CN108403750A - 一种提取绞股蓝总甙的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种便捷、系统、集成化的提取绞股蓝总甙的方法，所述方法包括如下步骤：第1步：绞股蓝药材前处理；第2步：将绞股蓝粉放在乙醇中浸提，得到滤液；第3步：树脂预处理；第4步：柱层析，得到绞股蓝总甙粉末；第5步：采用树脂再生溶液将树脂所吸附的杂质洗脱除去，使其恢复原来的组成和性能。该方法具有药材前处理、浸提、树脂预处理、柱层析、树脂再生的无间断差别的分离配合过程，分离效率高、分离过程稳定、便于质控，通过部分环节的控制便可得到目标数量的绞股蓝总甙。

Description

一种提取绞股蓝总甙的方法
技术领域
本发明涉及中药材有效成分提取技术领域，具体涉及一种提取绞股蓝总甙的方法。
背景技术
绞股蓝总甙，具有降血脂、改善心肌缺血缺氧、脑缺血的保护、抗氧化等作用。养心健脾、益气和血、除痰化瘀，适用于高脂血症，见有心悸气短、胸闷肢麻、眩晕头痛、健忘耳鸣、自汗乏力、或脘腹胀满等心脾气虚，痰阻血瘀者。
绞股蓝总甙的药理作用：药物组成主要有绞股蓝总苷。有降血脂、抗血小板聚集、抗心肌缺血损伤、抗衰老等作用，具体如下：
1.降血脂：用高糖高脂饲料诱发大鼠高脂血症，给予绞股蓝总苷治疗(7天)，结果治疗组血清胆固醇、三酰甘油含量比对照组显著降低；其疗效与剂量呈线性关系。体外实验表明，绞股蓝总苷可抑制脂肪细胞分解形成游离脂肪酸、抑制脂肪细胞摄取葡萄糖合成中性脂肪酸。另外，该药在降低血脂同时，也能抗动脉粥样硬化，使动脉壁斑块形成减少，损伤减轻。
2.抗心肌缺血损伤：动物实验研究结果表明，绞股蓝总苷不但可缩小心肌梗死范围，而且可对抗心肌缺血后再灌注损伤(使心肌细胞排列整齐，结构清晰，线粒体肿胀减轻，空泡减少，细胞染色体均匀)。
3.抗血小板聚集：体外实验证明绞股蓝总苷明显抑制血小板聚集诱导剂(胶原、ADP、花生四烯酸)诱导的血小板聚集；超微结构观察可见血小板呈分散状，表面光滑，无伪足形成，细胞内颗粒多而清晰。
4.对血流动力学的影响：给犬静脉注射绞股蓝总苷(1mg/kg)，可见心血管呈兴奋作用，收缩压及舒张压均见升高(收缩压升高大于舒张压)，作用维持30分钟以上；心率变化不明显。另外可提高心肌收缩及舒张性能，使每分输出量增加，心肌血循环改善。加大剂量静注(20mg/kg)对心血管呈抑制作用(血压降低，心率变慢，心肌收缩及舒张性能降低，使输出量减少)。
5.增强性功能作用：绞股蓝提取物灌胃能使雄性小鼠的睾丸和前列腺、雌性小鼠子宫重量与对照组比较有明显增加，说明绞股蓝有雄性、雌性激素样作用。
6.增强体力及抗疲劳作用：(1)绞股蓝总苷、水提物实验证明能延长小鼠游泳时间及爬杆时间和荷重游泳时间。较大剂量的绞股蓝提取物灌胃连续14天，能使长时间游泳大鼠保持较高血糖水平，减少肌糖原损耗，这可能是绞股蓝抗疲劳的重要原因；(2)绞股蓝可提高小鼠对常压缺氧的耐受力和气温较高环境下的存活时间。
7.增强免疫作用绞股蓝能增加正常小鼠脾脏和胸腺重量；绞股蓝皂苷还能对抗环磷酰胺所致的小鼠脾脏和胸腺重量下降。并能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。
8.抗自由基损伤作用：(1)绞股蓝皂苷能明显降低自然衰老和实验衰老大鼠肝脏和血浆脂质过氧化物(LPO)含量。临床研究报道，老年男冠心病患者血中LPO值明显增高，服用复方绞股蓝制剂后LPO值明显降低，恢复到健康男性老年人的水平；(2)绞股蓝总甙可使力竭运动小鼠心肾组织中丙二醛(MDA)减少，肾组织中超氧化物歧化化物歧化酶(SOD)活性升高，SOD/MDA比值相对增大，达到保护心肾组织免疫自由基损伤的作用。用绞股蓝醇提物喂养小鼠不仅提高小鼠肝SOD活性，同时也增强SOD耐热，耐酸性能，起到保护SOD的作用。
9.寿命试验—“细胞赋活作用”：绞股蓝及其复方制剂均可延长小鼠平均寿命和最高寿命。另据报道，绞股蓝延长组成生物的细胞繁殖传代，含总苷200mg/ml的培养液中，使人胎儿离体正常二倍体的成纤维细胞繁殖到59代，而对照组只传至51代就停止生长，延长15.7％；对雄尔纳综合征患者的皮肤细胞离体培养，对照组只繁衍22代，绞股蓝组延长至27代，延长22％，因此有细胞赋活剂之称。
