CN103494955B

CN103494955B - 治疗心脑血管疾病的中药组合物

Info

Publication number: CN103494955B
Application number: CN201310439942.5A
Authority: CN
Inventors: 蹇奇先; 范仕明; 柯昌林
Original assignee: GUANGYUAN YIMING BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Current assignee: GUANGYUAN YIMING BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date: 2013-09-25
Filing date: 2013-09-25
Publication date: 2016-01-13
Anticipated expiration: 2033-09-25
Also published as: CN103494955A

Abstract

本发明公开一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，按重量百分比由下列组分组成：含70%～98%绿原酸的杜仲叶提取物5.0%～50.0%，含20%～27%黄酮的杜仲皮提取物15.0%～50.0%，含60%～90%茶多酚的绿茶提取物2.5%～70.0%。本发明所述的组合物具有明显的抗脑缺血、心肌缺血作用，疗效更好、更加方便。

Description

治疗心脑血管疾病的中药组合物

技术领域

本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的中药组合物及其制备方法。

背景技术

随着人们生活水平的不断提高，饮食结构的改变，冠心病的发病率日渐攀升。冠心病是由于冠状动脉粥样硬化引起管腔狭窄，造成心肌供血供氧障碍而引起的心脏病，被称为是“世界杀手”。半个世纪以来，冠心病已成为威胁人类健康最严重的疾病之一。流行病学调查显示，近五十年来不论在农村或城市，心脑血管疾病的发病率和死亡率均呈上升趋势。1975年以后心脑血管疾病死亡者已占全部疾病死因第一位。30年中循环系统死因构成将增高59.6%，冠心病和脑卒中分别增高74.6%和75%。这些资料充分说明，心脑血管疾病不仅是危害人类健康的主要疾病，更是目前和未来20年内人类致死、致残的“头号杀手”。

在心脑血管疾病的治疗药物中，中药副作用小。在目前众多治疗心脑血管疾病的中成药中，复方制剂占有重要的位置，尤其以有效部位为主要活性成分的中成药也愈来愈受到人们的重视。治疗心脑血管疾病的各种中药有效部位的功效各有不同和侧重，临床上存在联合用药的巨大需求，因此，以有效部位制备的具有剂量小、疗效好、质量稳定等特点复方制剂，有着广阔的市场前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗心脑血管疾病的组合物。

本发明的另一目的是提供一种上述组合物的制备方法。

本发明的中药有效部位组合物，按重量百分比包括下列组分：

含70%～98%绿原酸的杜仲叶提取物5.0%～50.0%

含20%～27%黄酮的杜仲皮提取物15.0%～50.0%

含60%～90%茶多酚的绿茶提取物2.5%～70.0%。

本发明的中药有效部位组合物，优选为按重量百分比包括下列组分：

含70%～98%绿原酸的杜仲叶提取物10.0%～38.0%

含20%～27%黄酮的杜仲皮提取物20.0%～35.0%

含60%～90%茶多酚的绿茶提取物8%～55.0%。

本发明的中药有效部位组合物，更优选为按重量百分比包括下列组分：

含70%～98%绿原酸的杜仲叶提取物27.0%

含20%～27%黄酮的杜仲皮提取物28.0%

含60%～90%茶多酚的绿茶提取物45.0%

所述的绿原酸可以从市场上购得后纯化至70%～98%，也可以采用以下步骤制得：

取杜仲叶，将其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1:1)，加热回流40min，提取3次，滤液合并得提取液I。药渣加入70%乙醇，加热回流40min，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用8%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品：制备色谱的分离条件：色谱柱为半制备柱(LichrospherC18；10.0mm×250mm，5mm)，流动相为水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序如下：

0min时，流动相A为85%，流动相B为15%；

10min时，流动相A为79%，流动相B为21%；

15min时，流动相A为69%，流动相B为31%；

30min时，流动相A为63%，流动相B为37%；

35min时，流动相A为15%，流动相B为85%；

45min时，流动相A为15%，流动相B为85%；

流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段13.5～32.5min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。

优选的，在时间段15.5～28.5min收集溶液。

流动相A和B为体积比；流动相A是在100ml水中加入醋酸0.1ml；流动相B是乙腈溶液。

所述的杜仲黄酮可以从公开市场上购得后再纯化使得黄酮含量达到20%～27%，也可以采用以下方法制备：

取杜仲皮，将其粉碎后加入体积比2:3的乙酸乙酯和65%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～3小时，第二次和第三次分别1～2小时，滤液合并得提取液I，药渣加入70%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～1.5小时，第二次和第三次分别0.5～1小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用70%乙醇溶解浸膏，采用非极性或弱极性大孔树脂对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I；然后以60%～70%乙醇洗脱，再以90%～95%乙醇洗脱，得洗脱液II，回收，减压浓缩，干燥，即得杜仲总黄酮提取物。

