CN103509738A - 一种日沟维肠杆菌及其在麻疯树饼粕发酵脱毒中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种日沟维肠杆菌，它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15。本发明还公开了日沟维肠杆菌在麻疯树饼粕的发酵脱毒中的应用。本发明保藏号为CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15，可以有效降低麻疯树饼粕有毒成分，提高麻疯树饼粕的实用价值。

Description

一种日沟维肠杆菌及其在麻疯树饼粕发酵脱毒中的应用

技术领域

本发明涉及一株日沟维肠杆菌及其在麻疯树饼粕发酵脱毒中的应用，属于发酵领域。 

背景技术

麻疯树(Jatropha curcas L.)是世界公认的最有可能成为未来替代化石能源的具有巨大开发潜力的树种，利用麻疯树油加工生产的生物柴油在各项性能指标上接近甚至超过国家“0”号柴油以及国家生物柴油标准，因此以麻疯树果生产生物柴油已经成为现在研究生产生物柴油的一个活跃方向。麻疯树饼粕（Jatropha curcas seed cake，JCSC）是生物柴油生产过程中的副产物，具有很高的蛋白含量和较高的营养价值，但是因其毒性大，主要被作为肥料用或直接排放于自然环境中，不但严重地浪费了大量的优质蛋白资源，而且还造成了严重的环境污染，若能降低其毒性，则可作为饲用蛋白使用。 

麻疯树饼粕的主要毒性物质是佛波酯及其衍生物、胰蛋白酶抑制剂和Curcin。其中，胰蛋白酶抑制剂和Curcin是热不稳定性成分，简单的加热处理就可以使它们的分子构型发生变化，从而失去活性通过热处理可以使其大量减少，至几乎完全消失。但是，佛波酯(Phorbol-ester,PE)为热稳定性成分，毒性强，可以在160℃下耐受30min而不受影响，其结构属于四环二萜型，巴豆烷是佛波醇酯的基本结构部分，因此，脱除佛波酯的是麻疯树饼粕利用的关键因素。 

目前，国内外多采用物理化学方法除去麻疯树油粕中的佛波酯，但是化学脱毒操作复杂过程繁琐、易导致化学物残留，而且脱毒范围小、成本高；而酶解只能降解某种毒素，针对性较强，钝化效果不一致；物理脱毒效率低，且对饼粕中的营养成分造成一定的破坏。 

微生物具有繁殖快、数量大、产酶系复杂等特点，利用微生物发酵工程技术脱毒是一种较为有效的方法，文献报道采用铜绿假单胞菌（P.aeruginosa PseA）发酵能够降解麻疯树籽粕中的佛波酯。但是，铜绿假单胞菌是医院内感染的主要病原菌之一，经常引起术后伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等，还是尿路感染的常见病原菌。因而用铜绿假单胞菌处理的麻疯树饼粕作为饲料使用，存在潜在的安全隐患。 

发明内容

本发明提供了一种新的日沟维肠杆菌及其在麻疯树饼粕发酵脱毒中的应用。 

日沟维肠杆菌，其标准菌株为日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae Brenner et al.，保藏号为ATCC33028，分离自化妆品中，通常用于化妆品中抗菌防腐剂含量的检测，极少引起人体或动物体发病。 

本发明日沟维肠杆菌，它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15。 

本发明还提供了日沟维肠杆菌在麻疯树饼粕的发酵脱毒中的用途。 

其中，所述日沟维肠杆菌是保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15。 

本发明麻疯树饼粕的发酵脱毒方法，包括如下步骤： 

（1）取日沟维肠杆菌，复苏制备种子液； 

（2）取麻疯树饼粕，加水混匀，接种步骤（1）制备的种子液，其中，料水比为1：0.8～1.2（w/v），种子液的接种量为麻疯树饼粕的10～30%（v/w）； 

（3）在温度为30～37℃的条件下发酵2～8天，即可。 

步骤（1）中，所述日沟维肠杆菌是保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15。 

步骤（1）中，所述种子液由如下方法制备：在20ml牛肉膏蛋白胨液体培养基中接种2-3环日沟维肠杆菌，37℃、200r/min下振荡培养10～14h，即可。 

步骤（2）中，本发明方法的处理对象可以是未脱油的麻疯树饼粕，也可以是脱油后的饼粕。未脱油饼粕可按照如下方法制备：取麻疯树种仁，粉碎，过40目筛，即可；脱油饼粕可按照如下两种方法制备：1、将干燥麻疯树种仁粉碎过40目筛，按照索氏脱油方法脱油，即得；2、将干燥麻疯树种仁粉碎过40目筛，采取榨油机榨取的方法脱油，即得。 

