CN103454420B

CN103454420B - 快速检测微量磺胺氯哒嗪的试纸条及制备方法

Info

Publication number: CN103454420B
Application number: CN201310333981.7A
Authority: CN
Inventors: 张改平; 赵东; 王栋; 职爱民; 王方雨; 胡骁飞
Original assignee: HENAN BAIAO BIOTECHNOLOGY Ltd; Henan Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: HENAN BAIAO BIOTECHNOLOGY Ltd; Henan Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2013-08-03
Filing date: 2013-08-03
Publication date: 2015-07-01
Anticipated expiration: 2033-08-03
Also published as: CN103454420A

Abstract

本发明涉及一种快速检测磺胺氯哒嗪的试纸条及其制备方法，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水材料层，在纤维素膜层上设有偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白溶液印制的检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的对照印迹，金标抗体为胶体金标记的磺胺氯哒嗪抗体。本发明的试纸条特异性强，灵敏度高，简便，直观，准确，适用范围广，成本低，操作简便，能满足不同层次人员需要，具有广阔的市场前景，易于推广应用。

Description

快速检测微量磺胺氯哒嗪的试纸条及制备方法

技术领域

本发明属于兽药残留的免疫化学检测领域，特别是涉及一种快速检测微量磺胺氯哒嗪的免疫胶体金试纸条及制备方法。

技术背景

磺胺氯哒嗪（sulfachloropyridazine，SPDZ）分子式C₁₀H₉ClN₄O₂S，分子量284.72，是一类抑制核酸合成的人工合成抗菌药，属于广谱抗菌药物，具有毒性小、口服易吸收等特点，对许多革兰氏阳性菌和某些革兰氏阴性菌都有抑菌作用。由于磺胺类药物的价格低廉及其有效的抑菌作用，作为预防与治疗用药被广泛用于畜牧养殖业中。但磺胺氯哒嗪的不合理使用甚至滥用，一方面会引起耐药菌株的出现，导致对动物性食品的污染和人类健康的威胁；另一方面会引起动物性食品中磺胺类药物的残留，破坏机体正常菌群生态平衡、引发过敏性反应和尿及造血紊乱等，且有致肿瘤的潜在危害。因此，磺胺类药物的残留检测备受关注。我国、美国以及欧盟等均将磺胺类药物列为动物饲养过程中限制使用的药物，单个磺胺或总磺胺类的最高残留限量为0.1mg/kg。因此，应积极研究其有效、实用、简便的检测方法，打击违规添加等违禁行为，为控制其滥用提供简便快速准确的检测手段，确保饲料和食品安全。

目前国内外测定磺胺氯哒嗪在饲料和动物性食品中残留的方法种类较多，主要是采用理化分析方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、液相色谱/质谱联用分析法（LC/MS）、气相色谱/质谱联用分析法（GC/MS）、生物学检测、毛细管电泳法等。这些方法检测磺胺氯哒嗪灵敏度高，特异性强，但是样品需经一系列复杂的处理净化，繁琐费时，从样品预处理到得出检测结果至少需要2天时间；同时该检测方法需要大型专门仪器设备和专业技术人员操作，无法进行现场检测，时效性差，难以推广。免疫学检测法具有半定量和一定的定量能力，可以提供待测物的初步信息，该法灵敏度高，分析过程相对简单，用作磺胺氯哒嗪的筛查有独特优势，是需要优先发展的检测技术，但目前磺胺氯哒嗪免疫学检测方法急待研究解决。

发明内容：

本发明要解决的技术问题：提供一种特异、灵敏、快速、简便的快速检测微量磺胺氯哒嗪的试纸条；

还提供一种检测微量磺胺氯哒嗪的试纸条的制备方法。

本发明的技术方案：

一种快速检测微量磺胺氯哒嗪的试纸条，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水材料层，在纤维素膜层上设有偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白溶液印制的检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的对照印迹，金标抗体为胶体金标记的磺胺氯哒嗪抗体。

