CN103454422A - 氟甲喹快速检测试纸卡及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种氟甲喹快速检测试纸卡及制备方法，试纸卡包括外壳和试纸芯，试纸芯包括底板和底板上的样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，胶体金标记垫吸附有氟甲喹的特异性抗体，检测反应区设有氟甲喹偶联载体蛋白溶液印制的检测印迹，以及用羊或（兔）抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG溶液印制的对照印迹；氟甲喹特异性抗体为胶体金标记的氟甲喹单克隆抗体或多克隆抗体。制备时底座和面板嵌合在一起，面板上检测窗与试纸芯检测反应区对应，加样孔与试纸芯样品垫对应。该试纸卡特异性强、敏感性高，检测简便、快速、时效性强，结果显示形象、直观、准确，检测费用低，适用范围广，便于推广。

Description

氟甲喹快速检测试纸卡及制备方法

技术领域

本发明涉及一种检测氟甲喹的器具，特别是涉及一种快速检测氟甲喹的试纸卡及制备方法。

技术背景

氟甲喹是氟喹诺酮类抗生素，具有抗菌普广、杀菌活性强、体内分布广泛等等特点，并且与其他抗菌药物无交叉耐药性。目前，广泛应用于畜禽和水产养殖中。氟甲喹作为用于食品类动物中的药物，其在动物可食性组织和产品中的残留致癌毒性备受关注。国家对其在不同肉品中最高残留量做了严格的规定。因为氟甲喹价格低廉，抗菌普广、杀菌活性强，养殖户盲目追求预防和治疗效果，人为超量添加，造成在肉品中残留超标的现象普遍存在。因此,精确检测肉品中氟甲喹残留量非常重要。

目前，测定氟甲喹的方法多为高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用、毛细管区带电泳与质谱联用、酶联免疫试剂盒等法。这些方法检测时间一般较长，检测不方便，检测成本高，对检测人员素质要求高，严重制约了在实际检测中的应用，难以推广。由于这些方法的局限性和严重滞后性，使监控氟甲喹的非法使用变得困难，无法保证食品安全监控的有效性。

发明内容

本发明要解决的技术问题：提供一种特异强、灵敏度高，能快速、简便地检测氟甲喹的试纸卡及制备方法。

本发明的技术方案是：

一种氟甲喹快速检测试纸卡，含有外壳和位于外壳内的试纸芯，试纸芯包括底板，底板上依次固定黏贴有样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，所述胶体金标记垫吸附有氟甲喹的特异性抗体，所述检测反应区设有氟甲喹偶联载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隐形对照印迹；所述氟甲喹特异性抗体为胶体金标记的氟甲喹单克隆抗体或多克隆抗体。

所述氟甲喹偶联载体蛋白溶液是由以下方法制备的：

称取2 mg 氟甲喹溶解于500 μL 的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的氟甲喹液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13 的mol/L 的PBS溶液中，将活化的氟甲喹液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h；将反应产物置于4℃层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到氟甲喹载体蛋白的偶联物，分装，-20℃保存，备用。

所述氟甲喹偶联载体蛋白为甲状腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血蓝蛋白。

所述底板由硬质塑胶条或不吸水的硬纸条制成；所述样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成；所述检测反应区用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；所述胶体金标记垫用玻璃纤维、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成。

所述外壳由底座和面板构成，底座和面板通过嵌合连在一起，底座上设有放置试纸芯的凹槽，面板上设有检测窗、加样孔，检测窗与试纸芯的检测反应区相对应，加样孔与试纸芯的样品垫相对应。

所述隐形检测印迹和隐形对照印迹的排列方式为“︱︱”、“＋＋”或“··”。

所述氟甲喹快速检测试纸卡的制备方法，包括以下步骤： 

（1）氟甲喹与载体蛋白的偶联：

称取2 mg 氟甲喹溶解于500 μL 的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的氟甲喹液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13 的mol/L 的PBS溶液中，将活化的氟甲喹液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h；将反应产物置于4℃层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到氟甲喹载体蛋白的偶联物，分装，-20℃保存，备用；