步骤（2）中，所述料水比为1:0.8（w/v）；所述种子液的接种量为麻疯树饼粕的25%（v/w）。 

步骤（2）中，所述麻疯树饼粕中添加有碳源，碳源的添加量为麻疯树饼粕的10～20%（w/w），所述碳源为葡萄糖、蔗糖或可溶性淀粉。 

步骤（3）中，所述温度为36～37℃；所述发酵的时间为8天。 

本发明菌株可以有效降低麻疯树饼粕有毒成分，操作简便，成本低廉，应用前景良好。 

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。 

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。 

本发明日沟维肠杆菌zxy‐15（Enterobactergergoviae zxy‐15），于2013年5月8日保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏号为CCTCC：M2013184，保藏地址为中国·武汉·武汉大学。 

附图说明

图1zxy-15菌株16～24h的读数结果 

图2zxy-15菌株的16S rDNAPCR扩增电泳图谱以及进化树 

图3zxy-15生长曲线测定 

图4zxy-15接种量对脱毒效果的影响 

图5料水比对zxy-15脱毒效果的影响 

图6添加碳源对zxy-15脱毒效果的影响 

图7添加不同碳源对zxy-15脱毒效果的影响 

图8发酵温度对zxy-15脱毒效果的影响 

图9发酵时间对zxy-15脱毒效果的影响 

具体实施方式

实施例1本发明日沟维肠杆菌的鉴定特征 

（1）生理生化特征 

对本发明分离菌株在NB和结晶紫平板上培养24h后，取NB平板上单个菌落进行革兰氏染色观察，结合菌株在结晶紫平板上的生长情况判断其革兰氏阴阳性，并进行氧化酶实验和三糖铁实验，结果见表1： 

表1生理生化特征 

从生理生化实验结果可知，本发明zxy-15分离株是革兰氏阴性细菌，且属于肠道菌（GN-ENT），在后续的鉴定实验中选择Biolog鉴定系统中与肠道菌相对应的GN鉴定板。 

（2）Biolog分析结果 

采用Biolog微生物自动分析系统分析，Biolog微生物鉴定系统的结果通常包括三个参数，即可能性（Probability,PROB）、相似性（Similarity,SIM）以及位距（Distance,DIST）。而其中以SIM值最为重要。Biolog鉴定系统既可以依据培养4～6h时菌株对鉴定板上各个微孔中碳源的利用情况读数鉴定，也可以依据16～24h时的数据鉴定。在本试验中，培养16～24h的结果相对较好，取其读数进行鉴定。鉴定结果见图1以及表2。 

表2Biolog鉴定结果 

由图1及表2可以看出，采用Biolog分析方法得出本发明zxy-15分离株为日沟维肠杆菌（Enterobacter gergoviae）。 

（3）16S rDNA鉴定 

对本发明分离株的总DNA进行扩增，PCR扩增后得到约1.5kb的扩增产物。对16S rDNA的序列相似性在NCBI的Blastn上进行序列相似性比对，将GenBank中的相近菌株序列作为参比序列，用Clustal X1.83软件进行多重序列匹配分析，并用Treeconw构建系统发育树。 

实验结果如图2所示，菌株zxy-15与Enterobacter gergoviae同源性较高。 

综上，结合生理生化特征、Biolog分析结果和16S rDNA鉴定结果，将本发明分离株zxy-15鉴定为沟维肠杆菌（Enterobacter gergoviae），并将其命名为日沟维肠杆菌zxy-15（Enterobacter gergoviae）zxy-15。 