所述偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白溶液是通过以下方法得到的：

称取3.5 mg磺胺氯哒嗪钠置于10 mL螺口瓶中，用2mL 0.2mol/L的盐酸溶解；冰浴冷却后，避光边搅拌、边逐滴加入灭菌双蒸水溶解已预冷的1 mol/L 的NaNO₂溶液，NaNO₂溶液的用量以用淀粉碘化钾试纸检验呈蓝黑色为宜，4℃反应6h，得重氮化的磺胺氯哒嗪钠；

称取10mg载体蛋白溶于1 mL pH 7.2的PBS缓冲液中，预冷后边搅拌边逐滴加入重氮化的磺胺氯哒嗪钠，用1 mol/L的 NaOH调节pH 至8-9，4℃过夜反应；反应产物在4℃搅拌下用PBS透析3天，每天换液3次，透析后得到纯化的偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白溶液，冻干，-20℃保存，备用。

所述胶体金标记的磺胺氯哒嗪抗体采用如下方法制备：

在沸腾的0.01～0.02％氯金酸溶液中加入1％的新配制柠檬酸钠溶液，获得直径15-20nm的胶体金溶液，用0.1mol/L 的K₂CO₃调节pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存，备用；

以1：2000的标记比将待标记的磺胺氯哒嗪的单克隆抗体或多克隆抗体加入pH 8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后，加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获得初步纯化的金标抗体蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得胶体金标记的磺胺氯哒嗪抗体。

所述吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；吸水材料层用吸水滤纸，支撑层用不吸水的韧性材料制成。金标抗体纤维层用吸附磺胺氯哒嗪的金标抗体玻璃纤维棉制成。偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、鸡卵清白蛋白OVA或血蓝蛋白KLH。

检测印迹与对照印迹的排列组合为“︱︱”、“＋＋”、“┴┴”、“┬ ┬”、“├├”中的一种；在吸附纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该样品标记线偏向吸附纤维层一侧约0.5cm处。

所述磺胺氯哒嗪试纸条的制备方法，包括以下步骤：

（1）偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白的制备

称取10mg载体蛋白溶于1 mL pH 7.2的PBS缓冲液中，预冷后边搅拌边逐滴加入重氮化的磺胺氯哒嗪钠，用1 mol/L的 NaOH调节pH 至8-9，4℃过夜反应；反应产物在4℃搅拌下用PBS透析3天，每天换液3次，透析后得到纯化的偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白溶液，冻干，-20℃保存，备用；

（2）抗磺胺氯哒嗪抗体的制备；

（3）磺胺氯哒嗪金标抗体的制备；

（4）羊抗或兔抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG抗体的制备；

用所得的磺胺氯哒嗪载体蛋白溶液在纤维素膜层上印制检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG抗体在纤维素膜层上印制对照印迹；用磺胺氯哒嗪金标抗体制备金标抗体纤维层，然后依次按支撑层、吸附层和保护层的顺序组装成试纸条。

本发明的试纸条具有以下优点：

特异性强，灵敏度高。本发明试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对单克隆抗体的特异性及亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，试纸条具有较强的特异性和较高的灵敏度，可检测到10ng/ml的微量磺胺氯哒嗪。本发明在保障食品安全，保护消费者健康方面具有极其重要的意义。

简便、快速。使用本发明试纸条，无需其它任何试剂和仪器，可现场操作。只要将试纸条插入被检样品10～20秒，5分钟内即可判定检测结果。

结果显示形象、直观、准确。试纸条以显示棕红色的“︱”印迹（或“十”、“┬”、“┴”、“├”、“┤”印迹）作为检测结果阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“︱”印迹，表示被检样品中含有磺胺氯哒嗪；显示两条棕红色“︱︱”印迹，表示被检样品中不含磺胺氯哒嗪。结果判定形象、直观、准确，简单明了。

