CN103451286B

CN103451286B - 用于检测小麦抗旱性的引物及其应用

Info

Publication number: CN103451286B
Application number: CN201310381510.3A
Authority: CN
Inventors: 陈东升; 张晓科; 王宪国; 张维军; 亢玲; 金秀峰; 王小亮; 何进尚
Original assignee: CROP Research Institute of Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Current assignee: CROP Research Institute of Ningxia Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority date: 2013-08-28
Filing date: 2013-08-28
Publication date: 2015-04-15
Anticipated expiration: 2033-08-28
Also published as: CN103451286A

Abstract

本发明公开了用于检测与小麦抗旱的引物及其应用。本发明所提供的用于检测小麦抗旱性的引物为由引物对A和引物对B组成的引物对组：所述引物对A为由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对；所述引物对B为由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对。利用本发明所提供的引物检测小麦抗旱性，方法可靠、简便、实用，在小麦种质资源评价和育种标记的辅助选择中具有重要应用前景，同时为培育抗旱性强的小麦品种提供了参考依据。

Description

用于检测小麦抗旱性的引物及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于检测小麦抗旱性的引物及其应用。

背景技术

小麦是我国的重要的粮食作物和重要的战略性储备粮食品种。在各种逆境因子中，干旱已成为限制小麦生产的最主要因子，选育和推广抗旱小麦品种是解决这一难题既经济又有效的途径之一。寻找与其编码基因紧密连锁的分子标记，可为分子标记辅助选择育种奠定基础。

植物在受到水分胁迫后，会诱导产生一系列生理、生化反应以应对水分匮缺。胁迫压力作为信号可以诱导调节一些基因的表达，进而促使蛋白质的组成发生改变，或者合成新的蛋白质，由于蛋白质直接参与植物的应激反应，研究水分胁迫诱导蛋白有助于了解蛋白质与植物适应环境压力之间的关系。Schuppler等通过轻度水分胁迫处理小麦幼苗，发现叶片内分子量34kDa的蛋白含量明显增加。石峰等研究18份小麦品种水分胁迫诱导蛋白与抗旱性的关系，发现小麦在水分胁迫后能够引起分子量约66.2KDa应答蛋白的特异表达，该蛋白在中等及以上抗旱性品种中均有表达，而在弱抗旱性品种中不表达。在此研究的基础上，张洁等研究了30份冬小麦品种（系）幼苗期水分胁迫后叶片中应答蛋白的表达，发现该蛋白与品种的抗旱性紧密相关，并提出此蛋白在水分胁迫下的表达可作为鉴定品种抗旱性的一项指标。任万杰等对150份不同水旱生态型的冬小麦品种（系）进行不同水分条件下的应答蛋白表达分析，发现该蛋白表达的类型与品种水旱生态型间呈极显著相关。王婧等利用SSR标记对杂交组合（邯郸6050×西农2208）F₂群体进行分析，对该应答蛋白基因进行了初步定位，命名为“RpDD”，获得了位于同一侧且距离较远的两个SSR标记Xgwm129和Xgwm304。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测小麦抗旱的引物及其应用。

本发明所提供的用于检测小麦抗旱性的引物，为由如下引物对A和引物对B组成的引物对组：

所述引物对A具体为由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对；所述引物对B为由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对。

在实际应用中，所述引物对组（序列1、序列2、序列3和序列4）中的四条单链DNA在PCR反应体系中的摩尔比为1：1：1：1。

在本发明的一个实施例中，在所述引物对组中，组成每个引物对的两条单链DNA在PCR反应体系中的工作浓度均为0.25μM。

含有所述引物对组的试剂盒也属于本发明的保护范围。

所述引物对组的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述引物对组的制备方法可包括将所述引物对组中各序列所示单链DNA分别单独包装的步骤。

所述试剂盒的制备方法也属于本发明的保护范围。

所述试剂盒的制备方法可包括如下步骤：将所述引物对组中各序列所示单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种包装在同一试剂盒内：PCR反应缓冲液、DNA聚合酶和4种dNTP。

