CN103520256B - 一种高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，它是以药用的绞股蓝总皂苷药材为原料，采用连续逆流超声波提取、陶瓷膜微滤和大孔树脂吸附分离技术，结合传统溶剂回流提取原理，通过高效提取和分离，从而得到高纯度的目标产物--兽药用绞股蓝总皂苷，提高了产品纯度和得率，稳定了产品质量和高品质，降低了生产成本，达到了开发出高纯度兽药用绞股蓝总皂苷及其深加工产品的要求，并使生产过程符合环境保护要求，它通过技术的不断提升，调整工艺流程和技术参数，解决了兽药用绞股蓝总皂苷量产过程中所遇到的提取、溶剂回收、富集、纯化等工序的协调性方面的难点问题。

Description

一种高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法

技术领域

本发明涉及兽用药品，尤其是涉及一种高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法。

背景技术

绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Mak.的全草。我国绞股蓝资源极为丰富,是绞股蓝植物的原产地之一。

绞股蓝，又名五叶参、七叶胆，国外称甘蔓绞股蓝，属葫芦科多年生蔓草植物，长于山间阴湿的地方，味甘、无毒，皂甙的化学结构与人参类似，有“南方人参”之誉，在日本被誉为“福音草”。在民间，将绞股蓝用于治疗咳嗽、痰喘、慢性气管炎、传染性肝炎等疾病。1974年以来，日本学者从该植物中分离出50多种皂甙，其中4种与人参皂苷结构完全相同，11种完全相似。我国从1984年开始对绞股蓝的分布、资源进行调查、开发等工作。国内外的研究一致表明，绞股蓝具有抑制肿瘤细胞繁殖、抗疲劳、保肝、抗胃溃疡、调节脂质代谢等药理作用。

我国是绞股蓝总皂苷的生产和消费大国，每年销量达到20万吨左右，世界总量排名第1，但我国的人均绞股蓝总皂苷的消费水平不高，尤其是在兽药方面的使用，绞股蓝总皂苷在我国主要是用于高档保健绞股蓝茶和天然日用化妆品的原料和制剂产品，绞股蓝总皂苷有天然人参皂苷的美称，我国对于绞股蓝总皂苷的消费水平大约是发达国家对于对应产品消费水平的1/20、或世界平均消费水平的1/10。我国各类绞股蓝资源十分丰富,利用潜力巨大,开发绞股蓝总皂苷的应用有重要的现实意义和十分广阔的前景。

我国兽药用绞股蓝总皂苷的年总产量20万吨，绞股蓝粕的原料非常丰富，价格低廉，我国也利用兽药用绞股蓝总皂苷的开发了许多产品（如兽药用的绞股蓝总皂苷添加剂、绞股蓝总皂苷的洗面乳，液体皂、辅肤产品等）。江西省是我国兽药用绞股蓝总皂苷树的主产种植与绞股蓝油的主要产区之一。

兽药用的绞股蓝总皂苷有良好的药用价值，具有溶血、消炎、祛痰、抗真菌、抗突变的作用，可用作杀菌剂、杀虫剂、 利尿剂、提高兽群的免疫力作用等。正因如此作用，股蓝总皂苷已经引起人们广泛的关注。上世纪90年代末期, 国内兴起了对兽药用绞股蓝总皂苷的研究并有对应的产业化的研究扩大的发展趋势。

目前，工业上对兽药用绞股蓝总皂苷的提取主要有热水提取及溶剂抽提两种方法。热水提取法溶剂成本低廉，但产品含量不高，成分混合、色泽深，且能耗较高，单一的热水提取法产业化技术现已基本被淘汰；溶剂抽提法一般采用甲醇、或乙醇、正丁醇为抽提溶剂 ,能有效地提高产品的纯度，降低能耗，是如今生产中最常用的方法。但溶剂提取法使用大量溶剂，尽管溶媒可以回收循环使用，但是直接增加了生产成本，有时还存在溶液残留问题、环保问题等。这些不利因素限制了该产品的进一步开发利用。

