CN103499655A - 一种酒中香兰素的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种酒中香兰素的检测方法，包括如下步骤：1）配制标准液；2）样品前处理：量取待测酒的样品，除去乙醇；3）量取步骤2）处理好的样品，采用乙醚萃取；4）量取步骤2）处理好的样品，加入步骤1）配置好的标准液，再采用乙醚萃取；5）采用气相色谱仪检测经步骤1）配制好的标准液、经步骤3）处理好的样品以及步骤4）处理好的样品。本发明采用乙醚液液萃取的方式可以较充分的提取酒中的香兰素，实现除杂和富集，以符合气相色谱法（GC）检测的要求，并通过标样回收率校正提取效率，通过外标法实现精确定量。
Description
技术领域
本发明涉及一种香兰素的检测方法，特别是一种酒中香兰素的检测方法。
背景技术
香兰素，又名香草醛，是一种广泛使用的可食用香料，可在香荚兰的种子中找到，也可以人工合成，有浓烈的奶香气息，天然的香兰素亦发现于部分发酵酒当中，是酒香成分的重要组成之一。酒类中香兰素的测定一般采用气相色谱法，香兰素在水中和在有机溶剂中有较大的溶解度差异，采用气相色谱法检测香兰素过程中会由于样品处理不当出现杂质较多、回收率偏低等原因影响精确定量。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种酒中香兰素的检测方法，采用乙醚液液萃取的方式可以较充分的提取酒中的香兰素，实现除杂和富集，以符合气相色谱法（GC）检测的要求，并通过优化气相检测条件，实现了样品峰的完全分离，同时，通过标样回收率校正提取效率，用外标法实现精确定量，检测下限为0.1mg/L。
为达到上述目的，本发明的技术方案是：
一种酒中香兰素的检测方法，包括如下步骤：1）配制标准液；2）样品前处理：量取待测酒样品，除去乙醇；3）量取步骤2）处理好的样品，采用乙醚萃取；4）量取步骤2）处理好的样品，加入步骤1）配置好的标准液，再采用乙醚萃取；5）采用气相色谱仪检测经步骤1）配制好的标准液、经步骤3）处理好的样品以及步骤4）处理好的样品，并通过峰面积外标法计算得到香兰素含量。
所述的待测酒为黄酒。
所述的步骤1）具体为：精确称取香兰素粉末，加入去离子水定容至配制成浓度为100mg/L，并稀释得到浓度为2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的标准液。
所述的步骤2）具体为：量取100ml的待测酒的样品，采用旋转减压蒸馏除去乙醇，减压蒸馏时的温度为40℃，再加去离子水定容至与取样时相同的体积。
所述的步骤2）具体为：量取2ml的待测酒的样品，采用氮气在55℃下吹干除去乙醇。
所述的步骤3）具体为量取2ml的步骤2）处理好的样品，再加入等体积的乙醚，涡旋混匀后，静置分层，取出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。
所述的步骤3）具体为量取2ml的步骤2）处理好的样品，再加入等体积的乙醚，涡旋混匀后，分层困难时，加入0.1～0.3g分析纯氯化钠静置分层或离心分层，取出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。
所述的步骤4）具体为量取步骤2）处理好的样品中，加入步骤1）配置好的浓度为100mg/L的标准液，所述的步骤2）处理好的样品与步骤1）配置好的标准液的体积比为20:1，再加入与样品等体积的乙醚，涡旋混匀后，静置分层，取出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。
所述的步骤4）具体为量取步骤2）处理好的样品中，加入步骤1）配置好的浓度为100mg/L的标准液，所述的步骤2）处理好的样品与步骤1）配置好的标准液的体积比为20:1，再加入与样品等体积的乙醚，涡旋混匀后，分层困难时，加入0.1～0.3g分析纯氯化钠静置分层或离心分层，取出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。
所述的步骤5）中气相色谱仪的检测条件为：采用innowax极性柱子；进样口温度为250℃；不分流进样；载气恒流速为5ml/min；柱箱起始温度150℃，保持4min，15℃/min升温至200℃，保持15分钟；检测器温度为300℃；氢气流量为30ml/min、空气流量为400ml/min、尾吹气流量为25ml/min。
