CN103436547A - 一种具有草甘膦耐性的基因及其应用 - Google Patents

一种具有草甘膦耐性的基因及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103436547A
CN103436547A CN2013103967623A CN201310396762A CN103436547A CN 103436547 A CN103436547 A CN 103436547A CN 2013103967623 A CN2013103967623 A CN 2013103967623A CN 201310396762 A CN201310396762 A CN 201310396762A CN 103436547 A CN103436547 A CN 103436547A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ala
val
gly
leu
thr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2013103967623A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103436547B (zh
Inventor
强胜
毛婵娟
陈世国
戴伟民
宋小玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Agricultural University
Original Assignee
Nanjing Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Agricultural University filed Critical Nanjing Agricultural University
Priority to CN201310396762.3A priority Critical patent/CN103436547B/zh
Priority to US15/109,580 priority patent/US9926573B2/en
Priority to PCT/CN2013/001039 priority patent/WO2014036806A1/zh
Publication of CN103436547A publication Critical patent/CN103436547A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103436547B publication Critical patent/CN103436547B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8274—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for herbicide resistance
    • C12N15/8275—Glyphosate
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1085—Transferases (2.) transferring alkyl or aryl groups other than methyl groups (2.5)
    • C12N9/1092—3-Phosphoshikimate 1-carboxyvinyltransferase (2.5.1.19), i.e. 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/22—Vectors comprising a coding region that has been codon optimised for expression in a respective host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种具有草甘膦耐性的基因及其应用。该基因的核苷酸序列为SEQIDNO：1、SEQIDNO：3或SEQIDNO：5及其保持抗草甘膦活性的突变基因，以及编码的蛋白质氨基酸序列分别为SEQIDNO：2、SEQIDNO：4或SEQIDNO：6及其在第280到294位的保守区1、第416到433位的保守区2中氨基酸突变，利用该来自于植物的具有草甘膦耐性的基因及其突变制备抗/耐草甘膦植株，可以明显的显示出抗/耐草甘膦效果，这为培育抗/耐草甘膦除草剂作物提供了新的选择，增加抗/耐草甘膦除草剂转基因技术的多样性，从而降低了抗/耐除草剂转基因技术的生态风险。

Description

一种具有草甘膦耐性的基因及其应用
技术领域
    本发明属于植物分子生物学与植物遗传工程领域，具体地说，本发明涉及一种植物源抗/耐草甘膦基因以及该基因编码的蛋白质，并且对其进行人工改造，提供一种人工突变获得高抗草甘膦基因突变体的方法以及基因突变后获得的植物源高抗/耐草甘膦基因。通过遗传转化的方法使该基因在植物中表达而使植物获得对草甘膦的抗性能力，从而可以利用草甘膦于作物田间选择性地防除杂草。本发明也可以运用在作物育种、植物细胞培养的筛选。
背景技术
自从1946年开始使用2,4-D，化学除草剂已走过60多年的历程，为全球粮食生产和农业现代化做出了巨大贡献（Powels and Yu, 2010）。其中草甘膦（N-（膦羧基甲基）甘氨酸）是迄今为止最为重要、应用最为广泛和最优秀的除草剂（Duke and Powles, 2008）。自1974年美国孟山都公司开发草甘膦以来，由于其具有广谱、低毒、安全、无土壤残留的特点，迅速占据了世界除草剂的主导地位。草甘膦毒性作用机理主要是竟争性抑制EPSP合酶即5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合酶(EPSPS)，该酶广泛存在于真菌、细菌、藻类、高等植物体内，但不存在于动物体内。草甘膦是磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的类似物，二者的分子式极为相似，它能与PEP竞争性结合EPSP合酶，形成EPSP合酶·3-磷酸莽草酸(S3P)·草甘膦的复合物，阻断EPSP的合成，从而阻断芳香族氨基酸的合成，导致植物死亡。而草甘膦无选择性地杀死作物和杂草，限制了它在农业生产上的使用，同时也给农业生产带来了巨大的损失。自1996开始，抗草甘膦转基因作物（如大豆、玉米、棉花和油菜）研制和商业化，才使得草甘膦被广泛应用于农作物田杂草的防除（Powles, 2008）。目前，草甘膦已成为生产量最大的农药品种，占全球农药市场的近20％，年销售超过20亿美元。许多研究者通过多种方法来选育抗草甘膦的作物新品种。
目前通过基因工程培育抗草甘膦植物是最有效的获取抗性作物的手段。基因工程方法多采用细菌来源的抗性 EPSP 合成酶基因，该基因的产物与草甘膦结合活性下降而不能被其竞争抑制，保证了植物芳香族氨基酸的正常合成。常用的抗性基因来源有鼠沙门氏菌、根癌农杆菌、大肠杆菌、假单胞菌等。许多研究者利用这些抗性基因，采用基因工程的方法获得了表达细菌 EPSP 合成酶的转基因植物表现对草甘膦的抗性（Sost and Amrherin, 1990; Blackburn and Boutin, 2003; Maskell, 1998; Gallo and Irvine, 1996; Zhou et al., 1995; Mannerlof et al., 1997; Penaloza et al., 1995; Zboinska et al., 1992），其中转基因抗草甘膦大豆已在美国、巴西等国家大面积栽种。但这些来源于细菌的抗性基因作物作为食品或食品原料，其安全性一直是争论的焦点。