兽药用绞股蓝总皂苷的传统提取技术先后经历了水提、含水乙醇、含水甲醇的提取工艺，从产品加工的成本， 所得产品质量都有了较大程度的提高，但从市场和经济效益的角度来看，仍不能令人满意。主要存在的问题是：产品质量差，皂苷含量低，纯度低，色泽深，并有大量的糖类、黄酮苷存在，大大限制了该产品的进一步开发应用。随着兽药用绞股蓝总皂苷的工业化提取及应用研究的发展,生产工艺也在不断改进,但至今未有大的突破，尤其是精制阶段的工艺,至今未有大的突破。

（1）水提法产品的得率为18.92%，一些可溶性的蛋白和多糖溶于热水中，因此使得产品纯度较低，一般为45%左右，但能满足低纯度要求的农药行业（作农药混配剂等）。

（2）水提醇沉法可获得较佳的产品质量，产品纯度为69%左右，比水提法所得产品的纯度高，但产品得率有所降低；工艺过程较复杂，乙醇耗量虽减少，但水提液浓缩时的能耗相应加大，另外设备投资费用也较高。

（3）醇提法获得的产品纯度虽较水提醇沉法有所降低，但无论从产品得率和皂苷提取率上都有所提高，且易进行连续化生产，此方法有一定优势。

（4）钙盐沉淀法是继其它金属盐 如铅盐、钡盐等）沉淀法后开始研究使用的方法，生产过程中克服了重金属污染的缺点，但是产品得率和纯度都不太理想，用盐酸溶液转溶沉淀时需要消耗大量的盐酸溶液，环境保护和污水的排放有问题。因此，目前该方法仍存在一定的局限性。

因此，继续深入研究产业化高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的提取与精制技术，要考虑的因素有提取率及残留量; 另一方面更重要的是节约生产成本和后续的纯化方法结合起来,以达到满意的产品纯度,并降低成本。

另外，兽药用的绞股蓝总皂苷由于味苦,偶见有溶血性和鱼毒性,限制了它的更多用途，因此至今尚未得到充分的开发利用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高产品纯度和得率、稳定产品质量、降低生产成本的高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：

一种高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，特征是：具体步骤如下：

A、干燥：先将绞股蓝药材洗净、晾干，经过初步筛选后，将绞股蓝药材送入干燥机中，经50℃-65℃的热风连续动态干燥至股蓝药材的水分低于10%；

B、粉碎将干燥后的绞股蓝药材进行粉碎，粉碎至中粗粉，粉碎的目数为10目—50目，得到绞股蓝药材粉末；

C、浸泡：按照绞股蓝药材粉末与乙醇的1∶6--8 W/V的比例加入70%的乙醇，即绞股蓝药材粉末用70%的乙醇溶液浸润，使得总体的含醇量达70%，室温低于15℃±1℃，浸泡时间为3小时，室温高于16℃±1℃，浸泡时间为2小时，注意密闭；

D、连续逆流超声提取：将浸泡后的绞股蓝药材粉末采取连续逆流超声提取，超声波的频率为15--50Hz，连续可调，超声波的提取时间为30分钟/次，滤过，分离溶媒和药渣，共提取3次，提取温度45℃～60℃，合并滤液，药渣弃之，经过分离得到提取液；药渣经挤干机和烘干系统连续回收乙醇溶剂后自动排出药渣；

E、第一次浓缩：提取液经过滤后进行减压双效浓缩回收乙醇至尽；提取液继续在负压为0.4-0.6Pa、温度为55℃±2℃的环境下减压，浓缩至每1ml相当于生药10.0g的浓缩液，在4℃中冷藏，静置12小时，吸取上清液，下层再进行高速离心澄清分离，合并滤液；

F、陶瓷膜分离：将滤液通过陶瓷膜进行微滤，得到有效地滤除大分子杂质的滤液；

G、大孔树脂纯化：将滤液泵入预先活化好的大孔吸附树脂柱中进行吸附富集，预先活化好的大孔吸附树脂柱应符合中性要求，从提取的上柱液中选择性地吸附皂苷成分，多次分别用水洗脱至无色、15%乙醇洗脱至基本无色，主要是洗去非皂苷类杂质，收集15%的乙醇液，回收乙醇；然后再用65%--75%的乙醇按照5-10%的级差梯度洗脱，将去杂后的总皂苷洗脱下来，经大孔吸附树脂纯化后的兽药用绞股蓝总皂苷的纯度经检测在85%以上；如果纯度不够规定的要求，应重新上柱分离，精制至合格才进入下一步骤；收集洗脱液，减压回收乙醇；