（2）抗氟甲喹特异性抗体的制备；

（3）氟甲喹特异性抗体的制备；

在沸腾的200mL 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠8mL，获得直径为10-20nm的胶体金溶液，用0.1mol/L 的K₂CO₃调pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存，备用；以1：2000的标记比将待标记的氟甲喹单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化的胶体金标记物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得氟甲喹胶体金标记抗体； 

（4）羊抗或兔抗小鼠IgG抗体的制备；

用氟甲喹特异性抗体制备胶体金标记垫；用氟甲喹偶联载体蛋白溶液印制隐形检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制隐形对照印迹；然后在底板上依次固定黏贴样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，组装成试纸芯，将试纸芯装于外壳中进而组装成试纸卡。

本发明的检测试纸卡具有下列优点：

 特异性强，敏感性高。该胶体金层析检测试纸卡以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体或多克隆抗体为基础制备而成，胶体金标记物中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对抗体的特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，试纸卡具有较强的特异性和较高的敏感性，检出氟甲喹最低限量可达到10ppb。

 简便、快速、时效性强。使用该检测试纸卡，无需任何其它试剂和仪器，可现场操作，试纸卡加入被检样品液后，在5分钟内即可判定检测结果。

 结果显示形象、直观、准确。试纸卡以显示红色线“︱”和“︱︱”作为检测结果的阳性和阴性标记，即在检测反应区上显示一条红色线“︱”时，表示在被检样品中含有氟甲喹；显示两条红色线“︱︱”时，表示在被检样品中不含氟甲喹。结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阳性和假阴性等人为误判。

 节省费用，适用范围广，便于推广。使用检测试纸卡，比用仪器分析和进口ELISA试剂盒的费用大幅下降。此种检测工具不需要专业人员操作，可快速准确检测样品的氟甲喹的含量，弥补了分光光度高效液相色谱检测的不足。另外，试纸卡适用范围广，可满足不同层次人员需要，包括实验室检验、口岸检验、集贸市场卫生监督、加工企业和养殖场户等，便于推广应用，具有广阔的市场前景和明显的经济社会效益。

⑤本发明采用柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液，该方法反应过程比较温和，可在常温和中性pH条件下进行，易于操作和控制。采用EDC法制备氟甲喹载体蛋白偶联物，该方法操作步骤只需两步就可完成，减少了对样品的处理过程，利于提高偶联的效率。

附图说明

图1、氟甲喹快速检测试纸卡俯视结构示意图；

图2、图1的试纸卡剖面结构示意图；

图3、氟甲喹与载体蛋白偶联的反应原理图。

图中，1：底板，2：样品垫，3：胶体金标记垫，4：检测反应区，5：隐形检测印迹，6：隐形对照印迹，7：吸水垫，8：加样孔，9：检测窗，10：面板，11：固定槽，12：底座，13：凹槽。

具体实施方式

 本发明中如没有特别说明，其中的百分含量均为重量含量。

实施例一：氟甲喹快速检测试纸卡，参见图1、图2，包括外壳和位于外壳内的试纸芯，图中底板1、样品垫2、胶体金标记垫3、检测反应区4、隐形检测印迹5、隐形对照印迹6和吸水垫7共同组成试纸芯；试纸卡外壳材料为工程塑料，底座12上设有试纸芯的固定槽11；面板10上的加样孔8与试纸芯的样品垫2相对应；面板10上设有和底座相结合的凹槽13，在面板10上的检测窗9与试纸芯的检测反应区4相对应，是观察判定结果的窗口，其旁边印有T和C，分别与检测反应区4上的隐形检测印迹5和隐形对照印迹6相对应。试纸卡的底座和面板通过嵌合连在一起，检测卡外壳为长条形扁平状塑料壳，长7cm，宽0.6cm，厚0.3cm，壳壁厚0.1cm。