实施例2采用本发明日沟维肠杆菌对麻疯树饼粕发酵脱毒的方法 

1材料与仪器 

1.1材料 

菌种：本发明日沟维肠杆菌zxy-15（Enterobacter gergoviae zxy-15），简称菌株zxy-15。 

麻疯树饼粕：将干燥麻疯树种仁粉碎过40目筛，即得。 

1.2主要仪器 

AIRTECH超洁净工作台SW-CJ-2F，带有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪（美国，DIONEX公司），立式压力蒸汽灭菌器LDZX-50KBS，双层恒温振荡器IS-RSV1，超声波清洗仪SB-5200DTDN，FW135植物粉碎机，电热恒温鼓风干燥箱DHG-9070A，SI-234电子天平DENVER INSTRUMENT，海尔冰箱BCD-215KS，紫外分光光度计（UV1700），10ml容量瓶，可调式移液器，三角瓶，接种环，100ml烧杯，2ml注射器。 

美国DIONEX高效液相色谱（ASI-100Auto Sampler Injector，P680A HPLC Pump，PDA-100Photodiode Array Detector，TCC-100Column Themostat）；FW135粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；SI-234电子天平（丹佛仪器北京有限公司）；Millipore超纯水器；KQ5200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；SARTORIUS（BP211D型）十万分之一天平；离心机，滤膜为SERIAL NO.0952；移液管，移液枪， 三角瓶，试剂瓶。 

试剂： 

佛波酯标准品TPA（Phorbol-12-myristate13-acetate）来自SIGMA公司，纯度≥99%。 

JCF对照品,按照公开号为102659583的专利申请实施例1的方法制备，制得的显示佛波酯的特征峰的成分，即为JCF对照品。 

佛波醇酯（JC1）对照品，按照公开号为102659583的专利申请实施例1～实施例2的方法制备，制得的化合物1（Jatropha factor C1）即为JC1。 

所有试剂均为分析纯，色谱所用试剂为色谱纯，均购自成都科龙试剂公司。层析硅胶（160-200目）。 

2试验方法 

2.1培养基 

1）种子培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）：牛肉膏1g,蛋白胨1g,葡萄糖1g,NaCl0.5g,水1000ml，pH7.0。121℃下湿热灭菌30min备用。 

2）固态发酵培养基：麻疯树饼粕粉10g，水、pH自然，115℃～120℃灭菌20min。 

2.2菌悬液的制备 

制备20ml牛肉膏蛋白胨液体培养基于50ml的三角瓶，用接种环分别接入2-3环zxy-15菌株到三角瓶中，置于37℃、200r/min的恒温振荡器中进行菌悬液的培养至对数生长期。 

2.3菌悬液的生长对数中期的确定 

采用分光光度计比浊法在波长600nm下所测的OD值测定实验菌种菌悬液的生长曲线得出生长对数中期的培养时间。在600nm下，菌悬液中的细胞浓度与透光度成反比，与光密度（OD值）成正比。先制作样品的标准曲线，再以未接种的种子培养基为空白对照，进行样品OD值的测定，准确反映出菌株的生长趋势。绘制生长曲线，确定两个菌种液体培养的对数生长中期。 

操作如下： 

①取57个无菌锥形瓶，分别标记培养时间，即0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34和36h。 

②接种用可调式移液器吸取1ml培养了10-12h的zxy-15菌悬液分别转入57个盛有20ml牛肉膏蛋白胨细菌培养液的锥形瓶中，置于37℃、20Orpm恒温振荡器中，分别培养O、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34和36h，按照培养时间将标有相应的时间的锥形瓶取出，置于冰箱（4℃）中储存，最后一同比浊测定其光密度值。 

③比浊测定用未接种的细菌培养液作为空白对照，选用600nm波长进行 测定。 

④绘制生长曲线以培养时间为横坐标，以所测定的OD值为纵坐标绘制两株菌的生长曲线。 

⑤做三个平行试验。 

2.4菌株固体发酵单因素试验 

2.4.1固态发酵饼粕中佛波酯的提取与检测 

2.4.1.1对照品溶液的配制 

将1mg TPA对照品加入1mL甲醇中，配制成浓度为1.0mg·mL^-1的对照品溶液，用0.22um膜过滤，备用。 

取97.82mg JCF对照品,加入1mL乙腈中，配制成浓度为97.82mg·mL^-1的JCF母液，用0.22um膜过滤，备用。 

取6.0mg JC1对照品加入1mL乙醇中，制成浓度为6.0mg·mL^-1的对照品溶液，用0.22um膜过滤，备用。 

2.4.1.2麻疯树饼粕样品的制备 

称取1.5g麻疯树饼粕于10ml容量瓶中，加入8ml甲醇超声提取30min，冷却至室温，用甲醇定容至10ml。用0.22um膜过滤，备用。 

2.4.1.3HPLC检测方法 

采用HPLC-UV-DAD法对TPA、JC1、JCF制备样品及麻疯树饼粕样品进行定量鉴定。采用Agilent ZoRBox C18（250mm×4.6mm,i.d.,5μm）为色谱柱；流动相是乙腈∶超纯水=80∶20（V∶V）；流速：0.8mL·min-1；进样量：10μL；柱温：25℃；DAD扫描波长范围为190～800nm,紫外检测波长为210，230，280，310nm。 