在植物中也发现了由于EPSP合酶单个氨基酸位点突变造成其对草甘膦具有抗药性。牛筋草（Eleusine indica）对草甘膦的抗性提高了8～12倍，在于其EPSPS第106位脯氨酸变成了丝氨酸或苏氨酸（Pro106Ser/Thr）（Baerson et al.., 2002; Ng et al., 2003)；抗草甘膦的瑞士黑麦草（Lolium rigidum）不同种群的EPSPS的106位脯氨酸有2种不同突变，被苏氨酸或丙氨酸取代（Pro106Thr/Ala）（Wakelin and Preson, 2006; Yu et al., 2007）；EPSP合酶第182位氨基酸由脯氨酸（P）变成了丝氨酸（S）是多花黑麦草（Lolium multiflorum）种群的草甘膦抗性机制之一（González-Torralva, 2012）。通过这些有效位点的基因突变，降低了EPSPS对草甘膦的亲和性，从而增强了杂草对草甘膦的抗性。
同时，对抗草甘膦杂草 EPSPS 基因研究证实，杂草对草甘膦的抗药性大多是由氨基酸突变造成的极性变化所致。抗草甘膦牛筋草和瑞士黑麦草EPSPS 编码基因 106 位非极性脯氨酸分别突变为极性丝氨酸和苏氨酸(Baerson, 2002; Wakelin and Preston, 2006)；抗草甘膦瑞士黑麦草和田旋花 EPSPS 基因的 101 位分别由非极性脯氨酸和非极性苯丙氨酸突变为极性丝氨酸(Simarmata and Penner, 2008; Zhang et al., 2011)。氨基酸极性的改变，可能会影响EPSP合酶与草甘膦的亲和性。
孟山都公司已经对抗草甘膦牛筋草的EPSPS基因申请了专利保护。但是为了提高转基因农作物的抗性水平和增加抗性基因的多样性，生产应用中仍然需要新的抗/耐草甘膦基因和以此为基础的抗/耐草甘膦植物。相对于细菌等来源的抗草甘膦基因，植物来源的进化抗性或天然抗性基因，在培育抗/耐草甘膦除草剂作物后的生态环境和食品安全风险要低于其它生物类别的异源基因，提高民众心理的认可。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，提供一种基于自然界的植物天然耐性为基础，经过前期对大量植物进行的草甘膦耐性筛选得到的新的抗/耐草甘膦基因，并且对其进行改良得到一系列突变基因，利用这些基因可以用来产生转基因抗草甘膦植物，也可作为植物细胞培育中的筛选标记。
为了达到上述目的，本发明提供了三种具有草甘膦耐性的基因（LS-EPSPS）LsEPSPS1、 LsEPSPS2和LsEPSPS3，核苷酸序列分别为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5。
本发明还提供了一种抗/耐草甘膦蛋白质多肽，该抗/耐草甘膦蛋白质多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6或与上述氨基酸序列相比具有不小84%相同性的氨基酸序列。
SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6分别表示为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5编码的氨基酸序列。这三种氨基酸序列均包含四个特异性位点，麦冬中为144m，184i，232a以及273m，土麦冬和阔叶土麦冬中为146m，186i，234a以及275m，相当于大肠杆菌EPSP合酶氨基酸序列中70、107、153以及192位。
氨基酸序列SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：6表示的蛋白质多肽包括信号肽和成熟蛋白两部分。
本发明还提供一种通过突变获得保持有抗草甘膦能力的突变基因的方法，该方法包括以下步骤：
（1）获得突变基因，所述突变基因编码的蛋白质氨基酸序列SEQ ID NO：7（此序列为SEQ ID NO:4去除信号肽后的氨基酸序列）的第280到294位（保守区1）和第416到433位（保守区2）氨基酸序列至少各发生一个氨基酸突变；
（2）然后通过草甘膦筛选突变基因，从而选择高抗草甘膦的突变基因。
其中突变基因采用易错倾向PCR、定点突变、人工合成技术或者其他基因突变技术获得。
通过上述方法，本发明提供了一种具有草甘膦耐性的基因，基因编码的蛋白质的氨基酸序列在SEQ ID NO：7的第280到294位的保守区1、第416到433位的保守区2中至少各发生一个氨基酸突变。特别在保守区1和保守区2个至少引入1个或者1个以上如下位点的特变: 保守区1：1)第284位赖氨酸；2)第285位苯丙氨酸；3)第289位亮氨酸；保守区2：1)第416位缬氨酸；2)第421位精氨酸；3)第422位天冬氨酸；4)第424位甘氨酸；5)第425位半胱氨酸。
本发明同时也提供一种抗草甘膦的突变基因，其编码的蛋白质在以下两个保守区域至少各发生一个氨基酸突变。保守区1：1)第284位氨基酸由赖氨酸变为精氨酸；2)第285位氨基酸由苯丙氨酸变为酪氨酸；3)第289位氨基酸由亮氨酸变为组氨酸；保守区2：1)第416位氨基酸由缬氨酸变为谷氨酸；2)第421位氨基酸由精氨酸变为甘氨酸；3)第422位氨基酸由天冬氨酸变为缬氨酸；4)第424位氨基酸由甘氨酸变为半胱氨酸；5)第425位氨基酸由半胱氨酸变为酪氨酸。
本发明进一步提供一种具有草甘膦耐性的蛋白质，其第280到294位的氨基酸序列为SEQ ID NO:8-SEQ ID NO:14中的任意一种，第280到294位的氨基酸序列为SEQ ID NO:15-SEQ ID NO:28中的任意一种。
本发明还提供了一种具有草甘膦耐性的蛋白质，该蛋白质的氨基酸序列为 SEQ ID NO：29-SEQ ID NO：52中的任意一种。
本发明还提供了核苷酸序列为编码上述蛋白质多肽的基因。
利用上述具有草甘膦耐性基因的核酸序列，可以用来人工引入一个或多个变异，然后通过草甘膦筛选变异分子，而获得保持有抗/耐草甘膦能力的变异分子。例如利用低保真PCR的方法可以产生很多LSEPSPS的变异分子，而这些变异分子可以通过草甘膦筛选获得继续保持或增强有抗/耐草甘膦能力的变异分子。上述具有抗/耐草甘膦的LS-EPSPS基因LsEPSPS1、 LsEPSPS2和LsEPSPS3及其获得的保持有草甘膦耐性的突变基因LSE-EPSPS统称为抗/耐草甘膦基因（LSEPSPS）。
本发明还提供了能够与上述蛋白质多肽结合的抗体。
利用本发明的基因编码的氨基酸序列，可设计和人工添加信号肽序列以有利于在植物中的表达。
利用本发明的基因编码的氨基酸序列，可以设计和人工合成密码子优化的有利于在植物中表达的核酸序列。例如Campbell和Gowri（1990）的报道（Plant Physiology,92:1-11）。
本发明还提供了一种包含上述抗/耐草甘膦基因的表达载体，所述表达载体为原核表达载体或植物转化质粒。
构建包含表达构件的原核表达载体时，表达构件包括启动子和抗/耐草甘膦基因，载体质粒可以是PET系列、pMAL-p2X或pRSET-A等。在原核生物表达系统中，启动子可以是T7噬菌体启动子或者lac (乳糖启动子)、trp (色氨酸启动子)、PL和PR(λ噬菌体的左向和右向启动子)以及tac（乳糖和色氨酸的杂合启动子)等强启动子。
利用上述抗/耐草甘膦基因进一步构建包含表达构件的植物转化质粒时，表达构件包括启动子，带有叶绿体信号肽的抗/耐草甘膦基因和终止子。在转化单子叶植物时启动子可以是玉米Ubiqutin启动子，或者水稻Actin启动子，或者其他启动子。而终止子可以是根据根癌农杆菌终止子或者其他终止子。抗/耐草甘膦的LSE-EPSPS基因在5’端连接一个在同一个表达阅读框内表达的编码信号肽的DNA片段，这个信号肽可以引导LSEPSPS蛋白质进入叶绿体。这个信号肽可以是Rubisco 的亚基的信号肽（de castro Silva Filho 1996 Plant Mol . Biol . 30 : 767 一780 ) ，或者植物EPSPS 信号肽（Archer 1990 J . Bioenerg．Biomemb . 22 ( b ) : 789 一8 10 ），或者其他能使EPSPS发挥功能的信号肽，或者无信号肽。这个表达构件可以通过农杆菌（ 如Agrobacterium菌株LAB 4404 ）转入整合到植物的基因组中，稳定遗传和表达。
