CN103446294A - 一种九里香提取物的制备方法及该方法得到的九里香提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提出了一种九里香提取物的制备方法，以九里香的茎叶为原料，经特定的提取纯化工艺制得提取物，保留了原有药材的有效成分，且去除了杂质，药效优于原提取物及其它工艺部位。进一步添加新型进口非离子表面活性剂为辅料将其制成制剂，保存，携带方便，尤其含漱剂，口感好，作用时间长，稳定性良好，本发明还提出了一种有该方法制备的九里香提取物及其应用。

Description

一种九里香提取物的制备方法及该方法得到的九里香提取物及其应用

技术领域

本发明涉及药物领域，特别是指一种九里香提取物的制备方法，本发明还涉及由该方法制得的九里香提取物，以及该提取物的应用。 

背景技术

九里香（Murrayae folium ET Cacumen）为芸香科九里香属植物，主要分布在云南、贵州、湖南、广东、广西、福建、海南、中国台湾等地，是一种常用的中草药。现代药理研究证明，九里香具有抗菌、消炎、镇痛、解痉、局麻及增强免疫力等作用【黄光伟等，HPLC法测定牙膏中九里香酮的含量，口腔护理用品工业，2010，vol20（2），53～55】，在临床上主要用于胃脘疼痛、跌打肿痛、牙痛等。 

口腔粘膜炎是指口腔的炎症性和溃疡性反应，它是恶性肿瘤化疗较为常见而严重的并发症之一，其症状通常在化疗开始后5～7天发生，发生率高达50%～80%，给患者造成身心痛苦，使患者对治疗失去信心。严重的口腔粘膜炎可引起疼痛、溃疡、感染和出血，影响患者进食，甚至导致治疗计划中断。目前治疗化疗后口腔溃疡的方法有：预防措施、药物治疗、理化治疗等，预防措施如冷开水漱口对化疗所致的口腔粘膜炎有一定的防治作用,但效果不佳，理化治疗对身体有一定伤害存在较大的副作用，药物治疗是副作用最小，相对安全有效的治疗方法。 

九里香提取物在临床上治疗口腔溃疡的应用方法主要是：取鲜九里香15克，洗净捣烂后水煎，一日多次含漱，或者将其制备成牙膏及漱口液。但以上方法提取物工艺粗糙，药效成分不明，质量难以控制，作用时间短，在一定程度上影响了疗效，仅能作为日常的口腔护理保健使用，且对恶性肿瘤化疗患者针对性不强，从而限制了九里香提取物在治疗由恶性肿瘤化疗引起的口腔病变上的应用。 

发明内容

本发明的目的之一是提出一种九里香提取物的制备方法，操作方法简单，并能够得到一种安全有效的九里香提取物。 

本发明的另一目的是提出了该九里香提取物在制剂方面的应用，及其在制备预防和治疗由恶性肿瘤化疗引起的口腔病变的药物、消毒产品以及保健用品中的应用，以弥补现有技术的不足。 