胶体金标记垫3采用有胶体金标记的抗氟甲喹多克隆抗体；检测反应区4采用硝酸纤维素膜；隐形检测印迹5用氟甲喹-载体蛋白偶联物在检测反应区4上印制，载体蛋白为牛血清白蛋白BSA；隐形对照印迹6用兔抗小鼠IgG抗体溶液在检测反应区4上印制，两条线平行排列组合为“︱︱”；吸水垫7用吸水滤纸制成。将样品垫2、胶体金标记垫3、检测反应区4、吸水垫7从右至左依次粘贴固定在底板1上，彼此之间交界处纤维互相搭接。

要制成氟甲喹检测试纸卡，首先要制备偶联氟甲喹载体蛋白和氟甲喹胶体金标记物，从而制备隐形检测印迹和胶体金标记物；其次需制备羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG）抗体，用于制备隐形对照印迹。

（1）氟甲喹与载体蛋白偶联

采用EDC法与牛血清蛋白合成氟甲喹完全抗原，反应原理参见图3。

称取2 mg 氟甲喹溶解于500 μL 的N,N-二甲基甲酰胺（DMF）中，加入2 mg NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）和2 mg EDC（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐），室温避光反应24h，得到活化的氟甲喹液；称取牛血清蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13 的mol/L 的PBS溶液中，将活化的氟甲喹液逐滴加入BSA溶液中，密封避光于室温下搅拌4h；将反应产物置于4℃层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到氟甲喹载体蛋白的偶联物，分装，-20℃保存，备用。

（2）抗氟甲喹多克隆抗体的制备 

用氟甲喹载体蛋白偶联物免疫新西兰白兔，免疫剂量为200μg～500μg/次，背部皮下分4～6点注射。首免，用无菌PBS溶解氟甲喹载体蛋白偶联物，与等量FCA混合，充分乳化；加强免疫，用无菌PBS溶解氟甲喹载体蛋白偶联物，与等量FIA混合，充分乳化，首免后2～3周进行，连续免疫4～5次，每次间隔2～3周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法测定其效价达到10⁵以上时，采血并分离收集高免血清。以饱和硫酸铵盐析法提取IgG抗体，即取1份高免血清加2份PBS（pH7.2）混匀，加等体积饱和硫酸铵溶液混匀，置4℃冰箱12h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，再以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，加饱和硫酸铵溶液至终浓度33％，置4℃冰箱2h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，置4℃冰箱内用PBS（pH7.2）透析48～72h，中间换液数次，4℃、12000rpm离心15min，收集上清，得纯化的抗氟甲喹多克隆抗体，-20℃冻存，用于制备胶体金标记垫。

（3）氟甲喹胶体金标记物和胶体金标记的玻璃纤维棉的制备

采用柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液，即在沸腾的200mL 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠8mL，获得直径约15nm的胶体金溶液，用0.1mol/L K₂CO₃调pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存备用。以1：2000的标记比将待标记的氟甲喹单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后，加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化的胶体金标记物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得氟甲喹胶体金标记抗体。

将1：100～500稀释的胶体金标记抗体吸附于精制玻璃纤维棉中，4℃低温真空干燥，制备氟甲喹胶体金标记物玻璃纤维棉。

（4）羊抗或兔抗小鼠IgG抗体的制备

以饱和硫酸铵提取氟甲喹阴性小鼠血清IgG，即取1份小鼠血清加2份PBS（pH7.2）混匀，加等体积饱和硫酸铵溶液混匀，置4℃冰箱12h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，再以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，加饱和硫酸铵溶液至终浓度33％，置4℃冰箱2h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，置4℃冰箱内用PBS（pH7.2）透析48h，中间换液3次，4℃、12000rpm离心15min，收集上清，以紫外分光光度计测定其蛋白浓度，以50μg～100μg/kg体重的小鼠血清IgG经皮下和肌肉注射健康山羊或家兔3～4次，末次注射10天后，以ELISA测定其血清效价达到1：2000以上时，心脏或动脉采血，分离收集高免血清，以饱和硫酸铵提取羊抗或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体（方法与提取小鼠血清IgG相同，不再重述），用于试纸卡隐形对照印迹的制备。

