CN103491767B

CN103491767B - 展现出提供增强的芸苔粗粉营养价值的种子组成属性且具有omega-9性状的芸苔种质

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Publication number: CN103491767B
Application number: CN201280019742.8A
Authority: CN
Inventors: T.J.库比克; G.R.金格拉; V.L.里普利; M.E.比艾思; T.G.帕特森
Original assignee: Agrigenetics Inc
Current assignee: Agrigenetics Inc
Priority date: 2011-02-22
Filing date: 2012-02-21
Publication date: 2019-01-18
Anticipated expiration: 2032-02-21
Also published as: AU2012246713A1; US10470399B2; AU2016235023B2; RU2013142915A; AU2016235023A1; BR112013021375A2; MX366448B; JP6425888B2; KR20220034256A; BR112013021372A2; UA117804C2; MX2013009695A; JP6425381B2; JP2014507162A; RU2622086C2; EP2677858A2; RU2642297C2; SG192867A1; WO2012145064A2; JP6590846B2

Abstract

芸苔种质对芸苔种子赋予高蛋白质含量和低纤维含量的性状，其中所述芸苔植物生成具有平均为至少68%油酸(C18:1)和小于3%亚麻酸(C18:3)的种子。芸苔种子性状还可以包含至少45%粗制蛋白质和不超过18%酸性去污剂纤维含量的芸苔种质。某些实施方案进一步包含一种或多种选自下组的性状：降低的多酚含量和增加的磷含量。在特定的实施方案中，本发明关注包含此类种质的芸苔植物和自其生成的植物商品(例如种子)。包含本发明种质的芸苔植物可以展现出有利的种子组成特征，该特征使它们作为芸苔粗粉的来源特别有价值。

Description

展现出提供增强的芸苔粗粉营养价值的种子组成属性且具有 OMEGA-9性状的芸苔种质

优先权要求

本申请要求2011年2月22日提交的美国临时申请No.61/445,426，关于"CANOLAGERMPLASM EXHIBITING SEED COMPOSITIONAL ATTRIBUTES THAT DELIVER ENHANCEDCANOLA MEAL NUTRITIONAL VALUE HAVING OMEGA-9TRAITS”的在35U.S.C.§119(e)下的权益。

发明领域

本发明涉及芸苔(canola)种质和栽培种。在一些实施方案中，本发明涉及具有不依赖于种皮颜色修饰的粗粉组成属性(例如，降低的抗营养因子水平和升高的蛋白质水平)的芸苔种质。特定的实施方案涉及表明与例如降低的抗营养因子(例如，酸性去污剂纤维(ADF)和多酚化合物)水平和升高的蛋白质和磷水平组合的暗色种子颜色的芸苔种质。

发明背景

“芸苔”指具有按重量计至多2%的芥酸(C22:1)含量(与种子的总脂肪酸含量相比)，并且(压碎后)生成含有每克脱脂(无油)粗粉(meal)小于30微摩尔(μmol)芥子油苷(glucosinolate)的风干粗粉的油菜籽(rapeseed)(芸苔属物种(Brassica spp.))。与更传统的物种变种相比，这些类型的油菜籽以其可食性区别。由于芸苔油的低水平的饱和脂肪酸而认为其是卓越的可食用油。

虽然油菜籽粗粉是蛋白质相对较高的，但是其高纤维含量降低其消化率及其作为动物饲料的价值。与大豆粗粉相比，芸苔和含油种子油菜粗粉含有较高的膳食纤维价值和较低百分比的蛋白质。由于其高膳食纤维，芸苔粗粉比大豆粗粉具有小约20%的代谢能(ME)。因此，相对于其它含油种子粗粉诸如大豆粗粉，粗粉的价值保持较低，特别是在猪和家禽给粮中。Rakow(2004a)Canola meal quality improvement through the breedingof yellow-seeded varieties—an historical perspective,in AAFC SustainableProduction Systems Bulletin。另外，一些芸苔粗粉中芥子油苷的存在也降低其价值，这是由于这些化合物对家畜的生长和繁殖具有的有害影响所致。

芸苔变种部分以其种皮颜色区别。一般地，种皮颜色分成两大类：黄色和黑色(或茶褐色)。还观察到不同色调的这些颜色，诸如红棕色和黄棕色。已经广泛观察到具有较淡的种皮颜色的芸苔变种具有较薄的皮，如此比具有暗色种皮的变种具有更小的纤维和更多的油和蛋白质。Stringam et al.(1974)Chemical and morphological characteristicsassociated with seed coat color in rapeseed,in Proceedings of the 4thInternational Rapeseed Congress,Giessen,Germany,pp.99-108;Bell and Shires(1982)Can.J.Animal Science62:557-65;Shirzadegan and(1985)Fette Seifen Anstrichmittel87:235-7;Simbaya et al.(1995)J.Agr.Food Chem.43:2062-6;Rakow(2004b)Yellow-seeded Brassica napus canola for the Canadiancanola Industry,in AAFC Sustainable Production Systems Bulletin。关于这点的一个可能的解释是芸苔植物可以将更多能量消耗到生成蛋白质和油，若它不需要所述能量生成种皮纤维组分的话。还已经报告了结黄色种子的芸苔系比结黑色种子的芸苔系具有更低的芥子油苷含量。Rakow et al.(1999b)Proc.10th Int.Rapeseed Congress,Canberra,Australia,Sep.26-29,1999,Poster#9。如此，在历史上，结黄色种子的芸苔变种的开发已经作为一种提高芸苔粗粉的饲料价值的潜在方式追踪。Bell(1995)Meal and by-productutilization in animal nutrition,in Brassica oilseeds,production andutilization.Eds.Kimber and McGregor,Cab International,Wallingford,Oxon,OX108DE,UK,pp.301-37;Rakow(2004b),见上文;Rakow&Raney(2003)。

已经显示了与欧洲油菜(B.napus)(例如，芜青(B.rapa)和芥菜(B.juncea))紧密相关的芸苔(Brassica)物种的一些结黄色种子形式在其种子及随后的粗粉中具有较低水平的纤维。结黄色种子的欧洲油菜种质的开发已经证明可以经由整合来自相关芸苔物种的控制种子色素沉着的基因在欧洲油菜中降低纤维。然而，将来自相关芸苔物种的控制种子色素沉着的基因整合入有价值的含油种子芸苔变种，诸如芸苔变种中由于如下的事情而变得复杂，即多个隐性等位基因牵涉目前可用的结黄色种子系中黄色种皮的遗传。此外，“荚卷曲”也是在整合来自其它芸苔物种，诸如芥菜(juncea)和埃塞俄比亚芥(carinata)的黄色种皮颜色期间通常遇到的问题。

关于结暗色种子的欧洲油菜种质内的纤维有多少变化性可用非常少的信息，并且对已经开发出含有降低的抗营养因子(例如，纤维和多酚化合物)水平和升高的蛋白质水平的结暗色种子的芸苔尚未做出报告。

发明概述

本文中描述了芸苔(欧洲油菜)自由授粉栽培种(CL044864,CL065620)和杂种(CL166102H,CL121460H和CL121466H)，其包含提供已经显示影响营养价值的芸苔粗粉组成变化的新颖组合的种质。在一些实施方案中，包含本发明种质的芸苔植物可以生成具有例如蛋白质、纤维、和磷水平的新颖组合的种子，使得这些种子组分不依赖于种皮颜色。在特定的实施方案中，此类植物可以生成比标准芸苔类型具有更高的蛋白质和更低的纤维，以及与标准芸苔类型中的磷水平相似或比其更高的磷水平。在一些实施方案中，包含本发明种质的芸苔近交系和杂种在作为饲料或食物成分直接利用时和/或在作为原料利用以加工蛋白质分离物和浓缩物时可以提供营养增强的粗粉特性。此类种子可以是暗色的(例如，黑色、暗色、和杂色)或淡色的。

如此，本文中描述了芸苔种质，其可以用于以不依赖于种子颜色的方式获得具有期望的种子组成性状的芸苔植物。在一些实施方案中，可以使用包含此类种质的植物来生成具有期望的营养质量的芸苔粗粉。在特定的实施方案中，提供了包含本发明种质的近交芸苔系(及其植物)。在别的实施方案中，提供了具有包含本发明种质的近交芸苔植物的近交芸苔系(及其植物)作为亲本。本发明的芸苔变种包括例如但不限于：CL044864;CL065620;CL166102H;CL121460H;和CL121466H。

本文中还描述了获自包含本发明种质的近交芸苔植物或杂种的植物商品。特定的实施方案包括获自此类近交芸苔植物或杂种的芸苔粗粉或种子。

本发明的具体实施方案包括对芸苔种子赋予高蛋白质含量和低纤维含量性状的芸苔种质，其中所述芸苔植物生成具有平均为至少68%油酸(C18:1)和小于3%亚麻酸(C18:3)的种子。在其它实施方案中，芸苔植物包含芸苔种质。还描述了由芸苔植物生成的种子。别的实施方案包括自芸苔植物种子生成的后代植物。还公开了以不依赖于种皮颜色的方式对芸苔栽培种引入至少一种选自下组的性状的方法：高蛋白质含量、低纤维含量、至少68%油酸(C18:1)和小于3%亚麻酸(C18:3)。

还描述了用于改善芸苔粗粉的营养价值的方法。例如，描述了用于将芸苔粗粉组成特征的组合以不依赖于种子颜色的方式渐渗入芸苔种质中的方法。在特定的实施方案中，本发明的种质可以与以黄色种皮为特征的芸苔种质组合以生成如下的种质，其能够提供具有由每个种质赋予的期望特征的增强的芸苔粗粉。

从几个实施方案的以下详细描述看，上述和其它特征会变得更加显而易见，所述详细描述参照附图进行。

附图简述

图1包括具有暗色种皮颜色的几种芸苔变种的图像。

图2包括来自对某些欧洲油菜近交系和杂种的种子组成分析的数据。种子样品来自加拿大西部的重复试验。基于NIR预测种子组成数据，随后使用参照化学法证实。

发明详述

I.几个实施方案的概述

芸苔粗粉是油提取过程后剩余的芸苔种子级分。芸苔粗粉是蛋白质来源，因此在几种应用中利用，包括动物饲料配方和高价值蛋白质浓缩物和分离物的分离。在粗粉中终止的种皮,子叶和胚内的纤维限制单胃动物物种中芸苔粗粉的纳入率(inclusion rate)，如此，芸苔粗粉通常不提供与从其它来源(例如大豆)制备的粗粉相同的营养价值。已经显示了与欧洲油菜(例如，芜青和芥菜)紧密相关的物种中的结黄色种子形式在其种子及随后的粗粉中具有较低水平的纤维。此观察结果已经激发尝试以黄色种子颜色依赖性方式将低种子纤维性状引入欧洲油菜中。所得结黄色种子欧洲油菜种质的开发已经证明了可以经由此方法在欧洲油菜中降低纤维。

在本发明前，不认为结暗色种子的芸苔变种会展现出与在结黄色种子变种中观察到一样低的种子纤维含量。此外，尚未描述含有降低水平的抗营养因子(例如，纤维和多酚化合物)，和升高的蛋白质和磷水平的结暗色种子芸苔系，其会代表改善的芸苔粗粉的来源。在一些实施方案中，本文中描述的芸苔种质提供不依赖于种皮颜色表达的几种关键增强粗粉组成属性的组合。在特定的实施方案中，从包含本发明种质的芸苔种子制备的芸苔粗粉可以实现较高的饮食纳入率，例如在猪和家禽饮食中。

可以使用本发明的种质(例如，经由选择性育种)来开发具有期望的种子组分性状及一种或多种别的期望性状(例如，改善的油组成、增加的油产量、经修饰的蛋白质组成、增加的蛋白质含量、疾病、寄生物抗性、除草剂抗性，等等)的芸苔。可以使用本发明的种质作为开始种质，可以对其引入种子组成的别的变化，使得可以开发出如下的芸苔系和杂种，其提供具有本文中描述的类型的改善升高的芸苔粗粉。

II.缩写

ADF 酸性去污剂纤维

ADL 酸性去污剂木质素

AID 表观回肠消化率

AME 表观代谢能

BSC 结黑色种子的芸苔

CP 粗制蛋白质百分比

DM 干物质浓度

ECM 本发明的增强的芸苔粗粉

FAME 脂肪酸/脂肪酸甲酯

GE 总能量

HT “高温”加工

LT “低温”加工

NDF 中性去污剂纤维

NMR 核磁共振

NIR 近红外线分光术

SAE 芥子酸酯

SBM 大豆粗粉

SER 可溶性提取残留物

SID 标准化回肠消化率

TAAA 真氨基酸利用度

TDF 总膳食纤维

TME 真代谢能

WF 白色薄片(white flake)

III.术语

回交：回交方法可以用于将核酸序列导入植物中。几十年以来已经广泛使用回交技术来将新性状引入植物中。Jensen,N.,Ed.Plant Breeding Methodology,John Wiley &Sons,Inc.,1988.。在一个典型的回交方案中，将感兴趣的初始品种(回归亲本)与携带要转移的感兴趣基因的第二品种(非回归亲本)杂交。然后，将来自此杂交的所得后代与回归亲本再次杂交，并重复该过程，直到获得如下的植物，其中在来自非回归亲本的转移基因外，在转化植物中恢复回归植物的基本上所有期望的形态学和生理学特征。

