CN1888905B - 磺胺药多残留联检试纸盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种磺胺药多残留分析的金标层析检测试纸盒。该试纸盒由塑料壳和试纸芯构成，面板上设有加样孔和结果显示窗，反应膜用印制有隐形检测线和对照线的硝酸纤维素膜，金标物结合垫用吸附2～5种混合金标抗体的玻璃纤维棉，反应膜上的检测线为2～5条相应的磺胺药-载体蛋白结合抗原，或者金标物结合垫用吸附2～5种金标磺胺药-载体蛋白结合抗原的玻璃纤维棉，则反应膜检测线为2～5条相应的抗某种磺胺药的抗体，反应膜上的对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、或为羊抗兔IgG、或为兔抗载体蛋白IgG抗体印制。本发明的试纸盒一次加样同时检测多种磺胺药物，大大节省检测时间，具有特异性强，灵敏度高，简便，直观，准确，适用范围广，成本低，易于推广应用。
Description
一、技术领域：本发明涉及一种快速检测微量磺胺药的器具，特别是涉及一种磺胺药多残留分析的金标层析检测试纸盒。
二、技术背景：
磺胺药是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学药物。具有抗菌谱广、价廉、使用方便的特点，除广泛用于兽医临床治疗外，常常作为饲料添加剂在动物生产中应用，以便控制某些疾病。由于磺胺药在动物生产中的不规范使用，使其在动物体内残留，并通过肉、蛋、奶等食物链进入人体，在人体内蓄积，导致许多细菌产生抗药性，造成过敏性反应，发生中毒，还可引起造血系统障碍、急性溶血性贫血、粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血等，有些还有致畸、致癌作用，严重危害人类的身体健康。
磺胺药是近15～20年来在动物性食品中残留超标现象非常严重的一类兽药，因此，世界各国对磺胺药的残留极为关注，我国已把动物性食品中磺胺药残留列为重点监控对象之一。
检测磺胺药残留的方法很多，如微生物学法、薄层层析法、高效液相色谱法、气相色谱法、气-质联用分析法和毛细管电泳法等。但这些方法有的需要昂贵的仪器设备，需要熟练的专业人员操作，操作过程复杂，需要的时间较长，限制了其应用范围，难以在生产实际中推广应用。
三、发明内容：
本发明的目的是：研制出特异，敏感、快速、简便的磺胺药多残留联检试纸盒。
本发明的技术方案是：
一种磺胺药多残留联检试纸盒，由塑料壳和试纸芯构成，塑料壳包含底座和面板，其中底座上设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和结果显示窗，试纸芯由样品垫、金标物结合垫、反应膜和吸水垫依次相互搭接粘贴在衬板上制成。反应膜用印制有隐形检测线和对照线的硝酸纤维素膜，其特征为：金标物结合垫用吸附2～5种混合金标抗体的玻璃纤维棉，金标抗体为胶体金标记的抗某种磺胺药的单克隆抗体或多克隆抗体，反应膜上的检测线为2～5条相应的磺胺药-载体蛋白结合抗原，反应膜上的对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、或为羊抗兔IgG、或为兔抗载体蛋白IgG抗体印制，对照线和检测线平行排列组合为“|||”，或为“||||”，或为“|||||”，或为“||||||”。
所述的金标抗体和相应的结合抗原形成下述的任意2～5种组合，
金标抗磺胺甲基嘧啶(SM1)抗体，检测线为SM1-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺二甲基嘧啶(SM2)抗体，检测线为SM2-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺对甲氧嘧啶(SMD)抗体，检测线为SMD-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺嘧啶(SD)抗体，检测线为SD-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺二甲氧嘧啶(SDM)抗体，检测线为SDM-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺间甲氧嘧啶(SMM)抗体，检测线为SMM-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺甲噁唑(SMZ)抗体，检测线为SMZ-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺异噁唑(SIZ)抗体，检测线为SIZ-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺甲氧吡嗪(SMP)抗体，检测线为SMP-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺喹噁啉(SQ)抗体，检测线为SQ-载体蛋白结合抗原。