H、第二次浓缩：用70%的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，将去杂后的兽药用绞股蓝总皂苷洗脱下来，并将收集的洗脱液减压回收乙醇至尽，余液继续减压浓缩至60℃时测定相对密度为1.15-1.1.18的稠膏；

I、成品：将稠膏经加压送入至减压喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的进风口温度为115℃，出风口温度为85℃、压力位-60Pa，得到含水量为不超过5%的粉末，经检测：粉末中绞股蓝总皂苷的含量≥850mg/g，再分装、喷批号、外包装，即得兽药用绞股蓝总皂苷。

陶瓷膜的孔径为0.28-3.2微米，大孔吸附树脂的孔径为90A～100A、比表面积为500m2/g～550m2/g。

新购树脂常残存较多有机溶剂、低分子聚合物及有机杂质，使用前必须尽量除去，否则将影响树脂的使用寿命。因此，在步骤G中树脂要进行预处理，步骤如下：     A、新树脂预先用水洗净，漂洗至PH中性，水弃之；

B、漂洗后的树脂粒用2M的稀盐酸（HCl）浸泡24小时，再将树脂与酸水层分离，将酸洗后的树脂用水反复冲洗至PH中性，得到酸洗后的中性树脂，酸水层下次调整浓度另用；

C、将酸洗后的中性树脂再用2M的氢氧化钠（NaOH）溶液浸泡24小时，后将碱洗后的树脂与碱水层分离，碱洗后的树脂用水反复冲洗至PH中性，得到碱洗后的中性树脂，碱水层下次调整浓度另用；

D、采用水装法装入大孔吸附树脂柱中，排空气体，用水洗脱至中性，得到符合要求的预先活化好的大孔吸附树脂柱。

树脂再生的条件：当大孔吸附树脂柱中的树脂使用到一定的周期后，如果吸附效价下降到理论值的1/5，树脂需要再生。如希望阳离子树脂为H型、Na型或NH₄型，则可分别用盐酸、氢氧化钠或氢氧化铵处理；要使阴离子树脂为C1型、OH型，则可用盐酸或氢氧化钠分别处理。

大孔吸附树脂柱中的失效后的树脂的再生方法，步骤如下：

A、将失效后的树脂放在耐酸耐碱的塑料槽内，先用清水漂洗干净，滤干；      B、将滤干后的树脂用80%--90%的食用乙醇浸泡24小时，反复搅拌、翻动，洗去树脂内的表面吸附的脂溶性有机物，分离树脂和食用乙醇，然后树脂通过自然风进行抽干；

C、将步骤B中抽干后的树脂用40--50℃的热水浸泡2小时，洗去水溶性的吸附杂质，洗涤3次后，再通过14目的标准筛两次筛选的方法浮选或筛选出合格的树脂，目的是洗去树脂内的水溶性杂质和残破的树脂，剩下完整的树脂然后抽干；      D、将步骤C中抽干后的树脂用4倍于树脂量的2M/升盐酸溶液（W/W）浸泡处理2小时，经常翻动，目的是洗去酸溶性杂质；用去离子水或自来水洗至中性，抽干；      E、将步骤D中抽干后的树脂用4倍于树脂量的2摩尔/升的氢氧化钠溶液（W/W）浸泡2小时，经常翻动，目的是洗去碱溶性杂物；用去离子水或自来水洗至中性，抽干，得到再生后的树脂，可以采用水装法装入大孔吸附树脂柱中。      如果失效后的树脂是阴离子树脂，可转型为C1型或OH型，用盐酸按再生方法处理一次即可；如果失效后的树脂是阳离子树脂，可转为H型或Na型，用氢氧化钠按再生方法处理一次即可。      再生后的树脂的保存：将再生后的树脂保存于室温15—25度内。短期存放可置于1M盐酸或氢氧化钠溶液中。长期存放可加入防腐剂封存。遇到树脂长霉，可用1%甲醛浸泡1小时后，再漂洗干净，然后再按预处理的方法处理。