本发明的技术方案是这样实现的：一种九里香提取物的制备方法，包括以下步骤： 

（1）取九里香茎叶1～10kg，加水提取； 

（2）水提取液减压浓缩至0.05～2g/ml； 

（3）边搅拌边加入95%（V/V）乙醇，醇沉48小时； 

（4）取上清液，回收乙醇并减压浓缩至1～5g/ml，放冷，浓缩液加水稀释； 

（5）过滤，滤液上大孔树脂柱吸附，然后用大孔树脂量3～6倍体积的水洗脱，洗脱液浓缩至2～5g/ml，即得到成品。 

进一步，步骤（1）中，水温为50-100℃。 

进一步，步骤（3）中，加入乙醇的量达到50-90%（V/V）。 

进一步，步骤（5）中，树脂与滤液的质量比为1：:05～4。 

进一步，步骤（5）中，所述树脂为聚苯乙烯型打孔吸附树脂。 

一种九里香提取物，所述九里香提取物采用上述所述九里香提取物的制备方法制得。 

所述九里香提取物在含漱剂、凝胶剂、喷雾剂中的应用。 

进一步，所述含漱剂包括以下组分比例及制备步骤： 

I、取0.1～0.2份尼泊金乙酯钠、0.1～0.2份甜蜜素、0.1～0.3份甘草酸二钾溶于5～20份纯化水，得溶液1。 

II、取2～5份泊洛沙姆407，加入5～10份75%乙醇、5～10份丙二醇，搅拌溶解，再加入0.1～0.3份三氯新、0.03～0.08份薄荷脑，得溶液2。 

III、将溶液1加入溶液2中，搅拌至均匀透明。 

IV、加入10～25份九里香提取物，加水至全量，搅匀，经0.45um滤膜过滤。 

V、中间产品检验合格后，灌封，得到成品。 

进一步，所述凝胶剂包括以下组分比例及制备步骤： 

取3～7份木糖醇、0.005～0.02份甘草酸二钾、0.01～0.04份依地酸二钠、0.05～0.2份卡拉胶和0.1～0.5份卡波姆固体粉末混匀，用处方量30～80份的水溶解，再加入10～25份九里香提取物、3～7份甘油、3～7份丙二醇的混合溶液，搅拌均匀，用氢氧化钾以及磷酸溶液调节pH至6～9，抽真空，脱气，得到成品。 

进一步，所述喷雾剂包括以下组分比例及制备步骤： 

取10～25份九里香提取物加适量注射用水，加入0.45～0.9份氯化钠、0.05～0.15份羟苯甲酯、0.01～0.04份羟苯乙酯、0.01～0.03份羟苯丙酯搅拌使之溶解，用氢氧化钠调pH至6～9，滤过，加注射用水至全量，于115℃高压蒸汽灭菌30分钟，无菌分装于塑料喷雾瓶中即得。 

本发明的有益效果为：本发明以九里香的茎叶为原料，经特定的提取纯化工艺制得提取物，保留了原有药材的有效成分，且去除了杂质，药效优于原提取物及其它工艺部位。进一步添加新型进口非离子表面活性剂为辅料将其制成制剂，保存，携带方便，尤其含漱剂，口感好，作用时间长，稳定性良好。将它应用于由恶性肿瘤化疗引起的口腔病变，无需特殊设备，无需医护人员协助，患者可以独立使用，使用非常方便。 

经检测，所述九里香提取物，其水溶液PH4-6，其中包括：月橘烯碱、咔巴唑生物碱、香豆素、黄酮类化合物、挥发油等。 

具体实施方式

为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。 

根据本发明提供的方法，发明人进行如下操作： 

一种九里香提取物的制备方法，包括以下步骤： 

（1）取九里香茎叶10kg，加水提取，水温为100℃； 

（2）水提取液在75℃下减压浓缩至1g/ml； 

（3）边搅拌边加入95%（V/V）乙醇，醇沉48小时，加入乙醇的量达到80%（V/V）； 

（4）取上清液，回收乙醇并减压浓缩至4g/ml，放冷，浓缩液加水稀释； 

（5）过滤，滤液上大孔树脂柱吸附，树脂与滤液的质量比为1:05～4，树脂为聚苯乙烯型打孔吸附树脂，本实施例中采用的为D101，然后用大孔树脂量5倍体积的水洗脱，吸附30min，洗脱液浓缩至4g/ml，即得到九里香提取物。 

通过以上方法得到的该九里香提取物，其水溶液PH4-6，其中包括：月橘烯碱、咔巴唑生物碱、香豆素、黄酮类化合物、挥发油等。 

九里香提取物在含漱剂、凝胶剂、喷雾剂中的应用。 

进一步，发明人根据以下组分比例及制备步骤制得含漱剂： 

I、取0.15g尼泊金乙酯钠、0.2g甜蜜素、0.2g甘草酸二钾溶于15g纯化水，得溶液1。 

II、取4g泊洛沙姆407，加入8g75%乙醇、8g丙二醇，搅拌溶解，再加入0.2g三氯新、0.06g薄荷脑，得溶液2。 

III、将溶液1加入溶液2中，搅拌至均匀透明。 

IV、加入20g九里香提取物，加水至全量，搅匀，经0.45um滤膜过滤。 

V、中间产品检验合格后，灌封，得到含漱剂成品。 

进一步，发明人根据以下组分比例及制备步骤制得凝胶剂： 

取7g木糖醇、0.015g甘草酸二钾、0.03g依地酸二钠、0.1g卡拉胶和0.4g卡波姆固体粉末混匀，用处方量30～80g的水溶解，再加入20g九里香提取物、5g甘油、6g丙二醇的混合溶液，搅拌均匀，用5%的氢氧化钾以及1%的磷酸溶液调节pH至7，抽真空，脱气，得到凝胶剂成品。 