所述的洗脱流速为2～6BV/h；优选的，洗脱流速为2～4BV/h，更优选的为3BV/h。

所述的大孔树脂优选为AB-8和X-5，更优选为AB-8。所述的乙醇浓度为体积浓度。

经检测，沙棘总黄酮产物纯度可达20～27%。

所述的茶多酚可以从市场上购得后纯化至60%～90%，也可以采用以下方法制备：

绿茶粉碎，加80%乙醇，100℃回流提取3次，料液重量体积比1:8-10，提取时间10-30min，合并提取液；

离心，弃残渣，得上清液；

聚酰胺树脂吸附：柱高与直径比20，去离子水洗涤0.5h；

洗脱：去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min,去离子水中含有少量咖啡因，弃去，收集乙醇洗脱液，浓缩，即得。

经检测，茶多酚80%以上。

本发明所述的绿原酸、黄酮和茶多酚含量测定均采用现有技术记载的方法。

本发明的中药组合物，可与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各种剂型，例如，可制成水针剂、片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、粉针剂、胶囊剂、微粒剂、口服液。优选剂型为口服液、片剂。

本发明中药组合物原料来源易得，易于产业化；可根据需要制成各种剂型，更加有效、质量更加可控，为患者带来更多的利益，从而产生巨大的社会效益。

实验例几种中药提取物抗心肌缺血作用的实验研究

1、分组及给药

Wister雄性大鼠70只，体重249.2±22.7,按体重随机分为7组：生理盐水对照组；实施例二的杜仲黄酮提取物组；实施例二的绿原酸提取物组；实施例二的茶多酚提取物组；实施例一的中药组合物；实施例二的中药组合物。各药物均以生理盐水稀释至所需浓度，给药量为4ml/kg，尾静脉给药。

2、方法

（1）大鼠实验性心肌梗死模型：动物戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（45mg/kg），仰位固定。气管插管，在胸骨左侧作2cm的纵切口，近胸骨侧剪断第3、第4勒软骨，打开胸腔后，连接人工呼吸机（通气量2ml/100g，50次/min）。剪开心包膜，暴露心脏，冠状动脉左前降支根部穿线以备结扎，记录标准II导联心电图，稳定10分钟，结扎冠状动脉左前降支，关闭胸腔。用针筒吸出动物喉部分泌物，使动物恢复自主呼吸。结扎冠状动脉15min后，静脉给药。结扎冠状动脉4小时后，摘取心脏，在结扎线以下横切5片，进行氯化硝基四氮唑蓝（NBT）染色，计算心肌梗死区面积占心室及心脏面积的百分比，并进行统计学处理（t检验）。

（2）离体langendorff心脏灌流法：参考药理实验方法学第三版进行。

3、结果

（1）对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响，结果见表1。

表1各种提取物对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响

注：与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01；与黄酮提取物组相比，^#P<0.05,^##P<0.01；与绿原酸提取物组相比，^&P<0.05,^&&P<0.01；与茶多酚提取物组相比，P<0.05,P<0.01

（2）对离体豚鼠心脏冠脉流量及心率的影响，结果见表2。

表2各种提取物对离体豚鼠心脏冠脉流量及心率的影响（）

注：与黄酮提取物组相比，*P<0.05，**P<0.01；与绿原酸提取物组相比，，^#P<0.05,^##P<0.01；与茶多酚提取物组相比，^&P<0.05,^&&P<0.01。

以上表1及表2的结果显示，各给药组都具有明显的抗心肌缺血作用，而本发明有效部位组合物的疗效最好。

具体实施方式

参考下列实施例将更易于理解本发明，给出实施例是为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

实施例1

绿原酸提取物的制备：取杜仲叶，将其粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇(1:1)，加热回流40min，提取3次，滤液合并得提取液I。药渣加入70%乙醇，加热回流40min，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用8%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品：制备色谱的分离条件：色谱柱为半制备柱(LichrospherC18；10.0mm×250mm，5mm)，流动相为水(A)和乙腈(B)，梯度洗脱程序如下：

0min时，流动相A为85%，流动相B为15%；10min时，流动相A为79%，流动相B为21%；15min时，流动相A为69%，流动相B为31%；30min时，流动相A为63%，流动相B为37%；35min时，流动相A为15%，流动相B为85%；45min时，流动相A为15%，流动相B为85%；流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段13.5～32.5min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。