本发明还提供了包含上述抗/耐草甘膦基因的植物细胞，以及包含该植物细胞的抗/耐草甘膦植株。
本发明还提供了上述抗/耐草甘膦基因在制备抗/耐草甘膦植株方面的用途，以及上述抗/耐草甘膦基因作为植物转基因筛选标记的用途。
利用抗/耐草甘膦基因制备抗/耐草甘膦植株，可通过含有LSEPSPS表达构件的植物转化质粒获得。植物转化的方法和步骤各种植物有所不同，同种植物不同的品种也可能有所不同。但是植物转化的技术和方法是已知和成熟的。通常通过农杆菌或基因枪导入植物的未成熟胚、成熟胚、未分化的愈伤组织或原生质体。然后用不同浓度的草甘膦培养基进行筛选培养。再进行分化而获得转化芽，经过生根培养基培养就可以获得可以种植的种苗。也可以通过花粉介导法，通过农杆菌导入植物的花粉从而获得转基因的种子。更进一步，草甘膦可以喷施在转化苗及其后代筛选除去未转化植株和后代分离失去LSEPSPS基因的植株。具体可通过以下步骤制备：
（1）利用DNA重组技术，构建含有所述抗/耐草甘膦基因的植物转化质粒；
（2）将步骤（1）中构建的植物转化质粒通过基因枪或农杆菌浸染方法或花粉介导法导入植物组织，利用草甘膦培养基筛选含有抗/耐草甘膦基因的植物细胞；
（3）将步骤（2）中筛选的植物细胞进行分化获得转化芽，经过生根培养获得植物种苗，从而得到所述抗/耐草甘膦植株。
植物可选取水稻、玉米、棉花、小麦、大豆、马铃薯、甘薯、谷子、高粱、大麦、油菜、甘蔗、烟草、草坪草（狗牙根、结缕草、黑麦草、早熟禾、暖地大叶草、剪股颖、海滨雀稗）或牧草（紫苜蓿、红三叶草、雀稗）、蔬菜（青菜、白菜、黄瓜、芹菜、辣椒、茄子）、花卉（月季、康乃馨、菊花）。
抗/耐草甘膦基因作为植物转基因筛选标记时，通过已知的分子克隆技术可以使LSEPSPS在植物细胞中表达，通常构建一个在植物中表达的表达构件。这个表达构件包括启动子、带有叶绿体信号肽的LSEPSPS和终止子。这个表达构件可作为筛选标志被克隆到植物转化质粒。植物转化质粒通常还含有目的基因和其他DNA 序列。植物转化质粒可以通过基因枪或农杆菌浸染方法或花粉介导法导入植物组织，而含有合适浓度的草甘膦培养基则可以选择性地杀死没有导入质粒DNA 的植物细胞，从而选择含有LSEPSPS目的基因的植物细胞。
本发明适用于所有植物，包括双子叶和单子叶植物。
本发明相比现有技术具有以下优点：本发明基于自然界的植物天然耐性为基础，经过前期大量植物对草甘膦的耐性筛选，代替依赖于在长期草甘膦环境中生存的植物或微生物的抗性生物型筛选，发现了百合科麦冬草的草甘膦耐药性，并利用易错倾向PCR技术进行基因改造使其获得更高的草甘膦抗性，为培育抗/耐草甘膦除草剂作物提供了新的选择，增加抗/耐草甘膦除草剂转基因技术的多样性，从而降低了抗/耐除草剂转基因技术的生态风险；再则，由于本发明的基因是植物本身来源，在培育抗/耐草甘膦除草剂作物后的生态环境和食品安全风险要低于不同生物类别的异源基因，提高民众认可。
具体实施方式
    下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1. 麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬的草甘膦抗性实验
选取长势均匀的麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬，进行喷雾处理。草甘膦浓度设置为0、375、750、1500、3000、6000、12000、24000ai.g/ha，试验按照设计用量处理供试植物材料，每一处理重复四次。喷药后观察植株受损伤程度，每周调查并记录药害等级，绘制抑制率曲线并进行Logistic回归分析，计算ED50值。重复三次。结果发现，麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬的草甘膦抗性分别是一般植物的4.73、5.06和5.8倍。
实施例2. EPSPS 基因的克隆
以麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬总RNA反转录产物为模板，利用EPSPS基因保守序列设计引物，进行RT-PCR反应，将扩增得到的片段克隆至pMD19-T载体中，进行测序及BLAST。
得到保守区的序列后，再通过RACE（rapid-amplification of cDNA ends）技术，进行EPSP合成酶基因的全长克隆。以接头引物AP进行麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬RNA的反转录，利用已经得到的基因保守区序列设计基因特异性引物，并与3’端的特异引物进行RT-PCR反应。
根据已经得到的目的基因片段，利用TdT末端转移酶法进行5’端的克隆。设计基因特异性引物反转录后进行单引物的扩增，然后纯化扩增产物，用dCTP和TdT对纯化的扩增产物加尾，使用锚定引物进行PCR扩增带有dC尾的产物，最后使用巢式重新扩增初步PCR产物。将扩增得到的序列进行克隆测序。
最后，将保守区、3’端序列，5’端序列进行拼接，获得麦冬草EPSPS基因的cDNA的全长序列。麦冬基因的核苷酸序列为SEQ ID NO : 1 ，并命名为LsEPSPS1，其编码的氨基酸为SEQ ID NO :2；土麦冬EPSPS基因的核苷酸序列为SEQ ID NO : 3，并命名为LsEPSPS2，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO : 4；阔叶土麦冬EPSPS基因的核苷酸序列为SEQ ID NO : 5，并命名为LsEPSPS3，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO : 6。
实施例3. 麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬EPSPS基因编码氨基酸序列的分析比对
通过MAGA软件分析比较了与麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬EPSP合酶一致性较高的约260条EPSP合酶氨基酸序列，发现麦冬、土麦冬与阔叶土麦冬的EPSP合酶的氨基酸序列与其他植物相比存在四处特异的氨基酸，分别是144m，184i，232a以及273m（序列编号根据麦冬EPSP合酶氨基酸序列SEQ ID NO :2，相当于大肠杆菌EPSP合酶的70、107、153及192位，土麦冬和阔叶土麦冬中为146m，186i，234a以及275m），这些位点的氨基酸在麦冬、土麦冬与阔叶土麦冬中均保守，但在其他植物的相同位点均不存在。正是由于这些氨基酸的存在导致了麦冬、土麦冬与阔叶土麦冬对草甘膦的耐药性。
144和273位的Met中含有甲硫基—SCH3，其他氨基酸中均不含有，可能由于甲硫基的存在导致EPSP合酶结构发生改变。
184位的Ile与其他植物中的Val和Thr相比，R基团多一个—CH2—，可能由于—CH2—的增加致使同一位点所需的空间体积增大，使得与草甘膦的结合的空间位阻增大。
232位的Ala与其他植物中的Val相比，少了两个—CH3，使得R基团长度和空间位阻都减少，可能造成EPSP合酶结构发生改变。
将麦冬的EPSP合酶的氨基酸序列（共516个氨基酸）进行二级结构预测，并与已知的EPSP合酶主链图进行比较，发现整个氨基酸部位总共有12个螺旋（除信号肽），第144位甲硫氨酸位于第2和第3个螺旋的转角处，大约处于第3区；第184位异亮氨酸位于第3个螺旋上；第232位丙氨酸位于第4和第5螺旋的第2个折叠处；第273位甲硫氨酸位于第5和第6个螺旋的折叠处。