进一步，发明人根据以下组分比例及制备步骤制得喷雾剂： 

取25g九里香提取物加适量注射用水，加入0.7g氯化钠、0.1g羟苯甲酯、0.03g羟苯乙酯、0.03g羟苯丙酯搅拌使之溶解，用氢氧化钠调pH至7，滤过，加注射用水至全量，于115℃高压蒸汽灭菌30分钟，无菌分装于塑料喷雾瓶中即得喷雾剂成品。 

发明人根据以上方法步骤制得的产品进行测试，得到如下结果： 

本发明的九里香提取物、制剂，采用特定的优选提取工艺，保留了原药材的有效成分，并去除了杂质，药效优于原提取物及其他工艺部位，并采用新型辅料泊洛沙姆407制得的制剂尤其含漱剂口感好、作用时间延长、稳定性良好。 

对此，发明人进行的抑菌稳定性的试验，试验过程及数据如表1所示： 

表1：抑菌稳定性试验结果 

通过以上数据可以得出结论：该产品对大肠杆菌有较强抑菌作用，且抑菌作用在室温下至少保持1年。 

动物实验表明，九里香提取物在采用了醋酸致痛小鼠扭体试验及热板试验中，表现出一定的镇痛作用，说明其具有一定的外周镇痛及中枢镇痛作用。在采用了角叉菜胶所致足肿胀及二甲苯所致耳肿胀的动物模型中，能有效抑制以上肿胀，说明其对炎症早期的渗出、水肿具有一定的抑制作用。【吴龙火等，九里香叶的抗炎镇痛作用研究，湖北农业科学，2011，vol.50（21），4435～4437】 

进一步，发明人还对该九里香含漱剂对口腔内的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑制作用做了试验，过程及数据如表2所示： 

表2：抑菌试验结果 

抑菌实验表明，本发明的九里香口腔含漱液对口腔内金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有较强的抑菌作用，并且，其抑菌作用也不只限于以上两种，包括白假丝酵母菌等均受到有效的抑制。 

同时，为了验证本发明得到的产品的安全性，发明人还进行了如下安全性试验，过程及步骤如下： 

1、多次皮肤刺激试验 

1.1 材料和动物 

1.1.1 受试物：九里香口腔含漱液，无色液体，200mL/瓶，生产日期/批号为090501。 

以样品原液进行试验。 

1.1.2 实验动物：新西兰兔，由广东省医学实验动物中心提供，体重范围2.6～3.0kg。生产许可证号：SCXK（粤）2008-0002号，质量合格证号：0050397。饲料来源：由广东省医学实验动物中心提供。 

1.1.3 实验环境条件：实验动物使用许可证号:SYXK（琼）2005-0004。动物实验室温度:20.0～24.0℃，湿度：63～69%。 

1.2 方法： 

1.2.1 依据：GB15979-2002、卫生部《消毒技术规范》（2002年版）第二部分2. 

3.3。 

1.2.2 实验前2处，在兔子背部脊柱两侧剪毛，不得损伤皮肤。去毛范围左、右各约3cm×3cm。将样品原液0.5mL直接涂在面积为2.5cm×2.5cm的一侧去毛完整皮肤上，另一侧去毛完整皮肤以蒸馏水作为对照，进行同样操作。每次涂抹4h后，用温水除去残留受试物。每天涂抹一次，连续14天。在每次涂抹后24h观察涂抹部位皮肤反应，按卫生部《消毒技术规范》（2002年版）第二部分2.3.3中表2-11进行皮肤刺激反应评分。按公式计算每天每只动物平均积分（刺激指数），按《消毒技术规范》（2002年版）第二部分2.3.3中表2-12进行刺激强度评定。每天每只动物平均积分=E(受试动物14d的红斑和水肿总积分)/(受试动物数×14) 