原有的绞股蓝总甙的提取工艺在药材前处理、浸提、柱层析中均存在较大缺陷，具体表现为：成本高、产量低、总苷种类缺失进而导致疗效下降。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提取绞股蓝总甙的方法，用以解决现有的绞股蓝总甙的提取工艺成本高、产量低、总苷种类缺失进而导致疗效下降的问题。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一种提取绞股蓝总甙的方法，所述方法包括如下步骤：
第(1)步：将绞股蓝药材粉碎，得到绞股蓝粉；
第(2)步：将第(1)步得到的绞股蓝粉放在乙醇中浸提，得到滤液；
第(3)步：在树脂中加入水，浸泡，使树脂充分溶胀；加入树脂预处理溶液，冲洗，备用；
第(4)步：将第(2)步所得滤液上第(3)步预处理过的树脂柱进行吸附，树脂吸附饱和后，停止滤液上柱；采用乙醇解吸所述树脂柱内所吸附的皂苷，得到乙醇解吸液；将所述乙醇解吸液蒸馏，回收乙醇，固体烘干，得到水溶和脂溶成分的绞股蓝总甙粉末(A粉末)；
所述树脂柱由从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱组成；
D101大孔吸附树脂是一种具有多孔海绵状结构人工合成的聚合物吸附剂，依靠树脂骨架和被吸附的分子(吸附质)之间的范德华力，通过树脂巨大的比表面积进行物理吸附而达到从水溶液中分离提取水溶性较差的有机大分子的目的。采用大孔吸附树脂提取中草药有效成分如皂甙类、黄酮类、生物碱类，具有操作简便、成本较低、树脂可反复使用等优点，适于工业化规模生产。D101树脂是一种非极性吸附剂，比表面积为480～530m2/g。
D113树脂是在大孔结构的丙烯酸共聚体上带有羧酸基(-COOH)的阳离子交换树脂。主要用于工业水处理，特别是除去碳酸氢盐、碳酸盐及其它一些碱性盐类，也可用于锌、镍废液的回收处理，生化药物的分离提纯等。
第(5)步：采用树脂再生溶液将树脂所吸附的杂质洗脱除去，使所述树脂恢复原来的组成和性能。
作为一种优选的方案，第(3)步包括如下步骤：
将D101大孔吸附树脂装入容皿中，加纯化水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀后，再将树脂和水一同抽入柱内；静置10-30min；调整液面与树脂面持平，加入体积分数为80％-95％的乙醇1.5-2.5BV，流速1.5-2.5BV/h，冲洗，备用；
将D113阳离子树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内，静置10-30min；调整液面与树脂面持平，加入2％-6％HCl溶液1.5-2.5BV，流速0.5-1.5BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入80％-95％乙醇1.5-2.5BV，流速0.5-1.5BV/h，冲洗后，备用；
将LSA-700B大孔树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内；静置10-30min；调整液面与树脂面持平，加入2％-6％NaOH溶液1.5-2.5BV，流速0.5-1.5BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入体积分数为80％-95％的乙醇1.5-2.5BV，流速0.5-1.5BV/h，冲洗后，备用。
作为一种优选的方案，所述从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱的柱体积比例为1：1：3：1。
作为一种优选的方案，所述第(5)步包括如下步骤：
第(5.1)步：配制体积分数为3％-7％酸性醇溶液；
第(5.2)步：配制体积分数为2％-6％的氢氧化钠溶液；
第(5.3)步：将所述酸性醇溶液上柱，按柱组串联方式依次流经各柱；当酸性醇溶液全部加入后，再依次加入纯水，保持相同流速，将酸性醇全部置换，至柱组末端流出液PH＝0.67-7时，停止进纯水；
第(5.4)步：关闭D101大孔树脂柱、第一D113阳离子树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，打开LSA-700B大孔树脂柱；将所述氢氧化钠溶液加入LSA-700B大孔树脂柱使之转型；当全部氢氧化钠溶液进柱后，使用纯水置换柱中氢氧化钠溶液，至柱底流出液PH＝6.5～7止；
第(5.5)步：按照柱组串联顺序，用体积分数为80％-95％的乙醇依次流经第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，用量4-8BV，关闭柱组。