芸苔油：芸苔油指自油菜籽的商业变种提取的油。为了生成芸苔油，通常将种子在谷物升运器分级并混合以生成一致得可接受的产品。然后，将混合的种子碾碎，并且通常用己烷提取油，随后精制。然后，可以出售所得的油供使用。通常以完全干燥的种子的百分比测量油含量，并且特定的油含量是不同芸苔变种特征性的。油含量可以使用多种分析技术或通过本领域技术人员广泛可用的其它方法容易地且常规测定，所述技术例如但不限于：NMR;NIR;Soxhlet提取。参见Bailey,Industrial Oil & Fat Products(1996),5thEd.Wiley Interscience Publication,New York,New York。通常，通过如下测定总脂肪酸的百分比组成，即从种子提取油样品，生成油样品中存在的脂肪酸甲酯，并使用气相层析分析样品中多种脂肪酸的比例。脂肪酸组成也可以是特定变种的区别性特征。

商业上有用的：如本文中使用的，术语“商业上有用的”指具有足够的植物活力和生育力，使得农民可以使用常规耕作设备生成植物系或杂种作物的植物系和杂种。在特定的实施方案中，可以从商业上有用的变种的植物或植物材料提取具有描述的组分和/或质量的植物商品。例如，包含期望的油组分的油可以使用常规的碾碎和提取设备从商业上有用的植物系或杂种的种子提取。在某些实施方案中，商业上有用的植物系是近交系或杂种系。“商业良种”系和杂种通常具有期望的特征；例如但不限于：改善的至少一种植物商品产率；成熟度；疾病抗性；和竖立性(standability)。

良种系：源自育种和选择卓越的农艺学性能的任何植物系。良种植物是来自良种系的任何植物。

增强的芸苔粗粉：如本文中使用的，术语“增强的芸苔粗粉”意指源自芸苔种子加工的具有增强的组成的芸苔粗粉，所述芸苔种子具有升高的蛋白质含量和降低的至少一些抗营养组分水平。本发明的增强的芸苔粗粉可以在本文中不同称为"ECM"、"结黑色种子的芸苔ECM"、"BSC ECM"或"DAS BSC ECM"。然而，本发明并不意图限于仅结黑色种子的芸苔的ECM种质。

实质性(essentially)衍生的：在一些实施方案中，植物、种子或其部分的操作可以导致创建实质性衍生的变种。如本文中所使用的，术语“实质性衍生的”遵循International Union for the Protection of New Varieties of Plants (UPOV)列出的约定：

[A]在如下情况时变种应当视为实质性源自另一种变种(“初始变种”)，

(i)它主要源自初始变种，或者源自如下的变种，该变种自身主要源自初始变种，同时保留源自初始变种的基因型或基因型组合的实质特征的表达；

(ii)它与初始变种明显可区别；和

(iii)出列源自起源作用的差异外，它在源自初始变种的基因型或基因型组合的实质特征的表达上与初始变种一致。

UPOV,Sixth Meeting with International Organizations,Geneva,Oct.30,1992(联盟办公室准备的文件)。

植物商品：如本文中使用的，术语“植物商品”指自特定植物或植物部分(例如，包含本发明种质的植物，和获自包含本发明种质的植物的植物部分)生成的商品。商品可以例如但不限于：谷物；粗粉；草料；蛋白质；分离的蛋白质；面粉；油；碾碎的或完整的谷物或种子；包含任何粗粉、油、或碾碎的或完整的谷物的任何食物产品；或青贮饲料。

植物系：如本文中使用的，“系”指在个体间在至少一种性状方面展现出很少的遗传变异(例如，没有遗传变异)的植物组。近交系可以通过自花传粉和选择的几个世代或者备选地通过使用组织或细胞培养技术自单一亲本的营养繁殖创建。如本文中使用的，术语“栽培种”、“变种”和“类型”是同义的，并且这些术语指用于商业生产的品系。

植物材料：如本文中使用的，术语“植物材料”指完全或部分源自植物的任何加工的或未加工的材料。例如但不限于，植物材料可以是植物部分、种子、果实、叶、根、植物组织、植物组织培养物、植物外植体、或植物细胞。

稳定性：如本文中使用的，术语“稳定性”或“稳定的”指可遗传且仅有多个种子世代以基本上相同的水平维持的给定植物组分或性状。例如，可以以基本上相同的水平将稳定的组分维持至少三个世代。在此背景中，术语“基本上相同”在一些实施方案中可以指两个不同世代间维持于25%内；20%内；15%内；10%内；5%内；3%内；2%内；和/或1%内的组分，及完全在两个不同世代间维持的组分。在一些实施方案中，稳定的植物组分可以是例如但不限于油组分；蛋白质组分；纤维组分；色素组分；芥子油苷组分；和木质素组分。组分的稳定性可以受到一种或多种环境因素影响。例如，油组分的稳定性可以受到例如但不限于温度；位置；应激；和种植时间影响。预期在田间条件下具有稳定组分的植物的后续世代会以类似的方式生成植物组分，例如如上文所列的。

性状或表型：术语“性状”和“表型”在本文中可互换使用。

变种或栽培种：术语“变种”或“栽培种”在本文中指在繁殖时在其特征上独特的、稳定的且一致的用于商业生产的植物系。在杂种变种或栽培种的情况中，亲本系在其特征上是独特的、稳定的、且一致的。

除非另有指示，如本文中使用的，术语“一个”和“一种”指至少一种。

IV.以不依赖于种子颜色的方式提供期望种子组分性状的芸苔种质

在一个优选的实施方案中，本发明提供了芸苔种质，其可以用于以不依赖于种子颜色的方式获得具有期望的种子组分性状的芸苔植物。还提供了包含此种质的具体的例示性芸苔近交系和杂种。

一般地，认为芸苔油对于人和动物消费两者而言是非常健康的油。然而，芸苔种子的粗粉组分(其是提取油组分后留下)劣于大豆粗粉，这是由于其高纤维含量和降低的营养价值。在一些实施方案中，包含本发明种质的芸苔植物可以减轻或克服这些缺陷，并且可以提供芸苔粗粉作为高度营养的且经济的动物饲料来源。芸苔粗粉是芸苔油生成的副产物，如此通过本发明提供的芸苔粗粉通过容许此副产物与其它粗粉竞争使用来节约有价值的资源。

先前认为黄色芸苔种子颜色本身是有意义的，因为认为它对应于在提取油后获得的粗粉组分的改善的营养特征。一些实施方案可以第一次提供结暗色种子的(例如结暗色、黑色、和杂色种子)低纤维芸苔的种质，其也提供卓越的高油酸和低亚麻酸，所述种质也提供具有改善的营养特征(例如，改善的种子组分)的芸苔粗粉。在一些实施方案中，令人惊讶地，包含本发明种质的植物可以进一步提供与其它有价值的性状(例如但不限于：卓越的产率、高蛋白质含量、高油含量、和高油质量)组合的这些性状。特定的实施方案中的暗色皮的种子可以比通过标准结暗色种子的芸苔变种生成的种子具有薄得相当多的种皮。与标准结暗色种子的变种中的油和蛋白质水平相比，较薄的种皮可以导致粗粉中降低的纤维含量，和种子油和蛋白质含量的增加。因此，包含本发明种质的植物生成的暗色种子可以比通过标准的结暗色种子芸苔植物生成的种子中的观察结果在其种子中可以具有更高的油和蛋白质浓度。

在实施方案中，包含本发明种质的植物没有展现出实质性农艺学和/或种子限制。例如，此类植物可以与由标准芸苔变种展现的特征展现出至少一样有利的农艺学和/或种子质量(例如，萌发；早期季节活力；种子处理的效果；种子收获和可存储性)。在特定的实施方案中，包含本发明种质的植物也可以包含一种或多种由先前存在的芸苔近交系展现出的别的有利性状，例如但不限于有利的脂肪酸概况。

在实施方案中，包含本发明种质的植物可以生成包含几种营养特征中至少一种的种子。在特定的实施方案中，由此类芸苔植物生成的种子可以包含至少一种选自下组的营养特征：有利的油概况；高蛋白质含量；低纤维含量(例如ADF和NDF(包括低多酚含量))；(低纤维和高蛋白质赋予较高的代谢能)；高磷含量；和低芥子酸酯(SAE)含量。在某些实施方案中，“高”或“低”组分含量指由包含本发明种质的参照植物和生成的种子和由标准芸苔变种生成的种子之间的比较。如此，生成具有“低”纤维含量的种子的植物可以生成比在由标准芸苔变种生成的种子中观察到的纤维含量具有更低纤维含量的种子。并且，生成具有“高”蛋白质含量的种子的植物可以生成比在由标准芸苔变种生成的种子中观察到的蛋白质具有更高蛋白质含量的种子。

在一些实施方案中，可以生成由芸苔植物生成的油菜籽的实质上一致的集聚，所述芸苔植物包含至少一种选自上述组的营养特征。此类种子可以用于生成实质上一致的油菜植物田地。特定的实施方案提供了芸苔种子，其包含鉴定前述特征的组合。例如，种子的组合总油和蛋白质含量可以是种子的有用测量和独特特征。

一些实施方案提供了包含本发明种质的芸苔(例如结暗色种子的芸苔)，其能够具有NATREON型油概况或“Omega-9”油概况的芸苔油。“NATREON型”、“NATREON样”或“Omega-9”油概况可以表示范围为例如68-80%;70-78%;71-77%;和72-75%的油酸含量，其中alpha亚麻酸含量低于例如3%。在特定的实施方案中，从包含本发明种质的芸苔植物获得的种子可以产生如下的油，其具有超过68%、超过70%、超过71%、超过71.5%、和/或超过72%(例如,72.4%或72.7%)油酸，同时具有小于3%、小于2.4%、小于2%、小于1.9%、和/或小于1.8%(例如1.7%)的亚麻酸含量。在别的实施方案中，然而，包含本发明种质的芸苔可以生成具有例如大于80%的油酸含量的油。在某些实施方案中，自包含本发明种质的芸苔生成的芸苔油可以是天然稳定的(例如，没有人工氢化)。芸苔油的脂肪酸含量可以依照已知的方法容易且常规测定。

如此，一些实施方案提供了包含油级分和粗粉级分的芸苔种子(例如，暗色芸苔种子)，其中所述油级分可以具有例如3%或更小(相对于种子的总脂肪酸含量)的α-亚麻酸含量和例如68%或更多(相对于种子的总脂肪酸含量)的油酸含量。根据定义，此类种子的芥酸(C22:1)含量也可以小于2%(按重量计)(与种子的总脂肪酸含量相比)。在具体的例子中，芸苔种子的油含量可以包含48%-50%种子重量。

术语“高油酸”指比野生型或其它参照变种或系具有更高的油酸含量的芥菜或其它芸苔物种，如上下文可以规定，更一般地，它规定包含至少68.0%(按重量计)油酸的脂肪脂肪酸组成。

“总饱和物”指棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)、花生酸(C20:0)、山酸(C22:0)和二十四酸(C24:0)脂肪酸的组合百分比。可以依照本领域技术人员公知的标准规程测定本文中讨论的脂肪酸浓度。在例子中阐明具体的规程。脂肪酸浓度以占总脂肪酸含量的重量百分比表示。

如本文中使用的，术语“稳定性”或“稳定的”就给定的经遗传控制的脂肪酸组成而言意指将脂肪酸组分以基本上相同的水平，例如优选±5%在世代间维持至少两个世代，并且优选地至少三个世代。本发明的方法能够创建在世代间以多至±5%稳定的具有改善的脂肪酸组分芥菜系。本领域技术人员理解，上文提及的稳定性可以受到温度、位置、应激和种植时间影响。如此，芸苔系间的脂肪酸概况的比较应当使用在相似生长条件下生成的种子进行。

在本发明的上下文中使用术语“芸苔植物”时，这还包括所述组的任何单一基因转变。如本文中使用的，术语“单一基因转变的植物”指那些通过称作回交的植物育种技术开发的芸苔植物，其中在经由回交技术对变种转移的单一基因外恢复变种的基本上所有期望的形态学和生理学特征。可以与本发明一起使用回交方法以对变种改善或引入特征。如本文中使用的，术语“回交”指杂种后代返回对回归亲本的重复杂交，即对回归亲本回交一次或多次(鉴定为“BC1,”“BC2,”等等)。贡献期望特征基因的亲本芸苔植物称作“非回归”或“供体亲本”。此术语指在回交方案中使用非回归亲本一次，并且因此不再发生的实情。接受来自非回归亲本的一种或多种基因转移的亲本芸苔植物称为回归亲本，因为它在回交方案中使用几个轮次(Poehiman & Sleper,1994;Fehr,1987)。在一种典型的回交方案中，将感兴趣的初始变种(回归亲本)与携带要转移的感兴趣单一基因的第二变种(非回归亲本)杂交。然后，将自此杂交所得的后代再次与回归亲本杂交，并且重复该过程，直到获得芸苔植物，其中在来自非回归亲本的单一转移基因外，在转变植物中恢复回归亲本的基本上所有期望的形态学和生理学特征，如在相同环境条件下培养时在5%显著性水平测定的。在本申请中，术语“芸苔”(Brassica)可以包含芸苔属中包含的任何或所有物种，包括欧洲油菜、芥菜、黑芥菜(Brassica nigra)、埃塞俄比亚芥(Brassica carinata)、甘蓝(Brassicaoleracea)和芜青(Brassica rapa)。

