CN103520229A - 一种芒果提取物在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种芒果提取物在制备防治肿瘤疾病的药物或保健品中的应用。所述芒果提取物为芒果果皮或种仁经80%丙酮提取,C18固相萃取初步纯化获得的粗纯粉末,主要成分为五倍没食子单宁及其衍生物。所述药物或保健品中由芒果提取物与制剂允许的赋形剂或食品添加剂制成。研究证实芒果提取物具有抑制乳腺癌、肝癌和白血病的活性,可制备治疗抑制乳腺癌、肝癌和白血病细胞活性的药物或开发成功能食品或保健品。本发明为芒果加工副产物芒果果皮和种仁提取物提供了肿瘤治疗药物或保健品的新用途。
Description
技术领域
本发明属医药领域,涉及天然来源的芒果提取物在乳腺癌,肝癌及白血病等相关癌症防治中的应用,尤其涉及芒果没食子单宁提取物在制备防治癌症功能食品或保健品中的应用。
背景技术
随着人类生存环境、生活压力、人口老龄化等自然和社会环境诸多因素的变化,恶性肿瘤发病率和死亡率不断攀升,严重威胁人类的健康和生命。2012中国肿瘤登记年报显示,每年新发肿瘤病例约为312万例,全国每分钟有6人被诊断为恶性肿瘤,全国肿瘤死亡率为180.54/10万,每7至8人中有1人因恶性肿瘤死亡。乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤,2008年世界乳腺癌病例有0.0138亿,占总患肿瘤病例的10.9%。肝癌具有极高的致死率,占总癌症致死病例的9.2%,是世界上第三大致死癌症,在东亚及东南亚的发病率相对较高。白血病是一类造血干细胞异常的克隆性恶性疾病,在青少年中最常见的一种恶性肿瘤,为十大高致死率癌症之一。目前对于癌症的治疗多采用手术治疗,放射治疗及化学治疗等,这些治疗手段具有一定的毒副作用。流行病学研究表明,多食水果蔬菜具有较低的恶性肿瘤等慢性疾病发病率,因此从天然产物中开发具有低毒高药学活性功能的制剂及开发功能食品或保健品具有深远的意义。
芒果加工副产物果皮和种仁中含有大量的没食子单宁类物质,关于其药学活性的报道还相对较少,多集中在抗氧化及抑菌的活性研究,但其抑制肿瘤的作用却未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种芒果提取物在制备防治肿瘤疾病的药物中的应用。所述芒果提取物为芒果果皮或种仁经80%丙酮提取,C18固相萃取初步纯化获得的粗纯粉末,主要成分为五倍没食子单宁及其衍生物,所述肿瘤疾病为乳腺癌、肝癌及白血病。研究证实芒果提取物和五倍没食子单宁都表现出抑制乳腺癌、肝癌和白血病细胞的活性,提示其潜在的防治恶性肿瘤的作用。所述药物由芒果提取物与制剂允许的赋形剂制成。
本发明的另一个目的是提供一种芒果提取物在制备防治肿瘤的保健品中的应用。所述芒果提取物为芒果果皮或种仁经80%丙酮提取,C18固相萃取初步纯化获得的粗纯粉末,主要成分为五倍没食子单宁及其衍生物。所述保健品由芒果提取物与允许的食品添加剂制成。研究证实芒果提取物和五倍没食子单宁都表现出抑制乳腺癌、肝癌和白血病细胞的活性,可制备成防治乳腺癌、肝癌及白血病为主的肿瘤疾病的保健品。
本发明所述五倍没食子单宁的结构如下:
。
本发明芒果粗提物通过以下制备步骤获得:(1)干燥的芒果果皮或种仁用80%丙酮(固液比1:20)浸泡超声30 分钟,离心取上清,提取两次,过滤,合并两次滤液,在旋转蒸发仪上蒸干并溶于双蒸水中,得到水粗提物;(2)采用C18固相萃取柱(Waters 12cc, 2 g),经甲醇活化,水平衡后,将步骤(1)得到的水粗提物加入到固相萃取柱上,充分吸附后,先用水洗,去除糖酸等水溶性杂质,然后用甲醇洗脱,甲醇洗脱液真空浓缩蒸干制得芒果粗提物粉末。
研究证实芒果加工副产物芒果果皮和种仁中可提取分离到具有抑制乳腺癌、肝癌和白血病的天然产物,其主要成分为没食子单宁类物质。
本发明通过从加工副产物果皮和种仁中提取没食子单宁并进行抑制肿瘤细胞的活性研究,以达到将其应用于相关疾病防治的目的。五倍没食子单宁和芒果没食子单宁提取物都表现出抑制乳腺癌、肝癌和白血病细胞的活性,可制备治疗抑制乳腺癌、肝癌和白血病细胞的活性药物。该提取物可开发成功能食品或保健品,用于防治等癌症。本发明强调以没食子单宁为主的芒果提取物作为一种肿瘤治疗药物或保健品的新用途。
附图说明
图1 A是五倍没食子单宁的HPLC色谱图(λ=280 nm),其中峰1:五倍没食子单宁。
图1B是马切苏芒果种仁没食子单宁提取物的HPLC色谱图(λ=280 nm),其中峰1:五倍没食子单宁;峰2:六倍没食子单宁;峰3:七倍没食子单宁;峰4:八倍没食子单宁;峰5:九倍没食子单宁。
图1C是马切苏芒果果皮没食子单宁提取物的HPLC色谱图(λ=280 nm),其中峰1:五倍没食子单宁;峰2:六倍没食子单宁;峰3:七倍没食子单宁;峰4:八倍没食子单宁;峰5:九倍没食子单宁。
图2 是芒果没食子单宁提取物对人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231)增殖的抑制作用。