（5）检测反应原理

当试纸卡的加样孔加入待测样品溶液后，待测溶液通过虹吸作用带动待测氟甲喹及胶体金标记物中的胶体金标记物一起向检测反应区扩散，并最终渗入吸水垫。在扩散过程中，待测氟甲喹可与胶体金标记物相结合，进而封闭胶体金标记物上氟甲喹的抗原结合点，阻止胶体金标记物与纤维素膜上偶联氟甲喹载体蛋白的隐形检测印迹结合，不显示隐形检测印迹，而羊或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体则可与胶体金标记物结合，形成红色隐形对照印迹“︱”，即显示一条红色线“︱”为阳性表示。反之样品溶液中无氟甲喹则不能阻止胶体金标记物与纤维素膜上偶联氟甲喹载体蛋白的隐形检测印迹结合，显示红色隐形检测印迹“︱”，同样羊抗或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体也与胶体金标记物结合，显示红色隐形对照印迹“︱”，形成两条红色线“︱︱”为阴性表示。如果纤维素膜上没有红色线显示，则表明试纸卡已失效。

（6）样品制备和检测方法

检测样品为肉样：取肉品2g，加入10mL的提取液（提取液采用6.8g 的KH₂PO₄溶解在500 mL的双蒸水中，将其pH调节到7.0），均质1分钟，然后以4000转/分的转速离心10分钟；收集上清，沉淀物再抽提一次；将两次的上清混合，以10000转/分的转速离心10分钟，取上清用于检测。

检测时，将试纸卡平放，从加样孔滴加待测样品液，5分钟内从检测窗判定检测结果。

结果判定：如在检测反应区对应T的位置显示有一条红色线“︱”时，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有氟甲喹；如在检测反应区对应T、C的位置显示有两条红色线“︱︱”时，表示检测结果为阴性，说明待测样品不含氟甲喹；如在检测反应区没有红色线显示，则表明试纸卡已失效。

实施例二：检测试纸卡结构和实施例一基本相同，不同之处在于：以抗氟甲喹单克隆抗体替代抗氟甲喹多克隆抗体，制备氟甲喹胶体金标记物和胶体金标记垫；偶联氟甲喹的载体蛋白为鸡卵清白蛋白OVA，用羊抗兔IgG替代兔抗小鼠IgG抗体溶液在检测反应区上制备对照印迹。隐形检测印迹和隐形对照印迹排列为“＋”或“··”。

其它包括检测样品、操作方法和结果判定等均同实施例一，不再重述。

实施例三：检测试纸卡结构和实施例一基本相同，不同之处在于：

底板用硬质塑胶条制成；样品垫用尼龙膜制成；检测反应区采用纯硝酸纤维素膜；氟甲喹载体蛋白为鸡卵清白蛋白；隐形对照印迹用羊抗小鼠IgG抗体溶液印制。其它包括检测样品、操作方法和结果判定等均同实施例一，不再重述。

实施例四：检测试纸卡结构和实施例一基本相同，不同之处在于：

底板用不吸水的硬纸条制成；样品垫用聚偏二氟乙烯膜制成；检测反应区采用纯硝酸纤维素膜；氟甲喹载体蛋白为人血清白蛋白；隐形对照印迹用羊抗小鼠IgG抗体溶液印制。其它包括检测样品、操作方法和结果判定等均同实施例一，不再重述。

实施例五：检测试纸卡结构和实施例一基本相同，不同之处在于：

底板用不吸水的硬纸条制成；样品垫用聚酯膜制成；以抗氟甲喹单克隆抗体制备氟甲喹胶体金标记物；检测反应区采用羧化纤维素膜；氟甲喹载体蛋白为人血清白蛋白；隐形对照印迹用羊抗兔IgG抗体溶液印制。其它包括检测样品、操作方法和结果判定等均同实施例一，不再重述。

Claims (10)

1.一种氟甲喹快速检测试纸卡，含有外壳和位于外壳内的试纸芯，试纸芯包括底板，底板上依次固定黏贴有样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，其特征是：所述胶体金标记垫吸附有氟甲喹的特异性抗体，所述检测反应区设有氟甲喹偶联载体蛋白溶液印制的隐形检测印迹，以及用羊抗小鼠IgG、兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG溶液印制的隐形对照印迹；所述氟甲喹特异性抗体为胶体金标记的氟甲喹单克隆抗体或多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述氟甲喹偶联载体蛋白溶液是由以下方法制备的：