节省费用。使用该试纸条无需另配仪器设备和其它试剂，随时随地进行检测，费用低廉，节省大量贵重仪器及设备费用。

适用范围广，便于推广应用。该试纸条操作简便，能满足不同层次人员需要，包括专业化验、海关检疫、卫生检疫、质量监测、畜产品加工、养殖户以及消费者个人等，具有广阔的市场前景和明显的经济、社会效益。

⑥本发明的试纸条采用重氮化法将磺胺氯哒嗪与载体蛋白偶联，芳香胺化合物可在低温（冰浴）条件下与亚硝酸反应形成重氮盐，然后与载体蛋白分子上的酪胺酸和组胺酸残基形成偶氮键（-N=N-）偶联的化合物。本方法反应步骤少，反应条件要求不高，而且偶联效率比较高，可在大多数实验室内完成操作。采用柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液，该方法反应过程比较温和，可在常温和中性pH条件下进行，易于操作和控制。

附图说明

图1为本发明试纸条的俯视结构示意图。

图2为图1试纸条的侧面结构示意图。

图中，1为支撑层，2为吸附纤维层，3为金标抗体纤维层，4为纤维素膜层，5为吸水材料层，6为检测印迹，7为对照印迹，8-1为测试端保护膜，8-2为手柄端保护膜，9为样品标记线。

具体实施方式

实施例一：快速检测微量磺胺氯哒嗪的试纸条，参见图1、图2。图中支撑层1用塑胶薄片条制成，吸附纤维层2用玻璃纤维棉制成，金标抗体纤维层3上吸附有抗磺胺氯哒嗪的单克隆抗体，纤维素膜层4采用硝酸纤维素膜，吸水材料层5用吸水滤纸制成，将编号2、3、4、5各层从右至左依次粘贴固定在支撑层1上，彼此交界处纤维互相交叉渗透。在纤维素膜层4上设有检测印迹6和对照印迹7，检测印迹用偶联磺胺氯哒嗪的牛血清白蛋白（BSA）溶液印制而成，对照印迹用羊抗抗体溶液印制，两条印迹平行排列形成印迹带“︱︱”。8-1为覆盖在吸附纤维层2和金标抗体纤维层3上面的测试端保护膜（白色），8-2为覆盖在吸水材料层5上面的手柄端保护膜（如黄色），9为样品标记线，即在吸附纤维层2与金标抗体纤维层3交界处，对应的白色保护膜偏向吸附纤维层2一侧约0.5cm处印制的标记线，在样品标记线右侧的保护膜上印有箭头及max字样。

要制成磺胺氯哒嗪试纸条，首先要制备偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白和磺胺氯哒嗪金标抗体，从而制备检测印迹和金标抗体纤维；其次需制备羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG）抗体，用于制备对照印迹。

（1）磺胺氯哒嗪与载体蛋白偶联

采用重氮化法，将磺胺氯哒嗪与载体蛋白偶联制备人工结合抗原。

称取3.5 mg的磺胺氯哒嗪钠（SPDZ）置于10 mL螺口瓶中，用2mL 0.2mol/L 的盐酸溶解；冰浴冷却后，避光边搅拌、边逐滴加入灭菌双蒸水溶解已预冷的1 mol/L 的适量NaNO₂溶液，NaNO₂溶液的用量以用淀粉碘化钾试纸检验呈蓝黑色为宜，4℃反应6h，得重氮化的磺胺氯哒嗪钠；

称取10mg载体蛋白 BSA（或OVA、KLH）溶于1 mL pH 7.2的PBS缓冲液中，预冷后边搅拌边逐滴加入重氮化的磺胺氯哒嗪钠，用1 mol/L的 NaOH调节pH 至8.5左右，4℃过夜反应；反应产物在4℃搅拌下用PBS透析3天，每天换液3次，透析后得到纯化的SPDZ-BSA（或SPDZ-OVA、KLH-SPDZ），冻干，-20℃保存，备用。