图3 是芒果没食子单宁提取物对人肝癌细胞系(HepG2)增殖的抑制作用。
图4 是芒果没食子单宁提取物对人白血病细胞系(HL-60)增殖的抑制作用。
图5 是五倍没食子单宁对人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231),肝癌细胞系(HepG2)和白血病细胞系(HL-60)增殖的抑制作用。
具体实施方式
本发明结合附图和实施例作进一步的说明。
实施例1:
实施例1 本发明提取分离没食子单宁提取物的操作方法按照如下两个步骤来进行:
(1)从芒果副产物中富集没食子单宁:分别称取1.5 g马切苏(MQS)、台农1号(TN1)、紫花芒(ZHM)果实种仁和果皮冷冻干燥粉末,用80%丙酮(固液比1:20)超声提30分钟提取两次,8000 rpm离心10 min,合并两次上清液,在旋转蒸发仪上蒸干得浸膏,溶于25 ml ddH2O中。
(2)C18固相萃取柱(Waters 12cc, 2 g)首先用15 ml 甲醇活化,再用15 ml水平衡,然后将25 ml提取液上样,充分吸附后,用25 ml水淋洗,去除糖酸等水溶性杂质,然后用25 ml甲醇洗脱,用15 ml氯仿洗脱柱子中遗留的色素等杂质,最后用15 ml甲醇再生柱子。甲醇洗脱液在真空干燥上蒸干成粉末,其HPLC色谱图参见图1A-1C。
实施例2
芒果没食子单宁提取物作用于人乳腺癌细胞(MDA-MB-231细胞)72 h后显著抑制癌细胞增殖。具体步骤如下:将对数生长期的细胞消化后,吹打成单细胞悬液,接种于96孔培养板;5 x 103细胞/孔,每孔培养基200微升,37℃、5% CO2培养箱中培养过夜;加入不同浓度芒果没食子单宁提取物在培养箱中再培养3天。10%三氯醋酸固定1小时, 用双蒸水洗涤,干燥后,每孔加入70微升SRB溶液(4 mg/mL),室温染色20分钟,1 %醋酸洗涤,干燥。每孔加入100微升10 mM Tris-Base溶液使SRB溶解。酶标仪检测各孔OD值(检测波长:515 nm);记录结果;按下列公式计算抑制率:抑制率(%)=(OD对照-OD给药)/ OD对照 × 100%,并计算IC50,3品种芒果种仁和果皮提取物的IC50分别为8.31 ± 2.39,11.02 ± 1.89,10.73 ± 3.53,12.27 ± 1.04,15.84 ± 1.51,13.78 ± 3.73 μg/mL,具体浓度的提取物对MDA-MB-231细胞的抑制效果见图2。
实施例3:
芒果没食子单宁提取物作用于HepG2细胞72 h后显著抑制癌细胞增殖。具体步骤如下参见实施例2,3品种芒果种仁和果皮提取物的IC50分别为33.91 ± 3.06,41.05 ± 9.99,40.43 ± 8.33,43.01 ± 7.59,43.30 ± 15.49,53.33 ± 1.81 μg/mL,具体浓度的提取物对HepG2细胞的抑制效果见图3。
实施例4:
芒果没食子单宁提取物作用于HL-60细胞72 h后显著抑制癌细胞增殖。具体步骤如下:将对数生长期的细胞消化后,吹打成单细胞悬液,接种于96孔培养板;6 x103细胞/孔,每孔培养基100微升,37℃、5% CO2培养箱中培养过夜;加入不同浓度受试化合物素在培养箱中再培养3天。加入CCK-8液(20微升/孔);继续培养2小时。酶标仪检测各孔OD值(检测波长:450 nm);记录结果;按下列公式计算抑制:抑制率(%)=(OD对照-OD给药)/ OD对照 × 100%,并计算IC50,3品种芒果种仁和果皮提取物的IC50分别为28.72 ± 6.24,14.68 ± 3.88,26.96 ± 3.44,38.37 ± 3.72,12.04 ± 3.97,11.46 ± 6.39 μg/mL,具体浓度的提取物对HL-60细胞的抑制效果见图4。
实施例5:
五倍没食子单宁单体作用于MDA-MB-231、HepG2和HL-60细胞72 h后显著抑制癌细胞增殖。具体步骤参见实施例2,3和4。其IC50分别为32.76 ± 7.91,7.74 ± 1.76,4.73 ± 1.22 μg/mL,具体浓度的五倍没食子单宁对MDA-MB-231、HepG2和HL-60细胞的抑制效果见图5。
Claims (4)
1. 一种芒果提取物在制备防治肿瘤疾病的药物中的应用,所述芒果提取物为芒果果皮和种仁经80%丙酮提取,C18固相萃取初步纯化获得的粗纯粉末,主要成分为五倍没食子单宁及其衍生物,所述肿瘤疾病为乳腺癌、肝癌和白血病细胞。
2. 根据权利要求1所述的一种芒果提取物在制备防治肿瘤疾病的药物中的应用,其特征在于,所述药物由芒果提取物与允许的赋形剂制成。
3. 一种芒果提取物在制备防治肿瘤的保健品中的应用,所述芒果提取物为芒果果皮和种仁经80%丙酮提取,C18固相萃取初步纯化获得的粗纯粉末,主要成分为五倍没食子单宁及其衍生物,所述肿瘤为乳腺癌、肝癌和白血病细胞。
4. 根据权利要求3所述的一种芒果提取物在制备防治肿瘤的保健品中的应用,其特征在于,所述保健品由芒果提取物与允许的食品添加剂制成。
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