如本申请中使用的，芸苔芥菜指生成具有分别满足“芸苔”油或粗粉的商业名称要求的油和粗粉质量的种子的芥菜(即，如下的芥菜物种植物，其具有种子油中的小于2%芥酸(Δ1322:1)(按重量计)和每克无油粗粉小于30微摩尔芥子油苷)。

在一个方面，本发明提供了能够生成种子的芸苔植物，诸如芥菜植物，所述种子具有包含高百分比油酸和低百分比亚麻酸(按重量计)的内源脂肪酸含量。在特定的实施方案中，油酸可以构成超过约68.0%,69.0%,70.0%,71.0%,72.0%,73.0%,74.0%,75.0%,76.0%,77.0%,78.0%,79.0%,80.0%,81.0%,82.0%,83.0%,84.0%或85.0%，包括所有整数及其分数或具有大于85%油酸的数值的任何整数。在特定的实施方案中，脂肪酸的亚麻酸含量可以是小于约5%,4%,3%,2.5%,2.0%,1.5%,1.0%,0.5%或0%，并且包括所有整数及其分数。在一个例示性的实施方案中，植物是芥菜，其种子具有包含至少68%油酸(按重量计)和小于3%亚麻酸(按重量计)的内源脂肪酸含量。在别的实施方案中，植物是芥菜植物，其种子具有包含至少68.0%油酸(按重量计)和不超过约5%亚麻酸(按重量计)的内源脂肪酸含量。

在一个方面，本发明提供了能够生成种子的芸苔植物，诸如芥菜植物，所述种子具有包含高百分比油酸和低百分比亚麻酸(按重量计)和分别可以包含小于约5.5%总饱和脂肪酸或>10%总饱和脂肪酸的低总饱和脂肪酸或高总饱和脂肪酸的内源脂肪酸含量。

已知来自芥菜种子的油的组成与欧洲油菜的种子油的组成在两种脂肪酸组分(例如较高的芥酸含量)、精油(例如异硫氰酸烯丙酯)、和少量成分(例如生育酚、金属、鞣质、酚、磷脂、颜色体(color body)，等等)方面有所不同。已经发现与来自欧洲油菜的油相比，来自芥菜的种子中的油(包括提取油)在氧化稳定性方面更高，即使来自芥菜的油通常具有更高的C18:3水平。(C.Wijesundera et al.,“Canola Quality Indian Mustard oil(Brassica juncea)is More Stable to Oxidation than Conventional Canola oil(Brassica napus),”J.Am.Oil Chem.Soc.(2008)85:693–699)。

在一个备选方面，本发明提供了用于提高芸苔植物的油酸含量并降低亚麻酸含量的方法。此类方法可以牵涉：(a)在来自芸苔系的至少一些细胞中诱导诱变，所述芸苔系具有大于55%的油酸含量和小于14%的亚麻酸含量；(b)从至少一个所述诱变的细胞再生植物，并选择再生植物，其具有包含至少68%油酸(或备选阈值浓度的油酸，如上文列出的)和小于3%亚麻酸(或备选阈值浓度的亚麻酸，如上文列出的)的脂肪酸含量；并(c)从所述再生植物衍生植物的进一步世代，所述植物的进一步世代的个体植物具有包含至少68%油酸(或备选阈值浓度的油酸)和小于3%亚麻酸(或备选阈值浓度的油酸)的脂肪酸含量。在一些实施方案中，芸苔可以是芥菜。术语“高油酸含量”和“低亚麻酸含量”涵盖上文描述的可能数值的完全范围。在备选实施方案中，本发明的方法可以进一步包括对一种或多种品系、再生植物和植物的进一步世代选择降低的亚麻酸含量，诸如上文描述的可能数值的范围。在别的实施方案中，步骤(c)可以牵涉选择并培养来自步骤(b)的再生植物的种子。在别的实施方案中，本发明的方法可以包括规定步骤的重复，直到实现期望的油酸含量、亚麻酸含量或者这两者。

在备选实施方案中，提供了用于对个别种子筛选增加的油酸含量和降低的亚麻酸含量的方法，其包括：测定下列一项或多项：种子萌发物的一部分的脂肪酸的油酸含量；或亚麻酸含量；或油酸含量和亚麻酸含量；比较一种或多种含量与参照数值；并推断种子可能的相对油酸、亚麻酸、或油酸和亚麻酸含量。在特定的实施方案中，用于分析的植物部分可以是部分或整个的叶、子叶、茎、叶柄、茎或任何其它组织或组织碎片，诸如具有表明与种子组成可靠相关的组成的组织。在一系列实施方案中，萌发物的一部分可以是叶的一部分。在某些实施方案中，推断种子的脂肪酸组成的步骤可以包括假设所述叶中给定酸的显著变化水平反映种子中所述酸的水平的相似相对变化。在本发明的一个特定的实施方案中，用于通过分析叶组织对芸苔植物筛选个别植物系的方法，所述个别植物系的种子具有包含至少68%油酸和小于3%亚麻酸(按重量计)的内源脂肪酸含量。另外，可以通过气液层析对叶组织分析脂肪酸组成，其中可以通过诸如整装种子分析(bulk seed analysis)或半种子分析(half seed analysis)的方法发生脂肪酸的提取。

在备选实施方案中，本发明提供了包含先前描述的来自芥菜系的基因等位基因的芸苔植物，其可以是芥菜植物。在某些实施方案中，植物在以突变体等位基因表示的fad2-a和fad3-a处可以是纯合的。在别的实施方案中，芥菜植物、植物细胞、或其部分含有基因等位基因，其具有来自本文中公开的先前描述的序列的核酸序列。

在一些实施方案中，本发明可以牵涉通过检查BJfad2b基因的存在或缺乏区别本发明的HOLL芸苔质量芥菜(≥68%油酸和≤5%亚麻酸)与低油酸/高亚麻酸芥菜(约45%油酸和约14%亚麻酸)(关于参考文献，参见美国专利公开文本No.20030221217,Yao et al.)。此区别可以牵涉确认BJfad2a基因是在芸苔质量芥菜系中唯一功能性的油酸脂肪酸去饱和酶基因，如本领域中已知的。

在一个实施方案中，芥菜系含有fad2和fad3基因，如披露于国际公开文本No.US2006/0248611A1的，在其中的图1和3中例示。fad2和fad3基因在本文中以SEQ ID NO:1-4例示。所得的等位基因编码delta-12脂肪酸去饱和酶蛋白，其在国际公开文本No.US2006/0248611A1的图2中例示。在其它实施方案中，芥菜系可以含有fad2-a和fad3-a基因基因座处的突变，并且所得的突变体等位基因可以编码预测BJFAD2-a和BJFAD3-a蛋白的序列中的一处或多处突变。适合于本发明中使用的fad2-a和fad3-a突变基因和蛋白质的代表性例子还包括但不限于披露于：国际公开文本No.WO2006/079567A2(例如图1和2)，诸如SEQ ID NO:8和9;国际公开文本No.WO2007/107590A2，诸如SEQ ID NO:10-21;美国专利No.6,967,243B2(例如图2和3)，诸如SEQ ID NO:22-27；及欧洲公开文本No.1862551A1(例如图1到10)，诸如SEQ ID NO:28-39。

在选择的实施方案中，本发明提供了包含先前公开的突变体fad2和fad3基因的完整可读框(ORF)和/或5’上游区的分离的DNA序列。因而，本发明还提供了预测突变体蛋白质的多肽序列，其含有来自先前描述突变体等位基因的突变。已知膜结合的去饱和酶诸如FAD2具有保守的组氨酸框。这些组氨酸框外部的氨基酸残基变化也可以影响FAD2酶活性(et al.,Molecular Breeding4:543550,1998)。

在本发明的一个方面，可以在植物育种中使用本文中描述的突变体等位基因。具体地，可以使用本发明的等位基因来育种高油酸芸苔物种，诸如芥菜、欧洲油菜、芜青、黑芥菜和埃塞俄比亚芥。本发明提供了用于区别突变体等位基因与备选序列的分子标志物。由此，本发明提供了用于牵涉具有本发明等位基因的植物的遗传杂交的分离和选择分析的方法。由此，本发明提供了用于源自牵涉具有本发明等位基因的植物的遗传杂交的后代的分离和选择分析的方法。

在备选实施方案中，本发明提供了用于鉴定具有期望的脂肪酸组成或期望的遗传特征的芸苔植物，诸如芥菜植物的方法。例如，本发明的方法可以牵涉测定特定FAD2和/或FAD3等位基因，诸如本发明等位基因或野生型J96D-4830/BJfad2a等位基因在基因组中的存在。在特定的实施方案中，所述方法可以包括鉴定与鉴定的等位基因之一有关的核酸多态性或与本发明等位基因之一有关的抗原决定簇的存在。例如，可以用一批技术，诸如相关DNA片段的PCR扩增、DNA指纹法、RNA指纹法、凝胶印迹和RFLP分析、核酸酶保护测定法、相关核酸片段的测序、抗体(单克隆或多克隆)的生成、或适合于区别由来自其它变体的相关等位基因生成的蛋白质或所述蛋白质的野生型形式的备选方法实现此类测定。本发明还提供了通过测定本发明突变体等位基因存在鉴定芥菜植物的方法，所述芥菜植物的种子具有包含至少68%油酸(按重量计)的内源脂肪酸含量。

在备选实施方案中，本发明提供了包含编码突变FAD2和FAD3蛋白的fad2和fad3编码序列的芸苔植物。与野生型FAD2蛋白相比，此类突变FAD2/FAD3蛋白可以仅含有一处氨基酸变化。在代表性实施方案中，多种芥菜系含有由先前描述的等位基因编码的先前描述的突变FAD2蛋白。此类等位基因可以选择为对本发明的植物有效赋予增加的油酸含量和降低的亚麻酸含量。在特定的实施方案中，可以通过育种技术将期望的等位基因引入植物中。在备选实施方案中，可以通过分子生物学技术，包括植物转化引入本发明等位基因。在此类实施方案中，本发明的植物可以生成具有内源脂肪酸含量的种子，所述内源脂肪酸含量包含：至少约68%油酸(按重量计)和小于约3%亚麻酸(按重量计)，或如上文所列的任何其它油酸和亚麻酸含量阈值。本发明的植物还可以含有约68%至约85%(按重量计)油酸、约70%至约78%油酸、和约0.1%至约3%亚麻酸，其中油组分在遗传上源自亲本系。本发明的植物还可以具有小于7.1%至小于约6.2%(按重量计)的总脂肪酸含量。在一个实施方案中，植物生成具有内源脂肪酸含量的种子，所述内源脂肪酸含量包含至少约68%油酸和小于3%亚麻酸，其中油组成在遗传上源自亲本系。

在选择的实施方案中，本发明提供了具有内源油含量的芸苔种子，其可以是芥菜种子，所述内源油含量具有对一个或多个上述实施方案列出的脂肪酸组成，且其中内源油含量的遗传决定子源自本发明的突变体等位基因。例如，此类种子可以通过将本发明的每种突变体等位基因系自花传粉获得。或者，此类种子可以例如通过将突变体等位基因系与第二亲本杂交，接着进行选择获得，其中第二亲本可以是任何其它芸苔系诸如芥菜系，是芸苔质量芥菜或非芸苔质量芥菜、或任何其它芸苔物种诸如欧洲油菜、芜青、黑芥菜、和埃塞俄比亚芥。这些育种技术是本领域技术人员公知的。

在备选实施方案中，本发明提供了芸苔属的遗传稳定的植物，诸如形成具有一个或多个上述实施方案中公开的组成的成熟种子的芥菜植物。此类植物可以源自具有本发明的突变体等位基因的芥菜系。此类植物的油组成可以在遗传上源自亲本系。

在备选实施方案中，本发明提供了生成遗传稳定的芸苔植物，诸如芥菜植物的方法，所述遗传稳定的芸苔植物生成具有内源脂肪酸含量的成熟种子，所述内源脂肪酸含量包含一个或多个上述实施方案规定的组成。本发明的方法可以牵涉如下的步骤：将来自欧洲油菜的Omega9基因(例如fad2a和fad3a)与其它芸苔植物，诸如芥菜杂交以形成F₁后代。例如通过可以包括自花传粉或形成双重单倍体植物的手段繁殖F₁后代。通过组合突变体FAD2等位基因和突变体FAD3等位基因，具有双重突变体基因等位基因(fad2和fad3)的植物可以具有优于任何单一突变体植物的油脂肪酸概况。可以对所得的后代选择遗传稳定性植物，其生成具有一个或多个前述实施方案公开的组成的种子。例如，此类种子可以具有稳定化的脂肪酸概况，其包含总体可提取油中约7.1%至约6.5%的总饱和物含量。在某些变体中，后代可以自身生成具有上文对备选实施方案列出的组成的种子或油。具有大于约68%(按重量计)的油酸含量和小于约3%(按重量计)的亚麻酸含量。

在一个方面，本发明提供了具有稳定的、可遗传的高油酸和低亚麻酸表型的植物。例如，源自本发明突变体等位基因的高油酸和低亚麻酸表型在遗传上可遗传到M2、M3、和M4世代。

