CN103494868A - 大麻药总皂苷的抗动脉粥样硬化、调血脂及抗心肌缺血作用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及天然药物领域，具体涉及大麻药总皂苷的医药用途，其具有抗动脉粥样硬化、调血脂及抗心肌缺血作用。药理试验表明，大麻药总皂苷具有治疗心血管疾病的用途，特别是治疗动脉粥样硬化、调血脂及抗心肌缺血的功效。

Description

大麻药总皂苷的抗动脉粥样硬化、调血脂及抗心肌缺血作用

技术领域

本发明涉及大麻药总皂苷的医药用途，即其具有抗动脉粥样硬化、调血脂及抗心肌缺血作用。

背景技术

高血脂(Hyperlipidemias)是一种全身性疾病，指血中总胆固醇(TC)和/或甘油三酯(TG)过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)过低，现代医学称之为血脂异常。它是动脉粥样硬化(AS)和冠心病(CHD)等心脑血管疾病发生的重要危险因素。降低血脂可以延缓AS的进展，进而降低心脑血管等疾病的发生率和死亡率，减少心肌缺血性损伤的发生。

动脉粥样硬化(Atherosclerosis，AS)是一组动脉硬化的血管病中常见的最重要的一种，其特点是受累动脉病变从内膜开始。一般先有脂质和复合糖类积聚、出血及血栓形成，纤维组织增生及钙质沉着，并有动脉中层的逐渐蜕变和钙化，病变常累及弹性及大中等肌性动脉，一旦发展到足以阻塞动脉腔，则该动脉所供应的组织或器官将缺血或坏死。由于在动脉内膜积聚的脂质外观呈黄色粥样，因此称为动脉粥样硬化。本病主要累及大型及中型的肌弹力型动脉，以主动脉、冠状动脉及脑动脉。随着中国人民生活水平提高和饮食习惯改变，该病也成为我国病人主要死亡原因。引起心肌缺血性损伤发生的主要病因即冠状动脉粥样硬化，所以抑制动脉粥样硬化斑块的形成，是防治心肌缺血性损伤发生的重要手段。

综上所述，降血脂和抗动脉粥样硬化对心肌缺血具有明显的保护作用。

大麻药为豆科植物镰扁豆(Dolichos falcatus kalcatus Klein)的根，傣药名“托也腾”，傣医认为该药味麻，性温，有小毒，入土塔；具有“通气活络，活血止血，消肿止痛，接骨生肌”的功效；主治“阻伤，路哈”。大麻药作为主要成分在云南白药各种制剂以及云南红药胶囊(又名云南七龙散胶囊)等著名成药中广泛应用，资源非常丰富，药材价格低廉，具有巨大的开发应用价值。现代研究表明，大麻药根主要含有三萜皂苷，黄酮等成分，如23-单甲酯苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷(大麻药苷A)、苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷、(2s)-5，2，6-三羟基-8-异戊烯基6，7-(3-异戊烯基-2，2-二甲基-1-酮-环己二烯)-二氢黄酮和(2s)-5，2，6羟基-8-异戊烯基6，7(3-异戊烯基2，2-二甲基吡喃)-3，4-(2，2-二甲基-1-酮-环己二烯)-二氢黄酮等成分。

发明人在前期的研究中发现，大麻药(Dolichos falcatus Kalcatus Klein)总皂苷(简称：DZ)具有非常好的抗动脉粥样硬化、调血脂及抗心肌缺血作用。

发明内容

本发明公开了DZ的用于治疗心血管疾病的用途，所述心血管疾病优选高血脂症、动脉粥样硬化和心肌缺血损伤。下面是本发明有关DZ的部分药理试验及结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

实施例1

DZ的制备

取大麻药粗粉，加入12倍量的85％的乙醇，浸泡2小时，水浴回流提取2小时，滤过，得滤液。药渣再用10倍量85％乙醇回流提取1次，时间为2小时，滤过。合并2次滤液，减压回收乙醇至无醇味，再加入足量无水乙醇，有大量沉淀析出，过滤得滤饼，经60℃减压干燥，即得DZ。

实施例2

家兔高血脂合并动脉粥硬化模型

1.受试药物

给药样品：自制DZ样品；对照药物：辛伐他丁(苏州俞氏药业生产；批号：H20135237)。所以样品均用0.3％的CMC-Na配制。

2.实验动物

健康雄性日本大耳白兔30只，购自华中科技大学同济医学院，兔龄7-8周，体重2.0±0.2kg。各组动物均单笼饲养，12h光照/黑暗，控制室温于24±1℃，湿度50-60％，通风，防噪音控制。