作为一种优选的方案，第(5.3)步中，所述酸性醇溶液在柱中的流速为0.5-1.5BV/h；第(5.4)步中，所述碱液在柱中的流速为0.5-1.5BV/h；第(5.5)步中，体积分数为80％-95％的乙醇在各柱中的流速为1.5-2.5BV/h。
作为一种优选的方案，所述第(5)步还包括第(5.6)步：将第(5.3)步中流出的酸性醇溶液和第(5.4)步中流出的碱液中和，回收乙醇，剩余固体烘干，循环应用于第(2)步。
作为一种优选的方案，在第(4)步中，所述滤液在树脂柱中的流速为1.5-2.5BV/h；所述树脂柱的滤液处理量为25～30BV；解吸树脂柱内吸附皂苷的乙醇的用量为3-7BV，流速为1.5-2.5BV/h。
作为一种优选的方案，所述第(2)步包括如下步骤：
第(2.1)步：将绞股蓝粉装入浸提罐内，加入体积分数为60-85％的乙醇，浸渍；浸足4-8小时后，将药液排出，过滤，得到药液；第二遍浸渍加入体积分数为60-85％的乙醇，浸渍3-7小时，过滤，得到药液；合并二次药液，备用；
第(2.2)步：分别加入体积分数为60-85％的乙醇进行第三遍和第四遍浸渍，分别浸渍3-7小时；药液经粗滤后合并，循环应用于第(2)步；
第(2.3)步：回收药渣中的残留乙醇，药渣(B粉末)留用。
作为一种优选的方案，第(2)步和第(4)步中所采用的乙醇的体积分数为60-85％。
作为一种优选的方案，第(1)步中，所述绞股蓝粉的颗粒尺寸为2-10目。
本发明具有如下优点：
本发明提供了一种便捷、系统、集成化的提取绞股蓝总甙的方法，该方法具有药材前处理、浸提、树脂预处理、柱层析、树脂再生、再生液中残留皂苷回收的无间断差别的分离配合过程，分离效率高、分离过程稳定、便于质控，通过部分环节的控制便可得到目标数量的绞股蓝总甙。
本发明采用目前先进的逆向树脂再生、提取技术。常规的方法是用离子交换树脂去吸附无用的成分，从馏出液里获得有用的成分。而本发明是采用离子交换树脂吸收有用的成分(水溶和脂溶成分的绞股蓝总甙)，然后再用乙醇进行冲洗。
本发明采用生物医药中很安全的D101大孔吸附树脂柱、D113阳离子树脂柱和LSA-700B大孔树脂柱，不会导致绞股蓝总甙发生变性，极短时间将绞股蓝总甙与其它成份分离，大大提高了绞股蓝总甙的纯度，降低了损失率。同时对上述材料进行预处理后，可得到极其综合的表面和强力的表面接着性。
本发明采用了分类提取加工方式，全过程全产物利用。形成A粉末，水溶和脂溶成分的绞股蓝总甙。B粉末，除绞股蓝总甙外的不溶解性的部分粘多糖和纤维素、微量元素、以及受等温压缩率影响的纤维素吸附物质。共2种分解产品。
本发明将酸性醇配制方法、4％碱液配制方法应用于提取绞股蓝总甙的方法中。首先，水可溶、脂可溶性的大量皂甙、粘多糖、脂肪小体、蛋白小体等小分子物质组分含有大量有益成份。其次，在工业化复合制备提取绞股蓝总甙制备的生产中，由于经历了一系列的生产工艺过程，其分子排列性状已有所改变，而变得失去活性，所以还要进行破性与复性技术后，才可获得与原有源的，具有生物活性的高纯度的绞股蓝总甙。本发明采用的上述配制方法令绞股蓝总甙保持极高程度的药物活性，使国内绞股蓝总甙产业化开发，工业化生产成为可能，同时也保证了绞股蓝总甙的高活性及高品质。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本发明提供了一种提取绞股蓝总甙的方法，所述方法包括如下步骤：
第(1)步：将绞股蓝药材粉碎，得到绞股蓝粉；所述绞股蓝粉的颗粒尺寸为2-10目。
第(2)步：将第(1)步得到的绞股蓝粉放在乙醇中浸提，得到滤液；
第(2.1)步：将绞股蓝粉装入浸提罐内，加入体积分数为80％的乙醇，浸渍；浸足6小时后，将药液排出，过滤，得到药液；第二遍浸渍加入体积分数为80％的乙醇，浸渍5小时，过滤，得到药液；合并二次药液，备用；
第(2.2)步：分别加入体积分数为80％的乙醇进行第三遍和第四遍浸渍，分别浸渍5小时；药液经粗滤后合并，循环应用于第(2)步；
第(2.3)步：回收药渣中的残留乙醇，药渣留用。
第(3)步：在树脂中加入水，浸泡，使树脂充分溶胀；加入树脂预处理溶液，冲洗，备用；
将D101大孔吸附树脂装入容皿中，加纯化水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀后，再将树脂和水一同抽入柱内；静置20min；调整液面与树脂面持平，加入体积分数为95％的乙醇2BV，流速2BV/h，冲洗，备用；