（2）抗磺胺氯哒嗪单克隆抗体或多克隆抗体的制备

单抗制备：以50μg～100μg/只的磺胺氯哒嗪载体蛋白偶联物免疫6～8周龄Balb/C小鼠3～4次，每次免疫间隔时间3～5周，确定抗体效价符合要求后超强免疫，之后3～4天，将免疫小鼠眶下窦采血，分离阳性血清；脱颈致死，用75%的酒精浸泡小鼠5～10min消毒体表，无菌取其脾脏，将脾脏剪碎并研磨，经120目尼龙纱布过滤，1000rpm离心10min，收集脾细胞；将1×10⁸的脾细胞与NS0骨髓瘤细胞按10:1的比例混合，1000rpm离心10min弃上清，细胞沉淀物于37℃水浴中缓缓加入0.7～1.0mL的50%PEG4000作用1min，然后缓缓加入无血清1640培养基15mL，以终止PEG的作用，37℃水浴5～10 min，1000rpm离心10min弃上清，将细胞沉淀物重悬于HAT选择培养基中，并加入96孔细胞培养板孔（100μL～200μL/孔），置于37℃、5%CO₂培养箱中培养。培养10～14天，用间接ELISA法进行阳性孔筛选，选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行3次有限稀释克隆化，而后扩大培养，建立杂交瘤细胞株。所制备的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体可特异地与磺胺氯哒嗪反应，亲和力常数达到10¹⁰～10¹²，轻链亚型为κ或λ，重链亚型为IgG₁、IgG_2a、IgG_2b、IgG₃，针对磺胺氯哒嗪特异抗原决定簇的单克隆抗体，用于制备金标抗体玻璃纤维棉。

多抗制备：用磺胺氯哒嗪载体蛋白偶联物免疫新西兰白兔，免疫剂量为200μg～500μg /次，背部皮下分4～6点注射。首免，用无菌PBS溶解磺胺氯哒嗪载体蛋白偶联物，与等量FCA混合，充分乳化；加强免疫，用无菌PBS溶解磺胺氯哒嗪载体蛋白偶联物，与等量FIA混合，充分乳化，首免后2～3周进行，连续免疫4～5次，每次间隔2～3周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法测其定效价达到10⁵以上时，采血并分离收集高免血清。以饱和硫酸铵盐析法提取IgG抗体，即取1份高免血清加2份PBS（pH7.2）混匀，加等体积饱和硫酸铵溶液混匀，置4℃冰箱12h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，再以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，加饱和硫酸铵溶液至终浓度33％，置4℃冰箱2h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，置4℃冰箱内用PBS（pH7.2）透析48～72h，中间换液数次，4℃、12000rpm离心15min，收集上清，得纯化的抗磺胺氯哒嗪多克隆抗体，-20℃冻存，用于制备金标抗体玻璃纤维棉。

（3）磺胺氯哒嗪金标抗体和金标抗体玻璃纤维棉的制备

采用柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液，即在沸腾的0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠，获得直径约15nm的胶体金溶液，用0.1mol/L 的K₂CO₃调节pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存备用。以1：2000的标记比将待标记的磺胺氯哒嗪单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后，加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获得初步纯化的金标抗体蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得磺胺氯哒嗪胶体金标记抗体。将1：100～1：500稀释的胶体金标记抗体吸附于精制玻璃纤维棉中，4℃低温真空干燥，制备磺胺氯哒嗪金标抗体玻璃纤维棉。

（4）羊（或兔）抗小鼠IgG抗体的制备

以饱和硫酸铵提取磺胺氯哒嗪阴性小鼠血清IgG（或阴性兔血清IgG），即取1份小鼠血清（或兔血清）加2份PBS（pH7.2）混匀，加等体积饱和硫酸铵溶液混匀，置4℃冰箱12h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，再以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，加饱和硫酸铵溶液至终浓度为33％，置4℃冰箱2h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，置4℃冰箱内用PBS（pH7.2）透析48h，中间换液3次，4℃、12000rpm离心15min，收集上清，以紫外分光光度计测定其蛋白浓度，以50μg～100μg/kg体重的小鼠血清（或兔血清）IgG经皮下和肌肉注射健康山羊或家兔3～4次，末次注射10天后，以ELISA测定其血清效价达到1：2000以上时，心脏或动脉采血，分离收集高免血清，以饱和硫酸铵提取羊抗或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体（方法与提取小鼠血清IgG相同，不再重述），用于微量磺胺氯哒嗪试纸条对照印迹的制备。