杜仲黄酮提取物的制备：取杜仲皮，将其粉碎后加入体积比2:3的乙酸乙酯和65%乙醇，加热回流提取3次，分别1小时，滤液合并得提取液I，药渣加入70%乙醇，加热回流提取3次，第一次1小时，第二次和第三次各0.5小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用70%乙醇溶解浸膏，采用大孔树脂X-5对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I；然后以60%乙醇洗脱，再以90%乙醇洗脱，洗脱流速为2BV/h，得洗脱液II，回收，减压浓缩，干燥，即得。

茶多酚提取物的制备：绿茶粉碎，加80%乙醇，100℃回流提取3次，料液重量体积比1:8，提取时间10-30min，合并提取液；离心，弃残渣，得上清液；聚酰胺树脂吸附：柱高与直径比20，去离子水洗涤0.5h；去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min,去离子水中含有少量咖啡因，弃去，收集乙醇洗脱液，浓缩，即得。

实施例2

0min时，流动相A为85%，流动相B为15%；10min时，流动相A为79%，流动相B为21%；15min时，流动相A为69%，流动相B为31%；30min时，流动相A为63%，流动相B为37%；35min时，流动相A为15%，流动相B为85%；45min时，流动相A为15%，流动相B为85%；流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段15.5～28.5min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。

杜仲黄酮提取物的制备：取杜仲皮，将其粉碎后加入体积比2:3的乙酸乙酯和65%乙醇，加热回流提取3次，第一次3小时，第二次和第三次分别2小时，滤液合并得提取液I，药渣加入70%乙醇，加热回流提取3次，第一次1.5小时，第二次和第三次各1小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用70%乙醇溶解浸膏，采用大孔树脂AB-8对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I；然后以70%乙醇洗脱，再以95%乙醇洗脱，洗脱流速为3BV/h得洗脱液II，回收，减压浓缩，干燥，即得杜仲总黄酮提取物。

茶多酚提取物的制备：绿茶粉碎，加80%乙醇，100℃回流提取3次，料液重量体积比1:10，提取时间30min，合并提取液；离心，弃残渣，得上清液；聚酰胺树脂吸附：柱高与直径比20，去离子水洗涤0.5h；去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min,去离子水中含有少量咖啡因，弃去，收集乙醇洗脱液，浓缩，即得。

实施例3

0min时，流动相A为85%，流动相B为15%；10min时，流动相A为79%，流动相B为21%；15min时，流动相A为69%，流动相B为31%；30min时，流动相A为63%，流动相B为37%；35min时，流动相A为15%，流动相B为85%；45min时，流动相A为15%，流动相B为85%；流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段15～25min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。

杜仲黄酮提取物的制备：取杜仲皮，将其粉碎后加入体积比2:3的乙酸乙酯和65%乙醇，加热回流提取3次，第一次2小时，第二次和第三次分别1.5小时，滤液合并得提取液I，药渣加入70%乙醇，加热回流提取3次，第一次1.5小时，第二次和第三次各0.8小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用70%乙醇溶解浸膏，采用大孔树脂AB-8对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I；然后以65%乙醇洗脱，再以90%乙醇洗脱，洗脱流速为4BV/h，得洗脱液II，回收，减压浓缩，干燥，即得杜仲总黄酮提取物。

茶多酚提取物的制备：绿茶粉碎，加80%乙醇，100℃回流提取3次，料液重量体积比1:9，提取时间20min，合并提取液；离心，弃残渣，得上清液；聚酰胺树脂吸附：柱高与直径比20，去离子水洗涤0.5h；去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min,去离子水中含有少量咖啡因，弃去，收集乙醇洗脱液，浓缩，即得。

实施例4

实施例一的绿原酸提取物5.0g、取实施例一的黄酮提取物4.0g，实施例二的茶多酚提取物1.0g；杜仲黄酮提取物用适量乙醇溶解，加入到饱和的羟丙基β-环糊精溶液中，搅拌均匀后，再搅拌1小时，冷藏过夜，抽滤，滤液低温干燥，得杜仲黄酮提取物和羟丙基β-环糊精的包合物粉末。杜仲黄酮提取物和羟丙基β-环糊精的包合物粉末与绿原酸提取物、茶多酚提取物混合均匀，冷冻干燥，得中药组合物。

实施例5

实施例二的绿原酸提取物2.7g、取实施例二的黄酮提取物2.8g，实施例二的茶多酚提取物4.5g，加去离子水制成口服液。

实施例6

实施例一的绿原酸提取物3.0g、取实施例一的黄酮提取物3.0g，实施例一的茶多酚提取物4.0g，加去离子水制成口服液。

实施例7

实施例一的绿原酸提取物4.0g、取实施例一的黄酮提取物4.0g，实施例一的茶多酚提取物2.0g，加去离子水制成口服液。黄酮提取物用适量乙醇溶解，加入到饱和的羟丙基β-环糊精溶液中，搅拌均匀后，再搅拌1小时，冷藏过夜，抽滤，滤液低温干燥，得黄酮提取物和羟丙基β-环糊精的包合物粉末。黄酮提取物和羟丙基β-环糊精的包合物粉末与绿原酸提取物、茶多酚提取物以及与56g微晶纤维素和27g硬脂酸镁混合均匀，压制成800片，即得。

