乙基)）指岩藻糖基环的2’位置的O-甲氧基-乙基修饰。2’-O-甲氧基乙基修饰的糖是修饰的糖。
“2’-O-甲氧乙基核苷酸”意为含2’-O-甲氧乙基修饰的糖部分的核苷酸。
“3’靶位”指与特定的反义化合物的3’-最末端核苷酸互补的靶核酸的核苷酸。
“5’靶位”指与特定的反义化合物的5’-最末端核苷酸互补的靶核酸的核苷酸。
“5-甲基胞嘧啶”意为具有与5’位置连接的甲基修饰的胞嘧啶。5-甲基胞嘧啶是修饰的核碱基。
“约”意为值的±10%之内。例如，若称，“可将标志物增加约50%”，则这意味着可将标志物增加45%-55%之间。
“活性药剂”意为药物组合物中当被施用于个体时提供治疗益处的物质。例如，在某些实施方案中，靶向ApoCIII的反义寡核苷酸是活性药剂。
“活性靶区域”或“靶区域”意为一种或多种活性反义化合物所靶向的区域。“活性反义化合物”意为降低靶核酸水平或蛋白水平的反义化合物。
“同时施用”指两种剂以任何方式的共施用，其中二者的药理作用在患者中同时显现。同时施用不需要两种剂在单一的药物组合物中、在相同的剂型中或通过相同的施用路径来施用。两种剂的作用不必同时显现。作用仅需要重叠一段时间且不必在时间上共同延长。
“施用”意为向个体提供药剂，且包括但不限于通过医学专业人员和自行施用来施用。
“药剂”意为当被施用于动物时可提供治疗益处的活性物质。“第一药剂”意为本发明的治疗化合物。例如，第一药剂可以是靶向ApoCIII的反义寡核苷酸。“第二药剂”意为本发明的第二治疗化合物（例如，靶向ApoCIII的第二反义寡核苷酸）和/或非ApoCIII治疗化合物。
“改善”指相关的疾病、疾患或病症的至少一种指征、病征或症状的减轻。指征的严重度可通过主观的或客观的测量来确定，这对于本领域中的技术人员是已知的。
“动物”指人类或非人动物，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、狗、猫、猪和非人灵长类，包括但不限于猴子和黑猩猩。
“反义活性”意为可归因于反义化合物与其靶核酸的杂交的任何可检测的或可测量的活性。在某些实施方案中，反义活性是靶核酸或由所述靶核酸编码的蛋白的量或表达的降低。
“反义化合物”意为能够经历通过氢键合与靶核酸杂交的低聚化合物。如本文所用，术语“反义化合物”涵盖本文所描述的化合物的药学上可接受的衍生物。
“反义抑制”意为与在不存在反义化合物的情况下的靶核酸水平或靶蛋白水平相比较，在存在与靶核酸互补的反义化合物的情况下靶核酸水平或靶蛋白水平的降低。
“反义寡核苷酸”意为具有允许与靶核酸的对应区域或片段杂交的核碱基序列的单链寡核苷酸。如本文所用，术语“反义寡核苷酸”涵盖本文所描述的化合物的药学上可接受的衍生物。
“ApoCIII”意为编码ApoCIII的任何核酸或蛋白序列。例如，在某些实施方案中，ApoCIII包括编码ApoCIII的DNA序列、从编码ApoCIII的DNA转录的RNA序列（包括含内含子和外显子的基因组DNA）、编码ApoCIII的mRNA序列、或编码ApoCIII的肽序列。
“ApoCIII mRNA”意为编码ApoCIII蛋白的mRNA。
“ApoCIII蛋白”意为编码ApoCIII的任何蛋白序列。
“动脉粥样硬化”意为影响大型和中型大小的动脉的动脉硬化，并以存在脂肪沉积为特征。脂肪沉积被称作“动脉粥样化”或“斑”，其主要由胆固醇和其它脂肪、钙和疤痕组织组成，并损害动脉的里层。
“双环糖”意为由两个非偕位环原子的桥连所修饰的岩藻糖基环。双环糖是修饰的糖。
“双环核酸”或“BNA”指核苷或核苷酸，其中核苷或核苷酸的呋喃糖部分包括连接呋喃糖环上的两个碳原子的桥，从而形成双环系统。
“帽子结构”或“末端帽子部分”意为已在反义化合物的任一末端被掺入的化学修饰。
“心血管疾病”或“心血管疾患”指与心脏、血管或循环相关的病症的组。心血管疾病的例子包括但不限于动脉瘤、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、脑血管疾病（中风）、冠心病、高血压、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症和高胆固醇血症。
“化学上不同的区域”指以某些方式在化学上不同于相同的反义化合物的另一区域的反义化合物的区域。例如，具有2’-O-甲氧基乙基核苷酸的区域在化学上不同于具有无2’-O-甲氧基乙基修饰的核苷酸的区域。
“嵌合反义化合物”意为具有至少两个化学上不同的区域的反义化合物。
“胆固醇”是发现于所有动物组织的细胞膜中的固醇分子。胆固醇必定通过脂蛋白在动物血浆中转运，所述脂蛋白包括极低密度脂蛋白（VLDL）、中密度脂蛋白（IDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）。“血浆胆固醇”指血浆或血清中存在的酯化的和/或非酯化的胆固醇的所有脂蛋白（VDL、IDL、LDL、HDL）的总和。
“胆固醇吸收抑制剂”意为抑制从饮食中获得的外源性胆固醇的吸收的剂。
“共施用”意为两种或多种药剂对个体的施用。两种或多种药剂可以在单一的药物组合物中，或可以在分离的药物组合物中。两种或多种药剂中每一种可通过相同的或不同的施用路径来施用。共施用涵盖并行施用或相继施用。
“互补性”意为第一核酸和第二核酸的核碱基之间配对的能力。在某些实施方案中，第一和第二核酸之间的互补新可在两个DNA链之间、在两个RNA链之间或在DNA与RNA链之间。在某些实施方案中，一个链上的核碱基中的一些与另一链上的互补的氢键合碱基匹配。在某些实施方案中，一个链上的全部核碱基与另一链上的互补的氢键合碱基匹配。在某些实施方案中，第一核酸是反义化合物且第二核酸是靶核酸。在某些这样的实施方案中，反义寡核苷酸是第一核酸且靶核酸是第二核酸。
“连续核碱基”意为彼此紧邻的核碱基。
“受限的乙基”或“cET”指具有呋喃糖基糖的双环核苷，其包含介于4’和2’碳原子之间的甲基（亚甲氧基）（4’-CH(CH3)-O-2’）桥连基。
“交叉反应性”意为靶向一个核酸序列的寡聚化合物可与不同的核酸序列杂交。例如，在一些情况下靶向人ApoCIII的反义寡核苷酸可与鼠类ApoCIII交叉反应。寡聚化合物是否与除其指定的靶标之外的核酸序列交叉反应取决于该化合物与非靶标核酸序列具有的互补性程度。寡聚化合物和非靶标核酸之间的互补性越高，寡聚化合物越可能将会与核酸交叉反应。
“治愈”意为恢复健康的方法或对疾病的处方治疗。
“冠心病（CHD）”意为向心脏供给血液和氧的小血管变狭窄，这常为动脉粥样硬化的结果。
“脱氧核苷酸”意为在核苷酸的糖部分的2’位置处具有氢的核苷酸。脱氧核苷酸可被多种取代基中的任一修饰。
“糖尿病（diabetes mellitus）”或“糖尿病（diabetes）”是以由于不足的胰岛素水平或降低的胰岛素敏感性导致的无序的代谢和异常高的血糖（高血糖）为特征的综合征。特征性症状为由于高血糖水平导致的过量的尿产生（多尿症）、试图补偿增加的排尿的过度口渴和增加的流体摄取（烦渴）、由于高血糖对眼睛光学的影响导致的视力模糊、原因不明的体重减轻和嗜睡症。
“糖尿病性血脂异常”或“伴血脂异常的2型糖尿病”意为以2型糖尿病、降低的HDL-C、升高的甘油三酯和升高的小的、致密的LDL颗粒为特征的病症。
“稀释剂”意为组合物中无药理学活性，但是是制药必需的或需要的成分。例如，注射的组合物中的稀释剂可以是液体，例如，盐溶液。
“血脂异常”指脂质和/或脂蛋白代谢的疾患，包括脂质和/或脂蛋白生产过剩或缺乏。血脂异常可表现为脂质诸如乳糜微粒、胆固醇和甘油三酯以及脂蛋白诸如低密度脂蛋白（LDL）胆固醇的升高。血脂异常的例子是乳糜微粒血症。
“剂量单位”意为提供药剂的形式，例如，丸剂、片剂或本领域中已知的其它剂量单位。在某些实施方案中，剂量单位是包含冻干的反义寡核苷酸的小瓶。在某些实施方案中，剂量单位是包含重新配成的反义寡核苷酸的小瓶。
“剂量”意为在单次施用中或在特定的时间段中提供的药剂的特定的量。在某些实施方案中，剂量可在一个、两个或更多个大丸剂、片剂或注射剂中施用。例如，在需要皮下施用的某些实施方案中，需要的剂量需要并非单次注射所容易容纳的量，因此，可使用两次或更多次注射来实现需要的量。在某些实施方案中，药剂通过延长的时间段内的输注或连续地输注来施用。剂量可表示为每小时、每天、每周或每月药剂的量。剂量还可以mg/kg或g/kg表示。
“有效量”或“治疗有效量”意为在需要药剂的个体中足以实现需要的生理结果的活性药剂的量。视待治疗的个体的健康和身体状况、待治疗的个体的分类群、组合物的配制、个体医疗条件的评估和其它相关因素而定，有效量在个体之间可有所不同。
“Fredrickson”系统用于将血脂异常的原发性（遗传）原因分类为数个亚组或类型。可接受利用本文所公开的化合物的治疗的血脂异常类型包括但不限于Fredrickson II型、IV型和V型。
“Fredrickson I型”以数种形式存在：1a型是由于LPL的缺陷或改变的apoC-II导致的脂蛋白脂肪酶缺陷；Ib型是家族性载脂蛋白CII缺陷，它是一种由于脂蛋白脂肪酶活化子的缺失导致的病症；和Ic型是由于脂蛋白脂肪酶的循环抑制剂导致的乳糜微粒血症。I型是常现于儿童的罕见的疾患。其以乳糜微粒的剧烈升高和极度升高的TG水平（常会达到远超过1000mg/dL且不是偶尔升高至10,000mg/dL或更高）为特征，伴随腹痛、复发性急性胰腺炎、暴发性皮肤黄瘤和肝脾肿大的发作。患者罕见地显现动脉粥样硬化，可能是因为其血浆脂蛋白颗粒太大而不能进入动脉内膜（Nordestgaard等,J Lipid Res,1988,29:1491-1500；Nordestgaard等,Arteriosclerosis,1988,8:421-428）。I型通常由于LPL基因的突变或基因辅因子apoCII的突变而引起，导致了受累个体不能产生功能上有活性的LPL。患者对这些突变来说是纯合的，或是复合杂合的。一般群体中患病率为约百万分之一，且由于建立者效应而在南非和东部魁北克要高得多。患者对降低TG的药物反应极小或根本没反应（Tremblay等,J Clin Lipidol,2011,5:37-44；Brisson等,Pharmacogenet Genom,2010,20:742-747）且因此使用20克/天或更低的饮食脂肪限制来控制该罕见疾患的症状。
“Fredrickson II型”是原发性高脂血症最常见的形式。其进一步分类为IIa型和IIb型，主要取决于是否除LDL胆固醇（LDL-C）外存在VLDL的升高。IIa型（家族性高胆固醇血症）可以是散发性的（由于饮食因素）、多基因性的、或由于19号染色体上的LDL受体基因的突变（群体的0.2%）或载脂蛋白B（apoB）基因的突变（0.2%）而导致的真正家族性的。家族性形式以腱黄瘤、黄斑瘤和早熟的心血管疾病为特征。该病的发生率对于杂合子为约500分之一，且对于纯合子为约1,000,000分之一。IIb型（也称作家族性混合性高脂蛋白血症）是混合性高脂血症（高胆固醇和TG水平），是由于LDL-C和VLDL升高而导致。高VLDL水平是由于包括TG、乙酰CoA的底物的过量产生和B-100合成的增加而导致。其也可能是由于LDL清除率的降低而导致。群体中的患病率为约10%。
“Fredrickson III型”（也称作异常β脂蛋白血症）是残留物清除病（remnant removal disease）或宽β病（Fern等,J Clin Pathol,2008,61:1174-118）。其由于富胆固醇的VLDL（β-VLDL）而导致。通常，患有该病症的患者由于乳糜微粒和VLDL残留物（例如，IDL）的清除受损而具有升高的血浆胆固醇和TG水平。该清除受损是由于载脂蛋白E（apoE）的缺陷而导致。残留物上所含的功能正常的apoE将能够与LDL受体结合并从循环中去除。受累个体体内的残留物累积会导致黄瘤症和早熟的冠状血管病和/或外周血管病。III型的最常见的原因是apoE E2/E2基因型的存在。已评估其患病率为约10,000分之一。
“Fredrickson IV型”（也称作家族性高甘油三酯血症）是发生于约1%的群体中的常染色体显性病症。由于VLDL的过量的肝脏产生或杂合的LPL缺陷导致TG水平的升高，但几乎总是小于1000mg/dL。血清胆固醇水平通常在正常限度内。疾患是异源的且表型受环境因素的强烈影响，尤其是碳水化合物和乙醇消耗。
“Fredrickson V型”具有高VLDL和乳糜微粒。其特征为功能丢失的LPL基因变体的携带者，伴随LPL活性为至少20%（即，与Fredrickson I型相比较部分LPL缺陷）。由于乳糜微粒和VLDL，这些患者呈现乳状血浆和严重的高甘油三酯血症。TG水平常大于1000mg/dL且总胆固醇水平常升高。LDL-C水平通常是低的。其还与急性胰腺炎、葡萄糖耐受不良和高尿酸血症的风险升高相关联。症状通常存在于成人（>35岁）且虽然患病率相对罕见，其比纯合的或复合杂合的LPL缺陷患者常见得多。
“完全互补”或“100%互补”意为第一核酸的核碱基序列的每个核碱基在第二核酸的第二核碱基序列中具有互补的核碱基。在某些实施方案中，第一核酸是反义化合物且第二核酸是靶核酸。
“间隙聚体(gapmer)”意为嵌合的反义化合物，其中具有支持RNase H裂解的多个核苷的内部区域位于具有一个或多个核苷的外部区域之间，其中构成内部区域的核苷在化学上不同于构成外部区域的核苷。内部区域可被称为“间隙”或“间隙区段”且外部区域可被称为“翼部”或“翼状区段”。
“间隙变宽”意为嵌合的反义化合物，其具有位于具有1至6个核苷的5’和3’翼状区段之间并与这些翼状区段紧邻的12个或更多个连续的2’-脱氧核苷的间隙区段。
“葡萄糖”是被细胞用作能量和炎性中间体的来源的单糖。“血浆葡萄糖”指血浆中存在的葡萄糖。
“高密度脂蛋白-C（HDL-C）”意为与高密度脂蛋白颗粒相结合的胆固醇。血清（或血浆）中HDL-C的浓度通常以mg/dL或nmol/L来定量。“HDL-C”和“血浆HDL-C”分别意为血清和血浆中的HDL-C。
“HMG-CoA还原酶抑制剂”意为通过抑制酶HMG-CoA还原酶起作用的药剂，比如阿托伐他汀、瑞舒伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀。
“杂交”意为互补核酸分子的退火。在某些实施方案中，互补核酸分子包括反义化合物和靶核酸。
“高胆固醇血症”意为按照有关成人高胆固醇的治疗的检测、评估的国家胆固醇教育计划（NCEP）的专门组报告的指南（参见，Arch.Int.Med.(1988)148,36-39），以升高的胆固醇或循环（血浆）胆固醇、LDL-胆固醇和VLDL-胆固醇为特征的病症。
“高脂血症”或“高脂血”是以升高的血清脂质或循环（血浆）脂质为特征的病症。该病症表现为异常高的脂肪浓度。循环血液中的脂质级分是胆固醇、低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白、乳糜微粒和甘油三酯。高脂血症的Fredrickson分类以如通过电泳或超速离心所测量的TG和富胆固醇的脂蛋白颗粒的型式为基础，并通常用于表征高脂血症诸如高甘油三酯血症的原发性原因（Fredrickson和Lee,Circulation,1965,31:321-327；Fredrickson等,New Eng J Med,1967,276(1):34–42）。
“高甘油三酯血症”意为以升高的甘油三酯水平为特征的病症。其病因包括原发性（即，遗传原因）和继发性（其它潜在的原因诸如糖尿病、代谢综合征/胰岛素抗性、肥胖、机体迟钝、吸烟、过量饮酒和极高碳水化合物的饮食）因素或，更常见的为二者的组合（Yuan等CMAJ,2007,176:1113-1120）。
“鉴定”或“选择患有代谢性疾病或心血管疾病的动物”意为鉴定或选择易患或已被诊断患有代谢性疾病、心血管疾病或代谢性综合征的受试者；或鉴定或选择具有代谢性疾病、心血管疾病或代谢性综合征的任何症状的受试者，包括但不限于高胆固醇血症、高血糖、高脂血症、高甘油三酯血症、高血压、升高的胰岛素抗性、降低的胰岛素敏感性、超正常的体重和/或超正常的体脂含量或其任何组合。此类鉴定可通过任何方法来实现，包括但不限于标准的临床测试或评估，诸如测量血清或循环（血浆）胆固醇、测量血清或循环（血浆）血糖、测量血清或循环（血浆）甘油三酯、测量血压、测量体脂含量、测量体重等等。
“改良的心血管结果”意为不良心血管事件或其风险发生的减少。不良心血管事件的例子包括但不限于死亡、再梗塞、中风、心源性休克、肺水肿、心跳停止和房性心律失常。
“紧邻”意为在紧邻的要素之间，例如，在区域、区段、核苷酸和/或核苷之间不存在介入要素。
“提高HDL”或“升高HDL”意为与未施用任何化合物的动物的HDL水平相比较在施用本发明的至少一种化合物之后在动物中升高HDL的水平。
“个体”或“受试者”或“动物”意为对于治疗或疗法所选定的人类或非人类动物。
“诱导”、“抑制”、“加强”、“升高”、“提高”、“降低”、“减少”等等指两种状态之间的定量的差异。例如，“有效抑制ApoCIII的活性或表达的量”意为被处理的样品中的ApoCIII的活性或表达的水平将不同于未处理的样品中的ApoCIII活性或表达的水平。这样的术语应用于例如，表达的水平和或活性的水平。
“抑制表达或活性”指RNA或蛋白的表达或活性的降低或阻遏，且不一定指表达或活性的完全消除。
“胰岛素抗性”被定义为其中正常的胰岛素的量不足以从脂肪细胞、肌肉细胞和肝细胞产生正常胰岛素反应的病症。脂肪细胞中的胰岛素抗性导致存储的甘油三酯水解，这升高了血浆中的游离脂肪酸。肌肉中的胰岛素抗性降低了葡萄糖摄取，而肝中的胰岛素抗性减少了葡萄糖存储，二者均起作用以升高血糖。由于胰岛素抗性导致的胰岛素和葡萄糖的高血浆水平常导致了代谢综合征和2型糖尿病。
“胰岛素敏感性”是个体有效地加工葡萄糖的程度的量度。具有高胰岛素敏感性的个体有效地加工葡萄糖，而具有低胰岛素敏感性的个体不能有效地加工葡萄糖。
“核苷间键”指核苷之间的化学键。
“静脉内施用”意为施用到静脉内。
“连接的核苷”意为键合在一起的相邻核苷。
“脂质降低”意为在受试者中减少一种或多种脂质。“脂质升高”意为在受试者中升高脂质（例如，HDL）。脂质降低或脂质升高可随时间利用一次或多次给药而发生。
“脂质降低疗法”或“脂质降低剂”意为提供给受试者以在受试者中减少一种或多种脂质的治疗方案。在某些实施方案中，提供脂质降低疗法以在受试者中减少CETP、ApoB、总胆固醇、LDL-C、VLDL-C、IDL-C、非HDL-C、甘油三酯、小致密LDL颗粒和Lp(a)中的一者或多者。脂质降低疗法的例子包括抑制素、贝特类（fibrates）、MTP抑制剂。
“脂蛋白”，诸如VLDL、LDL和HDL，指一组发现于血清、血浆和淋巴中的蛋白，并对脂质运输是重要的。每种脂蛋白的化学组成不同，原因为HDL具有较高的蛋白比脂质的比例，而VLDL具有较低的蛋白比脂质的比例。
“低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）”意为低密度脂蛋白颗粒中携带的胆固醇。血清（或血浆）中的LDL-C的浓度通常以mg/dL或nmol/L来定量。“血清LDL-C”和“血浆LDL-C”分别意为血清和血浆中的LDL-C。
“主要风险因子”指导致特定的疾病或病症的高风险的因子。在某些实施方案中，冠心病的主要风险因子包括但不限于吸烟、高血压、低HDL-C、冠心病家族史、年龄和本文所公开的其它因子。
“代谢性疾患”或“代谢性疾病”指以代谢功能的改变或失调为特征的病症。“代谢的”和“代谢”是本领域中熟知的术语且通常包括在活有机体中发生的生物过程的整个范围。代谢性疾患包括但不限于高血糖、前驱糖尿病、糖尿病（1型和2型）、肥胖、胰岛素抗性、代谢综合征和由于2型糖尿病引起的血脂异常。
“代谢综合征”意为以代谢来源的脂质和非脂质心血管风险因子的聚类为特征的病症。在某些实施方案中，通过以下因子中的任何3个的存在来鉴定代谢综合征：男性中腰围大于102cm或女性中腰围大于88cm；至少150mg/dL的血清甘油三酯；男性中HDL-C小于40mg/dL或女性中小于50mg/dL；至少130/85mmHg的血压；和至少110mg/dL的空腹葡萄糖。这些决定因素可在临床实践中容易地测量（JAMA,2001,285:2486-2497）。
“错配”或“非互补性核碱基”指当第一核酸的核碱基不能够与第二核酸或靶核酸的相应核碱基配对的情况。
“混合性血脂异常”意为以升高的胆固醇和升高的甘油三酯为特征的病症。
“修饰的核苷间键”指来自天然存在的核苷间键的取代或任何变化。例如，硫代磷酸酯键是修饰的核苷间键。
“修饰的核碱基”指不是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、胸苷或尿嘧啶的任何核碱基。例如，5-甲基胞嘧啶是修饰的核碱基。“未修饰的核碱基”意为嘌呤碱基腺嘌呤（A）和鸟嘌呤（G）以及嘧啶碱基胸腺嘧啶（T）、胞嘧啶（C）和尿嘧啶（U）。
“修饰的核苷”意为具有至少一个修饰的糖部分和/或修饰的核碱基的核苷。
“修饰的核苷酸”意为具有至少一个修饰的糖部分、修饰的核苷间键和/或修饰的核碱基的核苷酸。
“修饰的寡核苷酸”意为含至少一个修饰的核苷酸的寡核苷酸。
“修饰的糖”指天然糖的取代或改变。例如，2’-O-甲氧基乙基修饰的糖是修饰的糖。
“基序”意为反义化合物中化学上不同的区域的型式。
“天然存在的核苷间键”意为3’至5’磷酸二酯键合。
“天然的糖部分”意为发现于DNA(2’-H)或RNA(2’-OH)中的糖。
“核酸”指由单体核苷酸组成的分子。核酸包括核糖核酸（RNA）、脱氧核糖核酸（DNA）、单链核酸（ssDNA）、双链核酸（dsDNA）、小干扰核糖核酸（siRNA）和微RNA（miRNA）。核酸还可包含单一分子中的这些要素的组合。
“核碱基”意为能够与另一核酸的碱基配对的杂环部分。
“核碱基互补性”指能够与另一核碱基碱基配对的核碱基。例如，在DNA中，腺嘌呤（A）与胸腺嘧啶（T）互补。例如，在RNA中，腺嘌呤（A）与尿嘧啶（U）互补。在某些实施方案中，互补性碱基指能够与其靶核酸的核碱基碱基配对的反义化合物的核碱基。例如，若反义化合物的某位置的核碱基能够与靶核酸的某位置的核碱基氢键键合，则认为寡核苷酸和靶核酸在该核碱基配对处是互补的。
“核碱基序列”意为不依赖于任何糖、连接或核碱基修饰的连续核碱基的顺序。
“核苷”意为与糖连接的核碱基。
“核苷模拟物”包括用于在寡聚化合物的一个或多个位置处置换糖或糖和碱基且不一定要置换键的那些结构；例如具有吗啉代、环己烯基、环己基、四氢吡喃基、双环或三环糖模拟物，比如，非呋喃糖单元的核苷模拟物。
“核苷酸”意为具有与核苷的糖部分共价连接的磷酸基的核苷。
“核苷酸模拟物”包括用于在寡聚化合物的一个或多个位置处替换核苷和键的那些结构，诸如例如肽核酸或吗啉代类（由-N(H)-C(=O)-O-或其它非磷酸二酯键连接的吗啉代类）。
“寡聚化合物”或“寡聚体”意为连接的单体亚单位的聚合物，其能够与核酸分子的区域杂交。在某些实施方案中，寡聚化合物是寡核苷。在某些实施方案中，寡聚化合物是寡核苷酸。在某些实施方案中，寡聚化合物是反义化合物。在某些实施方案中，寡聚化合物是反义寡核苷酸。在某些实施方案中，寡聚化合物是嵌合的寡核苷酸。
“寡核苷酸”意为连接的核苷的聚合物，其各自可被修饰或未被修饰，彼此无关。
“胃肠外施用”意为通过注射或输注来施用。胃肠外施用包括皮下施用、静脉内施用、肌内施用、动脉内施用、腹膜内施用或颅内施用，例如，鞘内或脑室内施用。施用可以是连续的、长期的、短期的或间歇的。
“肽”意为通过由酰胺键连接至少两个氨基酸而形成的分子。肽指多肽和蛋白。
“药剂”意为当被施用于个体时提供治疗益处的物质。例如，在某些实施方案中，靶向ApoCIII的反义寡核苷酸为药剂。
“药物组合物”或“组合物”意为适合施用于个体的物质的混合物。例如，药物组合物可包含一种或多种活性剂和药学上的载体，比如无菌水溶液。
“药学上可接受的载体”意为不会干扰化合物结构的介质或稀释剂。这些载体中的某些使药物组合物能被配制为，例如，片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆料、悬浮液和锭剂以便由受试者口服摄入。这些载体中的一些使药物组合物能被配制为用于注射、输注或局部施用。例如，药学上可接受的载体可以是无菌水溶液。
“药学上可接受的衍生物”或“盐”涵盖本文所描述的化合物的衍生物，比如溶剂合物、水合物、酯、前药、多晶型物、异构体、同位素标记的变体、药学上可接受的盐和本领域中已知的其它衍生物。
“药学上可接受的盐”意为反义化合物的生理学或药学上可接受的盐，即，保留母体化合物的所需生物活性且不会赋予不想要的毒理学效应的盐。术语“药学上可接受的盐”或“盐”包括由药学上可接受的无毒酸或碱（包括无机的或有机的酸和碱）制备的盐。本文所描述的化合物的“药学上可接受的盐”可通过本领域中熟知的方法来制备。关于药学上可接受的盐的综述，参见Stahl和Wermuth,Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。反义寡核苷酸的钠盐对于人类的治疗施用来说是有用的并且完全可被接受。因此，在一个实施方案中，本文所描述的化合物为钠盐形式。