将D113阳离子树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内，静置20min；调整液面与树脂面持平，加入4％HCl溶液2BV，流速1BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入95％乙醇2BV，流速1BV/h，冲洗后，备用；
将LSA-700B大孔树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内；静置20min；调整液面与树脂面持平，加入4％NaOH溶液2BV，流速1BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入体积分数为95％的乙醇2BV，流速1BV/h，冲洗后，备用。
第(4)步：将第(2)步所得滤液上第(3)步预处理过的树脂柱进行吸附，树脂吸附饱和后，停止滤液上柱；采用乙醇解吸所述树脂柱内所吸附的皂苷，得到乙醇解吸液；将所述乙醇解吸液蒸馏，回收乙醇，固体烘干，得到水溶和脂溶成分的绞股蓝总甙粉末；
在第(4)步中，所述滤液在树脂柱中的流速为2BV/h；所述树脂柱的滤液处理量为27BV；解吸树脂柱内吸附皂苷的乙醇的用量为5BV，流速为2BV/h。
所述树脂柱由从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱组成；所述从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱的柱体积比例为1：1：3：1。
第(5)步：采用树脂再生溶液将树脂所吸附的杂质洗脱除去，使所述树脂恢复原来的组成和性能。
所述第(5)步包括如下步骤：
第(5.1)步：配制体积分数为5％酸性醇溶液；酸为氯化氢，醇为乙醇。
第(5.2)步：配制体积分数为4％的氢氧化钠溶液；
第(5.3)步：将所述酸性醇溶液上柱，按柱组串联方式依次流经各柱；当酸性醇溶液全部加入后，再依次加入纯水，保持相同流速，将酸性醇全部置换，至柱组末端流出液PH＝0.67-7时，停止进纯水；
第(5.4)步：关闭D101大孔树脂柱、第一D113阳离子树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，打开LSA-700B大孔树脂柱；将所述氢氧化钠溶液加入LSA-700B大孔树脂柱使之转型；当全部氢氧化钠溶液进柱后，使用纯水置换柱中氢氧化钠溶液，至柱底流出液PH＝6.5～7止；
第(5.5)步：按照柱组串联顺序，用体积分数为95％的乙醇依次流经第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，用量6BV，关闭柱组。
第(5.3)步中，所述酸性醇溶液在柱中的流速为1BV/h；第(5.4)步中，所述碱液在柱中的流速为1BV/h；第(5.5)步中，体积分数为95％的乙醇在各柱中的流速为2BV/h。
所述第(5)步还包括第(5.6)步：将第(5.3)步中流出的酸性醇溶液和第(5.4)步中流出的碱液中和，回收乙醇，剩余固体烘干，循环应用于第(2)步。
实施例2
本发明提供了一种提取绞股蓝总甙的方法，所述方法包括如下步骤：
第(1)步：将绞股蓝药材粉碎，得到绞股蓝粉；所述绞股蓝粉的颗粒尺寸为2-10目。
第(2)步：将第(1)步得到的绞股蓝粉放在乙醇中浸提，得到滤液；
第(2.1)步：将绞股蓝粉装入浸提罐内，加入体积分数为60％的乙醇，浸渍；浸足4小时后，将药液排出，过滤，得到药液；第二遍浸渍加入体积分数为60％的乙醇，浸渍3小时，过滤，得到药液；合并二次药液，备用；
第(2.2)步：分别加入体积分数为60％的乙醇进行第三遍和第四遍浸渍，分别浸渍3小时；药液经粗滤后合并，循环应用于第(2)步；
第(2.3)步：回收药渣中的残留乙醇，药渣留用。
第(3)步：在树脂中加入水，浸泡，使树脂充分溶胀；加入树脂预处理溶液，冲洗，备用；
将D101大孔吸附树脂装入容皿中，加纯化水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀后，再将树脂和水一同抽入柱内；静置10min；调整液面与树脂面持平，加入体积分数为80％的乙醇1.5BV，流速1.5BV/h，冲洗，备用；
将D113阳离子树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内，静置10min；调整液面与树脂面持平，加入2％HCl溶液1.5BV，流速0.5BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入80％乙醇1.5BV，流速0.5BV/h，冲洗后，备用；
