CN106491663A - 一种桑黄灵芝胶囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种桑黄灵芝胶囊的制备方法，是由该胶囊内容物按常规工艺方法压制成型制得，该胶囊的内容物按重量份配比计由以下组分组成：桑黄提取物5‑10份、灵芝提取物5‑10份、灵芝孢子油15‑20份、蜂蜡5‑10份。本发明综合利用独特的提取工艺最大限度的提取出桑黄灵芝中的有效活性成分，提高功效，提高生物利用度，相应降低原生药材用量，还具有优异的抗疲劳功效。
Description
技术领域
本发明涉及灵芝和桑黄在制药及功能性食品和保健食品领域中的应用，尤其涉及一种高含量桑黄灵芝胶囊及其制备方法。
背景技术
由于工作压力、家庭负担以及人体器官的自然衰老，常常使人感觉身体状况大不如前，容易疲劳。目前临床上抗疲劳的常用中药有刺五加、西洋参、人参、红景天、三七等。
灵芝，又称“灵芝草”、“仙草”、“瑞草”，为非褶菌目灵芝菌科灵芝属真菌灵芝。著名药用真菌，分布于北半球温带地区。始载于“神农本草经”，具有补中益气、滋阴强壮、扶正固本、延年益寿等功效。灵芝主要化学成分为多糖类和三萜类，三萜类成分复杂，曾祥丽等报道灵芝含有122种三萜类成分，其中最主要是灵芝酸37种。现已证明灵芝多糖类具有抗肿瘤、免疫调节、降血糖、降血脂、抗氧化和抗衰老等药理作用，灵芝三萜具有抗HIV-1及HIV-1蛋白酶活性、保肝、抗肿瘤和抗艾滋病毒等药理活性。有关灵芝有效成分提取工艺等研究方兴未艾，迄今为止仍是国内外瞩目的重要课题。为能得到高纯度的灵芝有效成分，近年来国内外学者对灵芝有效成分的提取纯化技术进行大量研究。现将其主要研究进展作一综述，以期为进一步研究开发灵芝提供参考依据。
桑黄，是一种真菌，因寄生于桑树而得名。子实体无柄，菌盖扁半球形或马蹄形，木质，浅肝褐色至暗灰色或黑色。在杨、柳、桦、栎等树干上也有生长。据分析，桑黄的成分极其复杂，除含大量多糖类物质外，还含β葡聚糖、几丁质（壳聚糖）、杂多糖（果胶、半纤维素、多糖醛酸等膳食纤维）等成分，在肠道中有促进有害物质及胆固醇排泄的作用。此外，桑黄还具有抗衰老、降低胆固醇、护肝和抗肝硬化等药理作用，而这些药理作用恰恰是备受制药界青睐的。
现有的桑黄灵芝类胶囊，内容物多为将桑黄和/或灵芝直接粉碎后的桑黄灵芝细粉，又或民间常规煮食，由于其有效成分难以完全溶解被机体吸收利用，生物利用度低、效果不好，故成人单次剂量需达10-20克方可产生特定功效，造成资源极大浪费。另一方面，作为粉状的灵芝提取物和桑黄提取物二者混合后不易分散均匀，放置一段时间后极易结成块状。同样，未见灵芝提取物和桑黄提取物联用于抗疲劳保健品或药物的报道。将几味天然药物配伍使用，能否发挥原有药效或药效发生怎样的改变， 对本领域技术人员来说，均是难以预料的。
发明内容
鉴于上述不足，本发明的目的在于提供一种桑黄和灵芝有效成分含量高，口服后易于吸收利用，桑黄灵芝提取物分散均匀且具有抗疲劳功效的桑黄灵芝胶囊及其制备方法。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案，本发明各组分的用量也是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在下述重量范围内制备出的软胶囊都具有较好成型性和疗效：
一种桑黄灵芝胶囊，该胶囊的内容物按重量份配比计，由以下组分组成：
桑黄提取物 5-10份
灵芝提取物 5-10份
灵芝孢子油 15-20份
蜂蜡 5-10份。
进一步的，桑黄灵芝胶囊内容物各组分的用量为：
桑黄提取物 8份
灵芝提取物 8份
灵芝孢子油 16份
蜂蜡 8份。
所述桑黄提取物是由以下制备方法制得：
取桑黄，将其粉碎后加入1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流40min，提取3次，滤液合并得提取液I；药渣加入70%乙醇，加热回流40min，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用8%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品：制备色谱的分离条件：色谱柱为半制备柱Lichrospher-C18；10.0mmX250mm，5μm，流动相为A为水和B为乙腈，梯度洗脱程序如下：
0min时，流动相A为85%，流动相B为15%；