在备选实施方案中，本发明提供了芥菜植物，其中相对于用于诱变实验的野生型芥菜，脂肪酸去饱和酶的活性是改变的，油酸含量是改变的，或者亚麻酸含量是改变的。脂肪酸去饱和酶(“FAD”)意指蛋白质展现出在脂肪酸的生物合成中引入双键的活性。例如，FAD2/FAD3酶可以以从油酸生物合成亚麻酸中引入第二个双键的活性为特征。与参照植物、细胞或样品相比，改变的去饱和酶活性可以包括去饱和酶活性的升高、降低或消除。

在其它方面，去饱和酶活性降低可以包括消除编码去饱和酶的核酸序列，诸如本发明的核酸序列的表达。消除表达在本文中意指由核酸序列编码的功能性氨基酸序列不以可检测水平生成。去饱和酶活性降低可以包括消除编码去饱和酶的核酸序列，诸如编码FAD2酶或FAD3酶的本发明序列的转录。消除转录在本文中意指由核酸序列编码的mRNA序列不以可检测水平转录。去饱和酶活性降低还可以包括自编码去饱和酶的核酸序列生成截短的氨基酸序列。生成截短的氨基酸序列在本文中意指由核酸序列编码的氨基酸序列缺少由野生型核酸序列编码的功能性氨基酸序列的一个或多个氨基酸。另外，去饱和酶活性降低可以包括生成变体去饱和酶氨基酸序列。生成变体氨基酸序列在本文中意指氨基酸序列具有与野生型核酸序列编码的氨基酸序列不同的一个或多个氨基酸。如本文中更为详细讨论的，本发明公开了与野生型系J96D-4830相比，本发明的突变体系生成具有变体氨基酸的FAD2和FAD3酶。为了降低去饱和酶活性，可以将多种类型突变引入核酸序列中，诸如移码突变、取代和缺失。

在一些实施方案中，本发明提供了新的FAD2/FAD3多肽序列，其可以依照本发明的备选实施方案修饰。本领域中公知的是，可以对多肽的结构做出一些修饰和变化，而不实质性改变所述肽的生物学功能以获得生物学等同多肽。如本文中使用的，术语“保守氨基酸取代”指用一种氨基酸取代肽中给定位置处的另一种，其中可以在没有任何明显功能损失或获得的情况中做出取代，以获得生物学等同多肽。在进行此类变化中，如氨基酸残基的取代可以基于侧链取代基的相对相似性，例如其大小、电荷、疏水性、亲水性等做出，并且可以通过常规测试对此类取代测定其对肽功能的影响。相反，如本文中使用的，术语“非保守氨基酸取代”指用一种氨基酸取代肽中给定位置处的另一种，其中取代引起肽的明显功能损失或获得，以获得不是生物学等同物的多肽。

纤维是植物细胞壁的组分，并且包括碳水化合物聚合物(例如，纤维素(线性葡萄糖聚合链))；半纤维素(例如半乳糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖的异质共聚物的分支链，其中附着酚分子)；和果胶(半乳糖醛酸、木糖、阿拉伯糖的水溶性聚合物，具有不同程度的甲基化)。纤维素还包含多酚聚合酶(例如，木质素样聚合物和缩合鞣质)。在理论上，ADF纤维由纤维素和木质素组成。缩合鞣质通常包含在ADF级分中，但是缩合鞣质含量不依赖于ADF而变化。比较而言，TDF是已经除去蛋白质、可溶物和淀粉的粗粉，并且由不溶性细胞壁组分(例如，纤维素、半纤维素、多酚和木质素)组成。

在特定的实施方案中，与芸苔变种相比，包含本发明种质的芸苔植物(例如结暗色种子芸苔植物)的种子可以具有降低的ADF。在具体的例子中，芸苔粗粉(全种子，除去油，按干重量计)的纤维含量可以包括例如但不限于：小于约18%ADF(例如，约18%ADF、约17%ADF、约16%ADF、约15%ADF、约14%ADF、约13%ADF、约12%ADF、约11%ADF、和约10%ADF和/或小于约22%NDF(例如约22.0%NDF,约21%NDF,约20%NDF,约19%NDF,约18%NDF,和约17%NDF)。

在特定的实施方案中，与标准结暗色种子芸苔变种相比，包含本发明种质的芸苔植物的种子可以具有增加的蛋白质含量。在具体的例子中，芸苔粗粉(全种子，除去油，按干重量计)的蛋白质含量可以包括例如但不限于大于约45%(例如约45%,约46%,约47%,约48%,约49%,约50%,约51%,约52%,约53%,约54%,约55%,约56%,约57%,和约58%)粗制蛋白质。不同芸苔变种以特定蛋白质含量为特征。蛋白质含量(%氮x6.25)可以使用多种公知的且常规的分析技术例如NIR和Kjeldahl测定。

也可以使用磷含量来限定芸苔变种的种子、植物和品系。在一些实施方案中.此类芸苔变种可以生成芸苔粗粉(全种子，除去油，按干重量计)，其在与自标准芸苔变种生成的粗粉相比时具有增加的磷含量。例如，本发明的芸苔粗粉可以具有超过1.2%;超过1.3%;超过1.4%;超过1.5%;超过1.6%,超过1.7%,和/或超过1.8%的磷含量。

上述性状的各种组合也可以在几个实施例中提供的近交芸苔系和杂种中鉴定，并且以几个实施例中提供的近交芸苔系和杂种例示。这些品系例示可以使用本发明的种质来提供并获得极其多种有利芸苔特征和/或性状的各种新组合。例如，可以将包含本发明种质的近交芸苔系与包含期望特征和/或性状的另一芸苔系杂交以引起包含本发明种质的近交系特征性的期望种子组分。种子组分(例如纤维含量、芥子油苷含量、油含量，等等)和其它植物性状的计算可以使用本领域中已知的且行业中公认的技术获得。通过选择和繁殖包含亲本变种的期望特征和/或性状的来自杂交的后代植物，可以创建新的变种，其包含特征和/或性状的期望组合。

具有改善的营养特征的芸苔粗粉

一些实施方案提供了包含芸苔种子的粗粉，其中所述芸苔种子具有油和粗粉特征，如上文讨论的。例如，一些实施方案包括经己烷提取的、风干的芸苔粗粉(白色薄片或WF)，其包含特征(例如种子组分)的新颖组合，如上文讨论的。特定的实施方案包括包含自包含本发明种质的植物生成的芸苔种子的粗粉，和含有包含本发明种质的植物后代的种子的粗粉。

在一些实施方案中，包含本发明种质的芸苔近交系和杂种在作为饲料或食物成分直接利用时和/或作为原料利用用于加工蛋白质分离物和浓缩物时可以提供营养增强的粗粉特性。例如，此类芸苔近交系和杂种可以提供优于标准芸苔粗粉的动物饲料。在一些实施方案中，可以利用芸苔粗粉组分(和包含它们的动物饲料)来为单胃动物(例如猪和家禽)提供良好的营养。

在一些实施方案中，芸苔粗粉组分(和包含它们的动物饲料)可以进一步利用以为反刍类动物(例如，牛动物、绵羊、山羊和亚目反刍亚目(Ruminantia)的其它动物)提供良好的营养。反刍类的喂养呈现特殊的问题和特殊的机会性。特殊的机会性源自反刍类利用不溶性纤维素纤维的能力，所述不溶性纤维素纤维可以通过这些动物瘤胃中的某些微生物分解，并且一般是单胃哺乳动物诸如猪不可消化的。特殊的问题源自某些饲料抑制瘤胃中纤维消化的趋势，以及源自瘤胃限制某些饲料的一些组分，诸如脂肪和蛋白质的利用的趋势。

油提取性芸苔种子是一种在动物饲料中使用的高质量蛋白质的潜在来源。在油提取后，与大豆粗粉(其目前对于饲料和食物目的是广泛优选的)中的约44-48%相比，商品芸苔粗粉包含约37%蛋白质。芸苔中含有的蛋白质富含甲硫氨酸，并且含有足够数量的赖氨酸，这两者是大多数谷类和含油种子蛋白质中的限制性氨基酸。然而，使用芸苔粗粉作为蛋白质来源在某些动物饲料中是有些有限的，因为它含有不想要的组成诸如纤维、芥子油苷、和酚类(phenolics)。

衍生芸苔的油菜籽的一种营养方面是其高(30-55μmol/g)水平的芥子油苷，即一种基于硫的化合物。在碾碎芸苔叶或种子时，通过黑芥子酶对芥子油苷的作用生成异硫氰酸酯。这些产物抑制甲状腺的甲状腺素合成，并且具有其它抗代谢效应。Paul et al.(1986)Theor.Appl.Genet.72:706-9。如此，对于人食物使用，例如，应当降低或消除源自油菜籽粗粉的蛋白质的芥子油苷含量以提供产物安全性。

在种子中具有例如有利的油概况和含量及低芥子油苷含量的改善的芸苔种子会显著降低氢化的需要。例如，此类油的较高的油酸和较低α-亚麻酸含量可以赋予升高的氧化稳定性，如此降低氢化和生成反式脂肪酸的需要。种子芥子油苷的降低会显著降低油中残留的硫含量。硫损害通常用于氢化的镍催化剂。Koseoglu et al.,Chapter8,in Canolaand Rapeseed:Production,Chemistry,Nutrition,and Processing Technology,Ed.Shahidi,Van Nostrand Reinhold,N.Y.,1990,pp.123-48。另外，来自具有低种子芥子油苷的芸苔变种的油对于加氢会是不太昂贵的。

芸苔粗粉中的酚化合物赋予苦的口味，并且认为必然与最终蛋白质产物中暗色颜色有关。种子壳(其在标准芸苔粗粉中大量存在)对于人和其它单胃动物是难消化的，而且还提供难看的异质产物。

通过包含本发明种质的芸苔植物生成的种子的粗粉组分可以具有例如但不限于：高蛋白质；低纤维；较高的磷；和/或低SAE。不溶性纤维和多酚是抗营养的，并且损害蛋白质和氨基酸消化。如此，具有至少一种选自下组的种子组分特征的芸苔粗粉和包含芸苔粗粉的动物饲料在一些应用中可以是期望的：降低的纤维含量、增加的蛋白质含量、降低的多酚含量和增加的磷含量。

在具体的例子中，芸苔粗粉(无油，以干物质计)可以包含of至少约45%(例如约45%,约46%,约47%,约48%,约49%,约50%,约51%,约52%,abo约53%,约54%,约55%,约56%,约57%,和约58%)的蛋白质含量。

与查找芸苔系相比，包含本发明种质的芸苔变种可以具有良好的产率，并且生成具有低得多的酸性去污剂纤维(ADF)的种子。在一些实施方案中，可以使用对由包含本发明种质的植物变种生成的种子的组分测定的任何经验数值，以限定植物变种的植物、种子、和油。在一些此类例子中，可以使用特定数目作为端点以限定高于、低于任何测定数值或者任何测定数值之间的范围。上文列出了油特征和其它种子组分的例示性范围。品系及其植物的种子也可以以此类范围的组合限定。例如，例如，与特征性纤维水平、多酚水平、芥子油苷水平、蛋白质水平、和磷水平一起在上文讨论的油特征可以用于限定特定品系及其种子。

不是所有前述特征(例如种子组分特征)是限定一些实施方案的品系和种子需要的，但是可以使用别的特征来限定此类品系和种子(例如但不限于代谢能、消化能量、生物能、和净能)。

VI.包含以不依赖于种子颜色的方式赋予期望的种子组分性状的种质的植物

可以将包含本发明种质的特定芸苔近交系和杂种的期望性状转移至其它类型的芸苔(经由常规的育种等等)，例如芜青和芥菜，所得的植物生成具有不依赖于种子颜色表达的期望特征(例如种子组分特征)的种子。如此，已经接受包含本发明种质的特定芸苔近交系或杂种的一种或多种期望性状转移的芸苔变种可以生成具有结黄色种子或结暗色种子的具有期望特征的种子。此类新的或经修饰的芸苔变种的粗粉和种子可以具有降低的种子纤维水平、升高的蛋白质水平、升高的磷水平、和/或降低的多酚水平。

一些实施方案不仅包括包含如本文中描述并例示的种质的芸苔的黄色和暗色种子，而且还包括自此类种子种植或以其它方式生成的植物，和主题芸苔植物的可再生细胞的组织培养物。例示性品系和杂种在没有遗传工程化及在没有诱变的情况中获得，由此证明所述种质在生成新的且经修饰的芸苔变中的效用。

在一些特定的实施方案中，提供了特定的例示性芸苔近交系和杂种。作为本公开内容的一部分，已经将CL065620,CL044864,CL121460H,CL166102H和CL121466H之每种的至少2500个种子保藏美国典型培养物保藏中心(ATCC),Rockville,Md.20852，并且对公众可获得，服从专利权，但是在其它方面不受限制(除了37C.F.R.§1.808(b)明确允许的那些限制外)。保藏物分别称为ATCC保藏物No.PTA-11697,PTA-11696,PTA-11698,PTA-12570,PTA-11699，保藏日为2011年2月22日(对于PTA11696到PTA11699)和2012年2月21日(对于PTA-12570)。如上文所列出的，会将保藏物维持于ATCC保藏中心(其是公共保藏中心)一段30年的时间，或者在最近的要求后5年，或者持续专利的有效期，以较长者为准，并且保藏物在其在所述期间变得不能存活时会进行替换。