2.4.2固态发酵因素考察试验 

将固态发酵培养基分装于100ml烧杯中，用8层无菌纱布封口，灭菌20min，灭菌后打散冷却备用。选择不同固态发酵条件进行实验，搅拌均匀，静置培养，发酵过程中定时采样，发酵后于60℃烘干、粉碎，采用HPLC-UV-DAD检测方法考察佛波酯峰面积的变化。 

2.4.2.1接种量对发酵脱毒的影响 

采用菌株zxy-15分别对麻疯树饼粕进行发酵，将种子菌液（10⁷个/mL）设定为10%、15%、20%、25%，30%（v/w）等5个总接种量（以麻疯树饼粕粉为标准）水平，料水比设为1∶1，于30℃恒温培养箱中分别培养3d，测定总佛波酯和JC1的峰面积，考察总接种量对发酵脱毒的影响。以未进行发酵的麻疯树饼粕做空白对照实验。 

2.4.2.2发酵料水比对发酵脱毒的影响 

培养基料水比是固态发酵的一个重要因素，显著影响微生物的生长和代谢 相关酶活，进而影响发酵进程的快慢。以麻疯树饼粕为基料，分别选择最佳菌种接种量，控制一定的湿度，选择料水比（W∶V）为1∶0.8、1∶1、1∶1.2等3个条件，于30℃恒温培养箱中分别培养3d后，测定总佛波酯和JC1的峰面积，考察料水比对发酵脱毒的影响。以未进行发酵的麻疯树饼粕做空白对照实验。 

2.4.2.3添加碳源对发酵脱毒的影响 

碳源是微生物生长繁殖所必需的营养元素，并为细胞生命活动提供能量。以麻疯树饼粕为基料，分别选择最佳接种量和发酵料水比，以葡萄糖为外加碳源，选择添加量（W∶W）为10%，15%，20%，于30℃恒温培养箱中分别培养3d后，测定总佛波酯和JC1的峰面积，考察外加碳源对发酵脱毒的影响。以未进行发酵的麻疯树饼粕做空白对照实验。 

2.4.2.4发酵温度对发酵脱毒的影响 

微生物都具有最适的发酵温度。以麻疯树饼粕为基料，分别选择最佳的接种量、发酵料水比和葡糖糖的加入量，分别在25℃，30℃，37℃恒温培养箱中培养3d后，测定总佛波酯和JC1的峰面积，考察发酵温度对发酵脱毒的影响。以未进行发酵的麻疯树饼粕做空白对照实验。 

2.4.2.5发酵时间对发酵脱毒的影响 

微生物不可无限期的繁殖，发酵时间是影响发酵的重要参数，以麻疯树饼粕为基料，分别选择最佳的接种量、发酵料水比、葡萄糖的加入量，以及最佳培养温度，连续分别培养2d，4d，6d，8d，测定总佛波酯和JC1的峰面积，考察发酵时间对发酵脱毒的影响。以未进行发酵的麻疯树饼粕做空白对照实验。 

2.4.2.6不同碳源对发酵脱毒效果的影响 

在2.4.2.3中，我们考察了外加低分子碳源对微生物发酵效果的影响，并且初步探索了加入量与之的效能关系，因此，进一步在确定了加入量的基础上考察加入低分子碳源（葡萄糖和蔗糖）和高分子碳源（可溶性淀粉）对发酵效果的影响。以麻疯树饼粕为基料，分别选择最佳的接种量、发酵料水比、最佳培养温度且选择每组碳源的用量为麻疯树饼粕的20%（w/w），培养至最佳发酵时间。测定总佛波酯和JC1的峰面积，考察不同碳源对发酵脱毒的影响。以未进行发酵的麻疯树饼粕做空白对照实验。 