本发明的有益效果是：本发明的一种酒中香兰素的检测方法，由于香兰素在水中和在有机溶剂中有较大的溶解度差异，本发明采用乙醚液液萃取的方式可以较充分的提取黄酒中的香兰素，实现除杂和富集，以符合气相色谱法（GC）检测的要求，并通过标样回收率校正提取效率，实现精确定量。采用乙醚萃取酒样中的香兰素效果良好，方法操作简便，检测成本低，准确度较高，线性相关性在0.99990，重复性平均偏差RSD%小于4%，本方法已适合推广使用。
附图说明
图1是本发明酒中香兰素的检测方法相关性试验中的不同浓度的线性相关性图。
图2是本发明酒中香兰素的检测方法中标样的出峰图；
图3是本发明酒中香兰素的检测方法中样品的出峰图。
具体实施方式
实施例1
本实施例的一种酒中香兰素的检测方法，包括如下步骤：1）配制标准液：精确称取0.01g香兰素粉末，加入100ml蒸馏水或去离子水定容至配制成浓度为100mg/L，并稀释得到浓度为2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的标准液；2）样品前处理：量取100ml的待测酒的样品，采用旋转减压蒸馏除去乙醇，减压蒸馏时的温度为40℃，现象为液体沸腾力度减弱即可停止，转移至100ml容量瓶，用蒸馏水或去离子水洗蒸馏瓶2-3次，合并洗液定容至100ml。3）量取2ml步骤2）处理好的样品至带盖10ml试管，再加入2ml的乙醚，加盖，涡旋混匀后，静置分层，分出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。4）量取2ml步骤2）处理好的样品至带盖试管中，加入100ul步骤1）配置好的100mg/L香兰素标准液，再加入2ml的乙醚，加盖，涡旋混匀后，静置分层，分出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。5）采用气相色谱仪检测经步骤1）配制好的标准液、经步骤3）处理好的样品以及步骤4）处理好的样品。标样的出峰图见图2，样品的出峰图见图3。气相色谱仪的检测条件为：气相色谱仪的型号为安捷伦7890A带FID检测器；采用innowax极性柱子；进样口温度为250℃；不分流进样；载气恒流速为5ml/min；柱箱起始温度150℃，保持4min，15℃/min升温至200℃，保持15分钟；检测器温度为300℃；氢气流量为30ml/min、空气流量为400ml/min、尾吹气流量为25ml/min。
通过本实施例检测得到香兰素的出峰时间在20.732min，峰面积为32.14008，计算公式为：含量/峰面积为6.51534e-2，计算得样品香兰素含量为2.09404mg/L。
本实施例的一种酒中香兰素的检测方法，由于香兰素在水中和在有机溶剂中有较大的溶解度差异，本实施例采用乙醚液液萃取的方式可以较充分的提取黄酒中的香兰素，实现除杂和富集，以符合气相色谱法（GC）检测的要求，并通过标样回收率校正提取效率，实现精确定量。采用乙醚萃取酒样中的香兰素效果良好，方法操作简便，检测成本低，准确度较高，线性相关性在0.99990，重复性平均偏差RSD%小于4%，本方法适合推广使用。
实施例2
本实施例的一种酒中香兰素的检测方法，包括如下步骤：1）配制标准液：精确称取0.01g香兰素粉末，加入100ml蒸馏水或去离子水定容至配制成浓度为100mg/L，并稀释得到浓度为2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的标准液；2）样品前处理：量取2ml的待测酒的样品至带盖10ml试管，采用氮气在55℃下吹干除去乙醇。3）在步骤2）处理好的样品中，加入2ml的乙醚，加盖，涡旋混匀后，分层困难时，加入0.1～0.3g分析纯氯化钠静置分层或离心分层，分出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。4）量取2ml步骤2）处理好的样品中，加入100ul步骤1）配置好的100mg/L香兰素标准液，再加入2ml的乙醚，涡旋混匀后，分层困难时，加入0.1～0.3g分析纯氯化钠静置分层或离心分层，分出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。5）采用气相色谱仪检测经步骤1）配制好的标准液、经步骤3）处理好的样品以及步骤4）处理好的样品。气相色谱仪的检测条件为：气相色谱仪的型号为安捷伦7890A带FID检测器；采用innowax极性柱子；进样口温度为250℃；不分流进样；载气恒流速为5ml/min；柱箱起始温度150℃，保持4min，15℃/min升温至200℃，保持15分钟；检测器温度为300℃；氢气流量为30ml/min、空气流量为400ml/min、尾吹气流量为25ml/min。