本发明是以药用的绞股蓝总皂苷药材为原料，采用连续逆流超声波提取、陶瓷膜微滤和大孔树脂吸附分离技术，结合传统溶剂回流提取原理，通过高效提取和分离，从而得到高纯度的目标产物--兽药用绞股蓝总皂苷，提高了产品纯度和得率，稳定了产品质量和高品质，降低了生产成本，达到了开发出高纯度兽药用绞股蓝总皂苷及其深加工产品的要求，并使生产过程符合环境保护要求，它通过技术的不断提升，调整工艺流程和技术参数，解决了兽药用绞股蓝总皂苷量产过程中所遇到的提取、溶剂回收、富集、纯化等工序的协调性方面的难点问题。

本发明采用了如下技术：

1、连续逆流超声提取：

连续逆流超声提取不仅实现了连续化作业、动态逆流提取，而且通过配备超声装置，在超声波的作用下，使得提取时间可缩短1/6～1/8，提取温度可降低30～40℃，能较好地保护兽药用绞股蓝总皂苷的有效成分，提取效率显著提高。

2、陶瓷膜分离：

兽药用绞股蓝总皂苷的分子质量在300～1000左右，大分子杂质如蛋白质类、聚糖类、黏糖类、黏液质等物质的分子质量在5000以上，选择孔径为0.28-3.2微米的MFS250无机陶瓷膜，能有效地滤除大分子杂质，脱色并纯化兽药用绞股蓝总皂苷。

3、大孔树脂纯化：

本项目选用D101型大孔吸附树脂（孔径为90A～100A、比表面积为500m2/g～550m2/g），从上柱液中选择性地吸附皂苷成分，然后多次分别用水洗脱、15%乙醇洗脱至基本无色，主要是洗去非皂苷类杂质，后再用70%乙醇将去杂后兽药用绞股蓝总皂苷洗脱下来。经大孔吸附树脂纯化后的兽药用绞股蓝总皂苷的纯度得到提高。

本发明具有如下优点：

1、连续逆流超声提取技术的应用，增大了兽药用绞股蓝浸提液与固体物料之间的接触面积，也增加了浓度梯度，较好地体现了动态多次浸取、连续浸取的思想，使连续逆流的扩散和平衡过程确保了最大的平衡极限，同时获得了较高的效率和浸出液浓度，总的效率相当于多个单次的扩散、平衡及分离阶段，能较好地保护兽药用绞股蓝总皂苷的有效成分，使有效成分提取效率显著提高；

2、总体耗能低，只有原传统提取方法的40—50%；

3、绞股蓝药材的烘干和溶剂回收技术能提高溶剂回收率，降低提取成本，实现安全生产

4、充分利用产品加工后的剩余物废渣，提高了兽药用绞股蓝总体的综合利用率。

5、具有浸出效率高，时间短，劳动强度低、生产能力大等特点。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例1：室温30度

一种高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，具体步骤如下：

A、干燥：先将绞股蓝药材洗净、晾干，经过初步筛选后，将绞股蓝药材送入干燥机中，经50℃-65℃的热风连续动态干燥至股蓝药材的水分低于10%；

B、粉碎将干燥后的绞股蓝药材进行粉碎，粉碎至中粗粉，粉碎的目数为10目—50目，得到绞股蓝药材粉末；

C、浸泡：按照绞股蓝药材粉末与乙醇的1∶6 W/V的比例加入70%的乙醇，即绞股蓝药材粉末用70%的乙醇溶液浸润，使得总体的含醇量达70%，浸泡时间为2小时，注意密闭；

D、连续逆流超声提取：将浸泡后的绞股蓝药材粉末采取连续逆流超声提取，超声波的频率为15--50Hz，连续可调，超声波的提取时间为30分钟/次，滤过，分离溶媒和药渣，共提取3次，提取温度45℃～60℃，合并滤液，药渣弃之，经过分离得到提取液；药渣经挤干机和烘干系统连续回收乙醇溶剂后自动排出药渣；

E、第一次浓缩：提取液经过滤后进行减压双效浓缩回收乙醇至尽；提取液继续在负压为0.4-0.6Pa、温度为55℃±2℃的环境下减压，浓缩至每1ml相当于生药10.0g的浓缩液，在4℃中冷藏，静置12小时，吸取上清液，下层再进行高速离心澄清分离，合并滤液；