3结果与分析 

3.1发酵菌株生长曲线绘制 

（1）zxy-15菌株生长曲线的绘制 

zxy-15菌株培养液的OD值测定结果见表3，其生长曲线如图3所示。 

表3zxy-15生长曲线测定 

时间/h	OD600	时间/h	OD600
				0	0.027	20	1.475
2	0.184	22	1.424
				4	0.564	24	1.371
6	0.855	26	1.369
				8	1.083	28	1.342
10	1.224	30	1.313
				12	1.34	32	1.306
14	1.483	34	1.301
				16	1.526	36	1.287
18	1.532

由表3和图3可以看出，经过一级活化后的菌种转接到新鲜的NB培养基中，没有明显的延滞期，菌株生长快速，14h到达对数生长末期，22h进入衰亡期。因此，为了保证发酵菌株的生长活力，种子液发酵的时间为10-14h为最佳。 

3.2菌株固体发酵单因素考察 

3.2.1接种量对脱毒的影响 

菌种在固态发酵中只能自我增殖扩散汲取营养物，接种量的大小在固态发酵过程中直接影响到饼粕的发酵。选择5个接种量水平考察试验菌株在发酵中对佛波酯的降解情况，结果见表4和图4。 

表4zxy-15接种量对脱毒效果的影响 

由表4和图4可知： 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯总量显著下降；佛波酯总量的下降幅度随着接种量的增加，先增加后降低，当接种量为25%时，下降幅度最大，达到38.41%。 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯JC1含量显著下降；佛波酯JC1含量的下降幅度随着接种量的增加而增加，当接种量为30%时，下降幅度最大，达到28.17%。 

综合考虑JC1和佛波酯峰面积的降解情况，用本发明菌株zxy-15对麻疯 树饼粕进行发酵脱毒时，最佳接种量选择25%。 

3.2.2料水比对脱毒的影响 

培养基湿度是固态发酵必需考虑的一个重要参数，干燥或过湿都会引起渗透压不平衡，抑制微生物的生命活动。选择3个料水比水平考察试验菌株在发酵中对佛波酯的降解情况，结果见表5和图5。 

表5料水比对zxy-15菌株脱毒的影响 

由表5和图5可知： 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯总量显著下降；佛波酯总量的下降幅度随着料水比的增加，先降低后增加，当料水比为1：0.8时，下降幅度最大，达到39.26%。 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯JC1含量显著下降；佛波酯JC1含量的下降幅度随着接种量的增加，先增加后降低，料水比为1∶0.8和1∶1时，对佛波酯JC1降解幅度相当。 

实验说明，用本发明菌株zxy-15对麻疯树饼粕进行发酵脱毒时，最佳料水比为1∶0.8。 

3.2.3添加碳源对发酵脱毒的影响 

选择3个水平的葡萄糖含量，在之前得到的最佳接种量和料水比基础上，考察葡萄糖对菌株发酵麻疯树饼粕的影响。结果见表6和图6。 

表6添加碳源对zxy-15菌株脱毒的影响 

由表6和图6可知： 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯总量显著下降；佛波酯总量的 下降幅度随着葡萄糖用量的增加，先降低后升高，当葡萄糖用量为20%时，下降幅度最大，达38.97%。 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯JC1含量显著下降；佛波酯JC1含量的下降幅度随着葡萄糖用量的增加而升高，当葡萄糖用量为20%时，下降幅度最大，达28.55%。 

综合考虑JC1和佛波酯峰面积的降解情况，用本发明菌株zxy-15对麻疯树饼粕进行发酵脱毒时，最佳葡萄糖加入量为20%。 

3.2.4不同碳源对发酵脱毒的影响 

碳源对于微生物生命活动至关重要，不仅为微生物生命活动供能，并且提供了合成产物的碳架。我们分别加入相同量的葡萄糖、蔗糖和可溶性淀粉，并考察了它们对固态发酵脱毒的影响，其结果如表7和图7。 

表7添加不同碳源对zxy-15脱毒效果的影响 

由表7和图7可知： 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯总量显著下降；与空白组（6.7634）相比，佛波酯降解效果最好的实验组是添加可溶性淀粉一组，佛波酯总量的下降幅度为35.07%。 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯JC1含量显著下降；与空白组的JC1峰面积3.6634相比，添加葡糖糖组和可溶性淀粉组对JC1的降解率接近，分别为23.88%和24.00%。 