通过本实施例检测得到香兰素的出峰时间在20.679min，峰面积为10.38493，计算公式为：含量/峰面积为6.51534e-2，计算得样品香兰素含量为0.67661mg/L。
本实施例的一种酒中香兰素的检测方法，由于香兰素在水中和在有机溶剂中有较大的溶解度差异，本实施例采用乙醚液液萃取的方式可以较充分的提取黄酒中的香兰素，实现除杂和富集，以符合气相色谱法（GC）检测的要求，并通过标样回收率校正提取效率，实现精确定量。采用乙醚萃取酒样中的香兰素效果良好，方法操作简便，检测成本低，准确度较高，线性相关性在0.99990，重复性平均偏差RSD%小于4%，本方法适合推广使用。
实施例3
本实施例的一种酒中香兰素的检测方法，包括如下步骤：1）配制标准液：精确称取0.01g香兰素粉末，加入100ml蒸馏水或去离子水定容至配制成浓度为100mg/L，并稀释得到浓度为2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的标准液；2）样品前处理：量取2ml的待测酒的样品至带盖10ml试管，采用氮气在55℃下吹干除去乙醇。3）在步骤2）处理好的样品中，加入2ml的乙醚，加盖，涡旋混匀后，静置分层，分层困难时，加入0.1～0.3g分析纯氯化钠静置分层或离心分层，分出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。4）量取2ml步骤2）处理好的样品中，加入100ul步骤1）配置好的100mg/L香兰素标准液，再加入2ml的乙醚，涡旋混匀后，静置分层，分层困难时，加入0.1～0.3g分析纯氯化钠静置分层或离心分层，分出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。5）采用气相色谱仪检测经步骤1）配制好的标准液、经步骤3）处理好的样品以及步骤4）处理好的样品。气相色谱仪的检测条件为：气相色谱仪的型号为安捷伦7890A带FID检测器；采用innowax极性柱子；进样口温度为250℃；不分流进样；载气恒流速为5ml/min；柱箱起始温度150℃，保持4min，15℃/min升温至200℃，保持15分钟；检测器温度为300℃；氢气流量为30ml/min、空气流量为400ml/min、尾吹气流量为25ml/min。
通过本实施例检测得到香兰素的出峰时间在20.679min，峰面积为10.38493，计算公式为：含量/峰面积为6.51534e-2，计算得样品香兰素含量为0.67661mg/L。
本实施例的一种酒中香兰素的检测方法，由于香兰素在水中和在有机溶剂中有较大的溶解度差异，本实施例采用乙醚液液萃取的方式可以较充分的提取黄酒中的香兰素，实现除杂和富集，以符合气相色谱法（GC）检测的要求，并通过标样回收率校正提取效率，实现精确定量。采用乙醚萃取酒样中的香兰素效果良好，方法操作简便，检测成本低，准确度较高，线性相关性在0.99990，重复性平均偏差RSD%小于4%，本方法适合推广使用。
实施例4
本实施例的一种酒中香兰素的检测方法，包括如下步骤：1）配制标准液：精确称取0.01g香兰素粉末，加入100ml蒸馏水或去离子水定容至配制成浓度为100mg/L，并稀释得到浓度为2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的标准液；2）样品前处理：量取100ml的待测酒的样品，采用旋转减压蒸馏除去乙醇，减压蒸馏时的温度为40℃，现象为液体沸腾力度减弱即可停止，转移至100ml容量瓶，用蒸馏水或去离子水洗蒸馏瓶2-3次，合并洗液定容至100ml。3）量取2ml步骤2）处理好的样品至带盖10ml试管，再加入2ml的乙醚，加盖，涡旋混匀后，静置分层，分出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。