F、陶瓷膜分离：将滤液通过陶瓷膜进行微滤，陶瓷膜的孔径为0.28-3.2微米，得到有效地滤除大分子杂质的滤液；

G、大孔树脂纯化：将滤液泵入预先活化好的大孔吸附树脂柱中进行吸附富集，预先活化好的大孔吸附树脂柱应符合中性要求，大孔吸附树脂的孔径为90A～100A、比表面积为500m2/g～550m2/g，从提取的上柱液中选择性地吸附皂苷成分，多次分别用水洗脱至无色、15%乙醇洗脱至基本无色，主要是洗去非皂苷类杂质，收集15%的乙醇液，回收乙醇；然后再用65%--75%的乙醇按照5-10%的级差梯度洗脱，将去杂后的总皂苷洗脱下来，经大孔吸附树脂纯化后的兽药用绞股蓝总皂苷的纯度经检测在85%以上；如果纯度不够规定的要求，应重新上柱分离，精制至合格才进入下一步骤；收集洗脱液，减压回收乙醇；

H、第二次浓缩：用70%的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，将去杂后的兽药用绞股蓝总皂苷洗脱下来，并将收集的洗脱液减压回收乙醇至尽，余液继续减压浓缩至60℃时测定相对密度为1.15-1.1.18的稠膏；

I、成品：将稠膏经加压送入至减压喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的进风口温度为115℃，出风口温度为85℃、压力位-60Pa，得到含水量为不超过5%的粉末，经检测：粉末中绞股蓝总皂苷的含量≥850mg/g，再分装、喷批号、外包装，即得兽药用绞股蓝总皂苷。

在步骤G中树脂要进行预处理，步骤如下：     A、新树脂预先用水洗净，漂洗至PH中性，水弃之；

B、漂洗后的树脂粒用2M的稀盐酸（HCl）浸泡24小时，再将树脂与酸水层分离，将酸洗后的树脂用水反复冲洗至PH中性，得到酸洗后的中性树脂，酸水层下次调整浓度另用；

C、将酸洗后的中性树脂再用2M的氢氧化钠（NaOH）溶液浸泡24小时，后将碱洗后的树脂与碱水层分离，碱洗后的树脂用水反复冲洗至PH中性，得到碱洗后的中性树脂，碱水层下次调整浓度另用；

D、采用水装法装入大孔吸附树脂柱中，排空气体，用水洗脱至中性，得到符合要求的预先活化好的大孔吸附树脂柱。

树脂再生的条件：当大孔吸附树脂柱中的树脂使用到一定的周期后，如果吸附效价下降到理论值的1/5，树脂需要再生。如希望阳离子树脂为H型、Na型或NH₄型，则可分别用盐酸、氢氧化钠或氢氧化铵处理；要使阴离子树脂为C1型、OH型，则可用盐酸或氢氧化钠分别处理。

大孔吸附树脂柱中的失效后的树脂的再生方法，步骤如下：

A、将失效后的树脂放在耐酸耐碱的塑料槽内，先用清水漂洗干净，滤干；      B、将滤干后的树脂用80%--90%的食用乙醇浸泡24小时，反复搅拌、翻动，洗去树脂内的表面吸附的脂溶性有机物，分离树脂和食用乙醇，然后树脂通过自然风进行抽干；

C、将步骤B中抽干后的树脂用40--50℃的热水浸泡2小时，洗去水溶性的吸附杂质，洗涤3次后，再通过14目的标准筛两次筛选的方法浮选或筛选出合格的树脂，目的是洗去树脂内的水溶性杂质和残破的树脂，剩下完整的树脂然后抽干；      D、将步骤C中抽干后的树脂用4倍于树脂量的2M/升盐酸溶液（W/W）浸泡处理2小时，经常翻动，目的是洗去酸溶性杂质；用去离子水或自来水洗至中性，抽干；      E、将步骤D中抽干后的树脂用4倍于树脂量的2摩尔/升的氢氧化钠溶液（W/W）浸泡2小时，经常翻动，目的是洗去碱溶性杂物；用去离子水或自来水洗至中性，抽干，得到再生后的树脂，可以采用水装法装入大孔吸附树脂柱中。      如果失效后的树脂是阴离子树脂，可转型为C1型或OH型，用盐酸按再生方法处理一次即可；如果失效后的树脂是阳离子树脂，可转为H型或Na型，用氢氧化钠按再生方法处理一次即可。      再生后的树脂的保存：将再生后的树脂保存于室温15—25度内。短期存放可置于1M盐酸或氢氧化钠溶液中。长期存放可加入防腐剂封存。遇到树脂长霉，可用1%甲醛浸泡1小时后，再漂洗干净，然后再按预处理的方法处理。