其中，序列1由25个核苷酸组成；序列2由25个核苷酸组成；序列3由20个核苷酸组成；序列4由20个核苷酸组成。

所述引物对组在检测小麦抗旱性中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的再一个目的是提供一种检测小麦抗旱性的方法。

本发明所提供的检测小麦抗旱性的方法，可为如下（a）-（c）中任一种：

（a）具体可包括如下（a1）-（a2）步骤：

（a1）以待测小麦的基因组DNA为模板，以由所述引物对A（由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对）进行PCR扩增，获得PCR产物；

（a2）检测步骤（a1）所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测小麦的抗旱性：若所述PCR产物中含有大小为101bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性强的小麦或候选为抗旱性强的小麦；若所述PCR产物中含有大小为117bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性弱的小麦或候选为抗旱性弱的小麦。

（b）具体可包括如下（b1）-（b2）步骤：

（b1）以待测小麦的基因组DNA为模板，以由所述引物对B（由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对）进行PCR扩增，获得PCR产物；

（b2）检测步骤（b1）所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测小麦的抗旱性：若所述PCR产物中含有大小为215bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性强的小麦或候选为抗旱性强的小麦；若所述PCR产物中含有大小为219bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性弱的小麦或候选为抗旱性弱的小麦。

（c）具体可包括如下（c1）-（c2）步骤：

（c1）以待测小麦的基因组DNA为模板，以所述引物对A（由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对）和所述引物对B（由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对）分别进行PCR扩增，获得PCR产物；

（c2）检测步骤（c1）所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测小麦的抗旱性：若采用所述引物对A扩增所得PCR产物中含有大小为101bp的DNA片段，且采用所述引物对B扩增所得PCR产物中含有大小为215bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性强的小麦或候选为抗旱性强的小麦；若采用所述引物对A扩增所得PCR产物中含有大小为117bp的DNA片段，且采用所述引物对B扩增所得PCR产物中含有大小为219bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性弱的小麦或候选为抗旱性弱的小麦。

在实际应用中，判断PCR产物中是否含有目的DNA片段时，可通过将PCR产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（凝胶浓度具体可如6%），看电泳图谱上是否含有目的条带：电泳图谱上含有目的条带，则PCR产物中含有目的DNA片段。

在上述方法中，所述大小为101bp的DNA片段具体为序列表中序列5所示DNA片段；所述大小为117bp的DNA片段具体为序列表中序列6所示DNA片段；所述大小为215bp的DNA片段具体为序列表中序列7所示DNA片段；所述大小为219bp的DNA片段具体为序列表中序列8所示DNA片段。

在实际应用中，判断PCR产物中是否含有含有序列5-序列8中任一所示DNA片段，可通过对PCR产物进行核苷酸序列测定来判断。

在上述方法中，以所述引物对A（由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对）进行PCR扩增的退火温度具体可为53℃；以所述引物对B（由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对）进行PCR扩增的退火温度具体可为53℃。

所述引物对组，或所述方法在如下（I）-（IV）中的应用也属于本发明的保护范围：

（I）筛选抗旱性强的小麦品种；

（II）筛选抗旱性弱的小麦品种；

（III）培育抗旱性强的小麦品种；

（IV）培育抗旱性弱的小麦品种。

本发明的还一个目的是提供一种培育抗旱性强（或弱）的小麦品种的方法，包括采用通过以上所述方法检测得到的所述抗旱性强（或弱）的小麦品种作为亲本进行育种的步骤。

在本发明中，所有的所述抗旱性均主要体现为小麦全生育期的抗旱性，具体体现在小麦抗旱指数上。

在本发明中，所有所述抗旱性强的小麦均为抗旱指数在1.10以上的小麦；所有所述抗旱性弱的小麦均为抗旱指数在0.89以下的小麦。具体的，所述抗旱指数均为按照“小麦抗旱性鉴定评价技术规范（GB/T21127-2007）”中“全生育期抗旱性鉴定”中记载的方法及公式计算所得。更加具体而言，在本发明中，所有所述抗旱性强的小麦均为“小麦抗旱性鉴定评价技术规范（GB/T21127-2007）”中记载的小麦全生育期抗旱性等级高于中等（抗旱性等级为极强或强）的小麦；所有所述抗旱性弱的小麦均为“小麦抗旱性鉴定评价技术规范（GB/T21127-2007）”中记载的小麦全生育期抗旱性等级低于中等（抗旱性等级为极弱或弱）的小麦。