称取2 mg 氟甲喹溶解于500 μL 的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的氟甲喹液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13 的mol/L 的PBS溶液中，将活化的氟甲喹液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h；将反应产物置于4℃层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到氟甲喹载体蛋白的偶联物，分装，-20℃保存，备用。

3.根据权利要求1所述的试纸卡，其特征是：所述氟甲喹偶联载体蛋白

为甲状腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血蓝蛋白。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试纸卡，其特征是：所述底板由硬质塑胶条或不吸水的硬纸条制成；所述样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成；所述检测反应区用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；所述胶体金标记垫用玻璃纤维、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成。

5.根据权利要求1-3任一项所述的试纸卡，其特征是：所述外壳由底座和面板构成，底座和面板通过嵌合连在一起，底座上设有放置试纸芯的凹槽，面板上设有检测窗、加样孔，检测窗与试纸芯的检测反应区相对应，加样孔与试纸芯的样品垫相对应。

6.根据权利要求1-5任一项所述的试纸卡，其特征是：所述隐形检测印迹和隐形对照印迹的排列方式为“︱︱”、“＋＋”或“··”。

7.权利要求1所述氟甲喹快速检测试纸卡的制备方法，其特征是：所述制备方法包括以下步骤： 

（1）氟甲喹与载体蛋白的偶联：

称取2 mg 氟甲喹溶解于500 μL 的DMF溶剂中，加入2 mg NHS和2 mg EDC，室温避光反应24h，得到活化的氟甲喹液；称取载体蛋白2 mg，充分溶解于2 ml 0.13 的mol/L 的PBS溶液中，将活化的氟甲喹液逐滴加入载体蛋白溶液中，密封避光于室温下搅拌4h；将反应产物置于4℃层析柜中用0.01mol/L的PBS透析3天，离心除去沉淀，得到氟甲喹载体蛋白的偶联物，分装，-20℃保存，备用；

（2）抗氟甲喹特异性抗体的制备；

（3）氟甲喹特异性抗体的制备；

在沸腾的200mL 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠8mL，获得直径为10-20nm的胶体金溶液，用0.1mol/L 的K₂CO₃调pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存，备用；以1：2000的标记比将待标记的氟甲喹单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化的胶体金标记物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得氟甲喹胶体金标记抗体； 

（4）羊抗或兔抗小鼠IgG抗体的制备；

用氟甲喹特异性抗体制备胶体金标记垫；用氟甲喹偶联载体蛋白溶液印制隐形检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG抗体溶液印制隐形对照印迹；然后在底板上依次固定黏贴样品垫、胶体金标记垫、检测反应区和吸水垫，组装成试纸芯，将试纸芯装于外壳中进而组装成试纸卡。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是：所述氟甲喹特异性抗体的制备方法如下：

在沸腾的200mL 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠8mL，获得直径为10-20nm的胶体金溶液，用0.1mol/L 的K₂CO₃调pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存，备用；以1：2000的标记比将待标记的氟甲喹单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化的胶体金标记物蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得氟甲喹胶体金标记抗体。

9.根据权利要求7所述的的制备方法，其特征是：所述氟甲喹偶联载体蛋白为甲状腺蛋白、鼠血清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、兔血清白蛋白、卵血清白蛋白或血蓝蛋白。

10.根据权利要求7所述的的制备方法，其特征是：所述底板由硬质塑胶条或不吸水的硬纸条制成；所述样品垫用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成；所述吸水垫用吸水滤纸或滤油纸制成；所述检测反应区用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成，所述胶体金标记垫用玻璃纤维、聚酯膜、醋酸纤维或尼龙膜制成；

所述外壳由底座和面板构成，底座和面板通过嵌合连在一起，底座上设有放置试纸芯的凹槽，面板上设有检测窗、加样孔，检测窗与试纸芯的检测反应区相对应，加样孔与试纸芯的样品垫相对应。

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