实施例2：室温10度

一种高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，具体步骤如下：

A、干燥：先将绞股蓝药材洗净、晾干，经过初步筛选后，将绞股蓝药材送入干燥机中，经50℃-65℃的热风连续动态干燥至股蓝药材的水分低于10%；

B、粉碎将干燥后的绞股蓝药材进行粉碎，粉碎至中粗粉，粉碎的目数为10目—50目，得到绞股蓝药材粉末；

C、浸泡：按照绞股蓝药材粉末与乙醇的1∶8 W/V的比例加入70%的乙醇，即绞股蓝药材粉末用70%的乙醇溶液浸润，使得总体的含醇量达70%，浸泡时间为3小时，注意密闭；

D、连续逆流超声提取：将浸泡后的绞股蓝药材粉末采取连续逆流超声提取，超声波的频率为15--50Hz，连续可调，超声波的提取时间为30分钟/次，滤过，分离溶媒和药渣，共提取3次，提取温度45℃～60℃，合并滤液，药渣弃之，经过分离得到提取液；药渣经挤干机和烘干系统连续回收乙醇溶剂后自动排出药渣；

E、第一次浓缩：提取液经过滤后进行减压双效浓缩回收乙醇至尽；提取液继续在负压为0.4-0.6Pa、温度为55℃±2℃的环境下减压，浓缩至每1ml相当于生药10.0g的浓缩液，在4℃中冷藏，静置12小时，吸取上清液，下层再进行高速离心澄清分离，合并滤液；

F、陶瓷膜分离：将滤液通过陶瓷膜进行微滤，陶瓷膜的孔径为0.28-3.2微米，得到有效地滤除大分子杂质的滤液；

G、大孔树脂纯化：将滤液泵入预先活化好的大孔吸附树脂柱中进行吸附富集，预先活化好的大孔吸附树脂柱应符合中性要求，大孔吸附树脂的孔径为90A～100A、比表面积为500m2/g～550m2/g，从提取的上柱液中选择性地吸附皂苷成分，多次分别用水洗脱至无色、15%乙醇洗脱至基本无色，主要是洗去非皂苷类杂质，收集15%的乙醇液，回收乙醇；然后再用65%--75%的乙醇按照5-10%的级差梯度洗脱，将去杂后的总皂苷洗脱下来，经大孔吸附树脂纯化后的兽药用绞股蓝总皂苷的纯度经检测在85%以上；如果纯度不够规定的要求，应重新上柱分离，精制至合格才进入下一步骤；收集洗脱液，减压回收乙醇；

H、第二次浓缩：用70%的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，将去杂后的兽药用绞股蓝总皂苷洗脱下来，并将收集的洗脱液减压回收乙醇至尽，余液继续减压浓缩至60℃时测定相对密度为1.15-1.1.18的稠膏；

I、成品：将稠膏经加压送入至减压喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的进风口温度为115℃，出风口温度为85℃、压力位-60Pa，得到含水量为不超过5%的粉末，经检测：粉末中绞股蓝总皂苷的含量≥850mg/g，再分装、喷批号、外包装，即得兽药用绞股蓝总皂苷。

在步骤G中树脂要进行预处理，步骤如下：     A、新树脂预先用水洗净，漂洗至PH中性，水弃之；

B、漂洗后的树脂粒用2M的稀盐酸（HCl）浸泡24小时，再将树脂与酸水层分离，将酸洗后的树脂用水反复冲洗至PH中性，得到酸洗后的中性树脂，酸水层下次调整浓度另用；

C、将酸洗后的中性树脂再用2M的氢氧化钠（NaOH）溶液浸泡24小时，后将碱洗后的树脂与碱水层分离，碱洗后的树脂用水反复冲洗至PH中性，得到碱洗后的中性树脂，碱水层下次调整浓度另用；