实施例8

实施例一的绿原酸提取物1.5g、取实施例二的黄酮提取物1.5g，实施例三的茶多酚提取物7.0g，加辅料制成硬胶囊。

实施例9

实施例三的绿原酸提取物5.0g、取实施例二的黄酮提取物4.0g，实施例一的茶多酚提取物1.0g，加去离子水制成口服液。

实施例10

实施例三的绿原酸提取物3.0g、取实施例二的黄酮提取物2.0g，实施例一的茶多酚提取物5.0g，加辅料制成颗粒剂。

实施例11

实施例一的绿原酸提取物2.0g、取实施例三的黄酮提取物2.0g，实施例二的茶多酚提取物6.0g，加辅料制成硬胶囊。

实施例12

实施例一的绿原酸提取物2.0g、取实施例二的黄酮提取物1.5g，实施例三的茶多酚提取物6.5g，加去离子水制成口服液。

Claims

1.一种治疗心脑血管疾病的中药组合物，按重量百分比由下列组分组成：

含70%～98%绿原酸的杜仲叶提取物5.0%～50.0%

含20%～27%黄酮的杜仲皮提取物15.0%～50.0%

含60%～90%茶多酚的绿茶提取物2.5%～70.0%。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述组分的重量百分比为：

含70%～98%绿原酸的杜仲叶提取物10.0%～38.0%

含20%～27%黄酮的杜仲皮提取物20.0%～35.0%

含60%～90%茶多酚的绿茶提取物8%～55.0%。

3.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述组分的重量百分比为：

含70%～98%绿原酸的杜仲叶提取物27.0%

含20%～27%黄酮的杜仲皮提取物28.0%

含60%～90%茶多酚的绿茶提取物45.0%。

4.根据权利要求1～3任一权利要求所述的中药组合物，其特征在于，所述的绿原酸采用以下步骤制得：取杜仲叶，将其粉碎后加入1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流40min，提取3次，滤液合并得提取液I；药渣加入70%乙醇，加热回流40min，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用8%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品：制备色谱的分离条件：色谱柱为半制备柱Lichrospher-C18；10.0mmX250mm，5μm，流动相为A为水和B为乙腈，梯度洗脱程序如下：

0min时，流动相A为85%，流动相B为15%；

10min时，流动相A为79%，流动相B为21%；

15min时，流动相A为69%，流动相B为31%；

30min时，流动相A为63%，流动相B为37%；

35min时，流动相A为15%，流动相B为85%；

45min时，流动相A为15%，流动相B为85%；

流动相A是在100ml水中加入醋酸0.1ml；流动相B是乙腈溶液，流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段13.5～32.5min收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。

5.根据权利要求4所述的中药组合物，其特征在于，在时间段15.5～28.5min收集溶液。

6.根据权利要求1～3任一权利要求所述的中药组合物，其特征在于，所述的杜仲黄酮采用以下方法制备：取杜仲皮，将其粉碎后加入体积比2:3的乙酸乙酯和65%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～3小时，第二次和第三次分别1～2小时，滤液合并得提取液I，药渣加入70%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～1.5小时，第二次和第三次分别0.5～1小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用70%乙醇溶解浸膏，采用非极性或弱极性大孔树脂对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I；然后以60%～70%乙醇洗脱，再以90%～95%乙醇洗脱，得洗脱液II，回收，减压浓缩，干燥，即得杜仲总黄酮提取物。

7.根据权利要求6所述的中药组合物，其特征在于，所述的洗脱流速为2～6BV/h。

8.根据权利要求7所述的中药组合物，其特征在于，所述的洗脱流速为2～4BV/h。

9.根据权利要求8所述的中药组合物，其特征在于，洗脱流速为3BV/h。

10.根据权利要求1～3任一权利要求所述的中药组合物，其特征在于，所述的茶多酚采用以下方法制备：绿茶粉碎，加80%乙醇，100℃回流提取3次，料液重量体积比1:8-10，提取时间10-30min，合并提取液；离心，弃残渣，得上清液；聚酰胺树脂吸附：柱高与直径比20，去离子水洗涤0.5h；去离子水和80%乙醇洗脱，流速6ml/min，去离子水中含有少量咖啡因，弃去，收集乙醇洗脱液，浓缩，即得。