4）量取2ml步骤2）处理好的样品至带盖试管中，加入100ul步骤1）配置好的100mg/L香兰素标准液，再加入2ml的乙醚，加盖，涡旋混匀后，静置分层，分出上清液后，采用45nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。5）采用气相色谱仪检测经步骤1）配制好的标准液、经步骤3）处理好的样品以及步骤4）处理好的样品。标样的出峰图见图2，样品的出峰图见图3。气相色谱仪的检测条件为：气相色谱仪的型号为安捷伦7890A带FID检测器；采用innowax极性柱子；进样口温度为250℃；不分流进样；载气恒流速为5ml/min；柱箱起始温度150℃，保持4min，15℃/min升温至200℃，保持15分钟；检测器温度为300℃；氢气流量为30ml/min、空气流量为400ml/min、尾吹气流量为25ml/min。
通过本实施例检测得到香兰素的出峰时间在20.732min，峰面积为32.14008，计算公式为：含量/峰面积为6.51534e-2，计算得样品香兰素含量为2.09404mg/L。
本实施例的一种酒中香兰素的检测方法，由于香兰素在水中和在有机溶剂中有较大的溶解度差异，本实施例采用乙醚液液萃取的方式可以较充分的提取黄酒中的香兰素，实现除杂和富集，以符合气相色谱法（GC）检测的要求，并通过标样回收率校正提取效率，实现精确定量。采用乙醚萃取酒样中的香兰素效果良好，方法操作简便，检测成本低，准确度较高，线性相关性在0.99990，重复性平均偏差RSD%小于4%，本方法适合推广使用。
对比实施例1
1）标准液配制：0.5g香兰素晶体用正己烷和乙醇混合液定容至50ml，获得香兰素母液（10000mg/L）；各吸取香兰素母液0.1ml，分别用正己烷和无水乙醇溶液定容至10ml（浓度为100mg/L）。2）黄酒中香兰素通过正己烷萃取除杂，浓缩富集，用气相色谱法检测；样品前处理：取黄酒2ml，加2ml正己烷，涡旋混匀，采用离心分层，取上层有机相，上GC检测。3）回收率试验：取黄酒2ml，加入100mg/L的香兰素醇溶液液0.1ml，涡旋混匀，再加入2ml正己烷萃取，涡旋混匀，分层萃取，上GC检测。气相条件：气相色谱仪的型号为安捷伦7890A带FID检测器；采用innowax极性柱子；进样口温度为250℃；不分流进样；载气恒流速为5ml/min；柱箱起始温度150℃，保持4min，15℃/min升温至200℃，保持15分钟；检测器温度为300℃；氢气流量为30ml/min、空气流量为400ml/min、尾吹气流量为25ml/min。通过本实施例得到的回收率10%左右。
相关性试验，考察准确度：将经实施例1中步骤2）处理后的待检测样品制备相同的5份，且分别配成2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L香草醛标准品，采用实施例1中步骤4）相同的方法处理后，经过GC检测，添加浓度跟平均峰面积结果如表1所示，根据表1作相关性图，得到不同浓度的线性相关性图如图1所示。
重复性试验：取与实施例1相同的待测酒样7个，重复做与实施例1的步骤2）中相同的前处理，每个单独进样2次取平均值，通过表1得到的校正公式计算得到的标准偏差与重复性平均偏差RSD%的结果如表2所示。
回收率试验：取与实施例1相同的待测酒样7个，加入香兰素标准水溶液至5mg/L,重复做与实施例1的步骤2）中相同的前处理，分别进样测得峰面积，同5mg/L的香兰素乙醚标准液在同GC条件下进样测得的峰面积相比较，计算出回收率，所得回收率结果如表3所示。
通过相关性试验和重复性试验后可知，采用乙醚萃取酒样中的香兰素效果良好，方法操作简便，检测成本低，准确度较高，线性相关性在0.99990，重复性平均偏差RSD%小于4%，因此本发明方法适合推广使用。
表1
表2
表3
Claims (10)
1.一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于包括如下步骤：1）配制标准液；2）样品前处理：量取待测酒样品，除去乙醇；3）量取步骤2）处理好的样品，采用乙醚萃取；4）量取步骤2）处理好的样品，加入步骤1）配置好的标准液，再采用乙醚萃取；5）采用气相色谱仪检测经步骤1）配制好的标准液、经步骤3）处理好的样品以及步骤4）处理好的样品，并通过峰面积外标法计算得到香兰素含量。
2.如权利要求1所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的待测酒为黄酒。