将LSA-700B大孔树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内；静置10min；调整液面与树脂面持平，加入2％NaOH溶液1.5BV，流速0.5BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入体积分数为80％的乙醇1.5BV，流速0.5BV/h，冲洗后，备用。
第(4)步：将第(2)步所得滤液上第(3)步预处理过的树脂柱进行吸附，树脂吸附饱和后，停止滤液上柱；采用乙醇解吸所述树脂柱内所吸附的皂苷，得到乙醇解吸液；将所述乙醇解吸液蒸馏，回收乙醇，固体烘干，得到水溶和脂溶成分的绞股蓝总甙粉末；
在第(4)步中，所述滤液在树脂柱中的流速为1.5BV/h；所述树脂柱的滤液处理量为25BV；解吸树脂柱内吸附皂苷的乙醇的用量为3BV，流速为1.5BV/h。
所述树脂柱由从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱组成；所述从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱的柱体积比例为1：1：3：1。
第(5)步：采用树脂再生溶液将树脂所吸附的杂质洗脱除去，使所述树脂恢复原来的组成和性能。
所述第(5)步包括如下步骤：
第(5.1)步：配制体积分数为3％酸性醇溶液；酸为氯化氢，醇为乙醇。
第(5.2)步：配制体积分数为2％的氢氧化钠溶液；
第(5.3)步：将所述酸性醇溶液上柱，按柱组串联方式依次流经各柱；当酸性醇溶液全部加入后，再依次加入纯水，保持相同流速，将酸性醇全部置换，至柱组末端流出液PH＝0.67-7时，停止进纯水；
第(5.4)步：关闭D101大孔树脂柱、第一D113阳离子树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，打开LSA-700B大孔树脂柱；将所述氢氧化钠溶液加入LSA-700B大孔树脂柱使之转型；当全部氢氧化钠溶液进柱后，使用纯水置换柱中氢氧化钠溶液，至柱底流出液PH＝6.5～7止；
第(5.5)步：按照柱组串联顺序，用体积分数为95％的乙醇依次流经第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，用量4BV，关闭柱组。
第(5.3)步中，所述酸性醇溶液在柱中的流速为0.5BV/h；第(5.4)步中，所述碱液在柱中的流速为0.5BV/h；第(5.5)步中，体积分数为80％的乙醇在各柱中的流速为1.5BV/h。
所述第(5)步还包括第(5.6)步：将第(5.3)步中流出的酸性醇溶液和第(5.4)步中流出的碱液中和，回收乙醇，剩余固体烘干，循环应用于第(2)步。
实施例3
本发明提供了一种提取绞股蓝总甙的方法，所述方法包括如下步骤：
第(1)步：将绞股蓝药材粉碎，得到绞股蓝粉；所述绞股蓝粉的颗粒尺寸为2-10目。
第(2)步：将第(1)步得到的绞股蓝粉放在乙醇中浸提，得到滤液；
第(2.1)步：将绞股蓝粉装入浸提罐内，加入体积分数为85％的乙醇，浸渍；浸足8小时后，将药液排出，过滤，得到药液；第二遍浸渍加入体积分数为85％的乙醇，浸渍7小时，过滤，得到药液；合并二次药液，备用；
第(2.2)步：分别加入体积分数为85％的乙醇进行第三遍和第四遍浸渍，分别浸渍7小时；药液经粗滤后合并，循环应用于第(2)步；
第(2.3)步：回收药渣中的残留乙醇，药渣留用。
第(3)步：在树脂中加入水，浸泡，使树脂充分溶胀；加入树脂预处理溶液，冲洗，备用；
将D101大孔吸附树脂装入容皿中，加纯化水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀后，再将树脂和水一同抽入柱内；静置30min；调整液面与树脂面持平，加入体积分数为95％的乙醇2.5BV，流速2.5BV/h，冲洗，备用；
将D113阳离子树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内，静置30min；调整液面与树脂面持平，加入6％HCl溶液2.5BV，流速1.5BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入95％乙醇2.5BV，流速1.5BV/h，冲洗后，备用；