D、采用水装法装入大孔吸附树脂柱中，排空气体，用水洗脱至中性，得到符合要求的预先活化好的大孔吸附树脂柱。

树脂再生的条件：当大孔吸附树脂柱中的树脂使用到一定的周期后，如果吸附效价下降到理论值的1/5，树脂需要再生。如希望阳离子树脂为H型、Na型或NH₄型，则可分别用盐酸、氢氧化钠或氢氧化铵处理；要使阴离子树脂为C1型、OH型，则可用盐酸或氢氧化钠分别处理。

大孔吸附树脂柱中的失效后的树脂的再生方法，步骤如下：

A、将失效后的树脂放在耐酸耐碱的塑料槽内，先用清水漂洗干净，滤干；      B、将滤干后的树脂用80%--90%的食用乙醇浸泡24小时，反复搅拌、翻动，洗去树脂内的表面吸附的脂溶性有机物，分离树脂和食用乙醇，然后树脂通过自然风进行抽干；

C、将步骤B中抽干后的树脂用40--50℃的热水浸泡2小时，洗去水溶性的吸附杂质，洗涤3次后，再通过14目的标准筛两次筛选的方法浮选或筛选出合格的树脂，目的是洗去树脂内的水溶性杂质和残破的树脂，剩下完整的树脂然后抽干；      D、将步骤C中抽干后的树脂用4倍于树脂量的2M/升盐酸溶液（W/W）浸泡处理2小时，经常翻动，目的是洗去酸溶性杂质；用去离子水或自来水洗至中性，抽干；      E、将步骤D中抽干后的树脂用4倍于树脂量的2摩尔/升的氢氧化钠溶液（W/W）浸泡2小时，经常翻动，目的是洗去碱溶性杂物；用去离子水或自来水洗至中性，抽干，得到再生后的树脂，可以采用水装法装入大孔吸附树脂柱中。      如果失效后的树脂是阴离子树脂，可转型为C1型或OH型，用盐酸按再生方法处理一次即可；如果失效后的树脂是阳离子树脂，可转为H型或Na型，用氢氧化钠按再生方法处理一次即可。      再生后的树脂的保存：将再生后的树脂保存于室温15—25度内。短期存放可置于1M盐酸或氢氧化钠溶液中。长期存放可加入防腐剂封存。遇到树脂长霉，可用1%甲醛浸泡1小时后，再漂洗干净，然后再按预处理的方法处理。

Claims (5)

1.一种高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，其特征在于：步骤如下：

A、干燥：先将绞股蓝药材洗净、晾干，经过初步筛选后，将绞股蓝药材送入干燥机中，经50℃-65℃的热风连续动态干燥至股蓝药材的水分低于10%；

B、粉碎将干燥后的绞股蓝药材进行粉碎，粉碎至中粗粉，粉碎的目数为10目—50目，得到绞股蓝药材粉末；

C、浸泡：按照绞股蓝药材粉末与乙醇的1∶6--8 W/V的比例加入70%的乙醇，即绞股蓝药材粉末用70%的乙醇溶液浸润，使得总体的含醇量达70%，室温低于15℃±1℃，浸泡时间为3小时，室温高于16℃±1℃，浸泡时间为2小时，注意密闭；

D、连续逆流超声提取：将浸泡后的绞股蓝药材粉末采取连续逆流超声提取，超声波的频率为15--50Hz，连续可调，超声波的提取时间为30分钟/次，滤过，分离溶媒和药渣，共提取3次，提取温度45℃～60℃，合并滤液，药渣弃之，经过分离得到提取液；药渣经挤干机和烘干系统连续回收乙醇溶剂后自动排出药渣；

E、第一次浓缩：提取液经过滤后进行减压双效浓缩回收乙醇至尽；提取液继续在负压为0.4-0.6Pa、温度为55℃±2℃的环境下减压，浓缩至每1ml相当于生药10.0g的浓缩液，在4℃中冷藏，静置12小时，吸取上清液，下层再进行高速离心澄清分离，合并滤液；