“硫代磷酸酯键”意为核苷之间的键，其中磷酸二酯键通过用硫原子置换非桥连氧原子之一而被修饰。硫代磷酸酯键是修饰的核苷间键。
“部分”意为核酸的确定数目的连续（即，连接的）核碱基。在某些实施方案中，部分是靶核酸的确定数目的连续核碱基。在某些实施方案中，部分是反义化合物的确定数目的连续核碱基。
“预防”指延迟或阻止疾病、疾患或病症的发作或发展达到从数分钟到无限期的时间段。预防还意为降低患上疾病、疾患或病症的风险。
“前药”意为以无活性形式制备的治疗剂，其在体内或其细胞内通过内源性酶或其它化学物品或条件的作用而转化为活性形式（即，药物）。
“升高”意为量的增加。例如，升高血浆HDL水平意为增加血浆中的HDL的量。
“TG与HDL的比率”意为相对于HDL水平的TG水平。高TG和/或低HDL的出现与心血管疾病发生、结果和死亡相关。“改善TG与HDL的比率”意为降低TG水平和/或升高HDL水平。
“降低”意为降低至较小的程度、大小、量或数目。例如，降低血浆甘油三酯水平意为降低血浆中的甘油三酯的量。
“区域”或“靶区域”被定义为具有至少一种可鉴定的结构、功能或特性的靶核酸的部分。例如，靶区域可涵盖3’UTR、5’UTR、外显子、内含子、外显子/内含子接合点、编码区、翻译起始区、翻译终止区或其它确定的核酸区域。ApoCIII的结构确定的区域可通过来自诸如NCBI的序列数据库的登录号来获得且这样的信息通过引用并入本文。在某些实施方案中，靶区域可涵盖从靶区域内的一个靶区段的5’靶位至该靶区域内的另一靶区段的3’靶位的序列。
“核糖核苷酸”意为在核苷酸的糖部分的2’位置具有羟基的核苷酸。核糖核苷酸可利用多种取代基中的任一者来修饰。
“第二药剂”或“第二治疗剂”意为可与“第一药剂”组合使用的药剂。第二治疗剂可包括但不限于siRNA或反义寡核苷酸，包括靶向ApoCIII的反义寡核苷酸。第二药剂还可包括抗ApoCIII抗体、ApoCIII肽抑制剂、胆固醇降低剂、脂质降低剂、葡萄糖降低剂和消炎剂。
“区段”被定义为核酸内区域的较小的亚部分。例如，“靶区段”意为一种或多种反义化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位”指靶区段的5’-最末端核苷酸。“3’靶位”指靶区段的3’-最末端核苷酸。
本文教导的反义寡核苷酸或靶核酸的“缩短”或“截短”的形式有一个、两个或多个核苷缺失。
“副作用”意为可归因于治疗的不是所需作用的生理反应。在某些实施方案中，副作用包括注射部位反应、肝功能测试异常、肾功能异常、肝毒性、肾毒性、中枢神经系统异常、肌病和不适。例如，血清中升高的转氨酶水平可指示肝毒性或肝功能异常。例如，升高的胆红素可指示肝毒性或肝功能异常。
“单链寡核苷酸”意为未与互补链杂交的寡核苷酸。
“可特异性杂交的”指对靶核酸具有足够程度的互补性以诱导所需效应，同时在体内检测和治疗性处理的情况下在需要特异性结合的条件下，即，在生理条件下对非靶核酸表现出极小的作用或无作用的反义化合物。
“抑制素”意为抑制HMG-CoA还原酶活性的药剂。
“皮下施用”意为仅在皮肤下面施用。
“受试者”意为对于治疗或疗法所选定的人类或非人类动物。
“心血管疾病或疾患的症状”意为由心血管疾病或疾患引起并伴随心血管疾病或疾患并充当其迹象的现象。例如，心绞痛；胸痛；气短；心悸；虚弱；眩晕；恶心；出汗；心动过速；心动过缓；心律失常；房颤；下肢肿胀；发绀；疲乏；昏厥；脸麻木；四肢麻木；跛行或肌肉痉挛；腹胀；或发烧是心血管疾病或疾患的症状。
“靶向”或“被靶向”意为将与靶核酸特异性杂交并诱导所需效应的反义化合物的设计和选择的过程。
“靶核酸”、“靶RNA”和“靶RNA转录”均指能够由反义化合物靶向的核酸。
“治疗性生活方式变化”意为旨在降低脂肪/脂肪组织质量和/或胆固醇的饮食和生活方式变化。此类变化会降低患上心脏病的风险，并可包括每日总卡路里、总脂肪、饱和脂肪、多不饱和脂肪、单不饱和脂肪、碳水化合物、蛋白、胆固醇、不溶纤维的饮食摄取的推荐，以及身体活动的推荐。
“治疗”指施用本发明的化合物以实现疾病、疾患或病症的改变或改良。
“甘油三酯”或“TG”意为由与三个脂肪酸分子结合的甘油组成的脂质或中性脂肪。
“2型糖尿病”（也称作“2型糖尿病”、“糖尿病，2型”、“非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）”、“肥胖相关糖尿病”或“成人发作糖尿病”）是代谢性疾患，主要以胰岛素抗性、相对胰岛素缺乏和高血糖为特征。
“未修饰的核苷酸”意为由天然存在的核碱基、糖部分和核苷间键组成的核苷酸。在某些实施方案中，未修饰的核苷酸是RNA核苷酸（即，β-D-核糖核苷）或DNA核苷酸（即，β-D-脱氧核糖核苷）。
“翼状区段”意为被修饰以赋予寡核苷酸特性，诸如增强的抑制活性、增加的对靶核酸的结合亲和力、或对体内核酸酶的降解的抗性的一种或多种核苷。
某些实施方案
某些实施方案提供了通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物从而降低ApoCIII水平而在该动物中降低ApoCIII水平的方法。在某些实施方案中，降低肝脏或小肠中的ApoCIII水平。
某些实施方案提供了通过向动物施用化合物而在该动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的方法，其中化合物靶向ApoCIII并提高了HDL水平并且/或者改善了TG与HDL的比率。
某些实施方案提供了在动物中预防、延迟或改善心血管疾病、疾患、病症或其症状的方法，其包括向该动物施用靶向ApoCIII的化合物，其中施用于该动物的该化合物通过在该动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而预防、治疗或改善该心血管疾病、疾患、病症或症状。
某些实施方案提供了在动物中预防、延迟或改善胰腺炎的方法，其包括向该动物施用靶向ApoCIII的化合物，其中施用于该动物的该化合物通过在该动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而在该动物中预防、延迟或改善胰腺炎。在某些实施方案中，胰腺炎是急性胰腺炎。
某些实施方案提供了在动物中预防、治疗、改善心血管疾病、疾患或病症、延迟其发作或降低其风险的方法，其包括向该动物施用靶向ApoCIII的化合物，其中该化合物通过在该动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而在该动物中预防、治疗、改善心血管疾病、疾患或病症、延迟其发作或降低其风险
某些实施方案提供了通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物而降低CETP水平的方法。
某些实施方案提供了通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物而升高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率和/或HDL的方法。某些实施方案提供了改善TG与HDL的比率的方法。
在某些实施方案中，ApoCIII核酸是以GENBANK登录号NM_000040.1（作为SEQ ID NO:1并入本文），和GENBANK登录号NT_033899.8从核苷酸20262640至20266603截短（作为SEQ IDNO:2并入本文）所列的序列中的任何。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII的化合物是修饰的寡核苷酸。在另外的实施方案中，修饰的寡核苷酸具有包含ISIS304801（SEQ IDNO:3）的至少8个连续的核碱基的核碱基序列。在某些实施方案中，修饰的核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互补。
在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由单链的修饰的寡核苷酸组成。
在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由12-30个连接的核苷组成。
在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
在某些实施方案中，所述化合物包含至少一个修饰的核苷间键。在某些实施方案中，核苷间键是硫代磷酸酯核苷间键。
在某些实施方案中，所述化合物包含含修饰的糖的至少一种核苷。在某些实施方案中，至少一种修饰的糖是双环糖。在某些实施方案中，至少一种修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
在某些实施方案中，所述化合物包含至少一种含修饰的核碱基的核苷。在某些实施方案中，修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。
在某些实施方案中，含修饰的寡核苷酸的化合物包含：（i）间隙区段，由连接的脱氧核苷组成；（ii）5’翼状区段，由连接的核苷组成；（iii）3’翼状区段，由连接的核苷组成，其中所述间隙区段紧邻5’翼部区段翼状区段和3’翼部区段翼状区段定位并位于两者之间，且其中每个翼状区段的每个核苷包含修饰的糖。
在某些实施方案中，含修饰的寡核苷酸的化合物包含：（i）间隙区段，由8-12个连接的脱氧核苷组成；（ii）5’翼状区段，由1-5个连接的核苷组成；（iii）3’翼状区段，由1-5个连接的核苷组成，其中所述间隙区段紧邻5’翼部区段翼状区段和3’翼部区段翼状区段定位并位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
在某些实施方案中，含修饰的寡核苷酸的化合物包含：（i）间隙区段，由10个连接的脱氧核苷组成；（ii）5’翼状区段，由5个连接的核苷组成；（iii）3’翼状区段，由5个连接的核苷组成，其中所述间隙区段紧邻5’翼部区段翼状区段和3’翼部区段翼状区段定位并位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有含ISIS304801（SEQ IDNO:3）的核碱基序列的至少8个连续的核碱基的核碱基序列。
某些实施方案提供了通过向动物施用治疗有效量的含由12-30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物而在该动物中降低心血管疾病的风险的方法，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补且其中所述修饰的寡核苷酸升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率。在某些实施方案中，ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQID NO:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互补。在另外的实施方案中，修饰的寡核苷酸包含ISIS304801（SEQ ID NO:3）的核碱基序列的至少8个连续的核碱基。
某些实施方案提供了在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，其包括向该动物施用治疗有效量的包含由12-30个连接的核苷组成并与ApoCIII核酸互补的修饰的寡核苷酸的化合物。在某些实施方案中，ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQID NO:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互补。在另外的实施方案中，施用于该动物的该化合物通过升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状。在另外的实施方案中，修饰的寡核苷酸包含ISIS304801（SEQ ID NO:3）的至少8个连续的核碱基。
在另外的实施方案中，心血管疾病的症状包括但不限于心绞痛；胸痛；气短；心悸；虚弱；眩晕；恶心；出汗；心动过速；心动过缓；心律失常；房颤；下肢肿胀；发绀；疲乏；昏厥；脸麻木；四肢麻木；跛行或肌肉痉挛；腹胀；或发烧。
某些实施方案提供了通过向动物施用由ISIS304801（SEQ ID NO:3）的核碱基序列组成的化合物而在该动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的方法。另外的实施方案提供了通过向动物施用由ISIS304801（SEQ ID NO:3）的核碱基序列组成的化合物从而在该动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而在该动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法。
某些实施方案提供了通过向动物施用具有ISIS304801的序列的修饰的寡核苷酸而升高该动物的HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的方法，其中所述修饰的寡核苷酸包含：（i）间隙区段，由10个连接的脱氧核苷组成；（ii）5’翼状区段，由5个连接的核苷组成；（iii）3’翼状区段，由5个连接的核苷组成，其中所述间隙区段紧邻5’翼部区段翼状区段和3’翼部区段翼状区段定位并位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
某些实施方案提供了通过向动物施用具有ISIS304801（SEQ IDNO:3）的序列的修饰的寡核苷酸而在该动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，其中所述化合物的所述修饰的寡核苷酸包含：（i）间隙区段，由10个连接的脱氧核苷组成；（ii）5’翼状区段，由5个连接的核苷组成；（iii）3’翼状区段，由5个连接的核苷组成，其中所述间隙区段紧邻5’翼部区段翼状区段和3’翼部区段翼状区段定位并位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
某些实施方案提供了通过向动物施用包含由12-30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物而升高该动物的HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的方法，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补。在某些实施方案中，ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQID NO:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互补。
某些实施方案提供了通过向动物施用包含由12-30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物而在该动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补，并升高该动物的HDL水平。在某些实施方案中，ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互补。
某些实施方案提供了通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物而降低CETP水平的方法。在某些实施方案中，所述化合物包含由12-30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补。在某些实施方案中，ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互补。在某些实施方案中，所述化合物包含由12-30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸并具有包含ISIS304801（SEQ ID NO:3）的至少8个连续的核碱基的核碱基序列。在某些实施方案中，所述化合物由ISIS304801（SEQ ID NO:3）的核碱基组成。
某些实施方案提供了通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物而升高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率和/或HDL的方法。在某些实施方案中，所述化合物包含由12-30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸，其中所述修饰的寡核苷酸与ApoCIII核酸互补。在某些实施方案中，ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸与SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互补。在某些实施方案中，所述化合物包含由12-30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸并具有包含ISIS304801（SEQ ID NO:3）的至少8个连续的核碱基的核碱基序列。在某些实施方案中，所述化合物由ISIS304801（SEQ ID NO:3）的核碱基组成。
在某些实施方案中，动物是人。
在某些实施方案中，心血管疾病是动脉瘤、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、脑血管疾病、冠心病、高血压、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症或高胆固醇血症。在某些实施方案中，血脂异常是乳糜微粒血症。
在某些实施方案中，动物处于胰腺炎风险中。在某些实施方案中，降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平预防胰腺炎。在某些实施方案中，升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率预防胰腺炎。
在某些实施方案中，降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平增强了餐后甘油三酯的清除。在某些实施方案中，升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率增强了餐后甘油三酯的清除。在某些实施方案中，降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平降低了餐后甘油三酯。在某些实施方案中，升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率降低了餐后甘油三酯。
在某些实施方案中，降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平改善了HDL与TG的比率。
在某些实施方案中，所述化合物是胃肠外施用的。在另外的实施方案中，胃肠外施用是皮下方式。
在某些实施方案中，所述化合物与第二药剂共施用。在某些实施方案中，第二药剂是葡萄糖降低剂。在某些实施方案中，第二药剂是LDL、TG或胆固醇降低剂。
在某些实施方案中，所述化合物和第二药剂是同时施用或相继施用的。
在某些实施方案中，所述化合物是盐形式，在另外的实施方案中，所述化合物还包含药学上可接受的载体或稀释剂。
某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来在动物中降低ApoCIII水平的药物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于在动物中降低ApoCIII水平的用途。在某些实施方案中，降低肝脏或小肠中的ApoCIII水平。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来通过升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的药物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于通过升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的药物的用途。在某些实施方案中，所述化合物与ApoCIII核酸序列至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少100%互补。在某些实施方案中，ApoCIII核酸是SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2。在某些实施方案中，所述化合物是修饰的寡核苷酸。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有包含ISIS304801（SEQ ID NO:3）的至少8个核碱基的核碱基序列。在某些实施方案中，修饰的寡核苷酸具有ISIS304801（SEQ ID NO:3）的核碱基序列。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来治疗患有胰腺炎或处于胰腺炎风险中的动物的药物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于治疗患有胰腺炎或处于胰腺炎风险中的动物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平的药物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来预防胰腺炎的药物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于预防胰腺炎的用途。
某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来在患有高甘油三酯血症的动物中降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平的药物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于在患有高甘油三酯血症的动物中降低肝脏和/或小肠中的ApoCIII水平的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来增强餐后甘油三酯的清除的药物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于增强餐后甘油三酯的清除的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于制备用来降低餐后甘油三酯的药物的用途。某些实施方案提供了靶向ApoCIII的化合物用于降低餐后甘油三酯的用途。
反义化合物
寡聚化合物包括但不限于寡核苷酸、寡核苷、寡核苷酸类似物、寡核苷酸模拟物、反义化合物、反义寡核苷酸和siRNA。寡聚化合物对于靶核酸可以是“反义的”，意味着能够通过氢键键合与靶核酸进行杂交。
在某些实施方案中，反义化合物具有核碱基序列，当以5’到3’方向书写时，所述核碱基序列包含其所靶向的靶核酸的靶区段的反向互补物。在某些此类实施方案中，反义寡核苷酸具有核碱基序列，当以5’到3’方向书写时，所述核碱基序列包含其所靶向的靶核酸的靶区段的反向互补物。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物长度为12至30个核苷酸。换言之，反义化合物是12至30个连接的核碱基。在另外的实施方案中，反义化合物包含由8至80、10至80、12至50、15至30、18至24、19至22或20个连接的核碱基组成的修饰的寡核苷酸。在某些此类实施方案中，反义化合物包含由长度为8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79或80个（或由上述值中任何两个界定的范围内的数目）的连接的核碱基组成的修饰的寡核苷酸。在一些实施方案中，反义化合物是反义寡核苷酸。
在某些实施方案中，反义化合物包含缩短的或截短的修饰的寡核苷酸。缩短的或截短的修饰的寡核苷酸可有一个或多个核苷从5’端缺失（5’截短），有一个或多个核苷从3’端缺失（3’截短），或有一个或多个核苷从中央部分缺失。可选地，缺失的核苷可遍及修饰的寡核苷酸而分布，例如，在有一个核苷从5’端缺失并有一个核苷从3’端缺失的反义化合物中。