一种磺胺药多残留联检试纸盒，由塑料壳和试纸芯构成，塑料壳包含底座和面板，其中底座上设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和结果显示窗，试纸芯由样品垫、金标物结合垫、反应膜和吸水垫依次相互搭接粘贴在衬板上制成。反应膜用印制有隐形检测线和对照线的硝酸纤维素膜，其特征为：金标物结合垫用吸附2～5种金标磺胺药-载体蛋白结合抗原的玻璃纤维棉，则反应膜检测线为2～5条相应的抗某种磺胺药的单克隆抗体或多克隆抗体，反应膜上的对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、或为羊抗兔IgG、或为兔抗载体蛋白IgG抗体印制，对照线和检测线平行排列组合为“|||”，或为“||||”，或为“|||||”，或为“||||||”。
所述的金标磺胺药-载体蛋白结合抗原和相应的磺胺药抗体为下述的任意2～5种组合，
金标SM1-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SM1抗体；金标SM2-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SM2抗体；金标SMD-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SMD抗体；金标SD-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SD抗体；金标SDM-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SDM抗体；金标SMM-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SMM抗体；金标SMZ-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SMZ抗体；金标SIZ-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SIZ抗体；金标SMP-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SMP抗体；金标SQ-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SQ抗体。
所述的衬板用硬质塑胶条，样品垫为玻璃纤维棉；吸水垫为吸水能力较强的吸水滤纸。
所述的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA，或鸡卵清白蛋白OVA，或人血清白蛋白HSA，或血蓝蛋白KLH。
所述的显示窗旁边分别印有字母T1、T2…Tn和C，T表示检测线，在靠近加样孔侧，C表示对照线，在远离加样孔侧，其中n为1、2、3、4、5。
本发明的积极有益效果：
本发明的磺胺药多联金标层析检测试纸盒具有以下突出优点，
①试纸盒特异性强，敏感性高。最低检出限可达到10ppb，低于我国目前限量标准。
②试纸盒实现了磺胺药多残留金标层析快速检测，用同一试纸盒可一次加样同时检测多种磺胺药物，克服以前的常规单项检测试纸盒一次只能检测一种药物的不足；大大节省了检测多种磺胺药物的检测时间，提高了工作效率。
③使用该试纸盒，无需其它试剂和仪器，可现场操作，在10分钟内即可判定检测结果，简便、快速、时效性强。
④使用该试纸盒以棕红色线条“|”显示数量或有无，作为检测结果判定依据，形象、直观，简单明了，不易出现人为误判。
⑤节省费用，适用范围广，便于推广。使用该试纸盒，比用仪器分析和常规单项检测试纸条费用大幅下降。同时，试纸盒适用范围广，可满足不同层次人员需要，包括专业检验、海关检疫、卫生检疫、质量监测、加工企业和养殖场户等，便于推广应用。
四、附图说明：
图1、试纸芯侧视结构示意图。
图2、试纸芯俯视结构示意图。
图3、二项联检试纸盒面板构造俯视图。
图4、试纸盒底座构造示意图。
图5、三项联检试纸芯俯视结构示意图。
图6、三项联检试纸盒面板构造俯视图。
图7、五项联检试纸芯俯视结构示意图。
图8、五项联检试纸盒面板构造俯视图。
图中，1：衬板； 2：样品垫； 3：金标物结合垫； 4：反应膜； 5：吸水垫；6：对照线； 7：检测线； 8：加样孔； 9：显示窗； 10：面板；11：底座； 12：固定槽。