F、陶瓷膜分离：将滤液通过陶瓷膜进行微滤，得到有效地滤除大分子杂质的滤液；

G、大孔树脂纯化：将滤液泵入预先活化好的大孔吸附树脂柱中进行吸附富集，预先活化好的大孔吸附树脂柱应符合中性要求，从提取的上柱液中选择性地吸附皂苷成分，多次分别用水洗脱至无色、15%乙醇洗脱至基本无色，主要是洗去非皂苷类杂质，收集15%的乙醇液，回收乙醇；然后再用65%--75%的乙醇按照5-10%的级差梯度洗脱，将去杂后的总皂苷洗脱下来，经大孔吸附树脂纯化后的兽药用绞股蓝总皂苷的纯度经检测在85%以上；如果纯度不够规定的要求，应重新上柱分离，精制至合格才进入下一步骤；收集洗脱液，减压回收乙醇；

H、第二次浓缩：用70%的乙醇洗脱大孔吸附树脂柱，将去杂后的兽药用绞股蓝总皂苷洗脱下来，并将收集的洗脱液减压回收乙醇至尽，余液继续减压浓缩至60℃时测定相对密度为1.15-1.1.18的稠膏；

I、成品：将稠膏经加压送入至减压喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的进风口温度为115℃，出风口温度为85℃、压力位-60Pa，得到含水量为不超过5%的粉末，经检测：粉末中绞股蓝总皂苷的含量≥850mg/g，再分装、喷批号、外包装，即得兽药用绞股蓝总皂苷。

2.根据权利要求1所述的高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，其特征在于：陶瓷膜的孔径为0.28-3.2微米，大孔吸附树脂的孔径为90A～100A、比表面积为500m2/g～550m2/g。

3.根据权利要求1所述的高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，其特征在于：在步骤G中树脂要进行预处理，步骤如下：      A、新树脂预先用水洗净，漂洗至PH中性，水弃之；

B、漂洗后的树脂粒用2M的稀盐酸浸泡24小时，再将树脂与酸水层分离，将酸洗后的树脂用水反复冲洗至PH中性，得到酸洗后的中性树脂，酸水层下次调整浓度另用；

C、将酸洗后的中性树脂再用2M的氢氧化钠溶液浸泡24小时，后将碱洗后的树脂与碱水层分离，碱洗后的树脂用水反复冲洗至PH中性，得到碱洗后的中性树脂，碱水层下次调整浓度另用；

D、采用水装法装入大孔吸附树脂柱中，排空气体，用水洗脱至中性，得到符合要求的预先活化好的大孔吸附树脂柱。

4.根据权利要求1所述的高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，其特征在于：大孔吸附树脂柱中的失效后的树脂的再生方法，步骤如下：

A、将失效后的树脂放在耐酸耐碱的塑料槽内，先用清水漂洗干净，滤干；      B、将滤干后的树脂用80%--90%的食用乙醇浸泡24小时，反复搅拌、翻动，洗去树脂内的表面吸附的脂溶性有机物，分离树脂和食用乙醇，然后树脂通过自然风进行抽干；

C、将步骤B中抽干后的树脂用40--50℃的热水浸泡2小时，洗去水溶性的吸附杂质，洗涤3次后，再通过14目的标准筛两次筛选的方法浮选或筛选出合格的树脂，目的是洗去树脂内的水溶性杂质和残破的树脂，剩下完整的树脂然后抽干；      D、将步骤C中抽干后的树脂用4倍于树脂量的2M/升盐酸溶液：W/W浸泡处理2小时，经常翻动，目的是洗去酸溶性杂质；用去离子水或自来水洗至中性，抽干；      E、将步骤D中抽干后的树脂用4倍于树脂量的2摩尔/升的氢氧化钠溶液：W/W浸泡2小时，经常翻动，目的是洗去碱溶性杂物；用去离子水或自来水洗至中性，抽干，得到再生后的树脂，采用水装法装入大孔吸附树脂柱中。

5.根据权利要求1所述的高纯度兽药用绞股蓝总皂苷的制备方法，其特征在于：再生后的树脂的保存：将再生后的树脂保存于室温15—25度内；短期存放置于1M盐酸或氢氧化钠溶液中；长期存放加入防腐剂封存；遇到树脂长霉，用1%甲醛浸泡1小时后，再漂洗干净，然后再按预处理的方法处理。