将LSA-700B大孔树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内；静置30min；调整液面与树脂面持平，加入6％NaOH溶液2.5BV，流速1.5BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入体积分数为95％的乙醇2.5BV，流速1.5BV/h，冲洗后，备用。
第(4)步：将第(2)步所得滤液上第(3)步预处理过的树脂柱进行吸附，树脂吸附饱和后，停止滤液上柱；采用乙醇解吸所述树脂柱内所吸附的皂苷，得到乙醇解吸液；将所述乙醇解吸液蒸馏，回收乙醇，固体烘干，得到水溶和脂溶成分的绞股蓝总甙粉末；
在第(4)步中，所述滤液在树脂柱中的流速为2.5BV/h；所述树脂柱的滤液处理量为30BV；解吸树脂柱内吸附皂苷的乙醇的用量为7BV，流速为2.5BV/h。
所述树脂柱由从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱组成；所述从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱的柱体积比例为1：1：3：1。
第(5)步：采用树脂再生溶液将树脂所吸附的杂质洗脱除去，使所述树脂恢复原来的组成和性能。
所述第(5)步包括如下步骤：
第(5.1)步：配制体积分数为7％酸性醇溶液；酸为氯化氢，醇为乙醇。
第(5.2)步：配制体积分数为6％的氢氧化钠溶液；
第(5.3)步：将所述酸性醇溶液上柱，按柱组串联方式依次流经各柱；当酸性醇溶液全部加入后，再依次加入纯水，保持相同流速，将酸性醇全部置换，至柱组末端流出液PH＝0.67-7时，停止进纯水；
第(5.4)步：关闭D101大孔树脂柱、第一D113阳离子树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，打开LSA-700B大孔树脂柱；将所述氢氧化钠溶液加入LSA-700B大孔树脂柱使之转型；当全部氢氧化钠溶液进柱后，使用纯水置换柱中氢氧化钠溶液，至柱底流出液PH＝6.5～7止；
第(5.5)步：按照柱组串联顺序，用体积分数为95％的乙醇依次流经第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，用量8BV，关闭柱组。
第(5.3)步中，所述酸性醇溶液在柱中的流速为1.5BV/h；第(5.4)步中，所述碱液在柱中的流速为1.5BV/h；第(5.5)步中，体积分数为95％的乙醇在各柱中的流速为2.5BV/h。
所述第(5)步还包括第(5.6)步：将第(5.3)步中流出的酸性醇溶液和第(5.4)步中流出的碱液中和，回收乙醇，剩余固体烘干，循环应用于第(2)步。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (9)

1.一种提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
第(1)步：将绞股蓝药材粉碎，得到绞股蓝粉；
第(2)步：将第(1)步得到的绞股蓝粉放在乙醇中浸提，得到滤液；
第(3)步：在树脂中加入水，浸泡，使树脂充分溶胀；加入树脂预处理溶液，冲洗，备用；
第(4)步：将第(2)步所得滤液上第(3)步预处理过的树脂柱进行吸附，树脂吸附饱和后，停止滤液上柱；采用乙醇解吸所述树脂柱内所吸附的皂苷，得到乙醇解吸液；将所述乙醇解吸液蒸馏，回收乙醇，固体烘干，得到水溶和脂溶成分的绞股蓝总甙粉末；
所述树脂柱由从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱组成；
第(5)步：采用树脂再生溶液将树脂所吸附的杂质洗脱除去，使所述树脂恢复原来的组成和性能。
2.根据权利要求1所述的提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，第(3)步包括如下步骤：
将D101大孔吸附树脂装入容皿中，加纯化水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀后，再将树脂和水一同抽入柱内；静置10-30min；调整液面与树脂面持平，加入体积分数为80％-95％的乙醇1.5-2.5BV，流速1.5-2.5BV/h，冲洗，备用；