五、具体实施方式：
要制成磺胺药多残留联检试纸盒，首先需要制备某种磺胺药-载体蛋白结合抗原，同时需要制备磺胺药金标物，而且需要制备羊抗或兔抗小鼠IgG抗体或羊抗兔IgG抗体，或兔抗载体蛋白IgG抗体，进而制备试纸芯，并安装在塑料壳底座的固定槽中，最后和面板嵌合在一起。
1、磺胺药-载体蛋白结合抗原制备
采用重氮化法或戊二醛法可制备任何一种磺胺药-载体蛋白结合抗原。
采用的载体蛋白分别为牛血清白蛋白(BSA)，鸡卵清白蛋白(OVA)，人血清白蛋白(HSA)，血蓝蛋白(KLH)。
重氮化法：以SMM为例，在冰浴条件下进行，称取SMM40mg溶于5ml0.1mol/L稀盐酸中，搅拌下滴加0.3～0.5ml10％的NaNO2，反应4～6h；称取BSA20mg溶于3ml PBS液，并在搅拌下缓慢加入上液中，用1mol/L的NaOH调pH≈8.5，反应过夜。收集反应液装入透析袋，在4℃下用0.1mol/L(pH7.4)的PBS透析3～5天，每天更换透析液2～3次。最后收集透析好的人工结合抗原SMM-BSA，保存于-20℃冰箱备用。
同法，用OVA或HSA或KLH替代BSA制得人工结合抗原SMM-OVA或SMM-HSA或SMM-KLH。
戊二醛法：以SMM为例，将10mg BSA溶于2ml pH＝9.6的0.05mol/L碳酸缓冲液中，再缓缓滴加25％戊二醛溶液0.2mL，搅拌反应4～6h；称取SMM20mg溶于2ml 0.1mol/L的NaOH溶液，并在搅拌下缓慢加入上液中，室温反应过夜。收集反应液装入透析袋，在4℃下用0.1mol/L(pH7.4)的PBS透析3～5天，每天更换透析液2～3次。最后收集透析好的人工结合抗原SMM-BSA，保存于-20℃冰箱备用。
同法，用OVA或HSA或KLH替代BSA制得人工结合抗原SMM-OVA或SMM-HSA或SMM-KLH。
采用上述两种方法可制备的磺胺药-载体蛋白结合抗原分别为：SM1-BSA、SM2-BSA、SMD-BSA、SD-BSA、SDM-BSA、SMM-BSA、SMZ-BSA、SIZ-BSA、SMP-BSA、SQ-BSA；SM1-OVA、SM2-OVA、SMD-OVA、SD-OVA、SDM-OVA、SMM-OVA、SMZ-OVA、SIZ-OVA、SMP-OVA、SQ-OVA；SM1-HSA、SM2-HSA、SMD-HSA、SD-HSA、SDM-HSA、SMM-HSA、SMZ-HSA、SIZ-HSA、SMP-HSA、SQ-HSA；SM1-KLH、SM2-KLH、SMD-KLH、SD-KLH、SDM-KLH、SMM-KLH、SMZ-KLH、SIZ-KLH、SMP-KLH、SQ-KLH。
2、抗某种磺胺药单克隆抗体或多克隆抗体的制备
单抗制备：以SM1为例，用SM1-载体蛋白结合抗原按50～100μg/只的剂量免疫8周龄BALB/c小鼠3～4次，每次免疫间隔时间3～5周，最后一次超强免疫后3～4天，无菌取其脾细胞并与NS0骨髓瘤细胞杂交融合，置37℃、5％CO2培养箱中培养。培养10～14天，用间接ELISA方法选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行3次有限稀释克隆化，而后扩大培养，建立杂交瘤细胞株，其分泌的单克隆抗体可特异地与SM1反应。以体内诱生法进行单抗制备，以辛酸-硫酸铵法提纯单抗，置-20℃冻存备用。
多抗制备：以SM1为例，用SM1-载体蛋白结合抗原免疫新西兰白兔，免疫剂量为200～500μg/次，背部皮下分4～6点注射。首免，用无菌磷酸盐缓冲液(PBS)溶解SM1-载体蛋白结合抗原，与等量弗氏完全佐剂(FCA)混合，充分乳化；加强免疫，用无菌PBS溶解SM1-载体蛋白结合抗原，与等量弗氏不完全佐剂(FIA)混合，充分乳化，首免后2～3周进行，连续免疫4～5次，每次间隔2～3周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法测定其效价达到105以上时，采血并分离收集高免血清。以饱和硫酸铵盐析法提取IgG抗体，置于-20℃冻存备用。
上述方法可用于任何一种磺胺药单克隆抗体或多克隆抗体的制备。
3、金标物结合垫的制备