当单一的另外的核苷存在于延长的寡核苷酸中时，另外的核苷可位于寡核苷酸的中央部分、5’或3’端。当两个或多个另外的核苷存在时，添加的核苷可彼此相邻，例如，在有两个核苷添加到寡核苷酸的中央部分、添加到其5’端（5’添加）、或可选地添加到其3’端（3’添加）的寡核苷酸中。或者，添加的核苷可遍及反义化合物而分布，例如，在有一个核苷添加到5’端且有一个亚单位添加到3’端的寡核苷酸中。
增加或减小反义化合物诸如反义寡核苷酸的长度、和/或引入错配碱基而不消除活性是可能的。例如，在Woolf等(Proc.Natl.Acad.Sci.USA89:7305-7309、1992)中，在卵母细胞注射模型中测试了长度为13-25个核碱基的一系列反义寡核苷酸诱导靶RNA的裂解的能力。靠近反义寡核苷酸的末端具有8或11个错配碱基的长度为25个核碱基的反义寡核苷酸能够指导靶mRNA的特异性裂解，不过程度小于不含错配的反义寡核苷酸。相似地，利用13个核碱基的反义寡核苷酸（包括具有1个或3个错配的寡核苷酸）实现了靶向特异性裂解。
Gautschi等（J.Natl.Cancer Inst.93:463-471，March2001）证明了与bcl-2mRNA具有100%互补性且具有与bcl-xL mRNA的3个错配的寡核苷酸在体外和体内降低bcl-2和bcl-xL的表达的能力。此外，该寡核苷酸在体内证明了有效的抗肿瘤活性。
Maher和Dolnick（Nuc.Acid.Res.16:3341-3358,1988）分别测试了一系列串联的14个核碱基反义寡核苷酸，和由两个或三个串联的反义寡核苷酸的序列组成的28个和42个核碱基反义寡核苷酸阻止人类DHFR在兔网织红细胞中的翻译的能力。三种14个核碱基反义寡核苷酸中的每一个单独地能够抑制翻译，不过水平比28或42个核碱基反义寡核苷酸更适度。
反义化合物基序
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物具有以型式或基序排列的经化学修饰的亚单位，以赋予反义化合物诸如增强的抑制活性、增加的对靶核酸的结合亲和力、或对体内核酸酶的降解的抗性的性质。
嵌合的反义化合物通常含有至少一个经修饰的区域以赋予增加的对核酸酶降解的抗性、增加的细胞摄取、增加的对靶核酸的结合亲和力、和/或增加的抑制活性。嵌合的反义化合物的第二区域可任选地充当细胞核酸内切酶RNase H的底物，其使RNA:DNA双链体的RNA链裂解。
具有间隙聚体基序的反义化合物被认为是嵌合的反义化合物。在间隙聚体中，具有支持RNaseH裂解的多个核苷酸的内部区域位于具有化学上不同于内部区域的核苷的多个核苷酸的外部区域之间。在具有间隙聚体基序的反义寡核苷酸的情况下，间隙区段通常充当核酸内切酶裂解的底物，而翼状区段包含修饰的核苷。在某些实施方案中，间隙聚体的区域根据构成每个不同的区域的糖部分的类型来区分。用于区分间隙聚体的区域的糖部分的类型在一些实施方案中可包括β-D-核糖核苷、β-D-脱氧核糖核苷、2’-修饰的核苷（此类2’-修饰的核苷尤其可包括2’-MOE和2’-O-CH3）和双环糖修饰的核苷（此类双环糖修饰的核苷可包括具有4’-(CH2)n-O-2’桥连基（其中n=1或n=2）的那些）。优选地，每个不同的区域包含统一的糖部分。翼部-间隙-翼部基序通常被描述为“X-Y-Z”，其中“X”代表5’翼状区域的长度，“Y”代表间隙区域的长度，且“Z”代表3’翼状区域的长度。如本文所用，被描述为“X-Y-Z”的间隙聚体具有使得间隙区段位于5’-翼状区段和3’翼状区段之间并与5’翼状区段和3’翼状区段中的每一个紧邻的构型。因此，在5’翼状区段与间隙区段之间、或间隙区段与3’翼状区段之间无介入核苷酸存在。本文所描述的反义化合物中的任一者可具有间隙聚体基序。在一些实施方案中，X和Z是相同的，在另外的实施方案中它们是不同的。在一个优选的实施方案中，Y在8与15个核苷酸之间。X、Y或Z可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个或更多个核苷酸中的任一者。因此，间隙聚体包括但不限于例如，5-10-5、4-8-4、4-12-3、4-12-4、3-14-3、2-13-5、2-16-2、1-18-1、3-10-3、2-10-2、1-10-1、2-8-2、6-8-6、5-8-5、1-8-1、2-6-2、2-13-2、1-8-2、2-8-3、3-10-2、1-18-2或2-18-2。
在某些实施方案中，反义化合物作为“翼状聚体”基序，具有翼部-间隙或间隙-翼部构型，即，如以上关于间隙聚体构型所描述的X-Y或Y-Z构型。因此，翼状聚体构型包括但不限于例如，5-10、8-4、4-12、12-4、3-14、16-2、18-1、10-3、2-10、1-10、8-2、2-13或5-13。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物具有5-10-5间隙聚体基序。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物具有间隙-增宽的基序。
靶核酸、靶区域和核苷酸序列
编码ApoCIII的核苷酸序列包括但不限于以下项：GENBANK登录号NM_000040.1（作为SEQ ID NO:1并入本文）和GENBANK登录号：NT_033899.8（从核苷酸20262640至20266603截短）（作为SEQ ID NO:2并入本文）。
应理解的是本文所含的实施例中的每个SEQ ID NO中所列出的序列与对糖部分、核苷间键或核碱基的任何修饰无关。因此，由SEQID NO定义的反义化合物可独立地包含，对糖部分、核苷间键或核碱基的一种或多种修饰。由Isis编号（Isis No）所描述的反义化合物指示核碱基序列和基序的组合。
在某些实施方案中，靶区域是靶核酸的结构确定的区域。例如，靶区域可涵盖3’UTR、5’UTR、外显子、内含子、外显子/内含子接合点、编码区域、翻译起始区域、翻译终止区域或其它确定的核酸区域。ApoCIII的结构确定的区域可通过来自诸如NCBI的序列数据库的登录号来获得，且该信息通过引用并入本文。在某些实施方案中，靶区域可涵盖从靶区域内的一个靶区段的5’靶位至该靶区域内的另一靶区段的3’靶位的序列。
在某些实施方案中，“靶区段”是核酸内靶区域的较小的亚部分。例如，靶区段可以是一种或多种反义化合物所靶向的靶核酸的核苷酸的序列。“5’靶位”指靶区段的5’最末端核苷酸。“3’靶位”指靶区段的3’最末端核苷酸。
靶区域可含有一个或多个靶区段。靶区域内的多个靶区段可以是重叠的。或者，它们可以是非重叠的。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段被不超过约300个核苷酸所隔开。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段被大量核苷酸所隔开，所述大量核苷酸为，为约，不超过，不超过约靶核酸上的250、200、150、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10个或由前述值中任何两个所界定的范围内的数目的核苷酸。在某些实施方案中，靶区域内的靶区段被不超过或不超过约靶核酸上的5个核苷酸所隔开。在某些实施方案中，靶区段是连续的。考虑的是由具有为本文所列的5’靶位或3’靶位中任一者的起始核酸的范围所界定的靶区域。
靶向包括确定与反义化合物杂交以使所需作用发生的至少一个靶区段。在某些实施方案中，所需作用是mRNA靶核酸水平降低。在某些实施方案中，所需作用是靶核酸编码的蛋白的水平的降低或与靶核酸关联的表型变化。
适宜的靶区段可发现于5’UTR、编码区域、3’UTR、内含子、外显子或外显子/内含子接合点内。含有起始密码子或终止密码子的靶区段也是适宜的靶区段。适宜的靶区段可特异性地排除某些结构上确定的区域诸如起始密码子或终止密码子。
适宜的靶区段的确定可包括靶核酸的序列与整个基因组中的其它序列的比较。例如，可使用BLAST算法来鉴定不同的核酸之间的相似性的区域。该比较可避免可能以非特异性方式与除所选择的靶核酸外的序列杂交的反义化合物序列（即，非靶序列或脱靶序列）的选择。
活性靶区域内的反义化合物的活性（例如，如由靶核酸水平的降低百分比所定义）可能存在变化。在某些实施方案中，ApoCIII mRNA水平的降低指示ApoCIII表达的抑制。ApoCIII蛋白水平的降低可指示靶mRNA表达的抑制。此外，表型变化可指示ApoCIII表达的抑制。例如，HDL水平的升高、LDL水平的降低或甘油三酯水平的降低是可关于ApoCIII表达的抑制来测定的表型变化之一。其它表型迹象，例如，与心血管疾病相关联的症状，也可被评估；例如，心绞痛；胸痛；气短；心悸；虚弱；眩晕；恶心；出汗；心动过速；心动过缓；心律失常；房颤；下肢肿胀；发绀；疲乏；昏厥；脸麻木；四肢麻木；跛行或肌肉痉挛；腹胀；或发烧。
杂交
在一些实施方案中，杂交发生在本文所公开的反义化合物和ApoCIII核酸之间。最常见的杂交机制包括核酸分子的互补核碱基之间的氢键结合（例如，Watson-Crick、Hoogsteen或反向的Hoogsteen氢键合）。
杂交可在不同的条件下发生。严格的条件是序列依赖性的且由待被杂交的核酸分子的性质和组成决定。
确定序列是否可与靶核酸特异性杂交的方法是本领域中熟知的（Sambrooke和Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第三版,2001）。在某些实施方案中，本文提供的反义化合物可与ApoCIII核酸特异性杂交。
互补性
当反义化合物的足够数目的核碱基可与靶核酸相应的核碱基氢键结合时，反义化合物和靶核酸彼此互补，以使所需效应（例如，靶核酸诸如ApoCIII核酸的反义抑制）发生。
反义化合物可跨越ApoCIII核酸的一个或多个区段杂交，以使插入的或相邻的区段不参与杂交事件（例如，环结构、错配或发夹结构）。
在某些实施方案中，本文所提供的反义化合物，或其特定的部分与ApoCIII核酸、靶区域、靶区段或其特定的部分为，或至少为70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%互补。反义化合物与靶核酸的互补性百分比可利用常规方法来测定。
例如，反义化合物的20个核碱基中的18个与靶区域互补，且因此将特异性杂交的反义化合物将代表90%互补性。在该例中，其余的非互补核碱基可与互补的核碱基的聚集或散布在一起，且不必彼此连续或与互补核碱基连续。因此，长度为18个核碱基、具有4个非互补核碱基，所述非互补核碱基侧接与靶核酸完全互补的两个区域的反义化合物将与靶核酸具有77.8%的整体互补性且因此将属于本发明的范围。反义化合物与靶核酸的区域的互补性百分比可利用本领域中已知的BLAST程序（基本局部比对搜索工具）和PowerBLAST程序来常规地测定（Altschul等，J.Mol.Biol.,1990,215,403410；Zhang和Madden,Genome Res.,1997,7,649656）。同源性、序列同一性或互补性百分比可通过例如使用Smith和Waterman的算法（Adv.Appl.Math.,1981,2,482489）的Gap程序（Wisconsin Sequence AnalysisPackage,针对Unix的版本8,Genetics Computer Group,UniversityResearch Park,Madison Wis.）利用默认设置来测定。
在某些实施方案中，本文所提供的反义化合物或其特定的部分与靶核酸或其特定的部分完全互补（即，100%互补）。例如，反义化合物可与ApoCIII核酸或其靶区域或靶区段或靶序列完全互补。如本文所用，“完全互补”意为反义化合物的每个核碱基能够与靶核酸的相应的核碱基精确的碱基配对。例如，20个核碱基的反义化合物与400个核碱基长的靶序列完全互补，只要存在与反义化合物完全互补的靶核酸的对应的20个核碱基部分即可。完全互补还可关于第一和/或第二核酸的特定的部分来使用。例如，30个核碱基反义化合物的20个核碱基部分可以与400个核碱基长度的靶序列“完全互补”。若靶序列具有对应的20个核碱基部分，其中每个核碱基与反义化合物的20个核碱基部分互补，则30个核碱基寡核苷酸的20个核碱基部分与靶序列完全互补。同时，视反义化合物的其余10个核碱基是否也与靶序列互补而定，整个30个核碱基反义化合物可能或可能不与靶序列完全互补。
非互补性核碱基的位置可在反义化合物的5’端或3’端。或者，非互补性核碱基可在反义化合物的内部位置。当存在两个或多个非互补性核碱基时，其可以是连续的（即，连接的）或非连续的。在一个实施方案中，非互补性核碱基位于间隙聚体反义寡核苷酸的翼状区段中。
在某些实施方案中，长度为或长度最多为12、13、14、15、16、17、18、19或20个核碱基的反义化合物相对于靶核酸诸如ApoCIII核酸或其特定的部分包含不超过4个、不超过3个、不超过2个或不超过1个非互补性核碱基。
在某些实施方案中，长度为或长度最多为12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核碱基的反义化合物相对于靶核酸诸如ApoCIII核酸或其特定的部分包含不超过6个、不超过5个、不超过4个、不超过3个、不超过2个或不超过1个非互补性核碱基。
本文提供的反义化合物还包括与靶核酸的一部分互补的那些。如本文所用，“部分”指靶核酸的区域或区段中确定数目的连续的（即，连接的）核碱基。“部分”还可指反义化合物的确定数目的连续核碱基。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段的至少8个核碱基部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段的至少10个核碱基部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段的至少12个核碱基部分互补。在某些实施方案中，反义化合物与靶区段的至少15个核碱基部分互补。还考虑的是与靶区段的至少9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个，或由这些值中的任何两个界定的范围内的数目的核碱基部分互补的反义化合物。
同一性
本文提供的反义化合物还可与特定的核苷酸序列、SEQ ID NO或由特定的Isis编号表示的化合物的序列或其部分具有确定的同一性百分比。如本文所用，若具有相同的核碱基配对能力，则反义化合物与本文所公开的序列相同。例如，含有尿嘧啶以代替公开的DNA序列中的胸苷的RNA将会被认为与该DNA序列是相同的，因为尿嘧啶和胸苷两者与腺嘌呤配对。还考虑了本文所描述的反义化合物的缩短的或延长的形式以及相对于本文所提供的反义化合物具有非相同的碱基的化合物。非相同的碱基可以是彼此相邻的或散布在整个反义化合物中。根据相对与之作比较的序列具有相同的碱基配对的碱基的数目计算反义化合物的同一性百分比。
在某些实施方案中，这些反义化合物或其部分与本文公开的反义化合物或SEQ ID NO或其一部分中的一个或多个具有至少70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%同一性。
修饰
核苷是碱基-糖组合。核苷的核碱基（也称作碱基）部分通常是杂环碱基部分。核苷酸是还包括与核苷的糖部分共价连接的磷酸基团的核苷。对于包括戊呋喃糖基糖的那些核苷，磷酸基团可与糖的2’、3’或5’羟基部分连接。通过相邻的核苷相互的共价键合形成线性聚合的寡核苷酸而形成寡核苷酸。在寡核苷酸结构内，常涉及磷酸基团形成寡核苷酸的核苷间键。
对反义化合物的修饰涵盖对核苷间键、糖部分或核碱基的取代或改变。由于需要的性质诸如，例如，增强的细胞摄入、对核酸靶标的增强的亲和力、在核酸酶的存在下增强的稳定性或升高的抑制活性，修饰的反义化合物常优于天然的形式。
还可采用化学修饰的核苷来升高缩短的或截短的反义寡核苷酸对于其靶核酸的结合亲和力。因此，利用具有此类化学修饰的核苷的较短的反义化合物常可获得相当的结果。
修饰的核苷间键
RNA和DNA的天然存在的核苷间键是3’至5’磷酸二酯键。由于需要的性质诸如，例如，增强的细胞摄入、对靶核酸的增强的亲和力和在核酸酶的存在下增强的稳定性，具有一个或多个修饰的，即，非天然存在的核苷间键的反义化合物常优于具有天然存在的核苷间键的反义化合物而被选择。
具有修饰的核苷间键的寡核苷酸包括保留磷原子的核苷间键以及不具有磷原子的核苷间键。含核苷间键的代表性磷包括但不限于磷酸二酯、磷酸三酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯和硫代磷酸酯。制备含磷键和含非磷键的方法是熟知的。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物包含一个或多个修饰的核苷间键。在某些实施方案中，修饰的核苷间键是硫代磷酸酯键。在某些实施方案中，反义化合物的每个核苷间键是硫代磷酸酯核苷间键。
修饰的糖部分
本发明的反义化合物可任选地含有其中糖基团已被修饰的一个或多个核苷。此类糖修饰的核苷可赋予反义化合物增强的核酸酶稳定性、升高的结合亲和力或一些其它有利的生物性质。在某些实施方案中，核苷包含经化学修饰的呋喃核糖环部分。经化学修饰的呋喃核糖环的例子包括但不限于取代基（包括5’和2’取代基团）的添加；非偕位环原子的桥连以形成双环核酸（BNA）；S、N(R)或C(R1)(R2)（R、R1和R2各自独立地为H、C1-C12烷基或保护基）对核糖基环氧原子的置换；和其组合。经化学修饰的糖的例子包括，2’-F-5’-甲基取代的核苷（关于其它公开的5’、2’-双取代的核苷，参见，于8/21/08公布的PCT国际申请WO2008/101157），或S对核糖基环氧原子的置换并在2’-位置具有另外的取代（参见，于2005年6月16日公开的美国专利申请US2005-0130923），或可选地，BNA的5’-取代（参见，于11/22/07公布的PCT国际申请WO2007/134181，其中LNA被例如5’-甲基或5’-乙烯基所取代）。
具有修饰的糖部分的核苷的例子包括但不限于包含5’-乙烯基、5’-甲基(R或S)、4’-S、2’-F、2’-OCH3、2’-OCH2CH3、2’-OCH2CH2F和2’-O(CH2)2OCH3取代基的核苷。2’位置的取代基还可选自烯丙基、氨基、叠氮基、硫代、O-烯丙基、O-C1-C10烷基、OCF3、OCH2F、O(CH2)2SCH3、O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)、O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)和O-CH2-C(=O)-N(Rl)-(CH2)2-N(Rm)(Rn)，其中每个Rl、Rm和Rn独立地为H或取代的或未取代的C1-C10烷基。
如本文所用，“双环核苷”指包含双环糖部分的修饰的核苷。双环核苷的例子包括但不限于在4’和2’核糖基环原子之间包含桥连基的核苷。在某些实施方案中，本文提供的反义化合物包括一个或多个包含4’至2’桥的双环核苷。此类4’至2’桥接的双环核苷的例子包括但不限于以下式中之一：4’-(CH2)-O-2’（LNA）；4’-(CH2)-S-2’；4’-(CH2)2-O-2’（ENA）；4’-CH(CH3)-O-2’和4’-CH(CH2OCH3)-O-2’和其类似物（参见，于2008年7月15日公布的美国专利7,399,845）；4’-C(CH3)(CH3)-O-2’和其类似物（参见于2009年1月8日公开的国际申请WO/2009/006478）；4’-CH2-N(OCH3)-2’和其类似物（参见2008年12月11日公开的国际申请WO/2008/150729）；4’-CH2-O-N(CH3)-2’（参见于2004年9月2日公开的美国专利申请US2004-0171570）；4’-CH2-N(R)-O-2’，其中R是H、C1-C12烷基或保护基（参见，于2008年9月23日公布的美国专利7,427,672）；4’-CH2-C(H)(CH3)-2’（参见，Chattopadhyaya等,J.Org.Chem.,2009,74,118-134）；和4’-CH2-C(=CH2)-2’和其类似物（参见，于2008年12月8日公开的国际申请WO2008/154401）。
与双环核苷相关的另外的报道还可见于公开的文献中（参见，例如：Singh等,Chem.Commun.,1998,4,455-456；Koshkin等,Tetrahedron,1998,54,3607-3630；Wahlestedt等,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,2000,97,5633-5638；Kumar等,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222；Singh等,J.Org.Chem.,1998,63,10035-10039；Srivastava等,J.Am.Chem.Soc.,2007,129(26)8362-8379；Elayadi等,Curr.Opinion Invest.Drugs,2001,2,558-561；Braasch等,Chem.Biol.,2001,8,1-7；和Orum等,Curr.Opinion Mol.Ther.,2001,3,239-243；美国专利第6,268,490号；第6,525,191号；第6,670,461号；第6,770,748号；第6,794,499号；第7,034,133号；第7,053,207号；第7,399,845号；第7,547,684号和第7,696,345号；美国专利公开第US2008-0039618号；第US2009-0012281号；美国专利序列号60/989,574；61/026,995；61/026,998；61/056,564；61/086,231；61/097,787和61/099,844；公开的PCT国际申请WO1994/014226；WO2004/106356；WO2005/021570；WO2007/134181；WO2008/150729；WO2008/154401和WO2009/006478。前述双环核苷的每一个可被制备为具有一个或多个立体化学糖构型，包括例如，α-L-呋喃核糖和β-D-呋喃核糖（参见于1999年3月25日作为WO99/14226公开的PCT国际申请PCT/DK98/00393）。
在某些实施方案中，BNA核苷的双环糖部分包括但不限于在戊呋喃糖基糖部分的4’和2’位置之间具有至少一个桥连基的化合物，其中所述桥连基独立地包含1个或从2个至4个连接的基团，所述连接的基团独立地选自-[C(Ra)(Rb)]n-、-C(Ra)=C(Rb)-、-C(Ra)=N-、-C(=O)-、-C(=NRa)-、-C(=S)-、-O-、-Si(Ra)2-、-S(=O)x-和-N(Ra)-；
其中：
x是0、1或2；
n是1、2、3或4；
每个Ra和Rb独立地为H、保护基、羟基、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、杂环基、取代的杂环基、杂芳基、取代的杂芳基、C5-C7脂环基、取代的C5-C7脂环基、卤素、OJ1、NJ1J2、SJ1、N3、COOJ1、酰基(C(=O)-H)、取代的酰基、CN、磺酰基(S(=O)2-J1)或硫氧基(S(=O)-J1)；且
每个J1和J2独立地为H、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C5-C20芳基、取代的C5-C20芳基、酰基(C(=O)-H)、取代的酰基、杂环基、取代的杂环基、C1-C12氨基烷基、取代的C1-C12氨基烷基或保护基。
在某些实施方案中，双环糖部分的桥连基是-[C(Ra)(Rb)]n-、-[C(Ra)(Rb)]n-O-、-C(RaRb)-N(R)-O-或-C(RaRb)-O-N(R)-。在某些实施方案中，桥连基是4’-CH2-2’、4’-(CH2)2-2’、4’-(CH2)3-2’、4’-CH2-O-2’、4’-(CH2)2-O-2’、4’-CH2-O-N(R)-2’和4’-CH2-N(R)-O-2’-，其中每个R独立地为H、保护基或C1-C12烷基。
在某些实施方案中，双环核苷进一步由同分异构构型定义。例如，含4’-2’亚甲基-氧基桥连基的核苷可以为α-L构型或β-D构型。先前，已将α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA掺入到显示反义活性的反义寡核苷酸中（Frieden等.,Nucleic Acids Research,2003,21,6365-6372)。