（5）试纸条检测反应原理

当磺胺氯哒嗪试纸条测试端插入待测样品溶液后，待测溶液通过虹吸作用带动待测磺胺氯哒嗪及金标抗体玻璃纤维棉中的金标抗体一起向纤维素膜层扩散，并最终渗入手柄端的吸水材料层。在扩散过程中待测磺胺氯哒嗪可与金标抗体相结合，进而封闭金标抗体上磺胺氯哒嗪的抗原结合点，阻止金标抗体与纤维素膜层上偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白的检测印迹结合，不能显示检测印迹，而羊或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体则可与金标抗体结合，形成棕红色对照印迹带“︱”，即一条棕红色带“︱”印迹为阳性表示。反之样品溶液中无磺胺氯哒嗪则不能阻止金标抗体与纤维素膜层上偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白的检测印迹结合，则显示棕红色检测印迹带“︱”，同样羊抗或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体也与金标抗体结合，显示棕红色对照印迹带“︱”，形成两条棕红色带“︱︱”为阴性表示。如果纤维素膜层上没有棕红色带显示，则表明试纸条已失效。

（6）待测样品的制备及检测步骤

检测肉样：将样品剪碎、磨细，以生理盐水稀释制成1：2～10的待测样品悬液；

操作方法：将磺胺氯哒嗪试纸条样品端插入待测样品中，插入深度不超过标记线，约10～20秒钟取出检测试纸条，水平放置，5min内观察判定检测结果。

结果判定：(a)阳性如果在纤维素膜上显示有一条棕红色印迹带“︱”，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有磺胺氯哒嗪；(b)阴性如果在纤维素膜上显示有两条棕红色印迹带“︱︱”，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中不含磺胺氯哒嗪；(c)失效如果在纤维素膜上没有棕红色带显示，则表明试纸条已失效。

实施例二：试纸条结构和实施例一基本相同，不同之处在于：金标抗体纤维层上吸附有抗磺胺氯哒嗪的多克隆抗体，吸附纤维层用尼龙膜制成，纤维素膜层采用纯纤维素膜，检测印迹和对照印迹均为“十”，覆盖在吸水材料层上面的手柄端保护膜为兰色。

用于检测奶样，可直接用生理盐水将奶样稀释制成1：2～5待测样品悬液；

结果判定：(a)阳性如果在纤维素膜上显示有一条棕红色印迹带“十”，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有磺胺氯哒嗪；(b)阴性如果在纤维素膜上显示有两条棕红色印迹带“十”，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中不含磺胺氯哒嗪；(c)失效如果在纤维素膜上没有棕红色带显示，则表明试纸条已失效。操作方法同实施例一，不重述。

实施例三：磺胺氯哒嗪试纸条和实施例一基本相同，不同之处在于：

吸附纤维层用PVDF膜制成，偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白溶液为鸡卵清白蛋白(OVA)，对照印迹用兔抗小鼠IgG的抗体溶液在纤维素膜上印制，纤维素膜层采用羧化纤维素膜，覆盖在吸水材料层上面的手柄端保护膜为绿色，检测印迹和对照印迹均为“┬”。

检测血样：提取血清并用生理盐水将其稀释制成1：2～10的待测样品。

结果判定：（a）阳性如果在纤维素膜上显示有一条棕红色印迹带“┬”，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有磺胺氯哒嗪；（b）阴性如果在纤维素膜上显示两条棕红色印迹带“┬”，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中不含磺胺氯哒嗪；（c）失效如果在纤维素膜上没有棕红色带显示，则表明试纸条已失效。