一些实施方案包括本文中公开的任何芸苔变种的种子。一些实施方案还包括由此类种子生成的芸苔植物，以及此类植物的可再生细胞的组织培养物。还包括从此类组织培养物再生的芸苔植物。在特定的实施方案中，此类植物可以能够表达例示性变种的所有形态学和生理学特性。特定的实施方案的芸苔植物可以已经鉴定自保藏种子培养的植物的生理学和/或形态学特征。

还提供了在上文描述的种子的后代的至少一个亲本中使用本发明的种质(例如，如本文中提供的例示性芸苔近交系和杂种中找到的)进行杂交的方法。例如，一些实施方案包括具有本文中例示的任何植物作为一个或两个亲本的F1杂种欧洲油菜植物。别的实施方案包括通过此类F₁杂种生成的欧洲油菜杂种。在特定的实施方案中，用于生成F₁杂种欧洲油菜种子的方法包括将例示性植物与不同近交植物芸苔植物杂交，并且收获所得的杂种种子。本发明的芸苔植物(例如，亲本芸苔植物、和通过用于生成F₁杂种的此类方法生成的芸苔植物)可以是雌性或雄性植物。

在一些实施方案中，可以通过杂交本发明的植物与具有经修饰的特征(例如高油和蛋白质水平)的另一个品系进一步修饰和/或改善芸苔植物的特征(例如，油和蛋白质水平和/或概况)。同样地，可以通过注意考虑亲本植物改善其它特征。包含本发明种质的芸苔系对于将其期望的种子组分特征以不依赖于种子颜色的方式杂交到其它油菜或芸苔系中可以是有益的。本发明的种质容许通过常规植物育种技术，包括异花传粉和选择后代将这些性状转移至相同物种内的其它植物中。在一些实施方案中，可以使用牵涉花粉转移和选择的常规植物育种技术在物种间转移期望的性状。参见例如Brassica crops and wildallies biology and breeding,Eds.Tsunada et al.,Japan Scientific Press,Tokyo(1980);Physiological Potentials for Yield Improvement of Annual Oil andProtein Crops,Eds.Diepenbrock and Becker,Blackwell Wissenschafts-VerlagBerlin,Vienna(1995);Canola and Rapeseed,Ed.Shahidi,Van Nostrand Reinhold,N.Y.(1990);and Breeding Oilseed Brassicas,Eds.Labana et al.,Narosa PublishingHouse,New Dehli(1993)。

在一些实施方案中，用于以不依赖于种子颜色的方式转移至少一种期望的种子组分特征的方法包括在种间杂交后，将F1世代的成员自花传粉以生成F2种子。然后，可以进行回交以获得展现出期望的种子组分特征的品系。另外，原生质体融合和核移植方法可以用于将性状从一种物种转移至另一种。参见例如,Ruesink,“Fusion of Higher PlantProtoplasts,”Methods in Enzymology,Vol.LVIII,Eds.Jakoby and Pastan,AcademicPress,Inc.,New York,N.Y.(1979),and the references cited therein;and Carlsonet al.(1972)Proc.Natl.Acad Sci.USA69:2292。

获得并生成包含本发明种质的例示性芸苔系，现在可以通过如上文列出的常规植物育种技术将暗色种皮颜色与期望的种子组分特征一起容易地转移到其它芸苔物种中。例如，现在可以将暗色种皮颜色与期望的种子组分特征一起容易地转移到商品化芜青变种，例如但不限于Tobin,Horizon和Colt。应当理解，暗色种子颜色不必与种子的其它特征一起转移。

给予一种例示性的变种作为起始点，双链技术人员在不偏离本发明范围的前提下可以以多种方式操作该变种提供的特定益处。例如，可以通过常规植物育种技术将例示性变种中存在的种子油概况转移至农艺学期望的欧洲油菜变种中，所述常规植物育种技术牵涉异花传粉和选择后代，例如其中将例示性变种的种质掺入其它农艺学期望的变种中。

特定的实施方案可以包括欧洲油菜的例示性变种，及已经实质性源自至少一种例示变体的实质性衍生的变体。另外，本发明的实施方案可以包括至少一种例示变体的植物、此类实质性衍生变体的植物、和/或从自其生成的植物或组织(包括花粉、种子和细胞)再生的油菜植物。

可以选择能够再生的植物材料，例如种子、小孢子、胚珠、花粉、营养部分、和小孢子。一般地，此类植物细胞可以选自任何芸苔变种，包括那些具有期望农艺学性状的。

再生技术是本领域中已知的。最初可以从选择的植物或变种选择能够再生的细胞(例如种子、小孢子、胚珠、花粉、和营养部分)。任选地，可以将这些细胞进行诱变。然后，可以使用基于细胞类型(并且不论它们是否诱变)的再生、传粉、和/或生长技术从细胞形成植物。植物或种子或其部分的操作可以导致实质上衍生的变体的创建。

在一些实施方案中，可以将包含本发明种质的植物展现的期望种子组分特征以不依赖于种子颜色的方式导入包含多个别的期望性状的植物中，以生成具有期望的种子组分特征和多种期望性状两者的植物。将期望的种子组分特征以不依赖于种子颜色的方式导入包含一种或多种期望性状的植物中的方法称为这些性状的“叠加(stacking)”。在一些例子中，期望种子组分特征与多种期望性状的叠加可以导致种子组分特征的进一步改善。在一些例子中，期望种子组分特征与多种期望性状的叠加可以生成如下的芸苔植物，其在所述多种期望性状中的一种或多种(例如所有)外还具有期望的种子组分特征。

对于与期望的种子组分特征的组合可以期望的性状的例子包括例如但不限于：植物疾病抗性基因(参见例如Jones等(1994)Science266:789(对叶霉菌(Cladosporiumfulvum)的抗性的番茄Cf-9基因)；Martin等(1993)Science262:1432(对丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)的抗性的番茄Pto基因)；及Mindrinos等(1994)Cell78:1089(对丁香假单胞菌的抗性的RSP2基因))；赋予对有害生物的抗性的基因；苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)蛋白、其衍生物或以其为模型的合成多肽(参见例如Geiser等(1986)Gene48:109(Btδ-内毒素基因；编码δ-内毒素基因的DNA分子可以例如以ATCC保藏号40098;67136;31995;和31998购自美国典型培养物保藏中心(Manassas,VA)))；凝集素(参见例如Van Damme等(1994)Plant Molec.Biol.24:25(君子兰(Clivia miniata)甘露糖结合凝集素基因))；维生素结合蛋白，例如亲合素(参见国际PCT公开文本US93/06487(使用亲合素和亲合素同系物作为针对昆虫有害生物的杀幼虫剂))；酶抑制剂；蛋白酶或蛋白水解酶抑制剂(参见例如Abe等(1987)J.Biol.Chem.262:16793(稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂);Huub等(1993)Plant Molec.Biol.21:985(烟草蛋白酶抑制剂I;及美国专利No.5,494,813)；淀粉酶抑制剂(参见Sumitani等(1993)Biosci.Biotech.Biochem.57:1243(硝孢链霉菌(Streptomyces nitrosporeus)alpha-淀粉酶抑制剂))；昆虫特异性激素或信息素，例如蜕化类固醇(ecdysteroid)或保幼激素、其变体、基于其的模拟物，或其拮抗剂或激动剂(参见例如Hammock等(1990)Nature344:458(保幼激素的灭活剂))；昆虫特异性肽或神经肽，其破坏受到影响的有害生物的生理学(参见例如Regan(1994)J.Biol.Chem.269:9(昆虫利尿激素受体);Pratt等(1989)Biochem.Biophys.Res.Comm.163:1243(来自太平洋折翅蠊(Diploptera puntata)的抑咽侧体神经肽(allostatin));美国专利No.5,266,317(昆虫特异性麻痹性神经毒素))；在自然界中由蛇、黄蜂、或其它生物体生成的昆虫特异性毒液(参见例如Pang等(1992)Gene116:165(蝎昆虫毒性肽))；负责超积累单萜、倍半萜、类固醇、氧肟酸、类苯丙烷衍生物或另一种具有杀虫活性的非蛋白质分子的酶；牵涉生物学活性分子修饰(包括翻译后修饰)的酶，例如糖酵解酶；蛋白水解酶；脂肪分解酶；核酸酶；环化酶；转氨酶；酯酶；水解酶；磷酸酶；激酶；磷酸化酶；聚合酶；弹性蛋白酶；几丁质酶；或葡聚糖酶，无论是天然的还是合成的(参见国际PCT公开文本WO93/02197(纤维二糖酶(callase)基因)；含有几丁质酶编码序列的DNA分子(例如来自ATCC，在保藏号Nos.39637和67152下);Kramer等(1993)Insect Biochem.Molec.Biol.23:691(烟草天蛾幼虫(hornworm)几丁质酶);及Kawalleck等(1993)Plant Molec.Biol.21:673(欧芹ubi4-2多聚泛素基因)；刺激信号转导的分子(参见例如Botella等(1994)Plant Molec.Biol.24:757(钙调蛋白);及Griess等(1994)Plant Physiol.104:1467(玉米钙调蛋白)；疏水矩肽(hydrophobicmoment peptide)(参见例如国际PCT公开文本WO95/16776(Tachyplesin的肽衍生物，其抑制真菌植物病原体)；和国际PCT公开文本WO95/18855(赋予疾病抗性的合成的抗微生物肽))；膜通透酶、通道形成剂、或通道阻断剂(参见例如Jaynes等(1993)Plant Sci 89:43(使转基因植物对青枯假单胞菌(Pseudomonas solanacearum)有抗性的杀菌肽-β溶胞肽类似物(cecropin-βlytic peptide analog)；病毒侵入蛋白或自其衍生的复合毒素(参见例如Beachy等(1990)Ann.rev.Phytopathol.28:451(针对苜蓿花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草线条病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、烟草蚀刻病毒、烟草脆裂病毒和烟草花叶病毒的外壳蛋白介导的抗性))；昆虫特异性抗体或自其衍生的免疫毒素(参见例如Taylor等,摘要#497,Seventh Int’l Symposium on Molecular Plant-Microbe Interactions(Edinburgh,Scotland)(1994)(经由生成单链抗体片段进行的酶促失活)；病毒特异性抗体(参见例如Tavladoraki等(1993)Nature366:469(用于针对病毒攻击提供保护的重组抗体基因))；在自然界由病原体或寄生物生成的发育阻滞蛋白(developmental-arrestiveprotein)(参见例如Lamb等(1992)Bio/Technology10:1436(真菌内α-l,4-D-多聚半乳糖醛酸酶通过溶解植物细胞壁同-α-1,4-D-半乳糖醛酸酶(galacturonase)来促进真菌定殖(colonization)和植物营养物释放;Toubart等(1992)Plant J.2:367(内多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白))；和在自然界由植物生成的发育阻滞蛋白(参见例如Logemann等(1992)Bio/Technology10:305(大麦核糖体失活基因，其提供升高的对真菌疾病的抗性))。

对于与期望的种子组分特征的组合可以期望的性状的其它例子包括例如但不限于：赋予对除草剂的抗性的基因(Lee等(1988)EMBO J.7:1241(突变体ALS酶);Miki等(1990)Theor.Appl.Genet.80:449(突变体AHAS酶);美国专利No.4,940,835和6,248,876(提供草甘膦抗性的突变体5-烯醇丙酮酰莽草酸(enolpyruvylshikimate)-3-磷酸合酶(EPSP)基因);美国专利No.4,769,061和ATCC保藏号39256(aroA基因)；草甘膦乙酰基转移酶基因(草甘膦抗性)；来自链霉菌属物种(Streptomyces species)，包括吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)和绿色产色链霉菌(Streptomyces viridichromogenes)的其它膦酰基化合物)，诸如那些记载于欧洲申请No.0242246和DeGreef等(1989)Bio/Technology7:61的(提供草甘膦抗性的草铵膦膦丝菌素乙酰基转移酶(PAT)基因)；吡啶氧基或苯氧基丙酸和环己酮(草甘膦抗性)；欧洲专利申请No.0333033和美国专利No.4,975,374(提供对除草剂诸如L-膦丝菌素的抗性的谷氨酰胺合成酶基因)；Marshall等(1992)Theor.Appl.Genet.83:435(Acc1-S1,Acc1-S2,和Acc1-S3基因，其提供对苯氧基丙酸和环己酮，诸如稀禾定(sethoxydim)和吡氟氯禾灵(haloxyfop)的抗性)；WO2005012515(提供草甘膦抗性的GAT基因)；WO2005107437(赋予对2,4-D、fop和吡啶基氧基生长素除草剂的抗性的基因)；和抑制光合作用的除草剂，诸如三嗪(psbA和gs+基因)或苯基氰(腈水解酶基因)(参见例如Przibila等(1991)Plant Cell3:169(突变体psbA基因);腈水解酶基因的核苷酸序列披露于美国专利No.4,810,648，且含有这些基因的DNA分子以ATCC保藏号53435,67441,和67442可获得；及Hayes等(1992)Biochem.J.285:173(谷胱甘肽S-转移酶))。