在某些实施方案中，双环核苷包括但不限于如以下所描述的(A)α-L-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(B)β-D-亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA、(C)亚乙基氧基(4’-(CH2)2-O-2’)BNA、(D)氨基氧基(4’-CH2-O-N(R)-2’)BNA、(E)氧氨基(4’-CH2-N(R)-O-2’)BNA、(F)甲基(亚甲基氧基)(4’-CH(CH3)-O-2’)BNA、(G)亚甲基-硫代(4’-CH2-S-2’)BNA、(H)亚甲基-氨基(4’-CH2-N(R)-2’)BNA、(I)甲基碳环(4’-CH2-CH(CH3)-2’)BNA和(J)丙烯基碳环(4’-(CH2)3-2’)BNA。
Figure BDA0000417096850000511
其中Bx是碱基部分且R独立地为H、保护基或C1-C12烷基。
在某些实施方案中，提供具有式I的双环核苷：
Figure BDA0000417096850000521
其中：
Bx是杂环碱基部分；
-Qa-Qb-Qc-是-CH2-N(Rc)-CH2-、-C(=O)-N(Rc)-CH2-、-CH2-O-N(Rc)-、-CH2-N(Rc)-O-或-N(Rc)-O-CH2；
Rc是C1-C12烷基或氨基保护基；且
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、缀合基团、反应性磷基团、磷部分或与支持介质的共价连接。
在某些实施方案中，提供具有式II的双环核苷：
Figure BDA0000417096850000522
其中：
Bx是杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、缀合基团、反应性磷基团、磷部分或与支持介质的共价连接；
Za是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基、酰基、取代的酰基、取代的酰胺、硫醇或取代的硫基。
在一个实施方案中，取代的基团中的每一个独立地经取代基单取代或多取代，所述取代基独立地选自卤素、氧代、羟基、OJc、NJcJd、SJc、N3、OC(=X)Jc和NJeC(=X)NJcJd，其中每个Jc、Jd和Je独立地为H、C1-C6烷基或取代的C1-C6烷基且X是O或NJc。
在某些实施方案中，提供具有式III的双环核苷：
Figure BDA0000417096850000531
其中：
Bx是杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、缀合基团、反应性磷基团、磷部分或与支持介质的共价连接；
Zb是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、取代的C1-C6烷基、取代的C2-C6烯基、取代的C2-C6炔基或取代的酰基(C(=O)-)。
在某些实施方案中，提供具有式IV的双环核苷：
Figure BDA0000417096850000541
其中：
Bx是杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、缀合基团、反应性磷基团、磷部分或与支持介质的共价连接；
Rd是C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；
每个qa、qb、qc和qd独立地为H、卤素、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、取代的C1-C6烷氧基、酰基、取代的酰基、C1-C6氨基烷基或取代的C1-C6氨基烷基。
在某些实施方案中，提供具有式V的双环核苷：
Figure BDA0000417096850000542
其中：
Bx是杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、缀合基团、反应性磷基团、磷部分或与支持介质的共价连接；
qa、qb、qe和qf各自独立地为H、卤素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(=O)OJj、C(=O)NJjJk、C(=O)Jj、O-C(=O)-NJjJk、N(H)C(=NH)NJjJk、N(H)C(=O)NJjJk或N(H)C(=S)NJjJk；
或qe和qf共同为=C(qg)(qh)；
qg和qh各自独立地为H、卤素、C1-C12烷基或取代的C1-C12烷基。
已描述了亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA单体腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、5-甲基-胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶的合成和制备以及其寡聚化和核酸识别性质（Koshkin等.,Tetrahedron,1998,54,3607-3630）。WO98/39352和WO99/14226中也描述了BNA和其制备。
还制备了亚甲基氧基(4’-CH2-O-2’)BNA和2’-硫代-BNA的类似物（Kumar等.,Bioorg.Med.Chem.Lett.,1998,8,2219-2222）。还描述了包含作为核酸聚合酶的底物的寡聚脱氧核苷酸双链体的封闭的核苷类似物的制备（Wengel等,WO99/14226）。此外，本领域中已描述了新颖的构象受限的高亲和力寡核苷酸类似物2’-氨基-BNA的合成（Singh等,J.Org.Chem.,1998,63,10035-10039）。此外，已制备了2’-氨基-和2’-甲基氨基-BNA且先前已报道了其具有互补RNA和DNA链的双链体的热稳定性。
在某些实施方案中，提供具有式VI的双环核苷：
Figure BDA0000417096850000561
其中：
Bx是杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为H、羟基保护基、缀合基团、反应性磷基团、磷部分或与支持介质的共价连接；
每个qi、qj、qk和ql独立地为H、卤素、C1-C12烷基、取代的C1-C12烷基、C2-C12烯基、取代的C2-C12烯基、C2-C12炔基、取代的C2-C12炔基、C1-C12烷氧基、取代的C1-C12烷氧基、OJj、SJj、SOJj、SO2Jj、NJjJk、N3、CN、C(=O)OJj、C(=O)NJjJk、C(=O)Jj、O-C(=O)NJjJk、N(H)C(=NH)NJjJk、N(H)C(=O)NJjJk或N(H)C(=S)NJjJk；且
qi和qj或ql和qk共同为=C(qg)(qh)，其中qg和qh各自独立地为H、卤素、C1-C12烷基或取代的C1-C12烷基。
已描述了具有4’-(CH2)3-2’桥连基和烯基类似物桥连基4’-CH=CH-CH2-2’的一种碳环双环核苷（Freier等,Nucleic AcidsResearch,1997,25(22),4429-4443和Albaek等,J.Org.Chem.,2006,71,7731-7740）。还描述了碳环双环核苷的合成和制备及其寡聚化和生物化学研究（Srivastava等,J.Am.Chem.Soc.2007,129(26),8362-8379）。
如本文所用，“4’-2’双环核苷”或“4’到2’双环核苷”指包含含连接呋喃糖环的两个碳原子的桥连基的呋喃糖环的双环核苷连接糖环的2’碳原子和4’碳原子。
如本文所用，“单环核苷”指包含非双环糖部分的修饰的糖部分的核苷。在某些实施方案中，核苷的糖部分或糖部分类似物可在任何位置被修饰或被取代。
如本文所用，“2’-修饰的糖”意为在2’位置处修饰的呋喃糖基糖。在某些实施方案中，此类修饰包含选自以下的取代基：卤化物，包括但不限于取代的和未取代的烷氧基、取代的和未取代的硫代烷基、取代的和未取代的氨基烷基、取代的和未取代的烷基、取代的和未取代的烯丙基和取代的和未取代的炔基。在某些实施方案中，2’修饰选自取代基，包括但不限于：O[(CH2)nO]mCH3、O(CH2)nNH2、O(CH2)nCH3、O(CH2)nF、O(CH2)nONH2、OCH2C(=O)N(H)CH3和O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2，其中n和m为从1到约10。其它的2’-取代基还可选自：C1-C12烷基；取代的烷基；烯基；炔基；烷芳基；芳烷基；O-烷芳基或O-芳烷基；SH；SCH3；OCN；Cl；Br；CN；F；CF3；OCF3；SOCH3；SO2CH3；ONO2；NO2；N3；NH2；杂环烷基；杂环烷芳基；氨基烷基氨基；聚烷基氨基；取代的甲硅烷基；RNA裂解基团；报告基团；插入子；用于改善药物代谢性质的基团；或用于改善反义化合物的药物代谢性质的基团，和具有相似的性质的其它取代基。在某些实施方案中，修饰的核苷酸包含2’-MOE侧链（Baker等,J.Biol.Chem.,1997,272,11944-12000）。已描述了此类2’-MOE取代具有与未修饰的核苷和其它修饰的核苷诸如2’-O-甲基、O-丙基和O-氨基丙基相比较提高的结合亲和力。还显示了具有2’-MOE取代基的寡核苷酸为基因表达的反义抑制剂，具有体内应用的期望的特征（Martin,Helv.Chim.Acta,1995,78,486-504；Altmann等,Chimia,1996,50,168-176；Altmann等,Biochem.Soc.Trans.,1996,24,630-637；和Altmann等,Nucleosides Nucleotides,1997,16,917-926）。
如本文所用，“修饰的四氢吡喃核苷”或“修饰的THP核苷”意为在正常的核苷中对于戊呋喃糖基残基中具有六元四氢吡喃“糖”取代的核苷（糖取代物）。修饰的THP核苷包括但不限于在本领域中被称作己糖醇核酸（HNA）、木密醇核酸（ANA）、甘露醇核酸（MNA）（参见Leumann,Bioorg.Med.Chem.2002,10,841-854），氟代HNA（F-HNA）或具有式VII的那些化合物：
其中对于式VII的所述至少一个四氢吡喃核苷类似物中的每一个独立地：
Bx是杂环碱基部分；
Ta和Tb各自独立地为将四氢吡喃核苷类似物与反义化合物连接的核苷间键基团或Ta和Tb中之一为将四氢吡喃核苷类似物与反义化合物连接的核苷间键基团且Ta和Tb中另外的为H、羟基保护基团、连接的缀合基团或5’或3’端基；
q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7各自独立地为H、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、取代的C2-C6烯基、C2-C6炔基或取代的C2-C6炔基；和R1和R2中每个选自氢、羟基、卤素、取代或未取代的烷氧基、NJ1J2、SJ1、N3、OC(=X)J1、OC(=X)NJ1J2、NJ3C(=X)NJ1J2和CN，其中X是O、S或NJ1，和每个J1、J2和J3独立地为H或C1-C6烷基。
在某些实施方案中，提供了式VII的修饰的THP核苷，其中q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7每一个为H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一个非H。在某些实施方案中，q1、q2、q3、q4、q5、q6和q7中的至少一个为甲基。在某些实施方案中，提供了式VII的THP核苷，其中R1和R2中的一个为氟。在某些实施方案中，R1为氟和R2为H；R1为甲氧基和R2为H；和R1为甲氧基乙氧基和R2为H。
如本文所用，“2’-修饰的”或“2’-取代的”指包含在2’位置含除H或OH外的取代基的糖的核苷。2’-修饰的核苷包括但不限于双环核苷，其中连接糖环的两个碳原子的桥连基连接糖环的2’碳和另一个碳；和具有非桥连的2’取代基的核苷，所述非桥连的2’取代基诸如烯丙基、氨基、叠氮基、硫代、O-烯丙基、O-C1-C10烷基、-OCF3、O-(CH2)2-O-CH3、2’-O(CH2)2SCH3、O-(CH2)2-O-N(Rm)(Rn)或O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn)，其中每个Rm和Rn独立地为H或取代的或未取代的C1-C10烷基。2’-修饰的核苷还可在例如糖的其它位置和/或核碱基处包含其它修饰。
如本文所用，“2’-F”指包含在2’位置处含氟代基团的糖的核苷。
如本文所用，“2’-OMe”或“2’-OCH3”或“2’-O-甲基”每个指包含在糖环的2’位置处含-OCH3基团的糖的核苷。
如本文所用，“MOE”或“2’-MOE”或“2’-OCH2CH2OCH3”或“2’-O-甲氧基乙基”每个指包含在糖环的2’位置处含-OCH2CH2OCH3基团的糖的核苷。
如本文所用，“寡核苷酸”指包含多个连接的核苷的化合物。在某些实施方案中，多个核苷中的一个或多个是修饰的。在某些实施方案中，寡核苷酸包含一个或多个核糖核苷（RNA）和/或脱氧核糖核苷（DNA）。
许多其它的双环和三环糖取代物环系统也是本领域中已知的，可用于修饰用于掺入到反义化合物中的核苷（参见，例如，参见论文：Leumann，Bioorg.Med.Chem,2002,10,841-854）。
此类环系统可进行多种另外的取代以增强活性。
用于制备修饰的糖的方法是本领域中的技术人员熟知的。
在具有修饰的糖部分的核苷酸中，维持核碱基部分（天然的、修饰的或其组合）以与适当的核酸靶标杂交。
在某些实施方案中，反义化合物包含一个或多个具有修饰的糖部分的核苷。在某些实施方案中，修饰的糖部分是2’-MOE。在某些实施方案中，2’-MOE修饰的核苷以间隙聚体基序排列。在某些实施方案中，修饰的糖部分是具有(4’-CH(CH3)-O-2’)桥连基团的双环核苷。在某些实施方案中，(4’-CH(CH3)-O-2’)修饰的核苷贯穿间隙聚体基序的翼部排列。在某些实施方案中，修饰的糖部分是cEt。在某些实施方案中，cEt修饰的核苷酸贯穿间隙聚体基序的翼部排列。
修饰的核碱基
核碱基（或碱基）修饰或取代虽然功能上与天然存在的或合成的未修饰的核碱基是可互换的，结构上与之不同。天然的和修饰的核碱基都能够参与氢键结合。此类核碱基修饰可赋予反义化合物核酶稳定性、结合亲和力或一些其它的有利的生物性质。修饰的核碱基包括合成的和天然的核碱基诸如，例如，5-甲基胞嘧啶（5-me-C）。某些核碱基取代，包括5-甲基胞嘧啶取代，对于提高反义化合物对于靶核酸的结合亲和力是特别有用的。例如，已显示5-甲基胞嘧啶取代增加核酸双链体稳定性0.6-1.2℃（Sanghvi,Y.S.,Crooke,S.T.和Lebleu,B.编,Antisense Research and Applications,CRC Press,Boca Raton,1993,第276-278页）。
另外修饰的核碱基包括5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物、腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物、2-硫尿嘧啶、2-硫胸腺嘧啶和2-硫胞嘧啶、5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶、5-丙炔基（-C≡C-CH3）尿嘧啶和胞嘧啶和嘧啶碱基的其它炔基衍生物，6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶、5-尿嘧啶（假尿嘧啶）、4-硫尿嘧啶、8-卤代、8-氨基、8-硫代、8-硫烷基、8-羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代尤其是5-溴代、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胸腺嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤、2-F-腺嘌呤、2-氨基-腺嘌呤、8-氮鸟嘌呤和8-氮腺嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤和7-脱氮腺嘌呤和3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。
杂环碱基部分可包括其中嘌呤或嘧啶碱基被其它杂环置换的那些，例如7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮鸟苷、2-氨基嘧啶和2-吡啶酮。对于增加反义化合物的结合亲和力特别有用的核碱基包括5-取代的嘧啶、6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代的嘌呤，包含2氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物包含一个或多个修饰的核碱基。在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的间隙增宽的反义寡核苷酸包含一个或多个修饰的核碱基。在某些实施方案中，修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。在某些实施方案中，每个胞嘧啶是5-甲基胞嘧啶。
用于配制药物组合物的组合物和方法
可将反义寡核苷酸与药学上可接受的活性的或惰性的物质相混合以制备药物组合物或制剂。用于药物组合物的配制的组合物和方法取决于大量的标准，包括但不限于施用路径、疾病的程度或待施用的剂量。
通过将反义化合物与适宜的药学上可接受的稀释剂或载体相组合而将靶向ApoCIII核酸的反义化合物用于药物组合物。
在某些实施方案中，“药学上的载体”或“赋形剂”是用于将一种或多种核酸递送到动物的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或任何其它药理学上惰性的运载体。赋形剂可以是液体或固体且当与核酸和给定的药物组合物的其它组分相组合时可根据预定的计划的施用方式来选择以提供需要的体积、浓稠度等。典型的药学上的载体包括但不限于结合剂（例如，预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素等）；填充剂（例如，乳糖和其它糖、微晶纤维素、胶质、明胶、硫酸钙、乙基纤维素、聚丙烯酸酯或磷酸氢钙等）；润滑剂（例如，硬脂酸镁、滑石、硅石、胶态二氧化硅、硬脂酸、金属硬脂酸盐、氢化植物油、玉米淀粉、聚乙二醇、苯甲酸钠、醋酸钠等）；崩解剂（例如，淀粉、淀粉羟基乙酸钠等）；和湿润剂（例如，十二烷基硫酸钠等）。
还可使用不会与核酸发生不利的反应的、适宜于胃肠外或非胃肠外施用的药学上可接受的有机或无机赋形剂来配制本发明的组合物。适宜的药学上可接受的载体包括但不限于水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、淀粉糖、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和类似物。
药学上可接受的稀释剂包括磷酸盐缓冲溶液（PBS）。PBS是适用于待胃肠外递送的组合物的稀释剂。因此，在一个实施方案中，应用于本文所描述的方法的是包含靶向ApoCIII核酸的反义化合物和药学上可接受的稀释剂的药物组合物。在某些实施方案中，药学上可接受的稀释剂是PBS。在某些实施方案中，反义化合物是反义寡核苷酸。
包含反义化合物的药物组合物包含任何药学上可接受的盐、酯或所述酯的盐或寡核苷酸，当将其施用于包括人的动物时能够提供（直接地或间接地）生物活性代谢物或其残余物。因此，例如，本公开内容还涉及反义化合物的药学上可接受的盐、前药、所述前药的药学上可接受的盐和其它生物等效物。适宜的药学上可接受的盐包括但不限于钠盐和钾盐。
前药可包括在反义化合物的一端或两端掺入另外的核苷，通过体内的内源性核酸酶将其裂解，以形成活性的反义化合物。
缀合的反义化合物
可将反义化合物与增强所得的反义寡核苷酸的活性、细胞分布或细胞摄入的一个或多个部分或缀合物共价连接。典型的缀合物基团包括胆固醇部分和脂质部分。另外的缀合物基团包括糖类、磷脂、生物素、吩嗪、叶酸、菲啶、蒽醌、吖啶、荧光素、罗丹明、香豆素和染料。
还可修饰反义化合物以具有一个或多个稳定基团，所述稳定基团通常与反义化合物的一个或两个末端连接以增强诸如例如核酸酶稳定性的性质。包括在稳定基团中的是帽子结构。这些末端修饰保护反义化合物避免核酸外切酶降解，且能够协助细胞内的递送和/或定位。帽子可存在于5’-末端（5’-帽子）或3’-末端（3’-帽子）或可存在于两个末端。帽子结构是本领域中熟知的且包括，例如，反向脱氧无碱基帽子（inverted deoxy abasic cap）。可用于覆盖反义化合物的一端或两端以赋予核酸酶稳定性的另外的3’和5’-稳定基团包括于2003年1月16日公布的WO03/004602中公开的那些。
细胞培养和反义化合物处理
反义化合物对ApoCIII核酸或蛋白的水平、活性或表达的作用可在多种细胞类型中进行体外测试。用于此类分析的细胞类型可获自商业销售者（例如，美国典型培养物保藏中心，Manassus,VA；Zen-Bio,Inc.,Research Triangle Park,NC；Clonetics Corporation,Walkersville,MD）和利用商业上可获得的试剂（例如，Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,CA）根据销售者的说明培养细胞。示例性的细胞类型包括但不限于HepG2细胞、Hep3B细胞、Huh7（肝细胞癌）细胞、原代肝细胞、A549细胞、GM04281成纤维细胞和LLC-MK2细胞。
反义寡核苷酸的体外测试
本文所描述的是用于利用反义寡核苷酸处理细胞的方法，所述反义寡核苷酸可以是适当修饰的以用于利用其它反义化合物进行处理。
通常，当培养中的细胞达到约60-80%汇合时用反义寡核苷酸处理细胞。
常用于将反义寡核苷酸引入培养的细胞中的一种试剂包括阳离子脂质转染试剂
Figure BDA0000417096850000641
（Invitrogen,Carlsbad,CA）。反义寡核苷酸与
Figure BDA0000417096850000642
在
Figure BDA0000417096850000643
1（Invitrogen,Carlsbad,CA）中混合以达到反义寡核苷酸的需要的终浓度，和通常范围在2至12ug/mL每100nM反义寡核苷酸的
Figure BDA0000417096850000644
浓度。
用于将反义寡核苷酸引入培养的细胞中的另一试剂包括LIPOFECTAMINE
Figure BDA0000417096850000645
（Invitrogen,Carlsbad,CA）。反义寡核苷酸与
Figure BDA0000417096850000646
1低血清培养基（Invitrogen,Carlsbad,CA）中的LIPOFECTAMINE
Figure BDA0000417096850000647
相混合以达到反义寡核苷酸的需要的浓度，和通常范围在2至12ug/mL每100nM反义寡核苷酸的
Figure BDA0000417096850000648
浓度。
用于将反义寡核苷酸引入培养的细胞中的另一试剂包括
Figure BDA0000417096850000649
（Invitrogen,Carlsbad,CA）。反义寡核苷酸与
Figure BDA00004170968500006410
1低血清培养基（Invitrogen,Carlsbad,CA）中的
Figure BDA00004170968500006411
相混合以达到反义寡核苷酸的需要的浓度，和通常范围在2至12ug/mL每100nM反义寡核苷酸的
Figure BDA00004170968500006412
浓度。
用于将反义寡核苷酸引入培养的细胞中的另一试剂包括OligofectamineTM（Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,CA）。反义寡核苷酸与Opti-MEMTM-1低血清培养基（Invitrogen LifeTechnologies,Carlsbad,CA）中的OligofectamineTM相混合以达到寡核苷酸的需要的浓度，OligofectamineTM与寡核苷酸比率为约0.2至0.8μL每100nM。
用于将反义寡核苷酸引入培养的细胞中的另一试剂包括FuGENE6（Roche Diagnostics Corp.,Indianapolis,IN）。将反义寡聚化合物与1mL的无血清RPMI中的FuGENE6混合以达到寡核苷酸的需要的浓度，FuGENE6与寡聚化合物比率为1-4μL的FuGENE6每100nM。