10min时，流动相A为79%，流动相B为21%；
15min时，流动相A为69%，流动相B为31%；
30min时，流动相A为63%，流动相B为37%；
35min时，流动相A为15%，流动相B为85%；
45min时，流动相A为15%，流动相B为85%；
流动相A是在100ml水中加入醋酸0.1ml；流动相B是乙腈溶液，流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段13.5～32.5min收集溶液，溶液经浓缩冷冻真空干燥后得到有效组分。
所述灵芝提取物是由以下制备方法制得：
取灵芝，将其粉碎后加入体积比1:2的乙酸乙酯和60%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～3小时，第二次和第三次分别1～2小时，滤液合并得提取液I，药渣加入65%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～1.5小时，第二次和第三次分别0.5～1小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用65%乙醇溶解浸膏，采用非极性或弱极性大孔树脂对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I；然后以60%～70%乙醇洗脱，再以90%～95%乙醇洗脱，得洗脱液II，回收，减压浓缩，冷冻真空干燥，即得灵芝提取物。
所述灵芝孢子油由以下制备方法制得：
采用超临界CO2萃取法制备，具体为：30-40MPa先静态萃取10min，然后动态萃取，入口压力为30-40MPa，出口压力比进液口压力低5-10kPa；温度20-40℃，CO2体积20-40kg/h；在萃取的过程中单独或者联合采用下述方法：周期性压力波动、周期性流量波动；其中周期性压力波动的压力波动差为5-10Mpa，周期性流量波动的流速波动差为1.0-2.0米/秒，得灵芝孢子油。
一种桑黄灵芝胶囊的制备方法包括以下步骤：
取上述配方量的桑黄提取物和灵芝提取物混合均匀，得混合提取物，用0.5倍混合提取物量的灵芝孢子油湿润，另将剩余配方量的灵芝孢子油与蜂蜡共热，使蜂蜡溶解，待该灵芝孢子油和蜂蜡混合液冷却至55℃-60℃，在不断搅拌下，将灵芝孢子油和蜂蜡混合液缓缓加入到经灵芝孢子油湿润的桑黄和灵芝提取物中，不停搅拌，并以循环水冷却，待温度降至45℃-50℃，上胶体磨进行均质处理两次，得流动性均质性好的膏状体胶囊内容物，然后按常规工艺方法压制胶囊即得。
而本发明通过独特的提取工艺最大限度的提取出桑黄灵芝中的有效活性成分，如多糖、萜类等活性成分，最大限度地发挥桑黄和灵芝的药效或保健功效，提高了生物利用度，相应降低了桑黄和灵芝原生药材的用量。
本发明的另一重要意义在于，对于某些异常珍贵的中药，将药材通过独特的提取工艺，制成提取物用于制备高含量的胶囊剂，可以使现代胶囊剂型有效地模拟中医传统汤药，有利于推动中药现代化发展。
本发明的有益效果在于：
（1）综合利用独特的提取工艺最大限度的提取出桑黄灵芝中的有效活性成分，提高功效，提高生物利用度，相应降低原生药材用量。
（2）将中药材通过独特的提取工艺，制成提取物用于制备高含量的胶囊剂，可以使现代胶囊剂型有效地模拟中医传统汤药，有利于推动中药现代化发展。
（3）本发明配方中，无需添加其他人工合成食品添加剂或药用辅料，确保产品的天然属性，对人体无毒无害，安全有效。
（4）本发明有效解决了桑黄提取物和灵芝提取物的分散问题：
a、桑黄提取物和灵芝提取物经适量灵芝孢子油湿润后与蜂蜡油混合，可形成高浓度，但粘滞度较低的流体，主要是利用蜂蜡随温度降低而固化的特点，使桑黄提取物和灵芝提取物、蜂蜡、灵芝孢子油三者形成均质性较好的流体。
b、将桑黄提取物和灵芝提取物、蜂蜡、灵芝孢子油混合，在不停冷却搅拌下，缓缓增加物料稠度，是利用桑黄提取物和灵芝提取物、蜂蜡、灵芝孢子油混合物随温度下降而固化的原理，在搅拌下使物料均匀分散，有效解决液固相稳定性问题。在搅拌下，随着混合液温度的不断下降，析出的桑黄提取物和灵芝提取物以极细的微粒被蜂蜡不断包埋，形成均质性和流动性均较好的膏体，极易压制软胶囊。
（5）本发明具有优异的抗疲劳功效。
具体实施方式
实施例1
桑黄提取物的制备：