将D113阳离子树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内，静置10-30min；调整液面与树脂面持平，加入2％-6％HCl溶液1.5-2.5BV，流速0.5-1.5BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入80％-95％乙醇1.5-2.5BV，流速0.5-1.5BV/h，冲洗后，备用；
将LSA-700B大孔树脂装入容皿中，加纯水并使液面高于树脂面5-10cm，浸泡4h以上，使树脂充分溶胀，再将树脂和水一同抽入柱内；静置10-30min；调整液面与树脂面持平，加入2％-6％NaOH溶液1.5-2.5BV，流速0.5-1.5BV/h，使树脂转型；再加入纯水以相同流速洗至柱底流出液PH＝6.5～7.0；再加入体积分数为80％-95％的乙醇1.5-2.5BV，流速0.5-1.5BV/h，冲洗后，备用。
3.根据权利要求1所述的提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，所述从上往下依次串联的D101大孔吸附树脂柱、第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱的柱体积比例为1：1：3：1。
4.根据权利要求1所述的提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，所述第(5)步包括如下步骤：
第(5.1)步：配制体积分数为3％-7％酸性醇溶液；
第(5.2)步：配制体积分数为2％-6％的氢氧化钠溶液；
第(5.3)步：将所述酸性醇溶液上柱，按柱组串联方式依次流经各柱；当酸性醇溶液全部加入后，再依次加入纯水，保持相同流速，将酸性醇全部置换，至柱组末端流出液PH＝0.67-7时，停止进纯水；
第(5.4)步：关闭D101大孔树脂柱、第一D113阳离子树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，打开LSA-700B大孔树脂柱；将所述氢氧化钠溶液加入LSA-700B大孔树脂柱使之转型；当全部氢氧化钠溶液进柱后，使用纯水置换柱中氢氧化钠溶液，至柱底流出液PH＝6.5～7止；
第(5.5)步：按照柱组串联顺序，用体积分数为80％-95％的乙醇依次流经第一D113阳离子树脂柱、LSA-700B大孔树脂柱和第二D113阳离子树脂柱，用量4-8BV，关闭柱组。
5.根据权利要求4所述的提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，第(5.3)步中，所述酸性醇溶液在柱中的流速为0.5-1.5BV/h；第(5.4)步中，所述碱液在柱中的流速为0.5-1.5BV/h；第(5.5)步中，体积分数为80％-95％的乙醇在各柱中的流速为1.5-2.5BV/h。
6.根据权利要求4所述的提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，所述第(5)步还包括第(5.6)步：将第(5.3)步中流出的酸性醇溶液和第(5.4)步中流出的碱液中和，回收乙醇，剩余固体烘干，循环应用于第(2)步。
7.根据权利要求1所述的提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，在第(4)步中，所述滤液在树脂柱中的流速为1.5-2.5BV/h；所述树脂柱的滤液处理量为25～30BV；解吸树脂柱内吸附皂苷的乙醇的用量为3-7BV，流速为1.5-2.5BV/h。
8.根据权利要求1所述的提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，
所述第(2)步包括如下步骤：
第(2.1)步：将绞股蓝粉装入浸提罐内，加入体积分数为60-85％的乙醇，浸渍；浸足4-8小时后，将药液排出，过滤，得到药液；第二遍浸渍加入体积分数为60-85％的乙醇，浸渍3-7小时，过滤，得到药液；合并二次药液，备用；
第(2.2)步：分别加入体积分数为60-85％的乙醇进行第三遍和第四遍浸渍，分别浸渍3-7小时；药液经粗滤后合并，循环应用于第(2)步；
第(2.3)步：回收药渣中的残留乙醇，药渣留用。
9.根据权利要求1所述的提取绞股蓝总甙的方法，其特征在于，第(2)步和第(4)步中所采用的乙醇的体积分数为60-85％。
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