用于将反义寡核苷酸引入培养的细胞中的另一技术包括电穿孔（Sambrooke和RussellMolecular Cloning.A Laboratory Manual.第三版.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NewYork.2001）。
通过常规方法利用反义寡核苷酸处理细胞。通常在反义寡核苷酸处理后16-24小时收获细胞，此时通过本领域中已知的和本文描述的方法测量靶核酸的RNA或蛋白水平（Sambrooke和RussellMolecularCloning.A Laboratory Manual.第三版.Cold Spring Harbor LaboratoryPress,Cold Spring Harbor,New York.2001）。通常，当以多个重复进行处理时，数据呈现为重复处理的平均值。
所用的反义寡核苷酸的浓度在细胞系间是不同的。确定对于特定的细胞系的最佳反义寡核苷酸浓度的方法是本领域中熟知的（Sambrooke和RussellMolecular Cloning.A Laboratory Manual.第三版.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NewYork.2001）。当利用
Figure BDA0000417096850000651
（Invitrogen,Carlsbad,CA）、
Figure BDA0000417096850000652
（Invitrogen,Carlsbad,CA）或CytofectinTM（Genlantis,San Diego,CA）转染时通常使用浓度范围从1nM至300nM的反义寡核苷酸。当利用电穿孔转染时使用范围从625至20,000nM的较高浓度的反义寡核苷酸。
RNA分离
可基于总细胞RNA或聚(A)+mRNA进行RNA分析。RNA分离的方法是本领域中熟知的（Sambrooke和RussellMolecular Cloning.ALaboratory Manual.第三版.Cold Spring Harbor Laboratory Press,ColdSpring Harbor,New York.2001）。RNA利用本领域中熟知的方法来制备，例如，根据制备商推荐的方案利用
Figure BDA0000417096850000653
Reagent（Invitrogen,Carlsbad,CA）。
靶水平或表达的抑制的分析
可用本领域中已知的多种方式来测定ApoCIII核酸的水平或表达的抑制（Sambrooke和RussellMolecular Cloning.A Laboratory Manual.第三版.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NewYork.2001）。例如，靶核酸可通过例如Northern印迹分析、竞争性聚合酶链式反应（PCR）或定量实时PCR来定量。RNA分析可基于总细胞RNA或聚(A)+mRNA进行。RNA分离的方法是本领域中熟知的。Northern印迹分析也是本领域中常用的。定量实时PCR可利用从PE-Applied Biosystems,Foster City,CA可获得的商业上可获得的ABI
Figure BDA0000417096850000662
7600、7700或7900Sequence Detection System，根据制备商的说明加以利用来实现。
靶RNA水平的定量实时PCR分析
靶RNA水平的定量可通过利用ABI
Figure BDA0000417096850000661
7600、7700或7900Sequence Detection System（PE-Applied Biosystems,Foster City,CA）根据制备商的说明通过定量实时PCR来实现。定量实时PCR的方法是本领域中熟知的。
在实时PCR之前，将分离的RNA进行逆转录酶（RT）反应，其产生随后可用作实时PCR扩增的底物的互补DNA（cDNA）。在相同的样品孔中相继地进行RT和实时PCR反应。RT和实时PCR试剂获自Invitrogen（Carlsbad,CA）。RT和实时PCR反应通过本领域中的技术人员熟知的方法来进行。
利用表达恒定的基因诸如亲环蛋白A的表达水平或通过利用
Figure BDA0000417096850000663
（Invitrogen,Inc.Carlsbad,CA）定量总RNA可将通过实时PCR获得的基因（或RNA）靶标量标准化。亲环蛋白A表达由通过与靶标同时运行的、多重的或分别的实时PCR定量。总RNA利用RNA定量试剂（Invitrogen,Inc.Carlsbad,CA）定量。通过
Figure BDA0000417096850000672
进行RNA定量的方法在Jones,L.J.等,（Analytical Biochemistry,1998,265,368-374）中教导。
Figure BDA0000417096850000673
4000仪器（PE Applied Biosystems,Foster City,CA）被用于测量
Figure BDA0000417096850000674
荧光。
设计探针和引物以与ApoCIII核酸杂交。用于设计实时PCR探针和引物的方法是本领域中熟知的，且可包括诸如PRIMER
Figure BDA0000417096850000675
Software（Applied Biosystems,Foster City,CA）的软件的使用。
通过RT、实时PCR获得的基因靶数量可使用表达恒定的基因GAPDH或亲环蛋白A的表达水平，或通过利用RiboGreenTM（Molecular Probes,Inc.Eugene,OR）定量总RNA来进行。GAPDH或亲环蛋白A表达可通过RT、实时PCR通过同时与靶标多重运行或分开运行来定量。利用RiboGreenTMRNA定量试剂（Molecular Probes,Inc.Eugene,OR）定量了总RNA。
蛋白水平的分析
通过测量ApoCIII蛋白水平评价ApoCIII核酸的反义抑制。ApoCIII的蛋白水平可以本领域中熟知的多种方法来评估或定量，例如免疫沉淀、蛋白质印迹分析（免疫印迹）、酶联免疫吸附测定（ELISA）、定量蛋白测定、蛋白活性测定（例如，半胱天冬酶活性测定）、免疫组织化学、免疫细胞化学或荧光激活的细胞分选（FACS）（Sambrooke和RussellMolecular Cloning.A Laboratory Manual.第三版.Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NewYork.2001）。可鉴定针对靶标的抗体并从多种来源获得，例如MSRS抗体目录（Aerie Corporation,Birmingham,MI），或可通过本领域中熟知的常规单克隆或多克隆抗体生成方法来制备。用于检测人类和小鼠ApoCIII的抗体是商业上可获得的。
反义化合物的体内测试
在动物中测试反义化合物，例如，反义寡核苷酸以评价其抑制ApoCIII的表达并产生表型变化的能力。测试可在正常动物中或在实验疾病模型中进行。为对动物进行施用，在药学上可接受的稀释剂诸如磷酸盐缓冲溶液中配制反义寡核苷酸。施用包括胃肠外施用途径。反义寡核苷酸剂量和给药频率的计算取决于诸如施用途径和动物体重的因素。在用反义寡核苷酸处理一段时间后，从组织分离RNA并测量ApoCIII核酸表达的变化。还测量ApoCIII蛋白水平的变化。
某些适应症
在某些实施方案中，本文提供了治疗个体的方法，其包括施用如本文所描述的一种或多种药物组合物。在某些实施方案中，个体具有心血管疾病或代谢性疾患。
在某些实施方案中，心血管疾病是动脉瘤、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、脑血管疾病、冠心病、高血压、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、中风和类似疾病。在某些实施方案中，血脂异常是乳糜微粒血症。
如以下实施例中所示，已显示如本文所描述的靶向ApoCIII的化合物调节心血管疾病的生理性标志物或表型。在某些实验中，与未处理的动物相比较，化合物升高HDL水平，并降低LDL和甘油三酯水平。在某些实施方案中，HDL水平的升高和LDL和甘油三酯水平的降低与化合物对ApoCIII的抑制相关联。
在某些实施方案中，心血管疾病的生理性标志物可以是可定量的。例如，可通过例如标准的脂质检测测量并定量HDL水平。对于这样的标志物，在某些实施方案中，标志物可增加约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%，或这些值中的任何两个所限定的范围。
同样，本文所提供的是用于在需要其的受试者中预防、治疗或改善与心血管疾病相关联的症状的方法。在某些实施方案中，提供的是用于降低与心血管疾病相关联的症状的发生的比率的方法。在某些实施方案中，提供的是用于降低与心血管疾病相关联的症状的严重度的方法。在这样的实施方案中，所述方法包括向需要其的个体施用治疗有效量的靶向ApoCIII核酸的化合物。
心血管疾病以大量的身体症状为特征。本领域中的技术人员已知的与心血管疾病相关联的任何症状可如以上所描述的方法中以上所列来进行预防、治疗、改善或调节。在某些实施方案中，症状可以是以下中的任何，但不限于：心绞痛；胸痛；气短；心悸；虚弱；眩晕；恶心；出汗；心动过速；心动过缓；心律失常；房颤；下肢肿胀；发绀；疲乏；昏厥；脸麻木；四肢麻木；跛行或肌肉痉挛；腹胀；或发烧。
在某些实施方案中，症状是心绞痛。在某些实施方案中，症状是胸痛。在某些实施方案中，症状是气短。在某些实施方案中，症状是心悸。在某些实施方案中，症状是虚弱。在某些实施方案中，症状是眩晕。在某些实施方案中，症状是恶心。在某些实施方案中，症状是出汗。在某些实施方案中，症状是心动过速。在某些实施方案中，症状是心动过缓。在某些实施方案中，症状是心律失常。在某些实施方案中，症状是房颤。在某些实施方案中，症状是下肢肿胀。在某些实施方案中，症状是发绀。在某些实施方案中，症状是疲乏。在某些实施方案中，症状是昏厥。在某些实施方案中，症状是脸麻木。在某些实施方案中，症状是四肢麻木。在某些实施方案中，症状是跛行或肌肉痉挛。在某些实施方案中，症状是腹胀。在某些实施方案中，症状是受损的短期发烧。
在某些实施方案中，代谢性疾患包括但不限于高血糖、前驱糖尿病、糖尿病（1型和2型）、肥胖、胰岛素抗性、代谢综合征和糖尿病性血脂异常。
在某些实施方案中，如本文所描述的靶向ApoCIII的化合物调节代谢性疾患的生理学标志物或表型。在某些实施方案中，代谢性疾患的生理学标志物可以是可定量的。例如，可通过本领域中已知的标准检测测量和定量葡萄糖水平或胰岛素抗性。对于这样的标志物，在某些实施方案中，标志物可以减少约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%，或由这些值中的任何两个所限定的范围。在另一个例子中，胰岛素敏感性或HDL水平可通过本领域中已知的标准检测来测量和定量。对于这样的标志物，在某些实施方案中，标志物可增加约5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%，或这些值中的任何两个所限定的范围。
本文还提供了用于在需要其的受试者中预防、治疗或改善与代谢性疾患相关联的症状的方法。在某些实施方案中，提供的是用于降低与代谢性疾患相关联的症状的发作的比率的方法。在某些实施方案中，提供的是用于降低与代谢性疾患相关联的症状的严重度的方法。在这样的实施方案中，所述方法包括向需要其的个体施用治疗有效量的靶向ApoCIII核酸的化合物。
代谢性疾患以大量的身体症状为特征。可如以上所描述的方法中以上所列来对本领域中的技术人员已知的与代谢性疾患相关联的任何症状进行预防、治疗、改善或调节。在某些实施方案中，症状可以是以下中的任何，但不限于：过量的尿产生（多尿症）、过度口渴和增加的液体摄取（烦渴）、视野模糊、原因不明的体重减轻和嗜睡症。
在某些实施方案中，提供的是治疗个体的方法，其包括施用如本文所描述的治疗有效量的一种或多种药物组合物。在某些实施方案中，个体患有心血管疾病。在某些实施方案中，治疗有效量的靶向ApoCIII核酸的反义化合物的施用伴随着监测心血管疾病、糖尿病或与ApoCIII的表达相关联的其它疾病进展的ApoCIII水平或标志物，以确定个体对反义化合物的施用的反应。医师使用个体对反义化合物的施用的反应来确定治疗干预的量和持续时间。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物的施用导致ApoCIII表达降低至少约15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%，或这些值中的任何两个所限定的范围。在某些实施方案中，ApoCIII表达降低至≤50mg/L、≤60mg/L、≤70mg/L、≤80mg/L、≤90mg/L、≤100mg/L、≤110mg/L、≤120mg/L、≤130mg/L、≤140mg/L、≤150mg/L、≤160mg/L、≤170mg/L、≤180mg/L、≤190mg/L或≤200mg/L。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物的施用导致HDL水平升高至少约15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或99%，或这些值中的任何两个所限定的范围。
在某些实施方案中，靶向ApoCIII核酸的反义化合物的施用导致TG（餐后或空腹）水平降低至少约15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%，或这些值中的任何两个所限定的范围。在某些实施方案中，TG（餐后或空腹）降低至≤100mg/dL、≤110mg/dL、≤120mg/dL、≤130mg/dL、≤140mg/dL、≤150mg/dL、≤160mg/dL、≤170mg/dL、≤180mg/dL、≤190mg/dL、≤200mg/dL、≤210mg/dL、≤220mg/dL、≤230mg/dL、≤240mg/dL、≤250mg/dL、≤260mg/dL、≤270mg/dL、≤280mg/dL、≤290mg/dL、≤300mg/dL、≤350mg/dL、≤400mg/dL、≤450mg/dL、≤500mg/dL、≤550mg/dL、≤600mg/dL、≤650mg/dL、≤700mg/dL、≤750mg/dL、≤800mg/dL、≤850mg/dL、≤900mg/dL、≤950mg/dL、≤1000mg/dL、≤1100mg/dL、≤1200mg/dL、≤1300mg/dL、≤1400mg/dL、≤1500mg/dL、≤1600mg/dL、≤1700mg/dL、≤1800mg/dL或≤1900mg/dL。
在某些实施方案中，包含靶向ApoCIII的反义化合物的药物组合物用于制备用来治疗患有或易患心血管疾病的患者的药物。
施用
本发明的化合物或药物组合物可根据是需要局部治疗还是系统治疗或根据待治疗的区域以多种方式来施用。施用可以是口服的或胃肠外的。
在某些实施方案中，如本文所描述的化合物和组合物是胃肠外施用的。胃肠外施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注。
在某些实施方案中，胃肠外施用通过输注来进行。输注可以是慢性的或连续的或短期的或间歇的。在某些实施方案中，输注的药剂利用泵来递送。在某些实施方案中，输注是静脉内的。
在某些实施方案中，胃肠外施用通过注射来进行。注射可利用注射器或泵来递送。在某些实施方案中，注射是弹丸注射。在某些实施方案中，注射直接施用到组织或器官。在某些实施方案中，胃肠外施用是皮下的。
在某些实施方案中，用于胃肠外施用的制剂可包括无菌水溶液，其还可含有缓冲剂、稀释剂和其它适宜的添加剂诸如但不限于渗透增强剂、载体化合物和其它药学上可接受的载体或赋形剂。
在某些实施方案中，用于本发明的化合物或组合物的口服施用的制剂可包括但不限于药物载体、赋形剂、粉末或颗粒、微粒、纳米微粒、水或非水性介质中的悬浮液或溶液、胶囊、凝胶胶囊、囊剂、片剂或小片。增稠剂、调味剂、稀释剂、乳化剂、分散助剂或粘着剂可以是需要的。在某些实施方案中，口服制剂是其中本发明的化合物与一种或多种渗透增强剂、表面活性剂或螯合剂共同施用的那些。
给药
在某些实施方案中，根据给药方案（例如，剂量、剂量频率和持续时间）施用药物组合物，其中可选择给药方案来获得所需作用。所需作用可以是，例如，ApoCIII的减少或预防、降低、改善或减缓与ApoCIII有关的疾病或病症的进展。
在某些实施方案中，调整给药方案的可变形式以导致受试者中的药物组合物的需要的浓度。关于给药方案使用的“药物组合物的浓度”可指药物组合物的化合物、寡核苷酸或活性成分。例如，在某些实施方案中，调整剂量和剂量频率以提供足以实现需要的作用的量的药物组合物的组织浓度或血浆浓度。
给药取决于待治疗的疾病状态的严重度和反应性，治疗的时程持续数天至数月，或直至实现治愈或达到疾病状态的减少。给药还取决于药物效力和代谢作用。在某些实施方案中，剂量是每kg体重0.01μg至100mg，或在0.001mg-1000mg剂量的范围内，且可一天一次或多次、一周一次、一月一次或一年一次或甚至每2年至20年一次来给药。成功治疗后，可能需要使患者进行维持治疗以防止疾病状态的复发，其中寡核苷酸以维持剂量来施用，范围从每kg体重0.01μg至100mg，一天一次或多次，至每20年一次或范围从0.001mg至1000mg剂量。
某些组合疗法
在某些实施方案中，包含本文所描述的化合物的第一药剂与一种或多种第二药剂共施用。在某些实施方案中，所述第二药剂被设计为与本文所描述的第一药剂治疗相同的疾病、疾患或病症。在某些实施方案中，所述第二药剂被设计为与本文所描述的第一药剂治疗不同的疾病、疾患或病症。在某些实施方案中，第一药剂被设计来治疗第二药剂的非所需的副作用。在某些实施方案中，第二药剂与第一药剂共施用以治疗第一药剂的非所需作用。在某些实施方案中，所述第二药剂被设计来治疗如本文所描述的一种或多种药物组合物的非所需的副作用。在某些实施方案中，第二药剂与第一药剂共施用以产生组合作用。在某些实施方案中，第二药剂与第一药剂共施用以产生协同作用。在某些实施方案中，第一药剂与第二药剂的共施用允许使用比若将药剂作为独立的治疗来施用时达到治疗或预防作用所需要的更低的剂量。
在某些实施方案中，本文所描述的一种或多种组合物和一种或多种其它药剂是同时施用的。在某些实施方案中，本发明的一种或多种组合物和一种或多种其它药剂在不同的时间施用。在某些实施方案中，本文所描述的一种或多种组合物和一种或多种其它药剂在单一剂型中一起制备。在某些实施方案中，本文所描述的一种或多种组合物和一种或多种其它药剂是独立制备的。
在某些实施方案中，第二药剂包括但不限于ApoCIII降低剂、胆固醇降低剂、非HDL脂质（例如，LDL）降低剂，HDL升高剂、鱼油、烟酸、贝特（fibrate）、抑制素、DCCR（二氮嗪的盐）、降糖剂和/或抗糖尿病剂。在某些实施方案中，第一药剂与最大耐受剂量的第二药剂组合施用。在某些实施方案中，将第一药剂施用于不能响应于最大耐受剂量的第二药剂的受试者。
ApoCIII降低剂的例子包括不同于第一药剂的ApoCIII反义寡核苷酸、烟酸或Apo B反义寡核苷酸。
降糖剂和/或抗糖尿病剂的例子包括但不限于治疗生活方式变化、PPAR激动剂、二肽基肽酶（IV）抑制剂、GLP-1类似物、胰岛素或胰岛素类似物、胰岛素促分泌素、SGLT2抑制剂、人糊精类似物、双胍、α-葡糖苷酶抑制剂、二甲双胍、磺酰脲、罗格列酮、氯茴苯酸、噻唑烷二酮、α-葡糖苷酶抑制剂和类似物。磺酰脲可以是醋磺环己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、甲磺氮卓脲、格列美脲、格列甲嗪、格列本脲或格列齐特。氯茴苯酸可以是那格列奈或瑞格列奈。噻唑烷二酮可以是匹格列酮或罗格列酮。α-葡糖苷酶可以是阿卡波糖或米格列醇。
胆固醇或脂质降低疗法可包括但不限于治疗性生活方式变化、抑制素、胆汁酸多价螯合剂、烟酸和贝特类。抑制素可以是阿托伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、瑞舒伐他汀和辛伐他汀和类似物。胆汁酸多价螯合剂可以是考来维仑、消胆胺、降胆宁和类似物。贝特类可以是吉非贝齐、非诺贝特、氯贝特和类似物。
HDL升高剂包括胆固醇酯转移蛋白（CETP）抑制药物（诸如Torcetrapib）、过氧化物酶体增殖活化受体激动剂、Apo-A1、匹格列酮和类似物。
某些治疗群体
某些具有高TG水平的受试者处于心血管病和代谢病的显著风险中。在许多具有高TG（例如，高甘油三酯血症）的受试者中，目前的治疗不能将其TG水平降低至安全水平。ApoCIII在TG代谢中起重要作用并是心血管疾病的独立的风险因素。如本文所示，ApoCIII抑制显著降低了TG水平，其可改善心血管疾病或代谢病或其风险。
边界高TG水平（150-199mg/dL）常见于一般群体中且是代谢综合征/胰岛素抗性状态的常见要素。≥200mg/dL的高血浆TG水平是与心血管疾病的升高的风险相关联的常见的临床特征（Hegele等,Hum Mol Genet2009,18:4189-4194；Hegele和Pollex,Mol CellBiochem,2009,326:35-43）。极高的TG水平（≥500和≤2000mg/dL）也最常与升高的乳糜微粒水平相关，且伴随急性胰腺炎的升高风险。
在某些实施方案中，本文所公开的化合物、组合物和方法用于治疗TG水平在100-200mg/dL之间、100-300mg/dL之间、100-400mg/dL之间、100-500mg/dL之间、200-500mg/dL之间、300-500mg/dL之间、400-500mg/dL之间、500-1000mg/dL之间、600-1000mg/dL之间、700-1000mg/dL之间、800-1000mg/dL之间、900-1000mg/dL之间、500-1500mg/dL之间、1000-1500mg/dL之间、100-2000mg/dL之间、150-2000mg/dL之间、200-2000mg/dL之间、300-2000mg/dL之间、400-2000mg/dL之间、500-2000mg/dL之间、600-2000mg/dL之间、700-2000mg/dL之间、800-2000mg/dL之间、900-2000mg/dL之间、1000-2000mg/dL之间、1100-2000mg/dL之间、1200-2000mg/dL之间、1300-2000mg/dL之间、1400-2000mg/dL之间或1500-2000mg/dL之间的受试者。在某些实施方案中，利用本文所公开的化合物进行的治疗适应于具有≥100mg/dL、≥110mg/dL、≥120mg/dL、≥130mg/dL、≥140mg/dL、≥150mg/dL、≥160mg/dL、≥170mg/dL、≥180mg/dL、≥190mg/dL、≥200mg/dL、≥300mg/dL、≥400mg/dL、≥500mg/dL、≥600mg/dL、≥700mg/dL、≥800mg/dL、≥900mg/dL、≥1000mg/dL、≥1100mg/dL、≥1200mg/dL、≥1300mg/dL、≥1400mg/dL、≥1500mg/dL、≥1600mg/dL、≥1700mg/dL、≥1800mg/dL、≥1900mg/dL、≥2000mg/dL、≥2100mg/dL、≥2200mg/dL、≥2300mg/dL、≥2400mg/dL或≥2500mg/dL的TG水平的受试者。
高甘油三酯血症的一些类型可通过Fredrickson分类系统或由Tremblay所描述的分类系统来表征（Tremblay等,J Clin Lipidol,2011,5:37-44）。在某些实施方案中，本文所描述的化合物、组合物和方法用于治疗患有Fredrickson II型、IV型或V型高甘油三酯血症或处于其风险的受试者。
FredricksonIIb型（也称作家族性组合性高脂蛋白血症）是混合的高脂血症（高胆固醇和TG水平），由LDL-C和VLDL的升高而导致。高VLDL水平由于底物（包括TG、乙酰CoA）的过量产生和B-100合成的增加而导致。其还可因降低的LDL的清除而导致。群体的患病率为约10%。
Fredrickson IV型（也称作家族性高甘油三酯血症）是常染色体显性病症，发生于约1%的群体中。由于VLDL的过量的肝脏产生或杂合的LPL缺陷导致TG水平升高，但几乎总是小于1000mg/dL。血清胆固醇水平通常在正常限度内。疾患是异质性的且表型受环境因素强烈影响，尤其是碳水化合物和乙醇消耗。在某些实施方案中，本文所描述的化合物、组合物和方法用于治疗具有TG水平≥200mg/dL和杂合的LPL缺陷或VLDL过量产生的受试者。在某些实施方案中，本文所描述的化合物、组合物和方法用于治疗具有TG水平≥500mg/dL和杂合的LPL缺陷或VLDL过量产生的受试者。