对于与期望的种子组分特征的组合可以期望的性状的其它例子包括例如但不限于：赋予或促成增值(value-added)性状的基因，例如，经修饰的脂肪酸代谢(参见例如Knultzon等(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:2624(增加植物的硬脂酸含量的硬脂酰-ACP去饱和酶的反义基因))；降低的肌醇六磷酸盐含量(参见例如Van Hartingsveldt等(1993)Gene127:87(黑曲霉(Aspergillus niger)肌醇六磷酸酶基因增强肌醇六磷酸的分解，对经转化的植物添加更多游离的磷酸根)；及Raboy等(1990)Maydica35:383(与负责具有低水平的肌醇六磷酸的玉米突变体的等位基因有关的DNA的克隆和再导入))；和例如通过用编码改变淀粉分支样式的酶的基因转化植物来实现的经修饰的碳水化合物组成(参见例如Shiroza等(1988)J.Bacteol.170:810(链球菌(Streptococcus)突变体果糖基转移酶基因);Steinmetz等(1985)Mol.Gen.Genet.20:220(果聚糖蔗糖酶(levansucrase)基因);Pen等(1992)Bio/Technology10:292(α-淀粉酶);Elliot等(1993)Plant Molec.Biol.21:515(番茄转化酶基因);Sogaard等(1993)J.Biol.Chem.268:22480(大麦α-淀粉酶基因);及Fisher等(1993)Plant Physiol.102:1045(玉米胚乳淀粉分支酶II))。

提供以下实施例以例示要求保护的发明的某些特定特征和/或方面。这些实施例不应解释为将公开内容限于描述的具体特征或方面。

实施例

实施例1：增强的芸苔粗粉(ECM)和常规芸苔粗粉的平均营养物组成和数值。

在2009年和2012年之间进行几个分析性和功能性研究以评估本发明的ECM系和杂种的营养物组成和价值。对完整的未加工的种子、部分加工的粗粉和完全加工的粗粉进行测试以解释对营养物组成和数值的可能的加工影响。在伊利诺斯州、密苏里州、乔治亚州和马尼托巴省的大学分析样品。使用此组成信息以使用标准预测方程评估增强的芸苔粗粉对常规芸苔粗粉的能量值。伊利诺斯州和乔治亚州的大学完成对样品生物学评估家禽能量和氨基酸消化率。在伊利诺斯州大学进行对样品生物学评估猪能量和氨基酸消化率。表1中显示了ECM系(范围或平均值)和常规芸苔粗粉之间的汇总营养物组成差异。在随后的实施例中概述了相关规程和研究的详情。

表1：ECM和常规芸苔粗粉的平均营养物组成。

*括号中的数字是平均值

**从营养物组成预测

ECM系显示了营养物组成中的几个独特改善，其提供动物喂养价值。如表1中显示的，ECM比常规芸苔粗粉在蛋白质中高约7%点。此外，必需氨基酸(为蛋白质的百分比)的平衡以较高的蛋白质水平得到维持。家禽和猪对ECM中的氨基酸的消化率与在常规芸苔粗粉中至少一样好，并且关键的氨基酸赖氨酸似乎具有略高的消化率，ECM系显示了较低水平的在细胞壁和壳中找到的纤维组分，具体地，木质素/多酚的水平低约2%点，纤维素水平低1%点，ADF残留物低3%点(3%点)，且ADF水平低5%点。

较高的蛋白质水平和较低的纤维组分水平与ECM系中约10%升高的生物能相关联。这些系也显示较高的磷(其是对动物饲料添加的昂贵营养物)水平。较高的蛋白质(氨基酸)、能量和磷与猪和家禽饲料中芸苔粗粉的价值($/t)升高约20-32%相关联，如在雏鸡和猪生长饲料的机会价格升高中反映的。表1。

实施例2：POS白色薄片(WF)、LT和HT粗粉方法

依照以下规程在萨斯卡通(CA)的POS试验厂(Pilot Plant)加工ECM种子和常规芸苔种子：

材料

在POS于2011年8月2日接收约1.5MT ECM测试系(CL44864)芸苔种子。在POS于2011年8月3日接收约3.0MT商品对照芸苔种子。主要材料的来源如下。己烷/异己烷：Univar,Saskatoon,SK.

Hyflo Super-cel滤器帮助：Manville Products Corp.,Denver,CO.

氮气：Air Liquide,Saskatoon,SK.

滤布,单丝:Porritts and Spensor,Pointe Claire,PQ.

滤纸,55lb鞣革式(tan style)1138-55:Porritts and Spensor,Pointe Claire,PQ.

方法：试验厂加工

在每个芸苔变种间，“一级”加工厂的所有设备是抽真空的或打扫干净的。易燃的，在试验间不关闭提取器。然而，提取器链Schnecken和溶剂回收系统保持运行以排空芸苔品种间的设备。不关闭真空，因此所有蒸汽抽吸至冷凝器，浓缩，并释放入溶剂工作罐中。这防止水在Schnecken中浓缩及堵漏传送机。以如下次序压榨/提取芸苔样品：

1.对照HT

2.对照LT

3.ECM测试系(CL44864)LT

轧胚(Flaking)

实施轧胚以破裂油细胞，并制备具有较大表面积的薄片，以通过将种子通过一组光泽辊进行蒸煮(cooking)/预压。调节薄片厚度和湿度以使生成细料的量最小化。高细料水平生成具有较差溶剂渗滤特性的压榨饼。

使用最小的辊缝设置将芸苔种子轧胚。每个批次的薄片厚度范围如下：

1.对照HT 0.21–0.23mm

2.对照LT 0.19–0.23mm

3.ECM测试系(CL44864)LT 0.21–0.23mm

补料速率受到压榨速率控制，并且是约133–150kg/hr。

刨片机：14”直径x28”宽度Lauhoff Flakmaster压扁机S-28型,系列No.7801，Lauhoff Corporation制造.

蒸煮(条件化)

完成蒸煮以进一步破裂油细胞，使薄片易弯，并通过该降低含有的油的粘性提高螺旋压榨机(expeller)的效率。还完成蒸煮以使种子中的酶失活。将蒸煮锅预加热，之后开发每次运行。在运行期间调节蒸汽压力以维持期望的薄片温度。

用于对照HT批次的盘中的温度如下：

顶部盘 60±5℃

底部盘 97±3℃

用于对照LT批次加ECM测试系(CL44864)LT批次的盘中的温度如下：

顶部盘 60±5℃

底部盘 93±2℃

蒸煮锅：使用两盘Simon-Rosedown蒸煮锅。每个区室高36cm(21cm工作高度)且直径是91cm，并且给其供应扫动臂，用于材料搅动。在夹套上使用蒸汽以进行干加热，以及可以对容器内容物添加直接蒸汽。在螺杆挤出机(screw press)上安装蒸煮锅以直接给料。

压榨

压榨取出约2/3的油，并且生成适合于溶剂提取的压榨饼(presscake)。压榨饼需要碾压抗性(以在提取器中提起)和多孔性(用于良好的质量转移和排出)。使用Simon-Rosedown预压榨机(pre-press)压榨经轧胚和蒸煮的种子。

在罐中收集粗制压榨油。

预压榨机：Simon-Rosedowns 9.5cm直径x94cm长螺杆压榨机。使用17rpm的操作螺杆速度。

溶剂提取和除溶剂化

溶剂提取是使压榨饼与己烷接触以从饼质量取出油。两个机制在运转中：使油浸入溶剂中，并且用越来越弱的溶剂混合油(miscellas)(己烷-油)清洗榨渣(己烷-固体)。提取通常是一个连续的逆流过程。

使用约90分钟的总停留时间(环中(loop in)至环外(loop out))、约2.5:1(w:w)的溶剂与固体比和52±5℃的溶剂混合油温度用异己烷/己烷提取芸苔对照HT压榨饼。(芸苔压榨饼给料速率在90分钟停留时间时是约90kg/hr，并且溶剂流动速率是220±10kg/hr.)。

在除溶剂化前取出商品芸苔白色薄片(WF)的样品，并风干。

将粗制油在升膜蒸发器(rising film evaporator)和蒸汽剥离器(steamstripper)中除溶剂化。

在蒸汽-有夹套的Schnecken螺杆和2盘除溶剂器-烤箱中完成榨渣(己烷-固体)的除溶剂化。将喷射流添加至顶部DT盘。盘中的目标温度如下：

Schnecken出口：<60℃

除溶剂化的盘:102±3℃

烘烤盘:102±3℃

使用约90分钟的总停留时间(环中至环外)、约2.5:1(w:w)的溶剂与固体比和52±5℃的溶剂混合油温度用异己烷/己烷提取芸苔对照LT和ECM测试系(CL44864)LT批次压榨饼。(芸苔压榨饼给料速率在110分钟停留时间时是约80kg/hr，并且溶剂流动速率是220±10kg/hr.)。

在除溶剂化前取出ECM测试系白色薄片(WF)的样品，并风干。

将粗制油在升膜蒸发器和蒸汽剥离器中除溶剂化。

Schnecken出口:<60℃

除溶剂化的盘:93±2℃

烘烤盘:93±2℃

提取器：所有不锈Crown Iron Works Loop Extractor(II型)。提取床是20.3cm宽x12.7cm深x长度680cm。另外，单元包括使用升膜蒸发器和蒸汽剥离器的溶剂混合油除溶剂化和使用蒸汽夹套的Schnecken螺杆和2盘除溶剂器-烤箱的榨渣(固体加溶剂)除溶剂化。将回收的溶剂收集并再循环。

真空干燥

完成真空干燥以将脱脂LT芸苔粗粉干燥至<12%湿度。

需要干燥的脱脂芸苔粗粉批次仅是对照LT批次。将约225kg脱脂粗粉加载到Littleford反应器干燥器中。然后，将粗粉在10-15”HG真空下加热至75±2℃。于约60℃开始粗粉取样以进行湿度分析，并且每15分钟发生，直到湿度<12%。然后，将粗粉放到整装的大袋中。重复上述规程，直到将所有粗粉干燥。

真空干燥器：600升FKM600-D(2Z)型Littleford反应器,序列#5132,LittlefordDay,Florence,KY.

锤磨(Hammer milling)

实施锤磨以生成一致的颗粒大小。

使用8/64”筛锤磨干燥的粗粉。在每个批次的粗粉间将锤磨机真空清扫。将粗粉包装到纤维鼓中，并于周围温度贮存，直到运输。

将芸苔粗粉锤磨的次序如下：

1.对照HT.

2.ECM测试系(CL44864)LT.

3.对照LT.

锤磨机：Prater Industries,G5HFSI型,系列#5075,Chicago,IL

实施例3：印第安纳波利斯白色薄片方法

可以加工本发明的芸苔种子以生成芸苔白色薄片，其使用最初记载于Bailey'sIndustrial Oil & Fat Products(1996),5th Ed.,Chapter2,Wiley IntersciencePublication,New York,New York的规程进行。

为了从芸苔种子提取油，首先如下将芸苔种子轧胚，即咖啡式研磨(coffeegrinding)，并在烤炉中热处理至85℃±10℃达至少20分钟。在热处理后，使用Taby压榨机20A型压榨机(Skeppsta,,Sweden)压榨研磨的种子。将来自Taby压榨机的所得压榨饼进行溶剂提取，以取出任何剩余的残留油。

然后，将来自含油种子压榨步骤的压榨饼进行溶剂提取以取出并收集任何剩余的残留油。将压榨饼放入不锈钢套筒(thimbles)中，所述不锈钢套筒放入定制Soxhlet^TM提取器(来自LaSalle Glassware(Guelph,ON))中。可以使用己烷作为提取溶剂，并且容许Soxhlet^TM提取器系统运行9-10小时。然后，从套筒取出经溶剂提取的压榨饼，并在整个盘间铺开至小于1英寸的饼厚度。容许经溶剂提取的饼空气除溶剂化24小时，之后碾磨。然后，使用例如Robot Coupe R2N Ultra B(Jackson,MS)碾磨除溶剂化的白色薄片。

实施例4：样品分析

可以使用如下文概述的方法不同地实施ECM和常规芸苔样品的化学和营养物分析。对芸苔粗粉样品分析干物质(方法930.15;AOAC International.2007.OfficialMethods.Of Analysis of AOAC Int.18th ed.Rev.2.W.Hortwitz and G.W.Latimer Jr.,eds.Assoc.Off.Anal.Chem.Int.,Gaithersburg.MD.(下文为“AOAC Int.,2007”))、灰分(方法942.05;AOAC Int.)、和GE(经由弹式热量计(6300型,Parr Instruments,Moline,IL)进行)。AOAC International(2007)Official Methods of Analysis of AOAC Int.,18thed.Rev.2.,Hortwitz and Latimer,eds.Assoc.Off.Anal.Chem.Int.,Gaithersburg.MD。通过使用3N HCl(Sanderson)的酸水解，接着在Soxtec2050自动化分析仪(FOSS NorthAmerica,Eden Prairie,MN)上用石油醚进行粗制脂肪提取(方法954.02;AOAC Int.)测定酸水解醚提取物(AEE)。Sanderson(1986),"A new method of analysis of feedingstuffs for the determination of crude oils and fats,"Pages77-81,于RecentAdvances in Animal Nutrition,Haresign and Cole,eds.Butterworths,London,U.K。通过在Elementar快速N-立方体(cube)蛋白质/氮装置(Elementar Americas Inc.,Mt.Laurel,NJ)上燃烧(方法990.03;AOAC Int.)测量粗制蛋白质；依照方法982.30E(A,B和C)测定氨基酸[AOAC Int.]；依照方法978.10(AOAC Int.)测定粗制纤维；依照方法973.18(AOAC Int.)测定ADF和木质素；及依照Holst测定NDF(Holst,D.O.1973.Holst filtrationapparatus for Van Soest detergent fiber analysis.J.AOAC.56:1352-1356)。糖概况(葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖)遵循Churms(Churms,1982,Carbohydrates inHandbook of Chromatography.Zweig and Sherma,eds.CRC Press,Boca Raton,FL.),及Kakehi and Honda(1989.Silyl ethers of carbohydrates.Page43-85in Analysis ofCarbohydrates by GLC and MS.C.J.Biermann and G.D.McGinnis,eds.CRC Press,BocaRaton,FL)。依照Churms分析寡糖(棉子糖、水苏糖、毛蕊花糖)；矿物(Ca,P,Fe,Mg,Mn,Cu,Na,K,S,Mo,Zn,Se,Co,Cr)经由电感偶合等离子体光学发射分光术(Inductive CoupledPlasma-Optical Emission Spectoscopy,ICP-OES)[方法985.01(A,B,and C);AOAC Int.]测定，而肌醇六磷酸依照Ellis et al(1977.Quantitative determination of phytatein the presence of high inorganic phosphate.Anal.Biochem.77:536-539.)测定。