144Met与草甘膦结合位点22Lys以及S3P结合位点23Ser、27Arg较为接近；184Ile与草甘膦结合位点96Gly、94Asn同处于第三个螺旋上，其增加的主链长度可能会使草甘膦结合的空间位阻增大从而降低草甘膦与EPSP合酶的亲和性；232Ala与124Arg很接近；273Met与其空间构像可能会影响169Ser、170Ser、171Gln以及197Ser都处于第5个结构域。这四个位点均处于底物与酶的结合有关的区域，此四个氨基酸的变化，可能导致EPSP合酶结构的变化，使其与底物的结合程度发生变化，从而导致草甘膦的耐药性。
实施例4. 错误倾向PCR突变扩增
根据已知的土麦冬的EPSPS基因设计引物，并以此为模板,进行错误倾向PCR致突变反应, 体系总体积100ul: 10×致突变PCR缓冲液10Ll, 10×dNTP混合物10 ul,引物各10 ul, MnCl210ul,模板10ul,TaqDNA聚合酶1ul,超纯水39ul.将混合好的反应体系以10ul分装入eppendorf管中进行PCR循环反应,反应条件为: 94℃变性5 min,94℃变性1 min,50℃退火1 min,72℃延伸1 min, 72℃延伸10 min. 30个循环后,110%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭(EB)染色后对其进行紫外分析检测.用Promega公司DNA纯化试剂盒回收琼脂糖上PCR产物.扩增得到约1300bp的目的片段。
实施例5. 重组质粒的构建及阳性克隆菌株的筛选及鉴定
用SphI和HindIII限制性酶分别切割pQE80L质粒载体和PCR突变产物,得到具有粘性末端的基因片段(大小分别约为4.7 kb和1.3kb),将酶切后的基因片段用T4连接酶连接,再进行感受态细胞E.coli转化. 挑取将能在含草甘膦100mmol/L培养基上生长的菌落，进行质粒的提取，并再次转化E.coli，使得原本在100mmol/L草甘膦培养基上不能生长的大肠杆菌获得草甘膦抗性。经测序得到该核苷酸序列为SEQ ID NO:29-SEQ ID NO:52。
实施例6. 高抗草甘膦LSE-EPSPS氨基酸序列突变位点的分析
在100mmol/L草甘膦上能够正常生长的克隆可能包含一个抗草甘膦性能比原始基因LS-EPSPS更加高的突变体。因此测定了实施例2获得的抗草甘膦克隆的突变区域的核苷酸序列，结果发现这此基因在保守区1(从第280到294号氨基酸)和保守区2(从第416到433号氨基酸)的突变结果如下:
表1 EPSP合酶氨基酸序列保守区突变情况
保守区域 序列 突变情况
280-294 280GGDVKFAEVLEKMG294A K284R,F285Y,L289H
416-433 416VPVTIRDPGCTRKTFPD433Y V416E,R421G,D422V,G424C,C425Y
实施例7. 保守区氨基酸突变功能验证
为了验证保守区280-294以及416-433区域的突变位点是否导致草甘膦抗性，本发明通过定点突变的方法获得一系列的突变基因，并将其导入大肠杆菌，在含有100mmol/L草甘膦培养基上37℃培养48h，观察生长情况，对能够正常生长的突变基因进行统计，结果发现，草甘膦抗性蛋自质的第280到294位的氨基酸序列为SEQ ID NO:8-SEQ ID NO:14中的任意一种，第280到294位的氨基酸序列为SEQ ID NO:15-SEQ ID NO:28中的任意一种。符合上述条件的蛋白质具有草甘膦抗性。
实施例8. LS-EPSPS和LSE-EPSPS基因在大肠杆菌中的表达
LS-EPSPS基因克隆在载体PET-28a中并转入大肠杆菌BL21(DE3)获得转基因菌株。转基因菌株的阅读框在PET系统的T7启动子的控制下而获得表达。
转LS-EPSPS-PET菌株和转PET-28a 菌株（空载体，对照）在LB 中培养，当OD600 达到0.6 时，分别将转基因菌株和PET-28a在37℃含Kan的LB液体培养基中生长至OD值0.4左右，1%的接种量接入草甘膦浓度分别为0、1500、3000、4500、6000、7500、9000、10500以及12000mg/L的含Kan的LB液体培养基中，同时加IPTG 至终浓度为1 mmol/L，12～16h后测OD值，从而得到转基因菌株和PET-28a在不同草甘膦浓度下的生长曲线并进行Logistic回归分析，实验结果发现在7500和9000mg/L浓度下，转LS-EPSPS-PET菌株的OD%（OD值占对照的百分比）值约为70%和60%，而转PET-28a 菌株的OD%仅为对照的20%和1%，说明在7500和9000mg/L浓度下，转LS-EPSPS基因菌株对草甘膦的抗性大大高于空载菌株。根据Logistic方程，转LS-EPSPS基因菌株的ED50值也大大高于空载体PET-28a。这些说明LS-EPSPS基因具有抗/耐草甘膦能力。
用EcoRI和HindIII限制性酶分别切割pET-28a质粒载体和PCR突变产物LSE-EPSPS基因,得到具有粘性末端的基因片段(大小分别约为5.8kb和1.3 kb),将酶切后的基因片段用T4连接酶连接,再进行感受态细胞BL21(DE3)转化,获得重组菌株，重组菌株的阅读框在PET系统的T7启动子的控制下而获得表达。分别用5m1含有50 u g /ml Kan的LB液体培养基培养转化子BL21(LSE-EPSPS)，BL21(LS-EPSPS)，以200rpm , 37℃空气浴的条件至细胞浓度达lO8/ml,以1%的接种量，转接到新鲜的含有50 u g /ml Kan的LB液体培养基中，200rpm、37℃继续培养至OD600=0.75时，加入IPTG至1 mmol/L以诱导重组蛋白的合成。在前述条件下，继续培养3小时。离心收取菌体，采用Laemmli所述的方法，先用SDS-PAGE样品缓冲液重悬菌体， SDS-PAGE凝胶电泳分离蛋白质。电泳完毕，用20%的考马氏亮蓝染色。
实施例9. EPSP合成酶粗提物的制备
分别用5m1含有50 u g /ml Kan的LB液体培养基培养转化BL21(LSE-EPSPS)，BL21(LS-EPSPS)，以200rpm , 37℃空气浴的条件至细胞浓度达lO8/ml,以1%的接种量，转接到新鲜的含有50 u g /ml Kan的LB液体培养基中，200rpm、37℃继续培养至OD600=0. 75时，加入IPTG至1mM以诱导重组蛋白的合成。在前述条件下，继续培养3小时。离心收取菌体。用缓冲液A(50mM Tris-C1, 0.1mM DTT, pH 7. 2)重悬菌体。细胞悬液置-70℃冻结，再在室温中重融。然后用Fluko公司的乳化机处理细胞悬液使其破壁。以12000rpm离心30分钟，弃去细胞碎片。上清液即为EPSP合成酶粗提物，可用于有关该酶的各项指标的测定。
实施例10. 离体EPSP合酶活性测定
称取麦冬、土麦冬、阔叶土麦冬以及野生拟南芥幼苗0.5 g，加150 ml提取缓冲液A[100 mmol/L的Tris pH 7.5、1 mmol/L的EDTA、10%(V/ V)的甘油、1 mg/L的BSA、10 mmol/L的维生素C(Vc)、1 mmol/L的苯脒(benzamidine)、5 mmol/L的DTT、20 mg/ml PVPP]，研磨匀浆，用6层纱布过滤，12000rpm、4℃下离心20 min，上清液为EPSP合酶的粗酶液。40μl酶促反应体系(50 mmol/L的HEPES pH7.5、1 mmol/L的(NH4)6MO7O24、1 mmol/L的PEP、2 mmol/L的S3P、1 mg/L的BSA，草甘膦浓度设置为0、100、200、500、800、1000以及2000umol/L)于25℃下预热5 min，加入10μl酶液，25℃下酶促反应15min，迅速放入沸水中停止酶促反应，冷却至室温，再参照Lanzetta和Alvarez(1979)的方法加800μl孔雀石绿盐酸盐显色反应30min，后再加100μl 34%的柠檬酸钠溶液，30min后于660 nm的分光光度计上测定OD660值。结果发现，野生型拟南芥EPSP合酶活性在500 umol/L时出现明显的下降，麦冬EPSP合酶活性在800 umol/L时出现明显的下降，土麦冬和阔叶土麦冬EPSP合酶活性在1000 umol/L时才出现明显的下降。进行Logistic回归分析并计算ED50值，拟南芥、麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬EPSP合酶的ED50值分别为560、860、1090以及1070umol/L，由此可见，麦冬、土麦冬和阔叶土麦冬EPSP合酶的活性明显高于野生型拟南芥。