3.如权利要求1所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的步骤1）具体为：精确称取香兰素粉末，加入去离子水定容至配制成浓度为100 mg/L，并稀释得到浓度为2.5mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L的标准液。
4.如权利要求1所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的步骤2）具体为：量取100ml的待测酒的样品，采用旋转减压蒸馏除去乙醇，减压蒸馏时的温度为40℃，再加去离子水定容至与取样时相同的体积。
5.如权利要求1所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的步骤2）具体为：量取2ml的待测酒的样品，采用氮气在55℃下吹干除去乙醇。
6.如权利要求1所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的步骤3）具体为量取2ml的步骤2）处理好的样品，再加入等体积的乙醚，涡旋混匀后，静置分层，取出上清液后，采用45 nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。
7.如权利要求1所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的步骤3）具体为量取2ml的步骤2）处理好的样品，再加入等体积的乙醚，涡旋混匀后，加入0.1～0.3g分析纯氯化钠静置分层或离心分层，取出上清液后，采用45 nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。
8.如权利要求1或3所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的步骤4）具体为量取步骤2）处理好的样品中，加入步骤1）配置好的浓度为100mg/L的标准液，所述的步骤2）处理好的样品与步骤1）配置好的标准液的体积比为20:1，再加入与样品等体积的乙醚，涡旋混匀后，静置分层，取出上清液后，采用45 nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。
9.如权利要求1或3所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的步骤4）具体为量取步骤2）处理好的样品中，加入步骤1）配置好的浓度为100mg/L的标准液，所述的步骤2）处理好的样品与步骤1）配置好的标准液的体积比为20:1，再加入与样品等体积的乙醚，涡旋混匀后，加入0.1～0.3g分析纯氯化钠静置分层或离心分层，取出上清液后，采用45 nm有机膜过滤得到处理好的待检测样品。
10.如权利要求1所述的一种酒中香兰素的检测方法，其特征在于：所述的步骤5）中气相色谱仪的检测条件为：采用innowax极性柱子；进样口温度为250℃；不分流进样；载气恒流速为5ml/min；柱箱起始温度150℃，保持4min，15℃/min升温至200℃，保持15分钟；检测器温度为300℃；氢气流量为30 ml/min、空气流量为400 ml/min、尾吹气流量为25ml/min。
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| CN103499655B (zh) | 2015-01-28 |
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Denomination of invention: A detection method of vanillin in wine Effective date of registration: 20211210 Granted publication date: 20150128 Pledgee: Zhejiang Shaoxing Ruifeng Rural Commercial Bank Co.,Ltd. HUTANG sub branch Pledgor: ZHEJIANG PAGODA BRAND SHAOXING WINE Co.,Ltd. Registration number: Y2021330002517 |