3.主要试剂与设备

饲料组分：普通兔饲料(华中科技大学同济医学院实验动物中心)；高脂饲料[14％蛋黄粉+5％猪油+1％胆固醇(上海惠世生化试剂有限公司，批号：130681)]

甘油三酯试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20130651)；总胆固醇试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20130611)；低密度脂蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20130712)；TGL-20M冷冻离心机(湘仪离心机仪器有限公司)；LA204电子天平(常熟市恒器厂)；721分光光度计(上海第三分析仪器厂)。

4.实验方法

4.1分组：按体重随机分为5组，每组6只。分别为空白组、模型组、DZ高组(40mg/kg)、DZ低组(20mg/kg)和辛伐他丁组(5mg/kg)。

4.2模型制备：

4.2.1异种蛋白注射：实验开始当日由耳缘静脉缓慢注射，给予模型组、DZ高组、DZ低组和辛伐他丁组家兔牛血清白蛋白1g/kg。

4.2.2饲料喂养：空白对照组每日2次给予普通饲料；其它组每日清晨饲喂高脂饲料(120-150g/d)后再添加普通饲料；共计14周。

4.3给药方法：DZ高、低剂量组分别灌胃给予40mg/kg、20mg/kg的DZ，辛伐他丁组灌胃给予5mg/kg的辛伐他丁，模型组与空白组给予等量体积的CMC-Na溶液，共计14周。

4.4血液标本采集及相关指标测定

4.4.1采集时间和方法：于实验第14周末将兔禁食8h，经兔耳缘静脉注射10％水合氯醛(1ml/kg)麻醉后处死，由心脏采集全血。

4.4.2血液保存和分离：血液标本收集后立即保存于0℃冰水中，10min内以4000r/min离心5min后立即送检。

4.4.3测定指标：血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)。

4.5主动脉标本采集及苏丹红染色

4.5.1取材：将兔麻醉后沿正中线剖开兔胸腔及腹腔，收集血液标本后立即剥离出自主动脉根部至双侧髂总动脉分叉处主动脉，生理盐水冲洗主动脉。

4.5.2染色：采用苏丹红Ⅳ染色法，结果判定方法将染色后的血管内膜面朝上，用玻璃板(厚2mm)压平血管内膜，在玻璃板上放一透明薄膜，标出动脉边界及病变范围，将薄膜上的图形用扫描仪转成图片文件。用Image软件进行计量分析，系统测量斑块面积、血管总面积，计算斑块面积占主动脉内膜总面积的百分数。

4.6统计学处理：

采用统计软件SPSS10.0对各组实验数据进行检验，各组计量资料以均数±标准差表示，组间比较用单因素方差分析及t检验，率的比较用卡方分析。以P＜0.05为具有统计学意义。

5实验结果及分析

家兔造模后，模型组血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及斑块面积占主动脉内膜总面积的百分数较空白组均显著性改变，表明造模成功。给予DZ高、低剂量及辛伐他丁后，均能使造模后异常的生理指标逐渐恢复至正常水平范围，且DZ高剂量组的作用与辛伐他丁药效相当，结果见表1。

表1DZ对家兔高血脂合并动脉粥硬化模型的改善作用

^#P＜0.05，^##P＜0.01，^###P＜0.001，vs空白组.^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001，vs模型组.

实施例3

大鼠急性心肌缺血模型

1.受试药物

给药样品：自制DZ样品。

2.实验动物

健康Wistar大鼠，雄性，体重250～300g，购自华中科技大学同济医学院试验动物中心，质量许可证号：SCXK-(鄂)2007-2001。12h光照/黑暗，控制室温于24±1℃，湿度50-60％，通风，防噪音控制。

3.主要试剂与设备

乌拉坦，TTC(中国医药集团上海试剂公司)，BL-420生物机能实验系统，小动物人工呼吸机(成都泰盟科技有限公司)。

4.实验方法

4.1分组：将雄性大鼠按体重随机分为假手术组、模型组、DZ低剂量组(20mg/kg)，DZ高剂量组(40mg/kg)，每组15只。假手术组及模型组给予生理盐水，DZ给药按0.5ml/100g灌胃，预先给药10d。

4.2模型制备：

大鼠按6ml/kg给予20％乌拉坦腹腔注射麻醉后，固定。将颈部正中、左前胸、四肢处的体毛剪掉，连接BL-420生物机能实验系统心电导线，全程记录II导联心电图。于颈部正中开口，分离右侧颈总动脉并插管，连接压力换能器记录动脉血压。并进行气管插管。开胸后连接小动物人工呼吸机。剪开心包膜，在肺动脉圆锥和左心耳之间，平左心耳下缘寻找左冠状动脉前降支(LAD)，并在其下穿线。待呼吸、血压平稳后，将结扎线从PE管(直径约2mm)中间穿出，用PE管一端阻断冠状动脉血流，另一端用动脉夹固定。缺血30min后，松开动脉夹，再灌注120min。缺血成功的标志为：II导联ST段抬高，R波增宽，动脉血压下降20％-30％。再灌注成功的标志为：抬高的ST段下降50％以上，动脉血压升高。假手术组开胸后冠状动脉下穿线，不结扎。