1.3 试验结果：受试物接触动物皮肤后，1只动物涂抹部位皮肤第8d至实验结束出现勉强可见红斑，未见水肿，其它动物未见红斑和水肿，无其它中毒反应。每天每只动物平均积分为0.2，皮肤刺激强度分级属无刺激性，结果如表3所示。 

表3 受试物对兔子多次皮肤刺激试验结果 

1.4 小结：受试物多次接触动物后，每天每只动物平均积分为0.2，皮肤刺激强度分级属无刺激性。 

2、皮肤变态反应试验(局部封闭涂皮试验） 

2.1 材料与动物 

2.1.1 受试样品：九里香口腔含漱液，无色液体，200mL/瓶，生产日期/批号为090501。以此作为受试物进行实验。 

2.1.2 实验动物：普通级Hartely豚鼠48只，体重250g～300g，雌雄各半。由广东省医学实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK(粤）2008-0002，质量合格证号：0050396。饲料来源：由广东省医学实验动物中心提供。 

2.1.3 实验环境条件：实验动物使用许可证号:SYXK(琼）2005-0004。动物实验室温度：22.0～24.0℃，湿度：62～70%。 

2.2 方法 

2.2.1 依据:GB15979-2002、卫生部《消毒技术规范》（2002年版）第二部分2.3.6。 

2.2.2 受试物配制：诱导接触和激发接触均使用样品原液。阳性物：2，4-二硝基氯代苯，诱导接触浓度和激发接触浓度分别为1%和0.5%。诱导接触前称取阳性物0.15g,以丙酮麻油混合液（按容积1:1配制）为溶剂加至15.0mL作为诱导 接触受试物。激发接触时称取阳性物0.10g，以丙酮麻油混合液（按容积1:1配制）为溶剂加至20.0mL，作为激发接触受试物。 

2.2.3 将实验豚鼠随机分成试验组、阴性对照组和阳性对照组，每组16只，雌雄各半。试验组：诱导接触前24h将豚鼠背部左侧去毛3cm×3cm范围，取受试物0.5mL，滴于2cm×2cm的4层纱布上，敷贴于豚鼠背部3cm×3cm的去毛区皮肤上，以一层无刺激塑料膜覆盖，无刺激胶布固定，6h后除去受试物；第7d和第14d以同样方法重复一次；激发接触为末次诱导后14d，将受试物组豚鼠背部右侧脱毛约3cm×3cm范围，取受试物0.5mL滴于2cm×2cm的4层纱布上，敷贴于豚鼠背部3cm×3cm的去毛区皮肤上，以一层无刺激塑料膜覆盖，无刺激胶布固定，6h后除去受试物。阴性对照组：仅以样品原液对动物给予受试物的激发接触。阳性对照组：用2，4-二硝基氯代苯替代受试物，操作程序同试验组。24h和48h后观察皮肤反应，按皮肤反应评分标准评分，将出现皮肤反应积分>1的动物，除以该组实验动物数，求得致敏率（％），再按致敏强度分级标准进行致敏强度评定。 

2.3 试验结果给予受试物激发接触后24h与48h，试验组与阴性对照组豚鼠皮肤未见红斑和水肿，致敏率为0%。阳性对照组豚鼠给予阳性物激发接触后24h与48h皮肤出现勉强可见红斑，明显红斑及勉强可见水肿，积分多1的动物数为14只，致敏率为88%。实验期间各组动物进食与活动正常，未见其它中毒反应。各组动物的皮肤反应强度见表4。 