本发明对65份小麦品种的统计实验结果表明，采用引物对Xbarc56扩增出101bp目的条带（序列5），且采用引物对Xbarc117扩增出215bp目的条带（序列7）的小麦品种中，有88.9%为抗旱性强的小麦品种；采用引物对Xbarc56扩增出117bp目的条带（序列6），且采用引物对Xbarc117扩增出219bp目的条带（序列8）的小麦品种中，有90.9%为抗旱性弱的小麦品种。可见，本发明所提供的检测小麦抗旱性的方法可靠、简便、实用，在小麦种质资源评价和育种标记的辅助选择中具有重要应用前景，同时为培育抗旱性强的小麦品种提供了参考依据。

附图说明

图1为引物对Xbarc56和引物对Xbarc117分别对不同抗旱性等级的小麦品种（系）进行PCR扩增的结果。其中，A为引物对Xbarc56的扩增结果；B为引物对Xbarc117的扩增结果；A和B中，泳道M为DNA分子量标准，各条带由大到小依次为600bp、500bp、400bp、300bp、200bp、100bp；泳道1为晋麦47；泳道2为西农2208；泳道3为长旱58；泳道4为西27；泳道5为CK6004；泳道6为临旱917；泳道7为运旱21-30；泳道8为晋麦50；泳道9为普冰143；泳道10为中梁88375；泳道11为洛旱2号；泳道12为石家庄8号；泳道13为秦麦1号；泳道14为沧核030；泳道15为川96003；泳道16为I424；泳道17为长武134；泳道18为西农979；泳道19为济麦20；泳道20为泰山9818；泳道21为郑麦9023；泳道22为德麦3号。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所涉及的65份小麦品种（系）均为市面常售品种。

实施例1、用于检测小麦抗旱性的引物的获得及其应用

一、小麦抗旱性的测定

以表2中65份小麦品种（系）作为实验材料，测定小麦品种（系）全生育期的相对发芽率，并进行抗旱性等级的划分。具体如下：

1、全生育期抗旱性鉴定

（1）田间鉴定

在常年自然降雨量小于500mm的地区或小麦生育期内自然降雨量小于150mm的地区进行田间抗旱性鉴定。

（a）试验设计

随机排列，三次重复，小区面积6.7m²。

（b）胁迫处理

播种前表土墒情应保证出苗，表墒不足时，要适量灌水。

（c）对照处理

在邻近胁迫处理的试验地设置对照试验。对照试验地的土壤养分含量、土壤质地和土层厚度等与胁迫处理的基本一致。田间水分管理要保证小麦全生育期处于水分适宜的状况，播种前表土墒情应保证出苗，表墒不足时，要适量灌水，另外，分别在拔节期、抽穗期、灌浆期灌水，使0cm～50cm土层水分达到田间持水量的80%±5%。

（2）考察性状

小区籽粒产量。

（3）抗旱指数

以小区籽粒产量计算抗旱指数，公式如下：

DI=Y_d×(Y_d/Y_p)/Y_md=(Y_d/Y_p)×(Y_d/Y_md) 式(1)

式中，DI——抗旱指数；

Y_d——胁迫环境品种（系）产量；

Y_p——非胁迫环境品种（系）产量；

Y_md——所有参试品种（系）于胁迫环境的平均产量；

注意：在进行抗旱性鉴定期间，要及时防治病、虫、鸟害，防治倒伏。

2、小麦全生育期抗旱性判定

抗旱性分为五级：极强（HR，highly resistant）、强（R，resistant）、中等（MR，moderately resistant）、弱（S，susceptible）、极弱（HS，highly susceptible）。