取桑黄，将其粉碎后加入1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流40min，提取3次，滤液合并得提取液I；药渣加入70%乙醇，加热回流40min，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用8%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品：制备色谱的分离条件：色谱柱为半制备柱Lichrospher-C18；10.0mmX250mm，5μm，流动相为A为水和B为乙腈，梯度洗脱程序如下：
0min时，流动相A为85%，流动相B为15%；
10min时，流动相A为79%，流动相B为21%；
15min时，流动相A为69%，流动相B为31%；
30min时，流动相A为63%，流动相B为37%；
35min时，流动相A为15%，流动相B为85%；
45min时，流动相A为15%，流动相B为85%；
流动相A是在100ml水中加入醋酸0.1ml；流动相B是乙腈溶液，流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段13.5～32.5min收集溶液，溶液经浓缩冷冻真空干燥后得到有效组分。
灵芝提取物的制备：
取灵芝，将其粉碎后加入体积比1:2的乙酸乙酯和60%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～3小时，第二次和第三次分别1～2小时，滤液合并得提取液I，药渣加入65%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～1.5小时，第二次和第三次分别0.5～1小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用65%乙醇溶解浸膏，采用非极性或弱极性大孔树脂对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I；然后以60%～70%乙醇洗脱，再以90%～95%乙醇洗脱，得洗脱液II，回收，减压浓缩，冷冻真空干燥，即得灵芝提取物。
灵芝孢子油的制备：
采用超临界CO2萃取法制备，具体为：30-40MPa先静态萃取10min，然后动态萃取，入口压力为30-40MPa，出口压力比进液口压力低5-10kPa；温度20-40℃，CO2体积20-40kg/h；在萃取的过程中单独或者联合采用下述方法：周期性压力波动、周期性流量波动；其中周期性压力波动的压力波动差为5-10Mpa，周期性流量波动的流速波动差为1.0-2.0米/秒，得灵芝孢子油。
桑黄灵芝胶囊的制备：
取桑黄提取物500g和灵芝提取物500g混合均匀，得混合提取物，用500g灵芝孢子油湿润，另将剩1000g灵芝孢子油与500g蜂蜡共热，使蜂蜡溶解，待该灵芝孢子油和蜂蜡混合液冷却至55℃-60℃，在不断搅拌下，将灵芝孢子油和蜂蜡混合液缓缓加入到经灵芝孢子油湿润的桑黄和灵芝提取物中，不停搅拌，并以循环水冷却，待温度降至45℃-50℃，上胶体磨进行均质处理两次，得流动性均质性好的膏状体胶囊内容物，然后按常规工艺方法压制胶囊即得桑黄灵芝软胶囊（内容物300mg/粒），服用剂量：每日一次1粒。
实施例2
制备方法同实施例1
只是桑黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子油以及蜂蜡的用量比为1:1:2:1。
实施例3
制备方法同实施例1
只是桑黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子油以及蜂蜡的用量比为2：1:3:1。
实施例4
制备方法同实施例1
只是桑黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子油以及蜂蜡的用量比为1：2:3:1。
实施例5
制备方法同实施例1
只是桑黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子油以及蜂蜡的用量比为1:1:4:1。
实施例6
制备方法同实施例1
只是桑黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子油以及蜂蜡的用量比为2：2:3:2。
以下通过具体药效学试验证明本发明具有抗疲劳功效的有益效果。
试验例：本发明桑黄灵芝胶囊对小鼠体重、负重游泳时间、血清尿素氮、肝糖原血乳酸的影响。