实施例5：对ECM印第安纳波利斯白色薄片样品和常规芸苔粗粉的基线分析结果

试验厂制备的经烘烤的ECM和常规芸苔粗粉的营养物组成。使用与商业芸苔粗粉加工相似，但是没有自种子溶剂提取油后的除溶剂器/烘烤的最终步骤的方法在印第安纳波利斯的Dow AgroSciences实验室加工几种ECM系(44864,121460,121466和65620)。此方法和所得的样品称为“印第安纳波利斯白色薄片”。实施例3中概述了加工参数。在伊利诺伊州和密西西比州的大学测试这些ECM印第安纳波利斯白色薄片样品，并在表2a,2b和2c中显示结果。芸苔粗粉对照是烘烤的商业制备的芸苔粗粉。数值以干物质(但包括油)为基础表示。

表2a：与常规芸苔粗粉相比ECM印第安纳波利斯白色薄片芸苔粗粉样品的营养物组成。

对来自伊利诺伊州和密西西比州的大学的ECM印第安纳波利斯白色薄片样品的分析结果与来自曼尼托巴大学的关于全种子的结果相似。寡糖在样品44864(2010)中比在其它ECM样品，包括2011年种植的44864中是更低的，而单糖是更高的。似乎对于2010年样品，生长的植物在接近收获时将以一些蔗糖和寡糖催化成单糖。

使用印第安纳波利斯白色薄片方案，与常规芸苔粗粉相比，在ECM系中看到更高的蛋白质、更低的ADF及更低的木质素和多酚，其与用完整种子看到的结果相似。商业粗粉的33%NDF数值在典型范围的较高的末端。

表2b：与常规芸苔粗粉相比ECM印第安纳波利斯白色薄片样品的氨基酸组成(%粗制蛋白质)。

*视为家禽和猪饲料中的主要限制性必需氨基酸

如用完整种子的情况，表2b中的结果显示氨基酸组成(作为粗制蛋白质的百分比)对ECM印第安纳波利斯白色薄片样品和商业芸苔粗粉是相似的。这指示由于蛋白质在ECM系中增加，重要的氨基酸按比例增加。

表2c：与常规芸苔粗粉相比印第安纳波利斯ECM白色薄片样品的矿物组成。

ECM印第安纳波利斯白色薄片样品的矿物含量与常规芸苔粗粉是相似的，两个例外是磷和钠。如关于完整种子的曼尼托巴大学结果的情况，ECM系中的磷的确表现为一致高于常规芸苔粗粉。常规芸苔粗粉中额外的钠无疑是由于常规芸苔加工期间添加的钠。

实施例6：在加拿大萨斯卡通的POS试验厂的ECM加工以模拟商业加工

在准备ECM的动物喂养评估中，鉴于加工对营养价值的影响，确定应当在商业加工条件下制备芸苔粗粉样品。随后，在萨斯卡通的POS试验厂加工样品。使用两种加工条件：除溶剂器/烤箱中的规则温度(HT)和较低的温度(LT)，以确保加工条件不对营养价值施加高于一切的影响。实施例2中概述了POS使用的加工条件。

表3：在加拿大萨斯卡通的POS试验厂在模拟的商业加工条件下制备的ECM和常规芸苔粗粉的营养物组成。(在伊利诺斯州和密西西比州的大学进行分析)。

试验加工的粗粉与完整种子和印第安纳波利斯白色薄片样品显示相似的组成，并且ECM样品和常规芸苔之间的差异与表2a和2b中描述的分析是一致是：蛋白质高7%点，ADF低5%点，木质素和多酚低4%点，及磷低0.35%点。

实施例7：未加工的ECM和常规芸苔种子的完全分析

未加工的芸苔种子的营养物组成。在马尼托巴大学分析来自2010年和2011年生产的ECM系的5份完整种子样品。将这些与2011年生产的官方加拿大谷物委员会(CanadianGrain Commission,CGC)复合种子样品(其根据定义是在所述季节期间在加拿大西部培养的目前的商业芸苔变种的平均质量)比较。营养物组成结果以无油干物质计表示，并且在表4a和4b中显示。

表4a：与常规芸苔种子相比ECM种子样品的营养物组成

结果显示了ECM和常规芸苔之间的最大差异是较高的蛋白质含量。ECM在蛋白质含量方面以无油干物质计高7.2%点(51.1%对43.9%)以及以3%油，88%干物质计(商业芸苔粗粉的典型规格基础)高6.1%点(43.5%对37.4%)。参见表4a,4b。以ECM中低2%的木质素和多酚和低3%的ADF残留(ADF–木质素/多酚–纤维素)似乎解释较高的蛋白质。ADF残留可能是糖蛋白和半纤维素组分的一种组合。纤维组分主要存在于细胞壁和壳中。ECM的磷含量比在常规芸苔中高几乎30%，并且它似乎在肌醇六磷酸和非肌醇六磷酸形式之间平均分布。磷是动物饲料中的一种有价值的营养物，并且即使肌醇六磷酸结合的磷是家禽和猪不完全消化的，动物饲料中肌醇六磷酸酶的通常使用会使此磷可用于动物。表4b提供了完整植物种子中氨基酸组成的类似比较。

表4b：与常规芸苔种子相比ECM种子样品的氨基酸组成(%粗制蛋白质)。

*视为家禽和猪饲料中主要的限制性必需氨基酸

表4b中的结果显示了氨基酸组成(作为粗制蛋白质的百分比)在ECM和商业芸苔粗粉之间是相似的。这指示由于蛋白质在ECM系中增加，重要的氨基酸也增加。

实施例8：家禽TME和氨基酸消化率

真代谢能(TME)和真可用氨基酸(true available amino acid,TAAA)测定法分别在1976年和1981年由渥太华的Agriculture Canada的Ian Sibbald博士开发。由于测定法的直接且非破坏性性质，该测定法已经变为世界上许多国家，包括美国的用于测定家禽饲料成分中能量和氨基酸可用度的选择方法。

在伊利诺斯大学和乔治亚大学进行的不同研究中使用成熟的单冠白来航鸡(single comb white leghorn,SCWL)小雄鸡作为选择的实验动物。公知的是，禽类具有快速的肠清除时间(gut-clearance time)。通过除去饲料24小时的时段，可靠假设测试对象的消化道排空先前消耗的食物残留物。

给每只禽(一般每个处理8个个体)精确喂养35克测试饲料，经由插管直接置于嗉囊中。通常以25代替35克喂养纤维高的成分，空间体积是相似的。在插管后，给禽提供水，但是不提供额外的饲料，达40小时的时段，期间定量收集排泄物。在收集后，将排泄物在强迫通风炉中干燥，通常于80C进行。随后，将其称重，并研磨，用于在TME测定法中测定总能量(GE)，或者以测定氨基酸含量。类似测定成分的GE和氨基酸组成。一旦称重，将排泄物样品合并，并均质化，用于单一GE或氨基酸测定。每只禽的排泄物质量比特定排泄物的GE或氨基酸组成变化得大得多。此观察结果和GE和氨基酸测定的费用和时间延迟证明合并是正当的。

使用用于能量或个别用于每种氨基酸的本领域中公知的方法计算消化率。使用GE和氨基酸的内源损失的评估来校正实验假象。

实施例9：猪消化能量(DE)、代谢能(ME)

DE和ME。在伊利诺斯大学会将48只生长的阉猪(初始BW:20kg)归入随机化完全区组设计研究中。会给猪分配6种饮食之1种，其中每种饮食8只重复猪。会将猪在代谢笼中放置，所述代谢笼会装备有饲喂器和乳头吮吸器(nipple drinker)、完全板条式地板、屏地板(screen floor)、和尿盘。这会容许自每只猪的总的，但分开的尿液和粪材料收集。

每只猪每天提供的饲料量会以每个重复中最小的猪维持能量(即106kcal ME perkg^0.75;NRC,1998)评估需要的3倍计算，并分成2份相等的粗粉。NRC1998,Nutrientrequirements of swine,Tenth Revised Edition.National AcademyPress.Washington,DC。水在所有时间会是可获得的。实验会持续14天。认为最初5天会是饮食适应期，使用标志与标志方法(marker to marker approach)依照标准规程在后5天期间收集尿液和粪材料(Adeola,O.2001,Digestion and balance techniques in pigs,pages903-916in Swine Nutrition.2nd ed.A.J.Lewis and L.L.Southern,ed.CRCPress,New York,NY.NRC.1998.Nutrient Requirements of Swine.10threv.ed.Natl.Acad.Press,Washington DC.)。在尿桶中在50mL氢氯酸保护剂上收集尿液样品。在收集后会立即将粪样品和10%收集的尿液于-20℃贮存。在实验结束时，会将尿液样品融化，并在动物和饮食内混合，并会采用子样品进行化学分析。

会将粪样品在强迫通风炉中干燥，并在分析前精细研磨。会使用弹式热量计(ParrInstruments,Moline,IL)对粪、尿液、和饲料样品一式两份分析DM和总能量。在化学分析后，会使用先前描述的规程在每种饮食中对能量计算总道消化率值(Widmer,M.R.,L.M.McGinnis,and H.H.Stein.2007.Energy,phosphorus,and amino aciddigestibility of high-protein distillers dried grains and corn germ fed togrowing pigs.J.Anim.Sci.85:2994-3003)。会分别计算粪和尿液中的能量损失量，并且会计算24份饮食之每份中DE和ME的数量(Widmer et al.,2007)。会通过用玉米饮食的DE和ME值除以此饮食中玉米的纳入率计算玉米的DE和ME。然后，会使用这些数值来计算玉米-芸苔粗粉饮食和玉米-大豆粗粉饮食中从玉米对DE和ME的贡献，然后，会通过差异计算芸苔粗粉的每种来源和大豆粗粉样品中的DE和ME，如先前描述的(Widmer et al.,2007)。

会使用SAS中的Proc Mixed规程(SAS Institute Inc.,Cary,NC)分析数据。会使用ANOVA比较对每份饮食和每种成分获得的数据。会使用Proc Mixed中的UNIVARIATE规程确认方差的同质性。饮食或成分会是固定效应，而猪和重复会是随机效应。会使用LSD检验计算最小平方均值，并会使用Proc Mixed中的pdiff语句分开均值。猪会是所有计算的实验单元，并且会使用alpha水平0.05来评估均值间的显著性。

实施例10：猪氨基酸消化率(AID和SID)

在伊利诺斯大学的研究中分析猪AID和SID。给12只生长的阉猪(初始BW:34.0±1.41kg)在远端回肠附近装配T-插管，并归入重复的6x6拉丁方设计，每个方具有6份饮食和6个时段。将猪在环境受控室中在1.2x1.5m围栏中个别家养。围栏具有固体侧板、完全板条式地板、和饲喂器，并且每个侧板安装乳头吮吸器。

制备6份饮食。5份饮食基于玉米淀粉、糖、和SBM或芸苔粗粉，并且SBM或芸苔粗粉是这些饮食中唯一的AA来源。最后一份饮食是无N饮食，其用于评估CP和AA的基础回肠内源损失。所有饮食中包含维生素和矿物以满足或超过生长猪的目前需要评估(NRC,1998)。所有饮食还含有0.4%氧化铬作为不可消化的标志物。

在每个时段开始和结束时记录猪重量，并且还记录每天供应的饲料量。以每日维持能量需要2.5倍的水平喂养所有猪，并且水在遍及实验的所有时间是可用的。认为每个时段的最初5天是饮食适应期。使用标准规程在第6天和第7天收集回肠消化物(digesta)样品达8小时。使用绳索束缚将塑料袋附着于插管桶，并且收集流到袋中的消化物。将袋在它们装满消化物的任何时间，或者至少30分钟取出，并且立即于-20℃冷冻，以防止细菌降解消化物中的氨基酸。在完成一个实验期后，使动物失去饲料过夜及次日早晨，并且提供新的实验饮食。