具体的小麦全生育期抗旱性判定标准见表1。

表1小麦全生育期抗旱性判定标准

抗旱指数	抗旱性等级
		≥1.30	极强（HR）
1.10～1.29	强（R）

0.90～1.09	中等（MR）
		0.70～0.89	弱（S）
≤0.69	极弱（HS）

3、65份小麦品种（系）的抗旱性鉴定结果如表2所示。

表2小麦抗旱性的测定结果及PCR扩增条带

注：表中PCR扩增产物一栏中“+”表示扩增出相应的目的条带，“-”表示未扩增出相应的目的条带。

统计表2中65份小麦品种（系）抗旱性的测定结果，其中，编号1-5共5份小麦品种（系）的抗旱性等级为极强（HR），编号为6-18共13份小麦品种（系）的抗旱性等级为强（R），编号为19-22共4份小麦品种（系）的抗旱性等级为中等（MR），编号为23-48共26份小麦品种（系）的抗旱性等级为弱（S），编号为49-65共17份小麦品种（系）的抗旱性等级为极弱（HS）。进一步统计，抗旱性等级在中等（MR）以上（抗旱性等级为极强或强）的小麦品种（系）共18份，抗旱性等级在中等（MR）以下（抗旱性等级为极弱或弱）的小麦品种（系）共43份。

二、用于检测小麦抗旱性的引物的合成及检测方法

1、用于检测小麦抗旱性的引物的合成

合成由序列表中序列1和序列2组成的引物对（记作Xbarc56），以及由序列3和序列4组成的引物对（记作Xbarc117）。

引物对Xbarc56中正反向引物如下：

Xbarc56-F（序列1）：5’-GCGGGAATTTACGGGAAGTCAAGAA-3’（序列5和序列6的第1-25位）；

Xbarc56-R（序列2）：5’-GCGAGTGGTTCAAATTTATGTCTGT-3’（序列5的第77-101位的反向互补序列，序列6的第93-117位的反向互补序列）。

引物对Xbarc117中正反向引物如下：

Xbarc117-F（序列3）：5’-TCATGCGTGCTAAGTGCTAA-3’（序列7和序列8的第1-20位）；

Xbarc117-R（序列4）：5’-GAGGGCAGGAAAAAGTGACT-3’（序列7的第196-215位的反向互补序列，序列8的第200-219位的反向互补序列）。

2、利用步骤1的引物检测小麦抗旱性的方法

（1）PCR扩增

以小麦基因组DNA为模板，采用引物对Xbarc56和引物对Xbarc117分别进行PCR。

反应体系（10μl）：1.0μL10×PCR buffer、50ng/μL DNA1.0μL、2.5mmol/L总dNTPs0.6μL、浓度为10μmol/L的正向引物（Xbarc56-F或Xbarc117-F）0.25μL、浓度为10μmol/L的反向引物（Xbarc56-R或Xbarc117-R）0.25μL、5U/μL Taq酶0.1μL。

采用引物对Xbarc56进行扩增的反应程序：94℃预变性5min；95℃变性40s；53℃退火40s，72℃延伸1min，共循环32次；最后72℃延伸8min。

采用引物对Xbarc117进行扩增的反应程序：94℃预变性5min；95℃变性40s；53℃退火40s，72℃延伸1min，共循环32次；最后72℃延伸8min。

反应结束后，PCR扩增产物以6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，缓冲体系为0.3×TBE溶液，2000V电压电泳1h，硝酸银染色显影后照相统计并保存。

（2）目标条带的测序与分析

（3）根据结果判定待测小麦的抗旱性

A.用引物对Xbarc56检测小麦抗旱性：若所述PCR产物中含有大小为101bp的DNA片段（序列5），则所述待测小麦为抗旱性强的小麦或候选为抗旱性强的小麦；若所述PCR产物中含有大小为117bp的DNA片段（序列6），则所述待测小麦为抗旱性弱的小麦或候选为抗旱性弱的小麦。

B.用引物对Xbarc117检测小麦抗旱性：若所述PCR产物中含有大小为215bp的DNA片段（序列7），则所述待测小麦为抗旱性强的小麦或候选为抗旱性强的小麦；若所述PCR产物中含有大小为219bp的DNA片段（序列8），则所述待测小麦为抗旱性弱的小麦或候选为抗旱性弱的小麦。

三、引物对Xbarc56和引物对Xbarc117用于检测小麦抗旱性的有效性验证

用引物对Xbarc56和引物对Xbarc117分别对表2中共65份小麦品种(系)进行了PCR分析，操作方法同步骤二。根据PCR扩增产物的电泳结果，参照步骤二2（3）中的结果判断标准对结果进行判断。