发明人通过对桑黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子油单方以及实施例1桑黄灵芝胶囊（复方）的小鼠抗疲劳功效药理试验对比研究证实，该实施例1桑黄灵芝胶囊（复方）用于抗疲劳具有更加显著的药理活性。
1.试验材料：
药品：
实施例1所制备的桑黄灵芝胶囊（内容物300mg/粒），每粒胶囊相当于含桑黄提取物50mg、灵芝提取物50mg、灵芝孢子油150mg、蜂蜡50mg。
单味桑黄提取物胶囊：参照实施例1制备方法，每粒胶囊相当于含桑黄提取物250mg、蜂蜡50mg。
单味灵芝提取物胶囊：参照实施例1制备方法，每粒胶囊相当于含灵芝提取物250mg、蜂蜡50mg。
单味灵芝孢子油胶囊：参照实施例1制备方法，每粒胶囊相当于含灵芝孢子油250mg、蜂蜡50mg。
2.试验方法：
取小鼠100只，分成五组：试验组（给药：实施例1所制得的桑黄灵芝胶囊）、桑黄组（给药：单味桑黄提取物胶囊）、灵芝组（给药：单味灵芝提取物胶囊）、灵芝孢子油组（给药：单味灵芝孢子油胶囊）；给药剂量5mg/kgBW，用0.5％CMC-Na配成混悬液，每日灌胃一次，空白组仅用0.5％CMC-Na 灌胃，30天后，对小鼠体重、负重游泳时间、血清尿素氮、肝糖原血乳酸的影响进行测试。
1.1对小鼠体重的影响：
表1对小鼠体重的影响（X±SD）
由表1可见，经口给予小鼠试验组、桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组胶囊30天后，各组小鼠的体重相比较，差异均无显著性（P>0.05）。因此各组胶囊对小鼠的体重无不良影响。
1.2对小鼠负重游泳时间的影响。
表2本饮料对小鼠负重游泳时间的影响（X±SD）
由表2可见，经口给予小鼠试验组、桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组胶囊30天后，试验组、桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组与空白组比较，负重游泳时间均有显著性（P<0.05）。试验组桑黄灵芝胶囊（复方）相比于桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组能显著延长对小鼠的负重游泳时间。
1.3对小鼠游泳后血清尿素氮水平的影响。
表3对小鼠游泳后血清尿素氮水平的影响（X±SD）
由表3可见，经口给予小鼠试验组、桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组胶囊30天后，试验组、桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组与空白组比较，血清尿素氮含量有显著性（P<0.05）。试验组桑黄灵芝胶囊（复方）相比于桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组能明显减少疲劳小鼠血清尿素氮产生。
1.4对小鼠肝糖原含量的影响
表4对小鼠肝糖原含量的影响（X±SD）
由表4可见，经口给予小鼠试验组、桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组胶囊30天后，试验组桑黄灵芝胶囊（复方）相比于桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组能明显减少疲劳小鼠血清尿素氮产生能明显提高小鼠肝糖原的含量。
1.5对小鼠游泳后血乳酸值的影响。
表5对小鼠游泳后血乳酸值的影响（X±SD）
由表5可见，经口给予小鼠试验组、桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组胶囊30天后，试验组桑黄灵芝胶囊（复方）相比于桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组可明显减少小鼠游泳后血乳酸曲线下面积。
由此可见，实施例1制得的桑黄灵芝胶囊具缓解体力疲劳之功效。
结论：经口给予小鼠试验组、桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组胶囊30天后，试验组桑黄灵芝胶囊（复方）相比于桑黄组、灵芝组、单味灵芝孢子油组相比较，能延长小鼠的负重游泳时间（P＜0.05）、减少疲劳小鼠血清尿素氮产生（P＜0.01）、提高小鼠肝糖原的含量（P＜0.05）、减少游泳后血乳酸曲线下面积（P＜0.01) ；受试桑黄灵芝胶囊对小鼠体重增长无不良影响。故在相同给药剂量下，本发明桑黄灵芝胶囊（复方）抗疲劳功效明显优于单味药物，说明本发明药物组合物，通过三味不同中药的相互配伍，符合中医药理论，发挥了协同增效作用，获得了更为理想的缓解体力疲劳的功效。