在实验结束时，将回肠样品融化，在动物和饮食内合并，并收集子样品，用于化学分析。也收集每份饮食的和每种芸苔粗粉和SBM样品的样品。将消化物样品冻干，并精细研磨，之后进行化学分析。对饮食和消化物的所有样品分析DM、铬、粗制蛋白质、和AA，并且对芸苔粗粉和SBM分析粗制蛋白质和AA。

使用方程[1]计算每种饮食中AA的表观回肠消化率(AID)数值：

AID,(%)=[1-(AAd/AAf)x(Crf/Crd)]x100, [1]

其中AID是AA(%)的表观回肠消化率值，AAd是回肠消化物DM中的所述AA的浓度，AAf是饲料DM中所述AA的AA浓度，Crf是饲料DM中的铬浓度，并且Crd是回肠消化物DM中的铬浓度。也会使用此等式计算CP的AID。

使用等式[2]基于在喂养无N饮食后获得的流动测定每种AA的向远端回肠的基础内源流动：

IAA_结束=AAd x(Crf/Crd) [2]

其中IAA_结束是AA的基础内源损失(mg per kg DMI)。会使用相同等式测定CP的基础内源损失。

通过对AID校正每种AA的IAA_结束，使用等式[3]计算标准化的回肠AA消化率值：

SID,(%)=AID+[(IAA_结束/AAf)x100] [3]

其中SID是标准化回肠消化率值(%)。

使用SAS的Proc GLM规程(SAS inst.Inc.,Cary,NC)分析数据。用芸苔粗粉来源、猪、和时段作为主效应使用ANOVA比较含有芸苔粗粉或SBM的5份饮食。使用LSD检验来分开均值。使用Alpha水平0.05来评估均值间的显著性。猪个体是所有分析的实验单位。

实施例11：饮食AA消化率

会通过在瘤胃-插管动物，诸如奶牛中原位温育ECM粗粉样品评估ECM的氨基酸消化率，以评估可溶性且降解性蛋白质含量，并且测定可降解级分的降解率(Kd)。

会给牛喂养混合饮食，该混合饮食为含有28.1%玉米青贮饲料、13.0%苜蓿青贮饲料、7.4%苜蓿干草、20.4%研磨过的玉米、14.8%湿啤酒糟粕(brewer’s grains)、5.6%完整棉籽、3.7%大豆壳、和7.0%补充物(蛋白质、矿物、维生素)的总体混合给粮(TMR)。会在瘤胃中温育标准聚酯原位袋(R510,5cm x10cm,50-微米孔径)0,2,4,8,12,16,20,24,32,40,48和64小时，所述袋含有约6g干物质(DM)大豆粗粉(SBM)、常规芸苔粗粉(CM)、或增强的芸苔粗粉(ECM)。会在每个时间点时取出重复的袋，并且在自来水中清洗，直到流出物是干净的。会将袋于55℃干燥3天，然后会将残留物取出并称重，以测定干物质(DM)消失。会使用Leco的燃烧方法对残留物分析N含量。瘤胃中不会温育0时间样品，但是会以与经瘤胃温育的样品一样的方式清洗和加工。

会对0时间残留物和瘤胃温育16小时后保留的残留物的样品分析近似组成(DM、粗制脂肪、粗制纤维、和灰分)和氨基酸(AA)组成(没有色氨酸)。可以使用这些参数来产生瘤胃降解性蛋白质(RDP)和瘤胃不降解性蛋白质(RUP)的估值，如关于奶牛营养物需要的National Research Council(2001)准则中使用的。

可以计算每个时间点时保留的初始样品N的百分比，并且将母牛内每个时间点的重复值取平均值。会将来自三只母牛的数值拟合至and McDonald(1979)描述的非线性方程。在此方法中，假设瘤胃CP消失遵循一级动力学，如由等式限定的，CP消失=A+B×(1-e^-Kd×t)，其中A是可溶性CP级分(%CP)，B是潜在可降解的CP级分(%CP)，Kd是降解速率常数(h^-1)，且t是瘤胃温育时间(h)。级分C(在瘤胃中不可降解)以级分A减去级分B计算。会使用SAS的PROC NLIN(第9.2版;SAS Institute Inc.,Cary,NC)拟合等式，其用Marquardt计算方法进行。

用于计算RDP和RUP值(以CP的百分比)的等式是：RDP=A+B[Kd/(Kd+Kp)]，和RUP=B[Kp/(Kd+Kp)]+C，其中Kp是自瘤胃通过的速率。由于通过速率不能直接从这些数据计算(其中瘤胃中含有基质，并且其防止通到下道)，必须假设Kp的速率。在此研究中，会对Kp使用0.07的数值，其与NRC(2001)中关于消耗典型哺乳饮食的高生产奶牛的等式计算的数值类似。由于此项目的目的是比较蛋白质来源和相同条件下瘤胃消化率的评估，测定RDP和RUP的通过速率选择是任意的。

会依照NRC(2001)推荐使用温育0,2,4,8,16,24和48小时的样品生成每份样品的最终等式。可以使用此研究中额外温育时间点(即12,20,32,40和64小时)的数据来确认系统的动力学，并且确保经修饰的芸苔粗粉与NRC(2001)规定中的假设一致。

实施例12：家禽TME和TAAA，包括基于来自伊利诺斯、密苏里州和马尼托巴大学的分析结果比较真TME与预测的TME。

在伊利诺斯大学和乔治亚大学两者进行对ECM样品的家禽真代谢能(TME)评估。实施例8中描述了方案。

表5：伊利诺斯大学和乔治亚大学研究中的ECM和常规芸苔粗粉的TME含量。

*具有不同字母的栏和组内的均值是显著不同的(p<.05)

**(SE)

***(百分比差异)

在POS制备的ECM和芸苔粗粉样品的情况中，合适的比较在两种LT粗粉间，以消除加工影响。结果在伊利诺斯大学和乔治亚大学研究两者中是相当的。家禽TME对于ECM(LT)比常规芸苔粗粉(LT)显著更高：在伊利诺斯大学研究高9%，且乔治亚大学研究高14%。这些结果确认下文的预测等式结果。表4。

还在溶剂提取器阶段后立即且在DT阶段前在POS采集ECM和常规芸苔粗粉的白色薄片样品。在乔治亚大学的不同研究中比较这些WF粗粉的家禽TME，并且如用LT样品一样，ECM WF比常规芸苔粗粉WF具有显著更高TME。表4。

使用实施例3中描述的白色薄片过程方法在印第安纳波利斯的Dow AgroSciences实验室独立加工4种ECM变种。然后，在两所大学将这些样品进行家禽TME分析。测试的ECM系间在TME上没有显著差异，只是121460系似乎比121466或65620系具有更低的TME。

来自这些结果的观察到的TME值与下文预测的代谢能含量一致。NationalResearch Council Nutrient Requirements of Poultry(NRC,1984,Nutrientrequirements of poultry.Ninth Revised Edition.National AcademyPress.Washington,DC))具有芸苔粗粉中ME的预测等式(双零油菜籽粗粉)：ME kcal/kg=(32.76x CP%)+(64.96x EE%)+(13.24x NFE%)

通过计算，高7%的CP应当得到低7%的NFE补偿，因此CP的净系数应当是：32.76–13.24=19.52。这导致在ECM中比在芸苔粗粉中多137kcal/kg的ME(7%x19.52=137)。关于此等式的问题是NFE是糖和淀粉能量值的较差估值。

一种备选等式是家禽ME(成年)的EEC预测等式。(Fisher,C andJ.M.McNab.1987.Techniques for determining the ME content of poultry feeds.In:Haresign and D.J.A.Cole(Eds),Recent Advances in Animal Nutrition–1987.Butterworths,London.P.3-17):ME,kcal/kg=(81.97x EE%)+(37.05x CP%)+(39.87x淀粉%)+(31.08x糖%)

EEC等式是“正贡献”等式，其将数值给予芸苔粗粉中的可消化营养物，诸如蛋白质、脂肪、淀粉和游离糖。由于ECM和芸苔粗粉之间的唯一分析差异是蛋白质，我们可以使用系数37.05来计算额外能量：37.05x7%=259kcal/kg。EEC等式设计用于完整饲料，其一般比芸苔粗粉具有更高的消化率。因此，37.05系数太高。

一种备选方法是使用蛋白质能量值的第一原则。大致估值是每克蛋白质的4卡总能量x80%蛋白质消化率x氮排泄的5%损失=每克约75%总卡(每克3卡代谢能或30x蛋白质%。这产生ECM中30x7%=210kcal/kg额外ME的代谢能。

总之，预期ECM粗粉会比常规芸苔粗粉具有多140–260kcal/kg的家禽ME。140kcal/kg值可能是严重评估不足的，而260kcal/kg可能在较高的侧。多200–220kcal/kg的家禽ME升高是有可能的。这以“照原样”为基础表示(表1)，商业ECM可能会具有2200kcal/kg的家禽ME对常规芸苔粗粉的2000kcal/kg。这是10%能量升高。

还在伊利诺斯大学和乔治亚大学两者测量家禽真氨基酸消化率(TAAA)。在此情况中，仅分析POS制备的粗粉样品，因为认为相对于烘烤过的芸苔粗粉而言白色薄片的高得多的氨基酸消化率不是商业相关的。表6。

表6：研究中POS制备的ECM和常规芸苔粗粉的关键氨基酸的家禽真氨基酸利用度(TAAA)。

不同芸苔粗粉样品间家禽真氨基酸利用度没有统计学显著差异。表6。

实施例13：猪氨基酸消化率(AID和SID)和预测的NE

在伊利诺伊大学进行猪回肠氨基酸消化率研究。使用POS试验厂制备的粗粉进行比较。

表7：在伊利诺伊大学研究中在POS制备的ECM和常规芸苔粗粉中蛋白质和关键氨基酸的猪表观回肠氨基酸消化率(AID)和猪标准化回肠氨基酸消化率(SID)。

*具有不同字母的行和组内的均值是显著不同的(p<.05)

在ECM和芸苔粗粉样品之间在蛋白质和氨基酸消化率上注意到一些统计学显著差异。ECM比芸苔粗粉具有更高的粗制蛋白质AID，但是蛋白质SID的差异不是显著的。对于AID和SID两者，赖氨酸在ECM中比在已经经历相同热处理的常规芸苔粗粉中更可消化。表7。

对于猪，预测猪中DE、ME、和NE的公认等式是Noblet的等式，如EvaPig(2008,Version1.0.INRA,AFZ,Ajinomoto Eurolysine)及NRC Nutrient Requirements of Swine(NRC,1998,Nutrient requirements of swine;Tenth Revised Edition;NationalAcademy Press.Washington,DC)中概述的：

等式1-4：DE,kcal/kg=4151–(122x Ash%)+(23x CP%)+(38x EE%)–(64x CF%)

等式1-14：NE,kcal/kg=2790+(41.22x EE%)+(8.1x Starch%)–(66.5xAsh%)–(47.2x ADF%)

Noblet等式是正和负贡献因子两者的杂合：脂肪、蛋白质和淀粉具有正系数，而灰分、CF和ADF具有负系数。在净能(NE)等式中不使用蛋白质，但是ADF的差异可以捕捉ECM和芸苔粗粉之间的差异。由于淀粉和灰分在ECM和芸苔粗粉中是相同的，那么关键差异是ADF。低5%点的ADF导致ECM中多47.2x5%=236kcal/kg的NE。此预测数字与家禽ME数字类似，因此再一次，按“照原样”为基础(表1)在ECM方面200kcal/kg的猪净能增加是有可能的。这应当导致能量增加约12%。

实施例14：别的ECM杂种

新芸苔杂种CL166102H还展现出增强的粗粉(ECM)特性。对此杂种种子(自2011年小样地试验收获)测量性能和质量性状，包括油、粗粉蛋白质、ADF、和总芥子油苷(Tgluc)。参见表8。

表8中的结果清楚指示此新的DAS ECM系就粗粉属性而言优于商业变种。

表8b：ECM系的农艺学性能(C3B03试验)

Claims

1.自携带种质的暗色芸苔种子生成的芸苔粗粉，

所述粗粉与自不携带所述种质的暗色芸苔种子生成的芸苔粗粉相比，包含高蛋白质含量和低酸性去污剂纤维(ADF)含量的性状，

且其中所述携带种质的暗色芸苔种子包含种子油，所述油包含至少68％油酸(C18:1)和小于3％亚麻酸(C18:3)，其中携带所述种质的暗色芸苔种子选自下组：CL065620，对应于保藏物ATCC登录号PTA-11697；CL044864，对应于保藏物ATCC登录号PTA-11696；CL121460H，对应于保藏物ATCC登录号PTA-11698；CL166102H，对应于保藏物ATCC登录号PTA-12570；以及CL121466H，对应于保藏物ATCC登录号PTA-11699。

2.权利要求1的芸苔粗粉，其中所述粗粉具有至少2400kcal/kg的均值真代谢能。

3.权利要求1的芸苔粗粉，其中所述粗粉具有有利的氨基酸消化率概况。

4.权利要求3的芸苔粗粉，其中所述芸苔粗粉包含大豆粗粉的氨基酸消化率的至少约90％的氨基酸消化率。

5.权利要求1的芸苔粗粉，其中所述芸苔粗粉包含大豆粗粉的可消化能含量或代谢能含量的至少约80％的可消化能含量或代谢能含量。