①金标抗体结合垫的制备：采用柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液，即在沸腾的200ml 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠8ml，获得直径约15nm的胶体金溶液，用0.1mol/L K2CO3调pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存备用。以1∶2000的标记比将待标记的单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后，加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～2000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化的金标抗体蛋白，再用丙烯葡聚糖S-400柱层析进行分离纯化，获得胶体金标记抗体。将1∶100～500稀释的胶体金标记抗体(单克隆抗体或多克隆抗体)吸附于精制玻璃纤维棉中，4℃低温真空干燥，制备金标抗体结合垫。
上述方法可用于任何一种磺胺药金标抗体结合垫的制备。
②金标抗原结合垫的制备：参照金标抗体结合垫的制备方法进行，以磺胺药-载体蛋白结合抗原替代抗磺胺药抗体，将胶体金pH值调为6.0～7.0即可。
4、羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗体的制备
以饱和硫酸铵盐析法提取磺胺药阴性小鼠血清IgG(或阴性兔血清IgG)，用小鼠血清(或兔血清)IgG以50～100μg/kg体重的剂量经皮下和肌肉注射健康山羊或家兔3～4次，末次注射10天后，测定其血清琼扩效价达到1∶40以上时，心脏或动脉采血，分离收集高免血清，以饱和硫酸铵盐析法提取羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗体(方法与提取小鼠血清IgG相同，不再重述)，置于-20℃冻存备用。
5、兔抗载体蛋白IgG抗体的制备
用载体蛋白BSA免疫新西兰白兔，免疫剂量为200～500μg/次，背部皮下分4～6点注射。首免，用无菌PBS溶解BSA，与等量FCA混合，充分乳化；加强免疫，用无菌PBS溶解BSA，与等量FIA混合，充分乳化，首免后2～3周进行，连续免疫3～4次，每次间隔2～3周，末次免疫后10～15天，测定其血清琼扩效价达到105以上时，采血并分离收集高免血清。以饱和硫酸铵盐析法提取抗BSA抗体，置-20℃冻存备用。
同法制备抗OVA抗体、抗HSA抗体、抗KLH抗体。
6、试纸盒检测反应原理
由于胶体金标记对象不同，其检测反应原理稍有差异。
当胶体金标记物是抗体时，加入待测样品溶液后，待测溶液通过虹吸作用带动待测物及金标物结合垫中的金标抗体一起向反应膜扩散，在扩散过程中，待测药物可与金标抗体相结合，从而封闭了金标抗体上的结合位点，阻止金标抗体被反应膜上的结合抗原检测线拦截，检测线不显示，而羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗体则可拦截金标抗体，显示一条棕红色对照线“|”，为阳性表示；否则，样品溶液中无待测药物时，不能阻止金标抗体被反应膜上的结合抗原检测线拦截，显示棕红色检测线“|”，但羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG)抗体也拦截金标抗体，显示棕红色对照线“|”，为阴性表示；如果反应膜上没有棕红色线显示，则表明试纸条已失效。
当胶体金标记物是结合抗原时，加入待测样品溶液后，样品溶液通过虹吸作用带动待测药物及金标物结合垫中的金标结合抗原一起向反应膜扩散，样品中的游离待测药物分子量小移动速度快，先到达反应膜检测线，先与检测线上的抗体相结合，封闭了检测线上抗体的结合位点，阻止金标结合抗原与反应膜上的抗体检测线结合，检测线不显示，而抗载体蛋白抗体则可拦截金标结合抗原，显示一条棕红色对照线“|”，为阳性表示；否则，样品溶液中无待测药物时，金标结合抗原到达反应膜上的检测线时即被相应的检测线抗体拦截，显示棕红色检测线“|”，同时抗载体蛋白抗体也可拦截金标结合抗原，显示棕红色对照线“|”，为阴性表示；如果反应膜上没有棕红色线显示，则表明试纸条已失效。
实施例一：磺胺药二项联检金标层析试纸盒
试纸盒塑料壳的构造含底座(11)和面板(10)，底座设有安装试纸芯的固定槽(12)，面板设有加样孔(8)和显示窗(9)，显示窗旁边设有T1、T2和C标示。试纸芯的构造是：衬板(1)用硬质塑胶条制成；样品垫(2)用玻璃纤维棉制成；金标物结合垫(3)，根据上述具体实施方式“3”所述的制备方法，制备吸附有胶体金标记的抗SDM和抗SM2单克隆抗体的玻璃纤维棉；反应膜(4)用硝酸纤维素膜，其上分别用偶联SDM-载体蛋白和SM2-载体蛋白结合抗原制备隐形检测线“|”，由样品端依次排列并与面板上T1、T2相对应，用羊抗小鼠IgG抗体制备隐形对照线“|”，3条线平行排列组合成“|||”；吸水垫(5)用吸水滤纸制成。将样品垫、金标物结合垫、反应膜、吸水垫依次相互搭接粘贴固定在衬板上，组装成SDM和SM2联检试纸芯。将试纸芯安装在底座(11)上的固定槽(12)内，试纸芯的样品垫和反应膜分别与面板上加样孔和显示窗相对应，反应膜上的2条检测线和1条对照线分别与显示窗旁边的T1、T2和C相对应，嵌合面板后制成试纸盒。