4.3观察指标

4.3.1实验全程记录II导联心电图，观察缺血30min内和再灌注120min期间室性心律失常的发生类型，频率及持续时间。分别记数室性期前收缩次数，室性心动过速持续时间及室颤持续时间。

4.3.2心肌梗死范围的测定

除假手术组外，其余各组随机取出5只大鼠，于再灌注2h末结扎大鼠左冠状动脉前降支(LAD)，将1％伊文氏蓝液3mL经右颈总动脉注入进行左室心肌染色，区分缺血区(非蓝染区)与非缺血区(蓝染区)。处死动物，迅速取出心脏，以磷酸缓冲液(PBS，pH7.4)冲洗，滤纸吸干表面水分，置-20℃冰箱中冷却。

心肌TTC染色：-20℃冰箱中冷藏30min，取出后剪去心房和右室，由心尖部向心基底部方向将心脏切成2mm厚的切片。将心肌片浸入1％TTC磷酸缓冲液中(pH7.4)，37℃孵育20min，以区分缺血未梗死区(砖红色)和梗死区(灰白色)。

固定、称重、扫描：取出心肌片用滤纸吸干后称重。将其彩色数字拍照，图像输入电脑保存。扫描后的心肌片保存在10％中性甲醛溶液内固定24h，以增强染色颜色对比，随后石蜡包埋。面积测定、计算：经以上处理，非缺血区已由伊文氏蓝溶液染成蓝色，缺血危险区包括砖红色的存活心肌及未被染色的灰白梗死组织。根据心肌厚片表面的三种颜色，用电脑图像分析软件分别测定梗死区面积和缺血区面积占整片心肌切面的百分比。面积百分比乘以该片心肌的重量得出该片心肌梗死区重量和缺血危险区重量。分别把各片心肌梗死区重量和缺血危险区重量总和后除以整个心脏重量，即得出整个心脏的心肌梗死区(infarctsize，IS)、缺血危险区(AAR)以及梗死区与缺血危险区之比(IS/AAR)。

4.3统计学处理：

采用统计软件SPSS10.0对各组实验数据进行检验，各组计量资料以均数±标准差

表示，组间比较用单因素方差分析及t检验，率的比较用卡方分析。以P＜0.05为具有统计学意义。

5实验结果及分析

5.1DZ对阻断大鼠左冠状动脉前降支诱导室性心律失常的影响

假手术组未发生恶性室性心律失常，模型组全部发生室性心律失常，说明造模成功。

将缺血0-30min和再灌注0-10min期间作为心律失常的考查期。心肌缺血5min后开始出现心律失常，10-15min心律失常最为频繁和严重；再灌注0-5min心律失常较为常见。

DZ组室性期前收缩明显减少，与模型组比较差异具有显著性(P＜0.05)。室性心动过速(室速)和室颤的发生率降低，持续时间明显缩短，与模型组比较具有显著性差异(P＜0.05)。结果见表2。

表2DZ对阻断大鼠左冠状动脉前降支诱导室性心律失常的影响

^*P＜0.05，^**P＜0.01，vs模型组.

5.2DZ对大鼠急性心肌缺血再灌注损伤心肌梗死面积的影响

表3为假手术组、模型组及DZ高、低剂量组心肌危险区面积(AAR)占左心室面积(LV)百分比(AAR/LV％)，梗死心肌(IS)占危险区心肌的面积百分比(IS/AAR％)，以及梗死心肌面积占左室面积百分比(IS/LV％)的比较。从结果中可知，AAR/LV百分率DZ组与模型组比较均具有显著性差异。DZ组IS/AAR％和IS/LV％均低于模型组(P＜0.05或P＜0.01)。

表3DZ对缺血再灌注大鼠心肌梗死面积的影响

^*P＜0.05，^**P＜0.01，vs模型组.

综述所述，DZ能够有效调节高血脂症家兔的血脂，抑制动脉粥样硬化斑块的形成。同时，其还能对急性心肌缺血具有缓解保护作用。

Claims (4)

1.大麻药总皂苷用于制备治疗心血管疾病的药物用途。

2.根据权利要求1所述药物的用途，其中心血管疾病是高血脂症。

3.根据权利要求1所述药物的用途，其中心血管疾病是动脉粥样硬化。

4.根据权利要求1所述药物的用途，其中心血管疾病是心肌缺血损伤。