我们对实施例2-6的产品也做了同实施例1一样的抗疲劳功效评价试验，其实验结果与实施例2的试验结果并无明显区别，故在此不做敷述。
Claims (6)
1.一种桑黄灵芝胶囊的制备方法，是由该胶囊内容物按常规工艺方法压制成型制得，其特征在于：该胶囊的内容物按重量份配比计由以下组分组成：
桑黄提取物 5-10份
灵芝提取物 5-10份
灵芝孢子油 15-20份
蜂蜡 5-10份。
2.根据权利要求1所述的桑黄灵芝胶囊的制备方法，其特征在于，所述桑黄提取物是由以下制备方法制得：
取桑黄，将其粉碎后加入1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流40min，提取3次，滤液合并得提取液I；药渣加入70%乙醇，加热回流40min，提取2次，滤液合并得提取液II，将提取液II浓缩成浸膏，用50%甲醇溶解浸膏，采用ODS-C18柱对其进行分离，首先用8%甲醇作为流动相，得洗脱液I，然后改换60%甲醇作为流动相，得洗脱液II，浓缩干燥后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品：制备色谱的分离条件：色谱柱为半制备柱Lichrospher-C18；10.0mmX250mm，5μm，流动相为A为水和B为乙腈，梯度洗脱程序如下：
0min时，流动相A为85%，流动相B为15%；
10min时，流动相A为79%，流动相B为21%；
15min时，流动相A为69%，流动相B为31%；
30min时，流动相A为63%，流动相B为37%；
35min时，流动相A为15%，流动相B为85%；
45min时，流动相A为15%，流动相B为85%；
流动相A是在100ml水中加入醋酸0.1ml；流动相B是乙腈溶液，流速为2ml/min，柱温为室温；样品用100%乙醇溶解，经制备液相色谱分离，在时间段13.5～32.5min收集溶液，溶液经浓缩冷冻真空干燥后得到有效组分。
3.根据权利要求1所述的桑黄灵芝胶囊的制备方法，其特征在于，所述灵芝提取物是由以下制备方法制得：
取灵芝，将其粉碎后加入体积比1:2的乙酸乙酯和60%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～3小时，第二次和第三次分别1～2小时，滤液合并得提取液I，药渣加入65%乙醇，加热回流提取3次，第一次1～1.5小时，第二次和第三次分别0.5～1小时，滤液合并得提取液II，合并提取液I和II，浓缩成浸膏，用65%乙醇溶解浸膏，采用非极性或弱极性大孔树脂对其进行分离，首先以水洗脱，得洗脱液I；然后以60%～70%乙醇洗脱，再以90%～95%乙醇洗脱，得洗脱液II，回收，减压浓缩，冷冻真空干燥，即得灵芝提取物。
4.根据权利要求1所述的桑黄灵芝胶囊的制备方法，其特征在于，所述灵芝孢子油由以下制备方法制得：
采用超临界CO2萃取法制备，具体为：30-40MPa先静态萃取10min，然后动态萃取，入口压力为30-40MPa，出口压力比进液口压力低5-10kPa；温度20-40℃，CO2体积20-40kg/h；在萃取的过程中单独或者联合采用下述方法：周期性压力波动、周期性流量波动；其中周期性压力波动的压力波动差为5-10Mpa，周期性流量波动的流速波动差为1.0-2.0米/秒，得灵芝孢子油。
5.一种桑黄灵芝胶囊的制备方法，其特征在于，该制备方法包括以下步骤：
取上述配方量的桑黄提取物和灵芝提取物混合均匀，得混合提取物，用0.5倍混合提取物量的灵芝孢子油湿润，另将剩余配方量的灵芝孢子油与蜂蜡共热，使蜂蜡溶解，待该灵芝孢子油和蜂蜡混合液冷却至55℃-60℃，在不断搅拌下，将灵芝孢子油和蜂蜡混合液缓缓加入到经灵芝孢子油湿润的桑黄和灵芝提取物中，不停搅拌，并以循环水冷却，待温度降至45℃-50℃，上胶体磨进行均质处理两次，得流动性均质性好的膏状体胶囊内容物，然后按常规工艺方法压制胶囊即得。
6.权利要求1-5任意一项所述桑黄灵芝胶囊在制备抗疲劳药物中的用途。
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