表4 豚鼠皮肤变态反应试验结果 

注：皮肤红斑反应强度和水肿反应强度，即为在皮肤反应积分为0、1、2、3、4的条件下的动物数比例。 

通过以上安全性实验表明，本发明的九里香口腔含漱液对皮肤刺激强度分级属于无刺激性，对实验豚鼠的皮肤致敏率为0%，未见皮肤变态反应。本发明的九里香口腔含漱液中采用了新型进口非离子表面活性剂泊洛沙姆407作为药物缓释载体，与九里香提取物结合既不改变其流变学特性，又能延长九里香提取物的抑菌、镇痛及消炎作用，与普通含漱剂相比，其具有特殊的反向热胶凝作用，即低温时（4～5℃）液体，在口腔的温度下形成为凝胶，并粘附于口腔溃疡的创面上，形成保护性胶液膜，能明显抑制口腔内金黄色葡萄球菌等有害细菌的粘附作用，同时大大减轻食物对伤口裸露的神经末梢的刺激而引起的疼痛，从而缓解疼痛和由于疼痛引起的进食困难。尤其适用于预防治疗口腔局部感染。 

可见，本发明的九里香提取物及其制剂药效明显优于现有技术的九里香提取物及制剂，可应用于制备预防和治疗由恶性肿瘤化疗引起的口腔病变药物、消毒产品及日常保健用品。 

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。 

Claims (10)

1.一种九里香提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取九里香茎叶1～10kg，加水提取；

（2）水提取液减压浓缩至0.05～2g/ml；

（3）边搅拌边加入95%（V/V）乙醇，醇沉48小时；

（4）取上清液，回收乙醇并减压浓缩至1～5g/ml，放冷，浓缩液加水稀释；

（5）过滤，滤液上大孔树脂柱吸附，然后用大孔树脂量3～6倍体积的水洗脱，洗脱液浓缩至2～5g/ml，即得到成品。

2.如权利要求1中所述九里香提取物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，水温为50-100℃。

3.如权利要求1中所述九里香提取物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，加入乙醇的量达到50-90%（V/V）。

4.如权利要求1中所述九里香提取物的制备方法，其特征在于：步骤（5）中，树脂与滤液的质量比为1:05～4。

5.如权利要求1中所述九里香提取物的制备方法，其特征在于：步骤（5）中，所述树脂为聚苯乙烯型打孔吸附树脂。

6.一种九里香提取物，其特征在于：所述九里香提取物采用权利要求1-5中任一所述九里香提取物的制备方法制得。

7.权利要求6中所述九里香提取物在含漱剂、凝胶剂、喷雾剂中的应用。

8.如权利要求7中所述九里香提取物在含漱剂、凝胶剂、喷雾剂中的应用，其特征在于：所述含漱剂包括以下组分比例及制备步骤：

I、取0.1～0.2份尼泊金乙酯钠、0.1～0.2份甜蜜素、0.1～0.3份甘草酸二钾溶于5～20份纯化水，得溶液1。

II、取2～5份泊洛沙姆407，加入5～10份75%乙醇、5～10份丙二醇，搅拌溶解，再加入0.1～0.3份三氯新、0.03～0.08份薄荷脑，得溶液2。

III、将溶液1加入溶液2中，搅拌至均匀透明。

IV、加入10～25份九里香提取物，加水至全量，搅匀，经0.45um滤膜过滤。

V、中间产品检验合格后，灌封，得到成品。

9.如权利要求7中所述九里香提取物在含漱剂、凝胶剂、喷雾剂中的应用，其特征在于：所述凝胶剂包括以下组分比例及制备步骤：

取3～7份木糖醇、0.005～0.02份甘草酸二钾、0.01～0.04份依地酸二钠、0.05～0.2份卡拉胶和0.1～0.5份卡波姆固体粉末混匀，用处方量30～80份的水溶解，再加入10～25份九里香提取物、3～7份甘油、3～7份丙二醇的混合溶液，搅拌均匀，用氢氧化钾以及磷酸溶液调节pH至6～9，抽真空，脱气，得到成品。

10.如权利要求7中所述九里香提取物在含漱剂、凝胶剂、喷雾剂中的应用，其特征在于：所述喷雾剂包括以下组分比例及制备步骤：

取10～25份九里香提取物加适量注射用水，加入0.45～0.9份氯化钠、0.05～0.15份羟苯甲酯、0.01～0.04份羟苯乙酯、0.01～0.03份羟苯丙酯搅拌使之溶解，用氢氧化钠调pH至6～9，滤过，加注射用水至全量，于115℃高压蒸汽灭菌30分钟，无菌分装于塑料喷雾瓶中即得。