实施例11. 真核表达载体的构建
一般地含有35S 启动子的植物表达载体比较适合外源基因向双子叶植物的转移，启动效率很强，容易在转基因后代中转录和表达，但35S启动子不适合在单子叶植物中发挥作用；单子叶转基因植物主要使用actin、emu、ubquitin promoter三种启动子，它们来源于单子叶植物，比较适合外源基因向单子叶植物的转移。终止子较常用的是胭脂碱合成酶基因终止子NOS，标记基因可以是新霉素磷酸转移酶(nptⅡ)、氯霉素乙酰转移酶基因（cat）、荧光素酶基因（luc）、绿色荧光蛋白基因(gfp)或者β-葡萄糖苷酸酶基因（gus）等等。以植物表达载体pBI121-LSEPSPS的构建为例：利用DNA重组技术，将LSEPSPS基因克隆至植物表达载体pBI121中，通过酶切、电泳鉴定LSEPSPS基因已成功构建到植物表达载体pBI121中；然后将重组质粒pBI121-LSEPSPS通过冻融法导入根癌农杆菌EHA105中，Kan平板筛选阳性克隆，生长的单菌落进行PCR鉴定，证明重组质粒已转入根癌农杆菌EHA105中。对于不同的植物可选择不同的表达载体，也可对其进行重组和改造，例如替换或增加启动子、终止子或标记基因。
实施例12. 转基因拟南芥的抗性鉴定
用花序浸染法转化野生型拟南芥，将LS-EPSPS基因和人工合成LSE-EPSPS相似序列以及由于低保真PCR扩增得到的变异的LSE-EPSPS基因构建好PBI121-LSEPSPS的植物表达载体并用冻融法转入农杆菌EHA105，制备好已转化了相应质粒的农杆菌菌液10ml，在转化前1d，转入大瓶培养过夜，第2d取出使用时菌液的OD600应当在1.2到1.6之间。室温下5000r/m离心15min，弃上清液，将农杆菌沉淀悬浮于相应体积的渗透培养基中，使OD600在0.8左右。将上述农杆菌悬浮液注人喷雾器中，对准植物的地上部分进行喷洒，直到植株上有水珠滴下时为止。用保鲜膜将这些植物(T0代植物)罩起来以保持湿度，置入培养室中培养，2到3d后可去掉保鲜膜，转化后lw左右方可浇水。继续培养至植物成熟，收种子(Tl代)放在干燥环境中lw左右，进行转化子的筛选。将成功转化的植株进行抗性鉴定，其具备草甘膦抗性，可以作为转基因筛选标记。
将筛选获得转基因拟南芥植株，以非转基因和转LS-EPSP基因的拟南芥组培苗的茎作为外植体在进行愈伤组织的诱导，培养基为6-BA2.0mg/L和NAA0.1mg/L的MS培养基。在愈伤生长2～3周后，进行草甘膦处理。将通过Kan抗性筛选的转基因抗性愈伤组织和野生愈伤组织分别接种到草甘膦的浓度为0 mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L和1000mg/LMS培养基中，然后于25℃，16h/8h进行光、暗交替培养，两周后统计结果。对照拟南芥愈伤组织在草甘膦浓度为50 mg/L时，已变黄并逐步坏死。而转基因拟南芥愈伤组织在600mg/L时仍可以正常生长，当浓度达800mg/L时生长才受到抑制，褐化变黄。
实施例13. 转变基因抗/耐草甘膦油菜的获得
目前常用的转基因方法主要有农杆菌介导转化法、激光微束穿刺法、PEG法、电击法、微注射法和花粉介导法。以花粉介导法为例介绍转基因抗/耐草甘膦油菜的获得。
进入油菜盛花期后，选取主茎或一次分枝上10～15个1～2 d内将要开放的花蕾徒手去雄，并摘除所选茎或分枝上其他花蕾，然后套袋。同时在同一品种中选取第2天将开放的花序进行套袋,以备第2天取粉用。翌日上午当天开放的套袋植株的花粉约0.4 g，悬浮在25 ml 7.5%的蔗糖溶液中，进行第1次超声波处理，然后在溶液中加入20μg含EPSPS基因的质粒DNA进行第2次超声波处理。第2次处理后，在溶液中加入10μL 1/10 000(W/V)硼酸，然后用处理过的花粉授在前一天去雄的油菜柱头上，套袋并挂牌，同时标注授粉花蕾数。授粉后5～6 d去袋，使处理的授粉株充分发育。采收种子。
实施例14. 转基因抗/耐草甘膦玉米的获得
在温室对受体材料以7 d为周期分期播种，玉米试材按试验需要进行控制授粉，授粉后10～13 d，取玉米幼胚作为转化受体。用次氯酸钠消毒玉米棒后，剥出幼胚(剥幼胚时要谨慎，不要创伤胚)，用侵染液(加AS)清洗幼胚4遍，然后加入一定浓度的农杆菌菌液，放置10～30 min，取出后用灭菌滤纸吸干，放到共培养培养基上，在25℃(黑暗)共培养2～5 d，然后将幼胚转移到静息培养基，在28℃条件下暗培养7 d。侵染和共培养环节菌液浓度OD500=0．3～0．5，侵染时间10 min)、共培养时间3 d。从静息培养基上把幼胚移入含有草甘膦的抗性筛选培养基上，暗培养。先在含10 mg/L除草剂低选择压下培养14 d，再经过80 mg/L除草剂高压选择，第3次筛选浓度加大至160 mg/L。每次继代注意淘汰呈褐色和水渍化的愈伤组织，并把生长正常的愈伤组织用镊子夹碎，分开选择培养。在继代筛选过程中注意经常观察发现污染或农杆菌复出的立即移出，未污染材料继续培养。另外，经常把出现褐化污染的组织块剔出或转移好的未被污染的组织块到新的相同培养基上。组织块膨大后，经常把大块组织剥小，连续继代筛选3次后，将选择到的抗性愈伤组织转到再生Ⅰ培养基上，恢复培养15 d或更长时间(暗培养)。再将抗性愈伤组织转到再生Ⅱ培养基上发芽，培养条件为28℃，每日3 000 lx光强下，光照12 h。待再生的玉米植株长到3片叶时，可将幼苗分移植到含生根培养基的瓶中，在室内培养。当幼苗长出较粗的根后，将幼苗从罐头瓶中取出，用水冲净培养基，移栽于混有营养土和蛭石(1∶3)的小花盆中，当玉米又长出2～3片新叶时，可将其移入大田或大花盆中，待长出三四叶后提取叶片DNA进行PCR检测。确定含有转入的LSEPSPS基因。
实施例15. 转基因抗/耐草甘膦棉花的获得
大量提取植物表达载体质粒DNA，选择次日将开放的花蕾进行自交。由于棉花是常异交植物，天然异交率在10%左右，因而外来花粉往往会造成品种间的混杂。在开花前一天，可见花冠快速伸长，黄色或乳白色的花冠呈指状突出于花蕾，次日即开放成为花朵。选择这样的花蕾，于指状花冠的前端用细线扎紧，并将细线的另一端系于铃柄，作为收获时的标记；在开花后20～24h左右即次日，选择果枝和花位较好的幼子房作为转化对象。一般选择每个果枝的第一和第二个果节位的花朵进行转基因操作。这些果节上的棉铃一般成铃率较高，有利于收获较多的种子；用50田微量进样器作为微注射的工具。每次使用前和使用后，应以淡洗涤剂清洗，再用蒸馏水漂清；注射时，摘除或剥去花瓣，抹平花柱。在剥除花瓣时，注意不能损伤幼子房的表皮层，以免增加脱落率；用右手持微量注射器，左手轻扶摘除花瓣后的幼子房，从抹平花柱处沿子房的纵轴方向进针至子房长度的约三分之二处，并后退至约三分之一处。
花粉管通道法转化得到的棉花种子(T0代)收获后于在温室盆栽幼苗，在2～3叶期，以草甘膦胺盐水剂喷洒棉花叶片(草甘膦施用量1000克/公顷)。一周后观察植株生长状况，拔除叶片表面有退绿斑点的植株。为获得高抗草甘膦的转基因棉株可连续进行3次筛选，时间间隔为10～14天。生长正常的被认为是获得抗性基因的植株。共获得3株。
实施例16. 转基因抗/耐草甘膦烟草的获得