检测样品：检测样品可为组织样、血样、奶样、蛋样、尿样和蜂蜜样品。
检测样品制备：
①组织样和蛋样将样品匀浆后，取样与乙腈水溶液按1∶3的比例混合，3000rpm离心10min，取上清液分别按1∶0.5～1和1∶1～2的比例加入水和乙酸乙酯混合，3000rpm离心5min，取上层液用氮气吹干，用PBS溶解干燥物，1∶1加入异辛烷混匀，3000rpm离心5min，弃上层液，取下层液作为待测样品。
②血样、奶样和尿样检测血样，提取血清并用生理盐水将其稀释制成1∶1～10待测样品；检测奶样，直接用生理盐水将奶样稀释制成1∶2～10待测样品悬液；检测尿样，直接取尿液作为待测样品。
③蜂蜜样取蜂蜜加入1～2倍生理盐水溶解稀释后，再按1∶1～5的比例加入乙酸乙酯，震荡10min，3000rpm离心10min，取上层液氮气吹干，干燥物用生理盐水复溶作为待测样品。
操作方法：检测时，将试纸盒平放，从加样孔滴加待测样品液，5～10分钟从显示窗判定检测结果。
结果判定：如只有C位置显示一条棕红色线“|”时，表示SDM和SM2检测结果均为阳性，说明在待测样品中含这2种待测药物；如在T1和C位置显示2条棕红色线“||”时，表示SM2检测结果为阳性，SDM检测结果为阴性，说明在待测样品中含SM2而不含SDM；如在T2和C位置显示2条棕红色线“||”时，表示SDM检测结果为阳性，SM2检测结果为阴性，说明在待测样品中含SDM而不含SM2；如在T1、T2和C位置显示3条棕红色线“|||”时，表示SDM和SM2检测结果均为阴性；如在反应膜上没有棕红色线显示，则表明试纸盒已失效。
实施例二：磺胺药二项联检金标层析试纸盒
试纸盒构造和实施例一基本相同，不同之处在于：用抗SDM和抗SM2的多克隆抗体替代抗SDM和抗SM2的单克隆抗体，制备金标结合垫；用羊抗兔IgG抗体替代兔抗鼠IgG抗体在反应膜上制备隐形对照线“|”。
其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例一，不再重述。
实施例三：磺胺药二项联检金标层析试纸盒
试纸盒构造和实施例一基本相同，不同之处在于：用SDM-载体蛋白和SM2-载体蛋白结合抗原替代抗SDM和抗SM2的单克隆抗体，制备金标结合垫；用兔抗载体蛋白IgG抗体替代兔抗鼠IgG抗体在反应膜上制备隐形对照线“|”。
其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例一，不再重述。
实施例四：磺胺药三项联检金标层析试纸盒
试纸盒塑料壳的构造含底座和面板，底座设有安装试纸芯的固定槽，面板设有加样孔和显示窗，显示窗旁边设有T1、T2、T3和C标示。试纸芯的构造是：衬板用硬质塑胶条制成；样品垫用玻璃纤维棉制成；金标物结合垫，根据上述具体实施方式“3”所述的制备方法，制备吸附有胶体金标记的抗SDM、抗SM2和抗SD单克隆抗体的玻璃纤维棉；反应膜用硝酸纤维素膜，其上分别用偶联SDM-载体蛋白、SM2-载体蛋白和SD-载体蛋白结合抗原制备隐形检测线“|”，由样品端依次排列并与面板上T1、T2、T3相对应，用兔抗小鼠IgG抗体制备隐形对照线“|”，4条线平行排列组合成“||||”；吸水垫用吸水滤纸制成。将样品垫、金标物结合垫、反应膜、吸水垫依次相互搭接粘贴固定在衬板上，组装成SDM、SM2和SD联检试纸芯。将试纸芯安装在底座的固定槽内，试纸芯的样品垫和反应膜分别与面板上加样孔和显示窗相对应，反应膜上的3条检测线和1条对照线分别与显示窗旁边的T1、T2、T3和C相对应，嵌合面板后制成试纸盒。
其它包括检测样品制备和操作方法均同实施例一，不再重述。
结果判定：如只有C位置显示1条棕红色线“|”时，表示SDM、SM2和SD检测结果均为阳性，说明在待测样品中含这3种待测药物；如显示1条棕红色T线和1条棕红色C线“||”时，表示2种药物检测结果为阳性，另外1种药物检测结果为阴性，说明在待测样品中含2种药物而不含另外1种药物；如显示2条棕红色T线和1条棕红色C线“|||”时，表示1种药物检测结果为阳性，另外2种药物检测结果为阴性，说明在待测样品中含12种药物而不含另外2种药物；如显示3条棕红色T线和1条棕红色C线“||||”时，表示3种药物检测结果均为阴性；如在反应膜上没有棕红色线显示，则表明试纸盒已失效。
实施例五：磺胺药三项联检金标层析试纸盒