FredricksonV型具有高VLDL和乳糜微粒。其以伴随至少20%（即，部分LPL缺陷）的LPL活性的功能缺失的LPL基因变体的携带者为特征。由于乳糜微粒和VLDL，这些受试者出现乳状血浆和严重的高甘油三酯血症。TG水平常大于1000mg/dL和总胆固醇水平总是升高。LDL-C水平通常是低的。其还与急性胰腺炎、葡萄糖耐受不良和高尿酸血症的风险升高相关联。症状通常存在于成人（>35岁），且虽然患病率相对罕见，但是其比纯合的或复合杂合的LPL缺陷个体常见得多。在某些实施方案中，本文所描述的化合物、组合物和方法用于治疗具有≥1000mg/dL TG的受试者。在某些实施方案中，本文所描述的化合物、组合物和方法用于治疗患有与受试者中的高TG水平相关联的胰腺炎或处于其风险的受试者。在某些实施方案中，本文所描述的化合物、组合物和方法用于治疗患有与受试者中的高TG水平相关联的心血管疾病或代谢病或处于其风险的受试者。在某些实施方案中，心血管疾病是动脉瘤、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、脑血管疾病、冠心病、高血压、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、中风和类似疾病。在某些实施方案中，血脂异常是乳糜微粒血症。在某些实施方案中，代谢病或疾患包括但不限于高血糖、前驱糖尿病、糖尿病（1型和2型）、肥胖、胰岛素抗性、代谢综合征和糖尿病性血脂异常。
在某些实施方案中，利用本文所公开的化合物进行的治疗适应于具有升高ApoCIII水平和/或甘油三酯水平的遗传缺陷的人类动物。在某些实施方案中，遗传缺陷是增加ApoCIII表达的等位基因变体或多态型。在某些实施方案中，多态型是T（第74位）到A、C（第-641位）到A、G（第-630位）到A、T（第-625位）到缺失、C（第-482位）到T、T（第-455位）到C、C（第1100位）到T、C（第3175位）到G、T（第3206位）到G、C（第3238位）到G和类似的多态型。在某些实施方案中，遗传缺陷是杂合的LPL缺陷。
在某些实施方案中，利用本文所公开的化合物进行的治疗适应于具有升高的ApoCIII水平的人类动物。在某些实施方案中，升高的ApoCIII水平是≥50mg/L、≥60mg/L、≥70mg/L、≥80mg/L、≥90mg/L、≥100mg/L、≥110mg/L、≥120mg/L、≥130mg/L、≥140mg/L、≥150mg/L、≥160mg/L、≥170mg/L、≥180mg/L、≥190mg/L、≥200mg/L、≥300mg/L、≥400mg/L或≥500mg/L。
实施例
非限制性公开内容并通过引用并入
虽然已根据某些实施方案具体描述了本文所描述的某些化合物、组合物和方法，以下实施例仅用于说明本文所描述的化合物而并不意在限制本发明。本申请中所列出的参考文献中的每一个以其整体通过引用并入本文。
实施例1：在huApoCIII转基因小鼠中对人ApoCIII的体内反义抑制的作用
本研究中所利用的具有人ApoCIII转基因的转基因小鼠是huApoCIII转基因F1杂种（Jackson Laboratories,CA）和C57BL/6小鼠的后代。在该测定中利用了ISIS304801（先前公开于美国专利7,598,227中），其具有SEQ ID NO:1（GENBANK登录号NM_000040.1）上的第508位的起始位点和SEQ ID NO:2（GENBANK登录NT_033899.8从核苷酸20263040至20266203截短）上的第3139位的起始位点，加上序列5’-AGCTTCTTGTCCAGCTTTAT-3’（SEQID NO:3）和5-10-5MOE间隙体基序。本测定还包括另一ISIS反义寡核苷酸“化合物X”，其具有5-10-5MOE间隙体基序，靶向SEQ IDNO：1或SEQ ID NO:2的另一区域。本测定还包括另一ISIS反义寡核苷酸“化合物Y”，其具有5-10-5MOE间隙体基序，靶向啮齿类ApoCIII序列（GenBank登录号NM_023114.3；SEQ ID NO:5）。
处理
将人ApoCIII转基因小鼠维持在12小时光/暗循环下并随意地喂养Teklad实验室食物。在开始实验之前使动物在研究设施中适应至少7天。在PBS中调制反义寡核苷酸（ASO）并通过经0.2微米过滤器进行过滤来灭菌。将寡核苷酸溶于0.9%的PBS中以用于注射。
分别测定雄性和雌性小鼠。将雄性小鼠分为三个处理组，每组由5只小鼠组成。两个这样的组接受37.5mg/kg的剂量的ISIS304801或化合物X的皮下注射，一周两次，持续2周。一组小鼠接受PBS的皮下注射，一周两次，持续2周。将雌性小鼠分成4个处理组，每个由4-5只小鼠组成。三个这样的组接受37.5mg/kg的剂量的ISIS304801、化合物X或Y的皮下注射，一周两次，持续2周。一组小鼠接受PBS的皮下注射，一周两次，持续2周。在处理之前和在最终给药之后，从每只小鼠中抽血并分析血浆样品。在最终给药后两天，对小鼠进行安乐死，收集器官并进行分析。
胆固醇和甘油三酯水平
通过Bligh和Dyer的方法（Bligh,E.G.和Dyer,W.J.Can.J.Biochem.Physiol.37:911-917,1959）提取血浆甘油三酯和胆固醇并利用商业上可获得的甘油三酯试剂盒（DCL甘油三酯试剂；DiagnosticChemicals Ltd.）进行测量。
雄性和雌性中甘油三酯分析的结果呈现于表1和表2中，并以mg/dL来表示。如所观察到的，所有处理组中的甘油三酯水平与对照组相比较显著降低。
为了测量胆固醇的不同级分（HDL、LDL和VLDL），通过HPLC分析来自雌性组的血浆样品并呈现于表3中。如所观察到的，ApoCIII的反义抑制显著降低了VLDL且还显著升高了HDL的水平。HDL的升高和VLDL水平的降低是ApoCIII的反义抑制的心血管的有利作用，且对于患有血脂异常疾病或处于患血脂异常疾病的风险中的动物可以是有利的。
表1
雌性转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对甘油三酯水平（mg/dL）的影响
第0周 第2周 变化%
PBS 2144 2533 +21
化合物X 2385 677 -72
化合物Y 2632 1644 -37
ISIS304801 2390 542 -75
表2
雄性转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对甘油三酯水平（mg/dL）的影响
第0周 第2周 变化%
PBS 6191 7073 +14
ISIS304801 6588 780 -88
化合物X 5464 861 -84
表3
雌性转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对血浆胆固醇级分（%总胆固醇）的影响
实施例2：huApoCIII转基因小鼠中对人ApoCIII剂量依赖性反义抑制
在剂量依赖性研究中利用人ApoCIII转基因小鼠对ISIS304801和化合物X进行了进一步的研究。
处理
将人ApoCIII转基因小鼠维持在12小时光/暗循环下并随意地喂养Teklad实验室食物。在开始实验之前使动物在研究设施中适应至少7天。在PBS中调制反义寡核苷酸（ASO）并通过经0.2微米过滤器进行过滤来灭菌。将寡核苷酸溶于0.9%的PBS中以用于注射。
将雌性小鼠分成9个处理组，每组由3只小鼠组成。8个这样的组接受1.5mg/kg/周、5mg/kg/周、15mg/kg/周或50mg/kg/周的剂量的ISIS304801或化合物X的皮下注射，持续2周。一组小鼠接受PBS的皮下注射，持续2周。在处理之前和在最终给药之后，从每只小鼠中抽血并分析血浆样品。在最终给药后两天，对小鼠进行安乐死，收集器官并进行分析。
胆固醇和甘油三酯水平
通过Bligh和Dyer的方法（Bligh,E.G.和Dyer,W.J.Can.J.Biochem.Physiol.37:911-917,1959）提取血浆甘油三酯和胆固醇并利用商业上可获得的甘油三酯试剂盒（DCL甘油三酯试剂；DiagnosticChemicals Ltd.）进行测量。
小鼠中胆固醇和甘油三酯分析的结果呈现于表4和5中，并以mg/dL来表示。如所观察到的，利用较高剂量的ISIS304801处理的小鼠中的HDL水平发生显著升高，表明寡核苷酸对ApoCIII的抑制的有利作用。高剂量处理组中的LDL和甘油三酯水平与对照组相比较发生降低。HDL的升高和LDL和TG水平的降低是ApoCIII的反义抑制的心血管的有利作用且对于患有血脂异常疾病或处于患血脂异常疾病的风险中的动物可以是有利的。
表4
转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对胆固醇和甘油三酯水平（mg/dL）的影响
Figure BDA0000417096850000821
表5
转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对HDL和LDL胆固醇水平（mg/dL）的影响
Figure BDA0000417096850000822
Figure BDA0000417096850000831
实施例3：CETP转基因LDL受体缺失小鼠中对ApoCIII的反义抑制的作用
在人CETP转基因LDLr-/-小鼠模型中进一步研究了化合物Y以检查小鼠ApoCIII反义抑制剂在高脂血症小鼠中对血浆脂质和脂蛋白代谢的影响。
处理
将人CETP转基因LDLr-/-转基因小鼠维持在12小时光/暗循环下并随意地喂养西方饮食（来自脂肪的42%卡路里，0.2%胆固醇）。在开始实验之前使动物在研究设施中适应该饮食10天。在PBS中调制反义寡核苷酸（ASO）并通过经0.2微米过滤器进行过滤来灭菌。将寡核苷酸溶于0.9%的PBS中以用于注射。
将8周龄雄性小鼠分成3个处理组。1个这样的组的6只小鼠接受12.5mg/kg/周的剂量的化合物Y的皮下注射，持续4周。一组4只小鼠接受12.5mg/kg/周的剂量的对照寡核苷酸ISIS141923（SEQID NO:4）的皮下注射，持续4周。一组5只小鼠接受PBS的皮下注射，持续4周。在开始给药之前和在处理2周和4周时采集血浆样品。
胆固醇和甘油三酯水平
通过Bligh和Dyer的方法（Bligh,E.G.和Dyer,W.J.Can.J.Biochem.Physiol.37:911-917,1959）提取血浆甘油三酯和胆固醇并利用商业上可获得的甘油三酯试剂盒（DCL甘油三酯试剂；DiagnosticChemicals Ltd.）进行测量。
小鼠中胆固醇和甘油三酯分析的结果呈现于表6至7中，并以mg/dL来表示。处理组中的胆固醇和甘油三酯水平与对照组中的相比较发生显著降低。胆固醇和TG水平的降低是ApoCIII的反义抑制的心血管有利作用且对于患有血脂异常疾病或处于患血脂异常疾病的风险中的动物可以是有利的。
表6
转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对胆固醇水平（mg/dL）的影响
周 PBS 化合物Y
0 1851 1747
2 2035 878
4 2359 686
表7
转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对甘油三酯水平（mg/dL）的影响
周 PBS 化合物Y
0 297 451
2 420 150
4 496 86
CETP蛋白水平和活性的抑制
利用商业上的ELISA试剂盒（ALPCO,目录号47-CETHU-E01）测量血浆CETP蛋白水平。利用荧光测定试剂盒（Roar Biomedical,Inc.目录号RB-CETP）测量CETP蛋白活性。如表8中所呈现的，利用反义寡核苷酸进行的处理降低了CETP蛋白表达和活性。CETP（胆固醇酯转移蛋白）有助于甘油三酯和胆固醇酯在高密度脂蛋白（HDL）和含apoB的脂蛋白，诸如极低密度脂蛋白（VLDL）、LDL和乳糜微粒之间的交换。CETP的降低与升高的HDL水平和降低的LDL水平相关（Barter P.J.等人.Artherioscler.Thromb.Vasc.Biol.23:160-167,2003）。因此，CETP蛋白水平和活性的抑制是ApoCIII的反义抑制的心血管有利作用且对于患有血脂异常疾病或处于患血脂异常疾病的风险中的动物可以是有利的。如所预料的，对照寡核苷酸对CETP不具有任何显著影响。
表8
转基因小鼠中CETP蛋白的抑制百分比
水平 活性
化合物Y 24 24
ISIS141923 0 3
apoA1蛋白水平和对氧磷酶-1（PON1）活性的升高
通过ELISA测量了血浆ApoA1蛋白水平。利用
Figure BDA0000417096850000851
对氧磷酶荧光测定试剂盒（Invitrogen,目录号E33702）测量了PON1蛋白活性。如表9和表10中呈现的，利用反义寡核苷酸进行的处理增强了ApoA1蛋白表达并升高了PON1蛋白活性。ApoA1和PON1是血浆中HDL的主要蛋白成分（Aviram,M和Rosenblat,M.Curr.Opin.Lipidol.16:393-399,2005）。因此，该两种蛋白组分的蛋白水平和活性的增强是ApoCIII的反义抑制的心血管有利作用且对于患有血脂异常疾病或处于患血脂异常疾病的风险中的动物可以是有利的。如所预料的，对照寡核苷酸对任一蛋白不具有任何影响。
表9
转基因小鼠中APOA1蛋白水平的升高百分比
mg/dL
PBS 65
化合物Y 211
ISIS141923 106
表10
转基因小鼠中PON1蛋白活性的升高百分比
Figure BDA0000417096850000861
实施例4：CETP转基因LDL受体缺失小鼠中ApoCIII的反义抑制对HDL胆固醇清除的影响
在人CETP转基因LDLr-/-小鼠模型中进一步研究了化合物Y以检查ApoCIII反义抑制剂在高脂血症小鼠中对HDL胆固醇清除和代谢的影响。
处理
将人CETP转基因LDLr-/-小鼠维持在12小时光/暗循环下并随意地喂养西方饮食（来自脂肪的42%卡路里，0.2%胆固醇）。在开始实验之前使动物在研究设施中适应该饮食10天。在PBS中调制反义寡核苷酸（ASO）并通过经0.2微米过滤器进行过滤来灭菌。将寡核苷酸溶于0.9%的PBS中以用于注射。
将8周龄雄性小鼠分成3个处理组。一组的6只小鼠接受15mg/kg/周的剂量的化合物Y的皮下注射，持续6周。一组4只小鼠接受15mg/kg/周的剂量的对照寡核苷酸ISIS141923的皮下注射，持续6周。一组5只小鼠接受PBS的皮下注射，持续6周。
胆固醇和甘油三酯水平
通过Bligh和Dyer的方法（Bligh,E.G.和Dyer,W.J.Can.J.Biochem.Physiol.37:911-917,1959）提取血浆甘油三酯和胆固醇并利用商业上可获得的甘油三酯试剂盒（DCL甘油三酯试剂；DiagnosticChemicals Ltd.）进行测量。
小鼠中胆固醇和甘油三酯分析的结果呈现于表11中，并以mg/dL来表示。处理组中的胆固醇和甘油三酯水平与对照组中的相比较发生显著降低。胆固醇和TG水平的降低是ApoCIII的反义抑制的心血管有利作用且对于患有血脂异常疾病或处于患血脂异常疾病的风险中的动物可以是有利的。
表11
转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对胆固醇和甘油三酯水平（mg/dL）的影响
总胆固醇 甘油三酯
PBS 2188 641
化合物Y 1402 170
HDL清除
对来自所有组的小鼠通过尾静脉注射1×106dpm的3H-胆固醇醚(3H-CEth)标记的HDL。放射性标记的胆固醇醚在结构上与胆固醇相似，但其会在摄入它的组织中被捕捉到。因此，放射性标记的胆固醇醚从血浆中的清除和其在肝中的累积可用于评估对逆向胆固醇转运的影响。在注射后5分钟、1.5小时、3小时、6小时和24小时收集血浆样品并利用液体闪烁计算器计数放射活性。在24小时时，处死小鼠并收获肝脏。在2:1氯仿/甲醇中提取肝样品并在氮气下将提取物吹下，溶于闪烁混合液（cocktail）中并利用相同的液体闪烁计数器计数。
如表12中呈现的放射性标记的减少与HDL-Ceth从血浆中的清除相关。结果表明利用化合物Y进行的处理导致了HDL胆固醇从血浆中清除的速率增加。这与经化合物Y处理的小鼠的肝中的放射性标记的胆固醇醚的较多累积相关，如表13中所呈现。因此，数据表明这些转基因小鼠中的ApoCIII的抑制改善了逆向胆固醇转运，且因此将对患有心血管疾病的患者，诸如患有血脂异常疾病的患者具有有利作用。
表12
转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对血浆HDL胆固醇（0小时时计数的%）的影响
1.5小时 3小时 6小时 24小时
PBS 87 79 64 38
ISIS141923 84 82 69 39
化合物Y 78 71 57 25
表13
转基因小鼠中反义寡核苷酸处理对放射性标记的CEth的肝摄取的影响
Figure BDA0000417096850000881
实施例5：C57BL/6小鼠中人ApoCIII的反义抑制的作用与ApoCIII敲除的小鼠模型的比较
ApoCIII基因敲除的小鼠获自Jackson Laboratories（库存编号002057）并与经ApoCIII反义寡核苷酸处理的C57BL/6小鼠进行比较。在该研究中使用了化合物Z，其具有5-10-5MOE间隙体基序并靶向啮齿类ApoCIII序列（GenBank登录号NM_023114.3；SEQ ID NO:5）。
反义寡核苷酸处理
将C57BL/6小鼠维持在12小时光/暗循环下并喂养高脂肪饮食（Harland Teklab实验室食物#88137），持续一周。在PBS中调制反义寡核苷酸（ASO）并通过经0.2微米过滤器进行过滤来灭菌。将寡核苷酸溶于0.9%的PBS中以用于注射。基于总血浆胆固醇和甘油三酯水平将小鼠随机分组，每组6-8只小鼠。三组C57BL/6小鼠每周接受3.1mg/kg、6.3mg/kg或12.5mg/kg的剂量的化合物Z的腹膜内注射，持续6周的时间。一组C57BL/6小鼠每周接受PBS的腹膜内注射，持续6周时间。PBS组用作经寡核苷酸处理的组和ApoCIII基因敲除的小鼠相比较的对照。
在最终给药后两天，处死小鼠并收集器官。还检测了喂养正常鼠类食物的相似的组的小鼠。
肝甘油三酯
利用Olympus临床分析器（Hitachi Olympus AU400e,Melville,NY）测量肝甘油三酯。数据呈现于表14中且表明利用ApoCIII反义寡核苷酸处理的小鼠具有与ApoCIII基因敲除的小鼠不同的表型。经高剂量ApoCIII反义寡核苷酸处理的小鼠具有与PBS对照组相似的肝甘油三酯水平。ApoCIII基因敲除的小鼠中的肝甘油三酯水平比用ApoCIII反义寡核苷酸处理的或用PBS对照物处理的C57BL/6小鼠显著更高。因此，ApoCIII的反义抑制与ApoCIII基因敲除的小鼠模型相比较具有降低肝脂肪变性的风险的有利作用。
表14
肝甘油三酯水平（mg/g肝组织）
Figure BDA0000417096850000901
实施例6：C57BL/6小鼠中ApoCIII的体内反义抑制的作用
评估了ApoCIII的反义抑制对血浆脂质水平和脂肪清除的影响。
处理
将雄性C57/BL6小鼠维持在12小时光/暗循环下并随意地喂养西方饮食（Harland Tekland88137）。在实验开始之前使动物在研究设施中适应至少7天。在PBS中调制反义寡核苷酸（ASO）并通过经0.2微米过滤器进行过滤来灭菌。将寡核苷酸溶于0.9%的PBS中以用于注射。
每组7-8只小鼠的组接受12.5mg/kg/周的剂量的化合物Z的腹膜内注射，持续6周。另一组小鼠接受12.5mg/kg/周的剂量的对照寡核苷酸ISIS141923的腹膜内注射，持续6周。第三组小鼠接受PBS的腹膜内注射，持续6周。在最终给药后两天，使小鼠禁食4小时，处死并收集血浆和组织。
ApoCIII mRNA的抑制
从肝和小肠中提取总RNA并利用ApoCIII引物探针组通过RT-PCR对ApoCIII mRNA进行定量并关于亲环蛋白标准化。结果呈现于表15中，表示为与PBS对照组相比较ApoCIII mRNA的抑制百分比。ISIS141923不会导致ApoCIII mRNA水平的任何降低，与预料的一样。数据表明了与PBS对照组相比较化合物Z在肝和小肠中对ApoCIII mRNA的显著抑制。
肠ApoCIII表达的抑制在乳糜微粒血症的预防中可能是重要的（Chait等人,1992,Adv Intern Med.1992,37:249-73），乳糜微粒血症是由乳糜微粒甘油三酯的不适当的清除导致的血脂异常状态。乳糜微粒血症的严重形式会导致危及生命的病症——胰腺炎。通过抑制肠ApoCIII，对脂蛋白脂肪酶的抑制将被减低，且乳糜微粒甘油三酯清除率将得以提高，从而预防胰腺炎。此外，肠ApoCIII的抑制将增强餐后甘油三酯的清除，从而降低餐后TG，它为冠心病的已知风险因子。
表15
相对于PBS对照组对ApoCIII mRNA的抑制百分比
抑制%
肝 74
小肠 13
胆固醇和甘油三酯水平
通过Bligh和Dyer的方法（Bligh,E.G.和Dyer,W.J.Can.J.Biochem.Physiol.37:911-917,1959）提取血浆胆固醇并利用Olympus临床分析器（Hitachi Olympus AU400e,Melville,NY）进行测量。通过HPLC单独地测量HDL和非HDL胆固醇。利用商业上可获得的甘油三酯试剂盒（DCL甘油三酯试剂；Diagnostic Chemicals Ltd.,Charlottetown,Canada）测量甘油三酯水平。结果呈现于表16中，并以mg/dL来表示。利用化合物Z进行的处理导致了总胆固醇、非HDL胆固醇和血浆甘油三酯水平与PBS对照组相比较有显著降低。总胆固醇、非HDL胆固醇和TG水平的降低是ApoCIII的反义抑制的心血管的有利作用且对于患有血脂异常疾病或处于患血脂异常疾病的风险中的动物可以是有利的。
表16
C56BL/6小鼠中的血浆胆固醇和甘油三酯水平（mg/dL）
Figure BDA0000417096850000921
脂肪清除
在注射后30分钟、1小时、2小时、3小时和4小时时收集血浆样品并利用Olympus临床分析器（Hitachi Olympus AU400e,Melville,NY）测量血浆总脂质含量。如表17中所呈现的血浆中的脂质水平是脂质从血浆中清除的逆指标。结果表明利用化合物Z进行的处理导致脂肪从血浆中清除的速率升高。
因此，数据表明这些转基因小鼠中的ApoCIII的抑制改善了逆向胆固醇转运并将对患有心血管疾病的患者具有有利作用。
表17
C57BL/6小鼠中反义寡核苷酸处理对血浆脂质（mg/dL）的影响
实施例7：C57BL/6小鼠中ApoCIII的体内反义抑制的作用
评估了ApoCIII的反义抑制对ApoCIII表达水平和脂肪清除的影响。
处理
将雄性C57/BL6小鼠维持在12小时光/暗循环下并随意地喂养西方饮食（Harland Tekland88137）。在实验开始之前使动物在研究设施中适应至少7天。在PBS中调制反义寡核苷酸（ASO）并通过经0.2微米过滤器进行过滤来灭菌。将寡核苷酸溶于0.9%的PBS中以用于注射。
每组5只小鼠的组接受12.5mg/kg/周的剂量的靶向ApoCIII的反义寡核苷酸化合物Z的腹膜内注射，持续6周。另一组小鼠接受12.5mg/kg/周的剂量的对照寡核苷酸ISIS141923的腹膜内注射，持续6周。在最终给药后两天，使小鼠禁食过夜，并通过口服强饲施用200μL的橄榄油的大丸剂。在大丸剂之后，以规律的时间间隔测量血浆甘油三酯水平，持续4小时。处死小鼠并收集血浆和组织。
ApoCIII mRNA的抑制
从肝和小肠中提取总RNA并利用ApoCIII引物探针组通过RT-PCR对ApoCIII mRNA进行定量并关于亲环蛋白标准化。结果呈现于表18中，表示为与寡核苷酸对照组相比较ApoCIII mRNA的抑制百分比。数据表明了与寡核苷酸对照组相比较化合物Z在肝和小肠中对ApoCIII mRNA的显著抑制。
如本文中别处所观察的，肠ApoCIII表达的抑制在乳糜微粒血症的预防中可能是重要的（Chait等人,1992,Adv Intern Med.1992,37:249-73），乳糜微粒血症是由乳糜微粒甘油三酯的不适当的清除导致的血脂异常状态。乳糜微粒血症的严重形式会导致危及生命的病症——胰腺炎。通过抑制肠ApoCIII，对脂蛋白脂肪酶的抑制将被减低，且乳糜微粒甘油三酯清除率将得以提高，从而预防胰腺炎。此外，肠ApoCIII的抑制将增强餐后甘油三酯的清除，从而降低餐后TG，它为冠心病的已知风险因子。
表18
相对于经对照寡核苷酸处理的C57/BL/6小鼠ApoCIII mRNA的抑制百分比
Figure BDA0000417096850000941