农杆菌活化；共培养：将侵染过的叶块摆放在铺有2层滤纸的烟草芽分化培养基(MS+IAA0.5mg/L+6-BA2mg/L)上，25oC暗培养4天；抗性芽的筛选：将经过共培养的烟草外植体转移到抗性芽筛选培养基(MS+ IAA0.5mg/L+6-BA2mg/L +Kan100 mg/L +Carb500mg/L)上，2～3周后即可生芽。生根：待抗性芽长到1cm左右时，将其转移到生根培养基(MS+ Kan100 mg/L +Carb500mg/L)上，1～2周后即有不定根形成。将烟草无菌苗移温室栽，长有6～8片真叶时，分别涂摸1‰、2‰、3‰、4‰、5‰、6‰浓度的草甘膦除草剂(商品名为农达Roundup)。继续培养两周观察烟草的草甘膦抗性，敏感的植株叶片出现黄花，而抗性植株生长正常，共获得了5株。
实施例17. 转基因抗/耐草甘膦黄瓜的获得
菌株培养：从平板上挑取含构建好的植物表达载体的根癌农杆菌单菌落接种于5 ml LB+50 mg/L卡那霉素（Kan）的培养液中，于28℃，200 r/min条件下培养16h后，转接到新鲜的90 ml LB+50 mg/L卡那霉素的培养液中，在同样的条件下继续培养至对数生长期时(4～5h，OD≌0. 8～1.2)，用液体MS洗涤3次后，重悬于MS液体培养基中，使其OD值为0.2～0.3即可用于转化。愈伤组织诱导和植株再生：将黄瓜种子浸入75%的乙醇中处理30 s，再用次氯酸钙溶液处理15 min，无菌水冲洗5次，播种在发芽培养基上，25℃黑暗萌发。取萌发2～3天的黄瓜子叶，切成5 mm方块，与处于对数生长期经MS培养基适当稀释的农杆菌（含有LSEPSPS基因）共浸染一定时间，将浸染后的外植体置于再生培养基上，24～25℃暗培养2天，再转至含羧苄青霉素和一定浓度草甘膦的诱芽培养基，24～25℃暗培养2～3周，进行愈伤组织分化。由子叶产生的愈伤组织获得的抗性芽，转至1/2MS培养基(含羧苄青霉素和一定浓度草甘膦)获得转化植株。
实施例18. 转基因抗/耐草甘膦月季的获得
月季成熟小叶外植体叶背朝下接种到添加了2，4-D0.5mg/L和pCAP3.0mg/L的愈伤组织诱导培养基上，光照条件下培养20d。将继代20～30d的新鲜愈伤组织置于农杆菌菌液（OD600=0.8）中侵染20min,，然后倒出愈伤组织，在无菌滤纸上适当晾干后接入含100uM AS、改良1/2MS盐类的共培养培养基中，25℃黑暗条件下共培养，用EHA105浸染的培养物共培养3～4d，以愈伤组织周围农杆菌长至肉眼可见菌落时为好。共培养结束后，愈伤组织用无菌水清洗1～2遍，在无菌滤纸上晾干后接入含70mg/L潮霉素和300mg/L头孢霉素的选择培养基，25℃黑暗条件下选择培养，2～3周继代一次，进行抗性愈伤的选择和增殖。对选择3个月的抗性愈伤组织进行GUS反应检测，一团抗性愈伤组织上的不同部分呈现深蓝色，浅蓝色或无蓝色反应，表现为明显的嵌合体。PCR检测，抗性愈伤组织中能扩增出目的片段。对抗性愈伤组织进行扩繁，然后进行再生植株的诱导和检测。
实施例19. 转基因抗/耐草甘膦狗牙根的获得
狗牙根茎节的分生能力强，选用含茎节长约0.5～1.0 cm的茎段为外植体。用自来水洗净表面，70%酒精浸泡30s，无菌水冲洗3次，0.1%氯化汞消毒10min，无菌水冲洗3次。取灭菌过的滤纸，吸干表面水分，接种于诱导培养基。愈伤组织的诱导以含2，4-D2mg/L+NAA3mg/L+6-BA0.2mg/L的MS培养基。继代培养2周，然后转移至含6-BA3mg/L+KT4.0mg/LMS分化培养基。置于28℃、16h光照、光10 ～30uEm-2s-1的人工气候室分化, 每2周以相同培养基继代1次。 将分化的小植株接于含NAA0.3mg/L的MS生根培养基，经2周生根培养后移至不含激素的1/2MS培养基壮苗，尔后移栽。取OD600≈0.5的农杆菌菌液，25℃浸泡10min，用灭过菌的滤纸吸去多余菌液，放入MS诱导培养基，暗条件共培养2d，然后用含Carb500mg/L的无菌水清洗愈伤。50mg/L潮霉素用作筛选物质，经3轮筛选，再生的植株苗长约15cm时转移至温室炼苗2周，成活后进行GUS组织化学染色和PCR鉴定，获得了阳性植株，移栽在网室自然生长。
实施例20. 抗LSEPSPS单克隆抗体的制备
将含有LSEPSPS基因的重组单克隆表达菌落置于LB培养液（含有Kan 50mg/L）中,37℃,300rpm培养,至细菌生长达到对数生长晚期后，加入终浓度为0.025mmol/L的IPTG，22℃低温诱导表达8h，离心10000rpm，10min，收集菌体，加入蛋白上样缓冲液，煮沸5min，进行12%SDS－PAGE鉴定，使之在大肠杆菌BL21（DE3）中获得高效表达。将制备的菌体经过超声破碎之后，以4℃，12000rpm离心20分钟，收集上清, 进行亲合层析纯化。采用纯化的重组EPSPS抗原免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾脏B淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞SP2/O在聚乙二醇（PEG）作用下进行融合，通过ELISA筛选稳定分泌抗LSEPSPS的单克隆杂交瘤细胞株。将杂交瘤细胞株注入小鼠腹腔，生的腹水中含有高效价的单克隆抗体。用饱和硫酸铵法纯化腹水IgG。
实施例21. 变异来源和蛋白表达来源LSEPSPS分子的草甘膦抗性鉴定
LSEPSPS可以用来人工引入单个或多个变异而获得保持有抗草甘膦能力的 LSEPSPS变异分子。例如利用低保真 PCR 的方法可以产生很多LSEPSPS变异分子，而这些变异分子可以通过草甘膦筛选获得继续保持有抗草甘膦能力的LSEPSPS变异分子。密码子具有简并性：除了甲硫氨酸和色氨酸外，每一个氨基酸都至少有两个密码子。这样可以在一定程度内，使氨基酸序列不会因为某一个碱基被意外替换而导致氨基酸错误。LSEPSPS基因翻译得到的氨基酸序列推导其编码的碱基序列，会得到多条与LSEPSPS相似的序列，此序列亦具有草甘膦抗性。将人工合成LSEPSPS相似序列以及由于低保真PCR扩增得到的变异的LSEPSPS基因构建好PBI121-LSEPSPS的植物表达载体并用冻融法转入农杆菌EHA105，制备好已转化了相应质粒的农杆菌菌液10ml，在转化前1d，转入大瓶培养过夜，第2d取出使用时菌液的OD600应当在1.2到1.6之间。室温下5000r/m离心15min，弃上清液，将农杆菌沉淀悬浮于相应体积的渗透培养基中，使OD600在0.8左右。将上述农杆菌悬浮液注人喷雾器中，对准植物的地上部分进行喷洒，直到植株上有水珠滴下时为止。用保鲜膜将这些植物(T0代植物)罩起来以保持湿度，置入培养室中培养，2到3d后可去掉保鲜膜，转化后lw左右方可浇水。继续培养至植物成熟，收种子(Tl代)放在干燥环境中lw左右，进行转化子的筛选。将成功转化的植株进行抗性鉴定，其具备草甘膦抗性，可以作为转基因筛选标记。
显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
<110>南京农业大学
<120>一种具有草甘膦耐性的基因及其应用
<160> 52
<170> PatentIn Version 3.3
<210> 1
<211> 1551
<212> DNA
<213> 麦冬种（Ophiopogon japonicus）
<220>
<400> SEQ ID NO: 1 
atggagcaag cgatcatggc tcagggcgtc gccaccaacc tcggcctctc tacttcctcc     60
cttcggaatc cgaagctcat cgcggcctct tctccttctt cttcgattcg gatcggatcg    120
gggctgaaac tagggttttc ggttggcttg aagggggagg ttgggaggag gagggcggtt    180