试纸盒构造和实施例四基本相同，不同之处在于：用抗SD、抗SDM和抗SM2的多克隆抗体替代抗SD、抗SDM和抗SM2的单克隆抗体，制备金标结合垫；用羊抗兔IgG抗体替代兔抗鼠IgG抗体在反应膜上制备隐形对照线“|”。
其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例四，不再重述。
实施例六：磺胺药三项联检金标层析试纸盒
试纸盒构造和实施例四基本相同，不同之处在于：用SD-载体蛋白、SDM-载体蛋白和SM2-载体蛋白结合抗原替代抗SD、抗SDM和抗SM2的单克隆抗体，制备金标结合垫；用兔抗载体蛋白IgG抗体替代兔抗鼠IgG抗体在反应膜上制备隐形对照线“|”。
其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例四，不再重述。
实施例七：磺胺药五项联检金标层析试纸盒
试纸盒塑料壳的构造含底座和面板，底座设有安装试纸芯的固定槽，面板设有加样孔和显示窗，显示窗旁边设有T1、T2、T3、T4、T5和C标示。试纸芯的构造是：衬板用硬质塑胶条制成；样品垫用玻璃纤维棉制成；金标物结合垫，根据上述具体实施方式“3”所述的制备方法，制备吸附有胶体金标记的抗SDM、抗SM2、抗SD、抗SM1和抗SMD单克隆抗体的玻璃纤维棉；反应膜用硝酸纤维素膜，其上分别用偶联SDM-载体蛋白、SM2-载体蛋白、SD-载体蛋白、SM1-载体蛋白和SMD-载体蛋白结合抗原制备隐形检测线“|”，由样品端依次排列并与面板上T1、T2、T3、T4、T5相对应，用羊抗兔IgG抗体制备隐形对照线“|”，6条线平行排列组合成“||||||”；吸水垫用吸水滤纸制成。将样品垫、金标物结合垫、反应膜、吸水垫依次相互搭接粘贴固定在衬板上，组装成SDM、SM2、SD、SM1和SMD联检试纸芯。将试纸芯安装在底座的固定槽内，试纸芯的样品垫和反应膜分别与面板上加样孔和显示窗相对应，反应膜上的5条检测线和1条对照线分别与显示窗旁边的T1、T2、T3、T4、T5和C相对应，嵌合面板后制成试纸盒。
其它包括检测样品制备和操作方法均同实施例一，不再重述。
结果判定：如只有C位置显示1条棕红色线“|”时，表示SDM、SM2、SD、SM1和SMD检测结果均为阳性，说明在待测样品中含这5种待测药物；如显示1条棕红色T线和1条棕红色C线“||”时，表示4种药物检测结果为阳性，另外1种药物检测结果为阴性，说明在待测样品中含4种药物而不含另外1种药物；如显示2条棕红色T线和1条棕红色C线“|||”时，表示3种药物检测结果为阳性，另外2种药物检测结果为阴性，说明在待测样品中含3种药物而不含另外2种药物；如显示3条棕红色T线和1条棕红色C线“||||”时，表示2种药物检测结果为阳性，另外3种药物检测结果为阴性，说明在待测样品中含2种药物而不含另外3种药物；如显示4条棕红色T线和1条棕红色C线“|||||”时，表示1种药物检测结果为阳性，另外4种药物检测结果为阴性，说明在待测样品中含1种药物而不含另外4种药物；如显示5条棕红色T线和1条棕红色C线“||||||”时，表示5种药物检测结果均为阴性；如在反应膜上没有棕红色线显示，则表明试纸盒已失效。
实施例八：磺胺药五项联检金标层析试纸盒
试纸盒构造和实施例七基本相同，不同之处在于：用抗SDM、抗SM1、抗SM2、抗SD和抗SMD的多克隆抗体替代抗SDM、抗SM1、抗SM2、抗SD和抗SMD的单克隆抗体，制备金标结合垫；用羊抗兔IgG抗体替代兔抗鼠IgG抗体在反应膜上制备隐形对照线“|”。
其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例七，不再重述。
实施例九：磺胺药五项联检金标层析试纸盒
试纸盒构造和实施例七基本相同，不同之处在于：用SDM-载体蛋白、SM1-载体蛋白、SM2-载体蛋白、SD-载体蛋白和SMD-载体蛋白结合抗原替代抗SDM、抗SM1、抗SM2、抗SD和抗SMD的单克隆抗体，制备金标结合垫；用兔抗载体蛋白IgG抗体替代兔抗鼠IgG抗体在反应膜上制备隐形对照线“|”。
其它包括检测样品制备、操作方法和结果判定等均同实施例七，不再重述。
Claims (5)
1.一种磺胺药多残留联检试纸盒，由塑料壳和试纸芯构成，塑料壳包含底座和面板，其中底座上设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和结果显示窗，试纸芯由样品垫、金标物结合垫、反应膜和吸水垫依次相互搭接粘贴在衬板上制成，反应膜用印制有隐形检测线和对照线的硝酸纤维素膜，其特征为：金标物结合垫用吸附2～5种混合金标抗体的玻璃纤维棉，金标抗体为胶体金标记的抗某种磺胺药的单克隆抗体或多克隆抗体，反应膜上的检测线为2～5条相应的磺胺药-载体蛋白结合抗原，反应膜上的对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、或为羊抗兔IgG、或为兔抗载体蛋白IgG抗体印制，对照线和检测线平行排列组合为“|||”，或为“||||”，或为“|||||”，或为“||||||”；