脂肪清除
在注射后0分钟、30分钟、60分钟、120分钟、180分钟和240分钟时收集血浆样品并利用Olympus临床分析器（Hitachi OlympusAU400e,Melville,NY）测量血浆甘油三酯含量。结果表明利用化合物Z进行的处理导致甘油三酯从血浆中清除的速率升高。
可将该研究与脂肪大丸剂临床研究相比较，在后者中表达高apo-CIII水平的患者表现出升高的餐后TG浓度（Petersen K.F.等人,NEngl J Med2010;362:1082-1089）。
表19
C57BL/6小鼠中反义寡核苷酸处理对餐后血浆TG（mg/dL）的影响
Figure BDA0000417096850000942
实施例8：C57BL/6小鼠中ApoCIII的体内反义抑制的作用
评估了ApoCIII的反义抑制对脂肪清除的影响。
处理
将雄性C57/BL6小鼠维持在12小时光/暗循环下并随意地喂养西方饮食（Harland Tekland88137）。在实验开始之前使动物在研究设施中适应至少7天。在PBS中调制反义寡核苷酸（ASO）并通过经0.2微米过滤器进行过滤来灭菌。将寡核苷酸溶于0.9%的PBS中以用于注射。
每组6只小鼠的组接受12.5mg/kg/周、6.3mg/kg/周或3.1mg/kg/周的剂量的靶向ApoCIII的反义寡核苷酸化合物Y或化合物Z的腹膜内注射，持续6周。另一组小鼠接受12.5mg/kg/周的对照寡核苷酸ISIS141923的腹膜内注射，持续6周。另一组小鼠接受PBS的腹膜内注射，持续6周。在最终给药后两天，使小鼠禁食过夜，并通过口服强饲施用200μL的橄榄油的大丸剂。在大丸剂之后，以规律的时间间隔测量血浆甘油三酯水平，持续4小时。
脂肪清除
在注射后0分钟、30分钟、60分钟、120分钟、180分钟和240分钟时收集血浆样品并利用Olympus临床分析器（Hitachi OlympusAU400e,Melville,NY）测量血浆甘油三酯浓度。结果表明利用化合物Y和化合物Z进行的处理导致脂肪从血浆中清除的速率升高。N.d.表明该数据组未被计算出来。
可将该研究与脂肪大丸剂临床研究相比较，在后者中表达高apo-CIII水平的患者表现出升高的餐后TG浓度（Petersen K.F.等人,NEngl J Med2010;362:1082-1089）。
表20
C57BL/6小鼠中反义寡核苷酸处理对餐后血浆TG（mg/dL）的影响
Figure BDA0000417096850000961
实施例9：高甘油三酯血症的猴模型中靶向人ApoCIII的ISIS反义寡核苷酸的作用
利用ISIS304801处理以高果糖饮食维持的恒河猴。评估反义寡核苷酸效力和耐受性以及药理学效应。
处理
猴为2-4岁且体重在2和5kg之间。将猴分到6组，每组随机分配5只雄性恒河猴。每天两次向组1-4中的每只猴提供约60g的饮食（批准的灵长类饮食#5048,PMI Nutrition International,Inc.）。在施用反义寡核苷酸之前在早晨供应适当的果糖补充物（即，约15%Kool
Figure BDA0000417096850000962
混合物），持续16周。为了确定足够的甘油三酯水平升高，在给药前1-2周从所有动物中收集血液样品以用于血清化学。
利用适当大小的不锈钢给药注射针和注射器利用ISIS寡核苷酸或PBS皮下注射各组猴子，注射到猴的背部的4个部位之一；每次给药以顺时针方式使用每个部位。在第一周（第1天、第3天和第5天），对一些组一周给药三次作为负荷剂量，且随后在第2-12周一周两次施用5mg/kg、10mg/kg或20mg/kg的ISIS304801。对每组5只恒河猴的两个对照组，在第一周（第1天、第3天和第5天）皮下注射PBS，一周三次，且随后在第2-12周一周两次。给药图显示于表21中。在第86天处死组1-4的猴。
将另外的高脂肪冲击物以鲜奶油奶昔的形式施用于组5和6的猴。将奶昔标准化以由782卡路里/m2体表组成，其中77.6%的卡路里来自脂肪、19.2%来自碳水化合物且3.1%来自蛋白。将组5和6的猴禁食过夜并通过胃管在第84天施用一次奶昔。在脂肪负荷的摄取之前（时间=0小时）和摄取后1、2、3、4和6小时抽血以评估甘油三酯偏差。在脂肪冲击后6小时期间使猴静息或维持禁食。在第87天处死该组的猴。
表21
高果糖饮食的恒河猴的组
Figure BDA0000417096850000971
肝靶标降低
RNA分析
处死时从组1-4中收集约150mg的肝以用于ApoCIII mRNA分析。将肝分成2块并浸入到含RLT缓冲液加上1%β-巯基乙醇的两个管中。将组织匀化并通过RT-PCR分析定量ApoCIII表达。如表22中所示，利用ISIS304801进行的处理导致了与PBS对照组相比较ApoCIII mRNA有显著降低。
表22
相对于PBS对照组恒河猴肝中的ApoCIII mRNA的抑制百分比
蛋白分析
从组1-4中的所有研究动物收集约1.5mL的血液并置于含K2-EDTA的管中，然后离心以进行血浆分离。利用商业上可获得的浊度分析测定（Kamiya Biomedical Co.,Seattle,WA）在临床分析器上定量ApoCIII蛋白水平。如表23中所示，利用ISIS304801进行的处理导致了与PBS对照组相比较ApoCIII蛋白水平的显著降低。还分析了ApoCIII蛋白水平降低的动力学并呈现于表24中。
表23
相对于PBS对照组恒河猴中的ApoCIII血浆蛋白水平的抑制百分比
Figure BDA0000417096850000982
表24
在不同的天数相对于PBS对照组恒河猴中的ApoCIII血浆蛋白水平（mg/dL）
组 剂量 第-7天 第16天 第30天 第86天
(mg/kg/周)
1 - 4.0 5.5 3.8 5.7
2 10 4.8 3.2 0.2 1.5
3 20 4.5 3.8 0.9 1.6
4 40 5.2 2.9 0.0 0.6
脂蛋白颗粒分析
为了建立血浆ApoCIII抑制的动力学，在开始给药之前7天以及在给药期间的第16天、第30天和第86天收集血浆样品。对样品进行NMR脂蛋白颗粒分析（Liposcience,Raleigh,NC）。由于处理组（组2-4）之间的ApoCIII降低无显著差异，仅呈现了对组2（接受10mg/kg/周的处理组）的分析。数据呈现于表25和26中。
在第30天在处理组的总血浆甘油三酯（TG）和VLDL和乳糜微粒TG方面观察到了自基线起统计学上显著的平均改变。同时对照猴展示了相同参数的平均升高。在这些喂养果糖的猴中利用ISIS304801进行的持续处理导致了HDL胆固醇颗粒数目的时间依赖性升高，升高了约8μmol/L（表27），且在这些研究中不产生LDL胆固醇的升高（表28）。在12周处理时间期间相对于PBS对照组，LDL胆固醇颗粒量无显著变化。
在处死时，利用Bligh和Dyer提取方法（Bligh,E.G.和Dyer,W.J.Can.J.Biochem.Physiol.,1959;37:911-917）提取肝脏并利用Wako色度计TG测定进行定量。在任一处理组中相对于PBS对照组ApoCIII的反义抑制不会增加肝TG累积（表29）。
表25
在不同的天数恒河猴中自基线血浆TG（mg/dL）的改变
Figure BDA0000417096850000991
表26
在不同的天数恒河猴中自基线VLDL和乳糜微粒TG（mg/dL）的改变
表27
在不同的天数恒河猴中自基线HDL胆固醇颗粒（μmol/L）的改变
Figure BDA0000417096850001002
表28
在不同的天数恒河猴中的总LDL胆固醇颗粒数（nmol/L）
表29
在HTG恒河猴中在12周之后PBS对照组和ISIS304801群体中的肝甘油三酯含量
Figure BDA0000417096850001011
餐后血浆TG清除
在第10周，在向猴提供膳食后0小时、1小时、2小时、3小时和4小时时测量来自10mg/kg/周组（组2）的猴的餐后血浆TG水平。如表30和31中所示，餐后血浆TG清除率发生显著升高，如10mg/kg/周的猴的餐后TG曲线下面积（AUC）的38%降低所示。
在12周还评估了组5和组6（脂肪冲击后的PBS对照组和40mg/kg/周组）中的餐后TG清除。数据呈现于表32中，且还表明了与对照组相比较该组的猴的餐后TG曲线下面积（AUC）的显著降低。
表30
恒河猴中的血浆TG（mg/dL）
Figure BDA0000417096850001012
表31
恒河猴中的餐后TG曲线下面积（AUC）
AUC
PBS 610
ISIS304801 376
表32
脂肪冲击后的恒河猴中的餐后TG曲线下面积（AUC）
AUC
PBS 613
ISIS304801 405
在第10周10mg/kg/周组中的猴比PBS组具有较低的空腹血浆TG水平。非人灵长类中的结果表明ApoCIII的反义抑制代表着在血脂异常个体中降低血浆TG和VLDL的有吸引力的治疗策略，且处理可同时升高HDL-C水平而对LDL-C无不利作用。
实施例10：ISIS304801I期临床试验
在双盲的、单一递增剂量和多重递增剂量（SAD和MAD）1期研究中，将年龄为18-55岁的健康受试者以3:1比率随机分配以接受ISIS304801或安慰剂（生理盐水）。
在研究中心对SAD受试者施用50、100、200或400mg（n=4/群体）的单次皮下（SC）注射。在第4天和第8天（±24小时窗口）使受试者返回到研究中心进行门诊访问以取得血液样品并进行临床评估。对受试者进行随访，直至第15天，此时通过电话访谈对其进行评估。
在研究中心对MAD受试者施用50、100、200或400mg的多次SC注射。第一周（第1天、第3天和第5天）受试者接受3个剂量的负荷方案，然后每周施用一次，持续3周（第8天、第15天和第22天）。在最终剂量的研究药物之后，随访受试者8周。在第29天、第36天和第50天（±24小时窗口）使受试者返回到研究中心进行门诊访问以进行安全和临床实验室评估并取得血液样品以用于PK分析。对受试者进行随访，直至第78天（±7天窗口），此时通过电话访谈对其进行评估。
MAD受试者在第-1天至第6天和第22天至第23天留在研究中心，在那里向其提供表33中所示的饮食。在第5、8、15、22、23、29、36、43和50天（±24小时窗口）使受试者禁食至少12小时，然后采集血样以进行评估。
表33
研究中心患者饮食
Figure BDA0000417096850001031
Figure BDA0000417096850001041
Figure BDA0000417096850001051
结果
总之，ISIS304801展示了良好的安全性特征并在所有受试者中是良好耐受的，无临床上有意义的转氨酶评估结果和无显著的不利事件。
MAD群体的基线特征显示于表34中。MAD受试者显示了总apoC-III和TG水平的剂量依赖性持续降低，在表35-36中表示为自基线起的改变百分比。
表34
MAD群体的基线特征
Figure BDA0000417096850001061
符合方案群体。所呈现的值为中值。
表35
血清ApoCIII的剂量依赖性延长的降低：ApoCIII自基线起的中值变化%
研究的天数 安慰剂 50mg 100mg 200mg 400mg
第5天 38.6 33.4 -4.5 -10.8 -42.6
第8天 31.9 17.8 -5.2 -36.0 -78.6
第15天 0.0 -22.1 -24.0 -54.1 -79.8
第22天 11.7 -20.9 -21.0 -61.7 -86.4
第23天 15.8 -15.6 -11.9 -58.7 -79.0
第29天 -11.0 -19.7 -17.3 -70.5 -77.5
第36天 1.9 -26.6 -32.1 -57.3 -69.5
第50天 16.4 21.9 -3.9 -63.0 -78.6
表36
甘油三酯的剂量依赖性降低：甘油三酯自基线起的中值变化%
研究的天数 安慰剂 50mg 100mg 200mg 400mg
第5天 78.5 50.0 15.9 -15.6 -7.7
第8天 34.9 17.7 -24.5 -31.8 -38.5
第15天 21.2 -27.4 -12.8 -50.8 -46.2
第22天 12.2 -18.3 -9.8 -25.1 -53.8
第23天 51.8 -4.0 1.1 -41.0 -44.2
第29天 28.5 -19.5 -25.0 -43.1 -43.8
第36天 15.4 -33.1 -34.8 -17.9 -36.5
第50天 33.1 48.8 -23.9 -48.2 -48.1
在50、100、200和400mg多剂量组中自基线值起的中值改变百分比分别显示了最终给药后一周（第29天）总apo-CIII的20、17、71和78%的降低和TG的20、25、43和44%的降低。较高剂量组中的降低持续最终给药之后的至少4周。
在第5天和第23天，安慰剂组TG水平达到波峰，与受试者过夜留在研究中心符合。认为由研究中心提供的饮食导致了过夜留在研究中心的受试者中的TG水平的激增。ISIS304801以剂量依赖性方式降低了TG波峰。在一种方式中，本文所显示的结果表明了ISIS304801对TG的餐后影响（不过在12小时禁食后评估了TG水平），因为饮食诱导的TG的激增被ISIS304801以剂量依赖性方式降低。
LDL-C值未发生改变（数据未示出），而HDL-C值倾向于以处理依赖性方式升高，如表37中所示。
表37
对HDL-C无有害作用
研究的天数 安慰剂 50mg 100mg 200mg 400mg
第5天 -5.9 7.7 -3.1 -3.2 -16.1
第8天 2.1 2.4 0.0 -11.1 -2.9
第15天 -2.8 4.8 10.9 4.7 -9.7
第22天 -0.6 4.8 8.7 11.6 -2.0
第23天 0.7 7.1 12.5 19.4 -1.6
第29天 2.1 19.0 0.0 13.9 8.0
第36天 0.0 23.8 8.8 13.9 1.6
第50天 -4.8 16.7 5.9 25.0 14.5
实施例11：ISIS304801II期临床试验
计划了一项随机的、双盲的、安慰剂对照的剂量反应研究以评估ISIS304801对比安慰剂对与VLDL水平相关联的空腹apoC-III的剂量/反应药效效应。要评估的另外的终点包括：ISIS304801对比安慰剂对以下的药效效应：空腹总apoC-III、TG、apoC-II（总体的和与VLDL相关的）、载脂蛋白B-100（apoB-100）、载脂蛋白A-1（apoA-1）、载脂蛋白A-2（apoA-2）、载脂蛋白E（apoE）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）、LDL-TG、VLDL-C、VLDL-TG、非高密度脂蛋白-胆固醇（非-HDL-C）、非HDL-TG、HDL-C、HDL-TG、乳糜微粒-C（CM-C）、CM-TG、游离脂肪酸（FFA）和甘油水平；研究中的患者亚组中的餐后脂质、载脂蛋白和脂蛋白特性和动力学和葡萄糖水平，并在另一亚组的患者（将与经历餐后评估的那些不同的患者）中评估了更广泛的PK；和ISIS304801的安全性、耐受性和PK。
对于每个患者，参与时间由以下组成：≤5-周筛选期（其包括资格验证期间运行的4周严格饮食控制）、1周研究资格验证/基线评估时期、13周治疗期和13周治疗后评估期，总共32周的研究参与。贯穿研究的全部时期，伴随药物治疗和有害事件（AE）将被记录。
患者将为至少18岁并在筛选时空腹TG≥500mg/dL，且在严格饮食控制运行的4周之后空腹TG≥300mg/dL且≤2000mg/dL。
对该研究计划了72名患者。每剂量群体（100、200、300mg）将计划有24位患者，其中每群体18位ISIS304801（活性物）患者和6位安慰剂患者。合格的患者将平均地（1:1）进入到非广泛PK/餐后组（组1）或广泛PK/餐后组（组2）中。组2中的患者将平均地（1:1）随机分配为广泛PK组（组2a）或餐后评估组（组2b）。组2a患者将平均地（1:1:1）随机分配为3个剂量群体（100、200、300mg）中之一，且在每个剂量群体内，按5:1接受活性物或安慰剂。组2b患者将平均地（1:1）随机分配为2个剂量群体（200、300mg）中之一，且在每个剂量群体内，按2:1接受活性物或安慰剂。组1患者将随机分配到剂量群体中并以实现对于剂量群体（100、200、300mg）以1:1:1和对于治疗（活性物、安慰剂）以3:1的整体研究随机化的方式进行治疗。
在研究参与的持续时间内使患者处于严格控制的饮食中（在进行筛选程序之后）。在受控饮食28天之后，患者将具有基线测量结果并对其进入研究的治疗期的资格进行评估。在试行饮食后符合进入标准的患者将平均地（1:1）进入非广泛PK/餐后组（组1）或进入广泛PK/餐后组（组2）且在其组分配内随机分配。
研究药物和治疗
将提供含于2mL塞好的玻璃小瓶中的ISIS304801（200mg/mL，1.0mL）的溶液。
该研究的安慰剂将是0.9%无菌盐水。
将通过非盲的药剂师（或有资格的代表）制备ISIS304801溶液和安慰剂。小瓶仅作一次使用。对于药物的身份不知情的受训练的专业人士将施用研究药物。在每个给药日，研究药物将作为SC注射施用于腹部、大腿或上臂的外部区域。100和200mg的剂量将作为单次SC注射来施用。300mg的剂量将作为两个相等的体积非连续的SC注射来施用。
患者将接受通过SC注射施用的13个剂量的研究药物，每周一次，持续13周（第1天、第8天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天、第50天、第57天、第64天、第71天、第78天和第85天）。
患者将在第1±0天和在±1天内的第8天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天、第50天、第57天、第64天、第71天、第78天和第85天完成治疗就诊。广泛PK组中的患者还将在第2天和第86±0天各自相对于第1天和第85天前往诊所就诊，以进行24小时抽血。患者将在计划的就诊日的±1天内的第92天和第99天、±3天内的第127天和±5天内的第176天完成随访就诊。餐后评估组中的患者还将在±2天内的第103天和第103天后一天前往诊所就诊，以进行24小时抽血。
在包括抽血以进行药效测量的每次就诊（第8天、第15天、第29天、第43天、第57天、第71天和第85天）之前，在就诊前将在晚间为患者提供标准化的预烹饪的晚饭（以保证每患者和每时间点相等适度的脂肪摄取），之后将其保持禁食。在这些临床就诊之前48小时将不允许食用酒精。
将在第8天、第15天、第29天、第43天、第57天、第71天和第85天（在研究药物施用之前）采集血液以测量VLDL apoC-III和其它药理学标志物。
在餐后评估前2天，餐后评估组中的患者将食用标准化的预烹饪的膳食（午餐和晚餐（提供的）和早餐和零食的指示）。在每个餐后评估日，在抽血之后，患者将食用标准化的液体膳食，这代表着约每日卡路里需求的三分之一，含稳定的放射性同位素示踪物，然后进行连续的血液取样。在食用液体膳食之后9小时患者将接受标准化的预烹饪的膳食，之后其将禁食直至第二天进行24小时抽血。
除槽式样品收集之外，广泛PK评估组中的患者在其第一次（第1-2天）和最后一次（第85-86天）施用研究药物之后24小时将经历连续的血液采样。
治疗后评估期
随访患者直至研究第176天。在此时过程中，患者将在研究的第92天、第99天、第127天和第176天（和对于餐后评估组中的患者在第103天）返回到研究中心进行门诊患者临床就诊以进行安全性和临床实验室评估（抽血）、饮食咨询和监测、合并用药使用记录和AE事件采集。
在整个治疗后评估期间将周期性地采集用于PK和PD分析的血液样品。在整个研究过程中的不同时间将进行血清化学、尿分析、凝血、补体、血液学、免疫功能、甲状腺功能和完整的脂质检测（full lipidpanel）的实验室测量。
餐后评估将如以下所描述在患者亚组中进行。
餐后膳食、取样计划和评估
脂蛋白代谢的餐后评估将利用补充有以声处理加入到液体膳食中的标记的示踪物3H-棕榈酸盐（300μCi,Perkin Elmer Inc.,Woodbridge,ON,Canada）的放射性标记的膳食来进行。棕榈酸盐是作为任何饮食中的常见组分的脂肪酸。3H-棕榈酸盐示踪物发出与X-射线等效的弱的放射性。由于饮食棕榈酸盐随着乳糜微粒在肠的肠上皮细胞中形成而掺入到其中，这能实现监测循环中新形成的乳糜微粒的出现和清除。用于研究乳糜微粒出现和清除的餐后动力学的方法已被成熟确立（Mittendorfer等.2003,Diabetes,52:1641-1648；Bickerton等，2007；Normand-Lauziere等.2010,PLoS.One,5:e10956）。
将提供含少量（300μCi）的放射性标记的脂肪酸（3H-棕榈酸盐）的液体膳食（与奶昔相似）。液体膳食将提供日常卡路里需求的约三分之一。在摄取饮食前1小时到摄取饮食后9小时，将如先前所描述（Normand-Lauziere等.2010,PLoS.One,5:e10956）施用[U-13C]-K棕榈酸盐（0.01μmol/kg/分钟于100ml25%人血清白蛋白中；Cambridge Isotopes Laboratories Inc.,Andover,MA）的稳定输注和[1,1,2,3,3-2H]-甘油（Cambridge Isotopes Laboratories Inc.）的采用引物（1.6μmol/kg）的连续输注（0.05μmol/kg/分钟）。血浆棕榈酸盐和甘油出现的速率将利用Steele氏非稳态等式来计算，假定分布体积分别为90ml/kg和230ml/kg（Gastaldelli等.1999,J Appl.Physiol,87:1813-1822）。
将在如下表中所注明的治疗期之前和之后的日期在摄取放射性标记的饮食之前和之后间隔性地抽取血液样品。将在9小时抽血之后给予参与者标准化的膳食。血液将收集在含Na2EDTA和奥利斯特（Orlistat）（30μg/ml,Roche,Mississauga,Canada）的管中以防止体外三酰基甘油脂肪分解且单独的样品将收集在NaF管中以用于血浆葡萄糖测定。
将在每个时间点对以下进行测量：
·3H-示踪物的血浆和CM级分水平
·血浆[U-13C]-K棕榈酸盐和[1,1,2,3,3-2H]-甘油出现速率
·TG、TC和apoB的血浆和CM级分水平
·apo CIII、apo CII和apo E的血浆和VLDL级分水平
·葡萄糖的血浆水平
血浆样品还用于描绘药物结合蛋白的特征、生物分析方法确证目的、稳定性和代谢物评估，或利用血浆成分来评估ISIS304801的其它作用。
Figure IDA0000417096880000011
Figure IDA0000417096880000021

Claims (85)

1.一种升高HDL水平或改善TG与HDL的比率的方法，其通过以下来进行：
(a)选择需要其的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
由此使HDL水平升高或TG与HDL的比率得到改善。
2.一种在动物中预防、延迟或改善心血管疾病、疾患、病症或其症状或心血管疾病、疾患、病症或其症状的发作的方法，其包括：
(a)选择需要其的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
从而在所述动物中升高HDL水平，其中所述心血管疾病、疾患、病症或症状或所述心血管疾病、疾患、病症或其症状得以预防、延迟或改善。
3.一种在动物中降低心血管疾病、疾患、病症或症状的风险的方法，其包括：
(a)选择需要其的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
从而在所述动物中升高HDL水平，其中所述心血管疾病、疾患、病症或其症状的风险被降低。
4.一种通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物来降低CETP水平的方法，其中CETP水平被降低。
5.一种升高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率和/或HDL的方法，其包括：
(a)选择需要其的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
其中ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率和/或HDL被升高。
6.一种预防、延迟或改善胰腺炎的方法，其包括：
(a)选择患有胰腺炎或处于胰腺炎风险中的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
其中所述胰腺炎得以预防、延迟或改善。
7.一种预防、延迟或改善胰腺炎的方法，其包括：