结果如表2所示（部分小麦品种(系)的变性聚丙烯酰胺凝胶检测结果如图1所示），从结果中可以看出：

1、在这65份小麦品种(系)中共有5份抗旱性等级为极强（HR）的品种，在用引物对Xbarc56进行PCR扩增时均得到了大小为101bp的目的条带（序列5），在用引物对Xbarc117进行PCR扩增时均得到了大小为215bp的目的条带（序列7）。在这65份小麦品种(系)中共有13份抗旱性等级为强（R）的品种，在用引物对Xbarc56进行PCR扩增时有11/13得到了大小为101bp的目的条带（序列5），另外2/13得到了大小为117bp的目的条带（序列6）；在用引物对Xbarc117进行PCR扩增时这11/13均得到了大小为215bp的目的条带（序列7），另外2/13得到了大小为219bp的目的条带（序列8）。在这65份小麦品种(系)中共有4份抗旱性等级为中等（MR）的品种，在用引物对Xbarc56进行PCR扩增时有2/4得到了大小为101bp的目的条带（序列5），另外2/4得到了大小为117bp的目的条带（序列6）；在用引物对Xbarc117进行PCR扩增时这2/4均得到了大小为215bp的目的条带（序列7），另外2/4得到了大小为219bp的目的条带（序列8）。在这65份小麦品种(系)中共有26份抗旱性等级为弱（S）的品种，在用引物对Xbarc56进行PCR扩增时有2/26得到了大小为101bp的目的条带（序列5），另外24/26得到了大小为117bp的目的条带（序列6）；在用引物对Xbarc117进行PCR扩增时有1/26得到了大小为215bp的目的条带（序列7），另外25/26得到了大小为219bp的目的条带（序列8）。在这65份小麦品种(系)中共有17份抗旱性等级为极弱（HS）的品种，在用引物对Xbarc56进行PCR扩增时均得到了大小为117bp的目的条带（序列6），在用引物对Xbarc117进行PCR扩增时也均得到了大小为219bp的目的条带（序列8）。可见，即随着小麦品种（系）抗旱性的降低，采用引物对Xbarc56和Xbarc117扩增出抗旱相应目的条带（序列5或序列7）的数量随之降低。

2、在65份小麦品种（系）中，采用引物对Xbarc56进行PCR扩增，能够得到大小为101bp的目的条带（序列5）的小麦品种（系）共有20份；在这20份小麦品种（系）中，有16份小麦品种（系）的抗旱性等级在中等（MR）以上（抗旱性等级为极强或强）；采用引物对Xbarc56进行PCR扩增，得到大小为117bp的目的条带（序列6）的小麦品种（系）共有45份；在这45份小麦品种（系）中，有41份小麦品种（系）的抗旱性等级在中等（MR）以下（抗旱性等级为极弱或弱）。即采用引物对Xbarc56进行PCR扩增能够得到101bp目的条带（序列5）的小麦品种（系）中有80%抗旱性等级在中等（MR）以上（抗旱性等级为极强或强）；采用引物对Xbarc56进行PCR扩增得到117bp目的条带（序列6）的小麦品种（系）中有91.1%抗旱性等级在中等（MR）以下（抗旱性等级为极弱或弱）。

3、在65份小麦品种（系）中，采用引物对Xbarc117进行PCR扩增，能够得到大小为215bp的目的条带（序列7）的小麦品种（系）共有19份；在这19份小麦品种（系）中，有16份小麦品种（系）的抗旱性等级在中等（MR）以上（抗旱性等级为极其强或强）；采用引物对Xbarc117进行PCR扩增，得到大小为219bp的目的条带（序列8）的小麦品种（系）共有46份；在这46份小麦品种（系）中，有42份小麦品种（系）的抗旱性等级在中等（MR）以下（抗旱性等级为极弱或弱）。即采用引物对Xbarc117进行PCR扩增能够得到215bp目的条带（序列7）的小麦品种（系）中有84.2%抗旱性等级在中等（MR）以上（抗旱性等级为极强或强）；采用引物对Xbarc117进行PCR扩增得到219bp目的条带（序列8）的小麦品种（系）中有91.3%抗旱性等级在中等（MR）以下（抗旱性等级为极弱或弱）。