所述的金标抗体和相应的结合抗原为：金标抗磺胺甲基嘧啶SM1抗体，检测线为SM1-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺二甲基嘧啶SM2抗体，检测线为SM2-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺对甲氧嘧啶SMD抗体，检测线为SMD-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺嘧啶SD抗体，检测线为SD-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺二甲氧嘧啶SDM抗体，检测线为SDM-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺间甲氧嘧啶SMM抗体，检测线为SMM-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺甲噁唑SMZ抗体，检测线为SMZ-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺异噁唑SIZ抗体，检测线为SIZ-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺甲氧吡嗪SMP抗体，检测线为SMP-载体蛋白结合抗原；金标抗磺胺喹噁啉SQ抗体，检测线为SQ-载体蛋白结合抗原。
2.一种磺胺药多残留联检试纸盒，由塑料壳和试纸芯构成，塑料壳包含底座和面板，其中底座上设有安装试纸芯的固定槽，面板上设有加样孔和结果显示窗，试纸芯由样品垫、金标物结合垫、反应膜和吸水垫依次相互搭接粘贴在衬板上制成，反应膜用印制有隐形检测线和对照线的硝酸纤维素膜，其特征为：金标物结合垫用吸附2～5种金标磺胺药-载体蛋白结合抗原的玻璃纤维棉，则反应膜检测线为2～5条相应的抗某种磺胺药的单克隆抗体或多克隆抗体，反应膜上的对照线为羊抗或兔抗小鼠IgG、或为羊抗兔IgG、或为兔抗载体蛋白IgG抗体印制，对照线和检测线平行排列组合为“|||”，或为“||||”，或为“|||||”，或为“||||||”；
所述的金标磺胺药-载体蛋白结合抗原和相应的磺胺药抗体为：金标SM1-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SM1抗体；金标SM2-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SM2抗体；金标SMD-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SMD抗体；金标SD-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SD抗体；金标SDM-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SDM抗体；金标SMM-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SMM抗体；金标SMZ-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SMZ抗体；金标SIZ-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SIZ抗体；金标SMP-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SMP抗体；金标SQ-载体蛋白结合抗原，检测线为抗SQ抗体。
3.根据权利要求1或2所述的试纸盒，其特征为：衬板用硬质塑胶条，样品垫为玻璃纤维棉；吸水垫为吸水能力较强的吸水滤纸。
4.根据权利要求1或2所述的试纸盒，其特征是：所述的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA，或鸡卵清白蛋白OVA，或人血清白蛋白HSA，或血蓝蛋白KLH。
5.根据权利要求1或2所述的试纸盒，其特征是：所述的显示窗旁边分别印有字母T1、T2，Tn和C，T表示检测线，在靠近加样孔侧，C表示对照线，在远离加样孔侧，其中n为1、2、3、4、5。
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