(a)选择患有胰腺炎或处于胰腺炎风险中的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
从而升高乳糜微粒清除率，其中所述胰腺炎得以预防、延迟或改善。
8.一种靶向ApoCIII的化合物，所述化合物通过以下步骤而用于升高HDL水平或改善TG与HDL的比率：
(a)选择需要其的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
由此使HDL水平升高或TG与HDL的比率得到改善。
9.一种靶向ApoCIII的化合物，所述化合物用于在动物中预防、延迟或改善心血管疾病、疾患、病症或其症状或心血管疾病、疾患、病症或其症状的发作，包括：
(a)选择需要其的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
从而在所述动物中升高HDL水平，其中所述心血管疾病、疾患、病症或症状或所述心血管疾病、疾患、病症或其症状的发作得以预防、延迟或改善。
10.一种靶向ApoCIII的化合物，所述化合物用于在动物中降低心血管疾病、疾患、病症或症状的风险，包括：
(a)选择需要其的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
从而在所述动物中升高HDL水平，其中所述心血管疾病、疾患、病症或其症状的风险被降低。
11.一种靶向ApoCIII的化合物，所述化合物用于通过向动物施用靶向ApoCIII的化合物来降低CETP水平，其中CETP水平被降低。
12.一种靶向ApoCIII的化合物，所述化合物用于升高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率和/或HDL，包括：
(a)选择需要其的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
其中ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率、餐后甘油三酯清除率和/或HDL被升高。
13.一种靶向ApoCIII的化合物，所述化合物用于预防、延迟或改善胰腺炎，包括：
(a)选择患有胰腺炎或处于胰腺炎风险中的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
其中所述胰腺炎得以预防、延迟或改善。
14.一种靶向ApoCIII的化合物，所述化合物用于预防、延迟或改善胰腺炎，包括：
(a)选择患有胰腺炎或处于胰腺炎风险中的动物，和
(b)向所述动物施用靶向ApoCIII的化合物，
从而升高乳糜微粒清除率，其中所述胰腺炎得以预防、延迟或改善。
15.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述动物患有高甘油三酯血症或处于高甘油三酯血症风险中。
16.如权利要求15所述的方法或用途，其中所述动物具有介于100-200mg/dL之间、100-300mg/dL之间、100-400mg/dL之间、100-500mg/dL之间、200-500mg/dL之间、300-500mg/dL之间、400-500mg/dL之间、500-1000mg/dL之间、600-1000mg/dL之间、700-1000mg/dL之间、800-1000mg/dL之间、900-1000mg/dL之间、500-1500mg/dL之间、1000-1500mg/dL之间、100-2000mg/dL之间、150-2000mg/dL之间、200-2000mg/dL之间、300-2000mg/dL之间、400-2000mg/dL之间、500-2000mg/dL之间、600-2000mg/dL之间、700-2000mg/dL之间、800-2000mg/dL之间、900-2000mg/dL之间、1000-2000mg/dL之间、1100-2000mg/dL之间、1200-2000mg/dL之间、1300-2000mg/dL之间、1400-2000mg/dL之间或1500-2000mg/dL之间的甘油三酯水平。
17.如权利要求15所述的方法或用途，其中所述高甘油三酯血症是Fredrickson II型、IV型或V型。
18.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述动物具有导致高甘油三酯血症的遗传缺陷。
19.如权利要求18所述的方法或用途，其中所述遗传缺陷是杂合的LPL缺陷或ApoCIII多态型。
20.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述动物具有≥500mg/dL的甘油三酯水平和杂合的LPL缺陷。
21.如权利要求5、7、12或14所述的方法或用途，其中所述升高的乳糜微粒清除率增强了餐后甘油三酯的清除和/或降低了餐后甘油三酯。
22.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中ApoCIII具有如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的核酸序列。
23.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述靶向ApoCIII的化合物是修饰的寡核苷酸。
24.如权利要求23所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO:3的核碱基序列的至少8个连续的核碱基的核碱基序列。
25.如权利要求23所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的核碱基序列80%互补。
26.如权利要求23所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的核碱基序列90%互补。
27.如权利要求23所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸的核碱基序列与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的核碱基序列100%互补。
28.如权利要求23-27中任一项所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸由单链的修饰的寡核苷酸组成。
29.如权利要求23-28中任一项所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成。
30.如权利要求29所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸由20个连接的核苷组成。
31.如权利要求23-30中任一项所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸的至少一个核苷间键是修饰的核苷间键。
32.如权利要求31所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸的每个修饰的核苷间键是硫代磷酸酯核苷间键。
33.如权利要求23-32中任一项所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含修饰的糖。
34.如权利要求33所述的方法或用途，其中至少一个修饰的糖是双环糖。
35.如权利要求33所述的方法或用途，其中至少一个修饰的糖包含2’-O-甲氧基乙基。
36.如权利要求23-33中任一项所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸的至少一个核苷包含修饰的核碱基。
37.如权利要求36所述的方法或用途，其中所述修饰的核碱基是5-甲基胞嘧啶。
38.如权利要求23所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)间隙区段，其由连接的脱氧核苷组成；
(b)5’翼状区段，其由连接的核苷组成；
(c)3’翼状区段，其由连接的核苷组成；
其中所述间隙区段紧邻所述5’翼状区段和所述3’翼状区段定位且位于两者之间，且其中每个翼状区段的每个核苷包含修饰的糖。
39.如权利要求23所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)间隙区段，其由8-12个连接的脱氧核苷组成；
(b)5’翼状区段，其由1-5个连接的核苷组成；
(c)3’翼状区段，其由1-5个连接的核苷组成；
其中所述间隙区段紧邻所述5’翼状区段和所述3’翼状区段定位且位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
40.如权利要求23所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)间隙区段，其由10个连接的脱氧核苷组成；
(b)5’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
(c)3’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
其中所述间隙区段紧邻所述5’翼状区段和所述3’翼状区段定位且位于两者之间，且其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键。
41.如权利要求38-40所述的方法或用途，其中所述修饰的寡核苷酸具有包含SEQ ID NO:3的核碱基序列的至少8个连续的核碱基的核碱基序列。
42.一种在动物中降低心血管疾病的风险的方法，其包括：向所述动物施用治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补，且其中施用于所述动物的所述化合物通过升高HDL水平来降低心血管疾病的风险。
43.一种在动物中降低心血管疾病或胰腺炎的风险的方法，其包括：向所述动物施用治疗有效量的包含修饰的寡核苷酸的化合物，所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成并具有包含SEQ IDNO:3的至少8个连续的核碱基的核碱基序列，且其中施用于所述动物的所述化合物通过升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率来降低心血管疾病或胰腺炎的风险。
44.一种在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，其包括：向所述动物施用治疗有效量的包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补，且其中施用于所述动物的所述化合物通过升高HDL水平而在所述动物中预防、治疗、改善或减少所述心血管疾病的至少一个症状。
45.一种在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，其包括：向所述动物施用治疗有效量的包含修饰的寡核苷酸的化合物，所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成并具有包含SEQ ID NO:3的至少8个连续的核碱基的核碱基序列，且其中施用于所述动物的所述化合物通过在所述动物中升高HDL水平而在所述动物中预防、治疗、改善或减少所述心血管疾病的至少一个症状。
46.一种包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补，所述化合物用于在动物中降低心血管疾病的风险，且其中所述化合物通过升高HDL水平来降低心血管疾病的风险。
47.一种包含修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成并具有包含SEQ ID NO:3的至少8个连续的核碱基的核碱基序列，所述化合物用于在动物中降低心血管疾病或胰腺炎的风险，其中所述化合物通过升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率来降低心血管疾病或胰腺炎的风险。
48.一种包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补，所述化合物用于在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状，且其中所述化合物通过升高HDL水平而在所述动物中预防、治疗、改善或减少所述心血管疾病的至少一个症状。
49.一种包含修饰的寡核苷酸的化合物，其中所述修饰的寡核苷酸由12至30个连接的核苷组成并具有包含SEQ ID NO:3的至少8个连续的核碱基的核碱基序列，所述化合物用于在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状，其中所述化合物通过在所述动物中升高HDL水平而在所述动物中预防、治疗、改善或减少所述心血管疾病的至少一个症状。
50.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述症状可以是以下中的任一项，但不限于：心绞痛；胸痛；气短；心悸；虚弱；眩晕；恶心；出汗；心动过速；心动过缓；心律失常；房颤；下肢肿胀；发绀；疲乏；昏厥；脸麻木；四肢麻木；跛行或肌肉痉挛；腹胀；或发烧。
51.一种在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的方法，所述方法通过向所述动物施用由SEQ ID NO:3组成的化合物以在所述动物中升高所述HDL水平和/或改善TG与HDL的所述比率来进行。
52.一种在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，所述方法通过向所述动物施用由SEQ ID NO:3组成的化合物以通过在所述动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而在所述动物中预防、治疗、改善或减少所述心血管疾病的至少一个症状来进行。
53.一种在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的方法，所述方法通过向所述动物施用具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸来进行，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)间隙区段，其由10个连接的脱氧核苷组成；
(b)5’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
(c)3’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
其中所述间隙区段紧邻所述5’翼状区段和所述3’翼状区段定位且位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键，其中所述修饰的寡核苷酸在所述动物中升高所述HDL水平和/或改善TG与HDL的所述比率。
54.一种在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，所述方法通过向所述动物施用具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸来进行，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)间隙区段，其由10个连接的脱氧核苷组成；
(b)5’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
(c)3’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
其中所述间隙区段紧邻所述5’翼状区段和所述3’翼状区段定位且位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键，其中所述修饰的寡核苷酸通过在所述动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而在患有所述心血管疾病的所述动物中预防、治疗、改善或减少至少一个症状。
55.一种在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率的方法，所述方法通过向所述动物施用包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物以在所述动物中升高所述HDL水平和/或改善TG与HDL的所述比率来进行，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补。
56.一种在动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状的方法，所述方法通过向所述动物施用包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物以通过升高所述动物的所述HDL水平和/或改善TG与HDL的所述比率而在所述动物中预防、治疗、改善或减少所述心血管疾病的至少一个症状来进行，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补。
57.一种降低CETP水平的方法，所述方法通过向动物施用具有包含SEQ ID NO:3的至少8个连续的核碱基的核碱基序列的化合物来进行，其中CETP水平被降低。
58.一种升高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL的方法，所述方法通过向动物施用具有包含SEQ IDNO:3的至少8个连续的核碱基的核碱基序列的化合物来进行，其中ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL被升高。
59.一种降低CETP水平的方法，所述方法通过向动物施用具有由SEQ ID NO:3组成的核碱基序列的化合物来进行，其中CETP水平被降低。
60.一种升高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL的方法，所述方法通过向动物施用由SEQ ID NO:3的至少8个连续的核碱基组成的化合物来进行，其中ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL被升高。
61.一种由SEQ ID NO:3组成的化合物，所述化合物用于在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率。
62.一种由SEQ ID NO:3组成的化合物，所述化合物用于通过在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而在所述动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状。
63.一种具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)间隙区段，其由10个连接的脱氧核苷组成；
(b)5’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
(c)3’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
其中所述间隙区段紧邻所述5’翼状区段和所述3’翼状区段定位且位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键，所述修饰的寡核苷酸用于在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率。
64.一种具有SEQ ID NO:3的序列的修饰的寡核苷酸，其中所述修饰的寡核苷酸包含：
(a)间隙区段，其由10个连接的脱氧核苷组成；
(b)5’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
(c)3’翼状区段，其由5个连接的核苷组成；
其中所述间隙区段紧邻所述5’翼状区段和所述3’翼状区段定位且位于两者之间，其中每个翼状区段的每个核苷包含2’-O-甲氧基乙基糖，其中每个胞嘧啶是5’-甲基胞嘧啶，且其中每个核苷间键是硫代磷酸酯键，所述修饰的寡核苷酸用于通过在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而在所述动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状。
65.一种包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，所述化合物用于在动物中升高HDL水平和/或改善TG与HDL的比率，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQ IDNO:2中所示的ApoCIII核酸互补。
66.一种包含由12至30个连接的核苷组成的修饰的寡核苷酸的化合物，所述化合物用于通过升高动物的HDL水平和/或改善TG与HDL的比率而在所述动物中预防、治疗、改善或减少心血管疾病的至少一个症状，其中所述修饰的寡核苷酸与如SEQ ID NO:1或SEQID NO:2中所示的ApoCIII核酸互补。
67.一种具有包含SEQ ID NO:3的至少8个连续的核碱基的核碱基序列的化合物，所述化合物用于在动物中降低CETP水平。
68.一种具有包含SEQ ID NO:3的至少8个连续的核碱基的核碱基序列的化合物，所述化合物用于在动物中升高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL。
69.一种具有由SEQ ID NO:3组成的核碱基序列的化合物，所述化合物用于在动物中降低CETP水平。
70.一种由SEQ ID NO:3的至少8个连续的核碱基组成的化合物，所述化合物用于在动物中升高ApoA1、PON1、脂肪清除率、乳糜微粒甘油三酯清除率或HDL。
71.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述动物是人。
72.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述心血管疾病是动脉瘤、心绞痛、心律失常、动脉粥样硬化、脑血管疾病、冠心病、高血压、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症或高胆固醇血症。
73.如权利要求72所述的方法或用途，其中所述血脂异常是乳糜微粒血症。
74.如权利要求73所述的方法或用途，其中所述动物处于胰腺炎风险中。
75.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中降低ApoCIII水平可预防、治疗或改善胰腺炎。
76.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中降低ApoCIII水平可增强餐后甘油三酯的清除。
77.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中降低ApoCIII水平可降低餐后甘油三酯。
78.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述化合物是胃肠外施用的。
79.如权利要求78所述的方法或用途，其中所述胃肠外施用是皮下施用。
80.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其还包含第二药剂。
81.如权利要求80所述的方法或用途，其中所述第二药剂选自：ApoCIII降低剂、胆固醇降低剂、非HDL脂质降低剂、LDL降低剂、TG降低剂、胆固醇降低剂、HDL升高剂、鱼油、烟酸、贝特、抑制素、DCCR（二氮嗪的盐）、降糖剂或抗糖尿病剂。
82.如权利要求81所述的方法或用途，其中所述动物不能对最大耐受剂量的所述第二药剂起反应。
83.如权利要求80所述的方法或用途，其中所述第二药剂是与所述化合物同时施用或相继施用的。
84.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其中所述化合物是盐形式。
85.如任一项前述权利要求所述的方法或用途，其还包含药学上可接受的载体或稀释剂。
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