4、在65份小麦品种（系）中，采用引物对Xbarc56进行PCR扩增，能够得到大小为101bp的目的条带（序列5），同时采用引物对Xbarc117进行PCR扩增，能够得到大小为215bp的目的条带（序列7）的小麦品种（系）共有18份；在这18份小麦品种（系）中，有16份小麦品种（系）的抗旱性等级在中等（MR）以上（抗旱性等级为极强或强）；采用引物对Xbarc56进行PCR扩增得到117bp的目的条带（序列6），同时采用引物对Xbarc117进行PCR扩增得到219bp的目的条带（序列8）的小麦品种（系）共有44份；在这44份小麦品种（系）中，有40份小麦品种（系）的抗旱性等级在中等（MR）以下（抗旱性等级为极弱或弱）。即采用引物对Xbarc56和Xbarc117分别进行PCR扩增能够同时得到101bp目的条带（序列5）和215bp目的条带（序列7）的小麦品种（系）中有88.9%抗旱性等级在中等（MR）以上（抗旱性等级为极强或强）；采用引物对Xbarc56和Xbarc117进行PCR扩增能够同时得到117bp目的条带（序列6）和219bp目的条带（序列8）的小麦品种（系）中有90.9%抗旱性等级在中等（MR）以下（抗旱性等级为极弱或弱）。

Claims

1.引物对组在检测小麦抗旱性中的应用；

所述引物对组，由如下引物对A和引物对B组成：

所述引物对A为由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对；所述引物对B为由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对。

2.一种检测小麦抗旱性的方法，包括如下步骤：

(c1)以待测小麦的基因组DNA为模板，以引物对A和引物对B分别进行PCR扩增，获得PCR产物；

所述引物对A为由序列表中序列1所示的单链DNA和序列2所示的单链DNA组成的引物对；所述引物对B为由序列表中序列3所示的单链DNA和序列4所示的单链DNA组成的引物对；

(c2)检测步骤(c1)所得PCR产物的大小，按照如下方法确定所述待测小麦的抗旱性：若采用所述引物对A扩增所得PCR产物中含有大小为101bp的DNA片段，且采用所述引物对B扩增所得PCR产物中含有大小为215bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性强的小麦或候选为抗旱性强的小麦；若采用所述引物对A扩增所得PCR产物中含有大小为117bp的DNA片段，且采用所述引物对B扩增所得PCR产物中含有大小为219bp的DNA片段，则所述待测小麦为抗旱性弱的小麦或候选为抗旱性弱的小麦。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述大小为101bp的DNA片段为序列表中序列5所示DNA片段；所述大小为117bp的DNA片段为序列表中序列6所示DNA片段；所述大小为215bp的DNA片段为序列表中序列7所示DNA片段；所述大小为219bp的DNA片段为序列表中序列8所示DNA片段。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：以所述引物对A进行PCR扩增的退火温度为53℃；以所述引物对B进行PCR扩增的退火温度为53℃。

5.引物对组在如下(I)-(IV)中的应用：

(I)筛选抗旱性强的小麦品种；

(II)筛选抗旱性弱的小麦品种；

(III)培育抗旱性强的小麦品种；

(IV)培育抗旱性弱的小麦品种；

所述引物对组，由如下引物对A和引物对B组成：

6.权利要求2-4中任一所述方法在如下(I)-(IV)中的应用：

(I)筛选抗旱性强的小麦品种；

(II)筛选抗旱性弱的小麦品种；

(III)培育抗旱性强的小麦品种；

(IV)培育抗旱性弱的小麦品种。

7.培育抗旱性强的小麦品种的方法，包括采用通过权利要求2-4中任一所述方法检测得到的所述抗旱性强的小麦品种作为亲本进行育种的步骤。

8.培育抗旱性弱的小麦品种的方法，包括采用通过权利要求2-4中任一所述方法检测得到的所述抗旱性弱的小麦品种作为亲本进行育种的步骤。