实施例四：磺胺氯哒嗪试纸条和实施例一基本相同，不同之处在于：

吸附纤维层用聚酯膜制成，纤维素膜层采用羧化纤维素膜，偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白溶液为血蓝蛋白（KLH）。用于检测尿样，可直接取尿液作为待测样品。检测印迹和对照印迹均为“┴”。操作方法和结果判定同实施例一，不重述。

实施例五：磺胺氯哒嗪试纸条和实施例一基本相同，不同之处在于：

对照印迹用羊抗兔IgG抗体溶液在纤维素膜上印迹制成，吸附纤维层用尼龙膜制成。检测印迹和对照印迹均为“├”。

检测样品、结果判定和操作方法同实施例一，不重述。

实施例六：和实施例一基本相同，不同之处在于：金标抗体纤维层吸附有抗磺胺氯哒嗪的多克隆抗体，检测样品为奶样，检测印迹和对照印迹均为“┤”。

实施例七：和实施例一基本相同，不同之处在于：金标抗体纤维层吸附有抗磺胺氯哒嗪的多克隆抗体，检测样品为血样。

实施例八：和实施例一基本相同，不同之处在于：金标抗体纤维层吸附有抗磺胺氯哒嗪的多克隆抗体，检测样品为尿样。

实施例九：和实施例一基本相同，不同之处在于：偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白溶液为血蓝蛋白。检测样品、结果判定和操作方法同实施例一，不重述。

实施例十：和实施例一基本相同，不同之处在于：偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白溶液为鸡卵清白蛋白，检测样品、结果判定和操作方法同实施例一，不重述。

Claims

1.一种快速检测微量磺胺氯哒嗪的试纸条，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，其特征是：吸附层从测试端依次为吸附纤维层、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水材料层，在纤维素膜层上设有偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白溶液印制的检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的对照印迹，金标抗体为胶体金标记的磺胺氯哒嗪抗体；

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：所述胶体金标记的磺胺氯哒嗪抗体采用如下方法制备：

3.根据权利要求2所述的试纸条，其特征是：吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；吸水材料层用吸水滤纸，支撑层用不吸水的韧性材料制成。

4.根据权利要求2所述的试纸条，其特征是：金标抗体纤维层用吸附磺胺氯哒嗪的金标抗体玻璃纤维棉制成。

5.根据权利要求2所述的试纸条，其特征是：偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、鸡卵清白蛋白OVA或血蓝蛋白KLH。

6.根据权利要求1-5任一项所述的试纸条，其特征在于：检测印迹与对照印迹的排列组合为“︱︱”、“＋＋”、“┴┴”、“┬ ┬”、“├├”中的一种；在吸附纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该样品标记线偏向吸附纤维层一侧约0.5cm处。

7.如权利要求1所述的快速检测微量磺胺氯哒嗪的试纸条的制备方法，其特征是：该方法包括以下步骤：

（1）偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白的制备

（2）抗磺胺氯哒嗪抗体的制备；

（3）磺胺氯哒嗪金标抗体的制备；

（4）羊抗或兔抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG抗体的制备；

用所得的偶联磺胺氯哒嗪载体蛋白溶液在纤维素膜层上印制检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG、或羊抗兔IgG抗体在纤维素膜层上印制对照印迹；用磺胺氯哒嗪金标抗体制备金标抗体纤维层，然后依次按支撑层、吸附层和保护层的顺序组装成试纸条。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是：所述磺胺氯哒嗪金标抗体的制备方法如下：

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征是：所述吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜制成；吸水材料层用吸水滤纸，支撑层用不吸水的韧性材料制成；金标抗体纤维层用吸附磺胺氯哒嗪的金标抗体玻璃纤维棉制成；偶联磺胺氯哒嗪的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA、鸡卵清白蛋白OVA或血蓝蛋白KLH。