实验说明，本发明zxy-15发酵麻疯树饼粕脱毒所用的最佳碳源为可溶性淀粉。 

3.2.5发酵温度对发酵脱毒的影响 

当发酵温度较低时，微生物的代谢活动较弱，而发酵温度过高则对微生物的生长和代谢活动有影响。为了考察发酵温度对麻疯树饼粕发酵的影响，分别选取30℃、34℃和37℃作为发酵温度，结果如表8和图8。 

表8发酵温度对zxy-15脱毒效果的影响 

由表8和图8可知： 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯总量显著下降；佛波酯总量的下降幅度随着发酵温度的升高，先升高后降低，发酵温度为34℃时，下降幅度最大，达到33.37%，37℃时的降解幅度为32.84%，二者的差值为0.53%。 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯JC1含量显著下降；佛波酯JC1含量的下降幅度随着发酵温度的升高而升高，发酵温度为37℃时，下降幅度最大，达到22.48%，34℃的降解幅度为20.36%，二者的差值为2.12%。 

综合考虑佛波酯总量和佛波酯JC1的含量下降率，用本发明菌株zxy-15对麻疯树饼粕进行发酵脱毒时，最佳发酵温度为37℃。 

3.2.6发酵时间对发酵脱毒的影响 

发酵时间是发酵过程中的重要参数。微生物具有较强的繁殖能力，由于微生物的生长都遵循典型生长曲线的四个时期，因此，选择最佳发酵时间既不会造成资源的浪费，也不会因发酵周期延长导致更易染菌。本试验选择了2d、4d、6d和8d四个梯度进行考察，对发酵后的饼粕进行佛波酯检测，结果见表9和图9。 

表9发酵时间对zxy-15脱毒效果的影响 

由表9和图9可知： 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯总量显著下降；佛波酯总量的下降幅度随着发酵时间的延长而升高，发酵时间为8天，下降幅度最大，达到55.6%。 

菌株zxy-15对饼粕进行固态发酵后，佛波酯JC1含量显著下降；佛波酯JC1含量的下降幅度随着发酵时间的延长，先升高后降低，发酵时间为4天，下降幅度最大，达到52.8%。 

实验说明，用本发明菌株zxy-15对麻疯树饼粕进行发酵脱毒时，发酵时间优选为8天。 

综上，采用本发明菌株zxy-15对不同麻疯树饼粕进行固态发酵，在自然温度条件下发酵2～4天，毒性成分——佛波酯的去除率可以达到55.6%。 

本发明采用日沟维肠杆菌zxy-15（Enterobacter gergoviae）zxy-15对麻疯树饼粕进行固态发酵的方法，可以有效除去其毒性成分佛波酯，并且，菌株安全性高，制得的产品可进一步加工成为饲用蛋白，具有极好的应用前景。 

Claims (10)

1.一种日沟维肠杆菌，其特征在于：它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviaezxy-15。

2.日沟维肠杆菌在麻疯树饼粕的发酵脱毒中的用途。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述日沟维肠杆菌是保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobacter gergoviae zxy-15。

4.一种麻疯树饼粕的发酵脱毒方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）取日沟维肠杆菌，复苏制备种子液；

（2）取麻疯树饼粕，加水混匀，接种步骤（1）制备的种子液，其中，料水比为1：0.8～1.2（w/v），种子液的接种量为麻疯树饼粕的10～30%（v/w）；

（3）在温度为30～37℃的条件下发酵2～8天，即可。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述日沟维肠杆菌是保藏号：CCTCC NO:M2013184的日沟维肠杆菌Enterobactergergoviae zxy-15。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述种子液由如下方法制备：在20ml牛肉膏蛋白胨液体培养基中接种2-3环日沟维肠杆菌，37℃、200r/min下振荡培养10～14h，即可。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述麻疯树饼粕按照如下方法制备：取麻疯树种仁，粉碎，过40目筛，即可。

8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述麻疯树饼粕中添加有碳源，碳源的添加量为麻疯树饼粕的10～20%（w/w），所述碳源为葡萄糖、蔗糖或可溶性淀粉。

9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述料水比为1:0.8（w/v）；所述种子液的接种量为麻疯树饼粕的25%（v/w）。

10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，所述温度为36～37℃；所述发酵的时间为8天。

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