agggtttcgg cgtcggtggc ggcggcggag aagccgtcga cggtgccgga gatcgtgctg    240
cagccgatca aggagatctc cgggacgatc aagctcccgg gatccaagtc gttgtccaat    300
cggattctgc ttcttgccgc gctcgctgag ggaactactg ttgtggacaa tttgttggac    360
agtgatgaca ttagctatat gcttgctgca cttaaaacac ttgggctctc tgtagaagac    420
gatagtgtca tgaaacgtgc aactgttgtg ggatctggag gtcaatttcc tgttgggaaa    480
gattccaaag aggtccaact ttttctagga aatgcaggga ctgcaatgcg tcctctgaca    540
gctgctgtta ttgctgctgg tggaaatgca agttacatac ttgatggggt accacgaatg    600
agggagagac ctatagggga cttggttgtt ggtttgaagc agttgggtgc agatgttgat    660
tgcattttgg gaactgactg tccacctgtt cgtgccaatg caaatggagg tcttccaggg    720
ggaaaggtta aactctctgg atcaattagc agtcagtatt tgactgcgtt gcttatggct    780
gcgcccttag ctcttggaga tgtggagatt gagatcatgg ataaacttat ttcagtccca    840
tatgttgaaa tgacgcttaa actgatggaa cgttttggag tcagtgtgga gcattccagt    900
agctgggata ggttcttcat caagggcggc caaaagtaca agtcccctgg aaatgcttat    960
gtggaaggtg atgcttcgag cgctagttat tttctcgcag gcgcagcagt caccggcggc   1020
acggtaactg ttgagggttg tggcacaagc agtttgcagg gtgatgtaaa attcgctgaa   1080
gttcttgaga aaatgggggc aaaggttaca tggacagaga atagcgtcac agtaacaggc   1140
ccgccgcaag atccttccaa gaagaagcga ttgcaagcca ttgatgtcaa tatgaataaa   1200
atgcctgatg ttgccatgac tctagctgtt gttgctcttt atgctgatgg tccgactgcc   1260
attagagacg ttgcttcatg gcgagtaaag gagactgaac gaatgattgc tatctgtaca   1320
gagcttagaa agctgggagc aacggtggaa gaaggacccg attactgcgt gatcaccccg   1380
cccgagaagt tgaacgtggc agcaatcgac acctacgacg atcacaggat ggccatggcg   1440
ttctctcttg cagcctgtgc ggatgcaccc gtcacgatca gagaccccgg ctgcacccgc   1500
aaaactttcc cggactattt tgaggtattg cagaggtttg cgaagcacta a            1551
<210> 2
<211> 516
<212> PRT
<213> 麦冬种（Ophiopogon japonicus）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (144,184,232,273)
<223>  Met, Ile, Ala, Met
<220>
<221> SIGNAL
<222> (1)...(63)
<220>
<221> CHAIN
<222> (64)...(516)
<400> SEQ ID NO: 2 
Met Glu Gln Ala Ile Met Ala Gln Gly Val Ala Thr Asn Leu Gly Leu
1               5                   10                  15     
Ser Thr Ser Ser Leu Arg Asn Pro Lys Leu Ile Ala Ala Ser Ser Pro
            20                  25                  30         
Ser Ser Ser Ile Arg Ile Gly Ser Gly Leu Lys Leu Gly Phe Ser Val
        35                  40                  45             
Gly Leu Lys Gly Glu Val Gly Arg Arg Arg Ala Val Arg Val Ser Ala
    50                  55                  60                 
Ser Val Ala Ala Ala Glu Lys Pro Ser Thr Val Pro Glu Ile Val Leu
65                  70                  75                  80 
Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys
                85                  90                  95     
Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr
            100                 105                 110        
Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser Asp Asp Ile Ser Tyr Met Leu
        115                 120                 125            
Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Ser Val Glu Asp Asp Ser Val Met
    130                 135                 140                
Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys
145                 150                 155                 160
Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met
                165                 170                 175    
Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr
            180                 185                 190        
Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu
        195                 200                 205            
Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly
    210                 215                 220                
Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn Ala Asn Gly Gly Leu Pro Gly
225                 230                 235                 240
Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala
                245                 250                 255    
Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile
            260                 265                 270        
Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr Val Glu Met Thr Leu Lys Leu
        275                 280                 285            
Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu His Ser Ser Ser Trp Asp Arg
    290                 295                 300                
Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr
305                 310                 315                 320
Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala
                325                 330                 335    
Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu
            340                 345                 350        
Gln Gly Asp Val Lys Phe Ala Glu Val Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys
        355                 360                 365            
Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp
    370                 375                 380                
Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Gln Ala Ile Asp Val Asn Met Asn Lys
385                 390                 395                 400
Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp
                405                 410                 415    
Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr
            420                 425                 430        
Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr
        435                 440                 445            
Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu
    450                 455                 460                
Asn Val Ala Ala Ile Asp Thr Tyr Asp Asp His Arg Met Ala Met Ala
465                 470                 475                 480
Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Ala Pro Val Thr Ile Arg Asp Pro
                485                 490                 495    
Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg
            500                 505                 510         
Phe Ala Lys His
        515    
<210> 3
<211> 1557
<212> DNA
<213> 土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<400> SEQ ID NO: 3 
atggagcaag cgatcatggc taagggcgtc gccaccaacc tcggcctctc cacttcctcc     60
cttgggaatc cgaagctcat cgtggcttct tcttctcctc ctccttcttc gattcggatc    120
ggatcggggc tgaaactagg gttttcggtt ggtttgaagg ggggagttgg gatgaggagg    180
gcggttacgg tttcggcgtc ggtggcggcg gcggagaaac cgtcgacggt gccggagatc    240
gtgctgcagc cgatcaagga gatctcgggg acgatcaagc tcccgggatc caagtcgttg    300
tccaatcgga ttctgcttct tgccgcgctc gctgagggaa ctactgttgt ggacaattta    360
ttggacagtg atgacattcg ctatatgctt gctgcactta aaacgcttgg gctcactgta    420
gaagacgata gtgtcatgaa acgtgcaact gttgtgggat ctggtggtca atttcctgtt    480
gggaaagatt ccaaagaggt tcaacttttt ctaggaaatg cagggactgc aatgcgtcct    540
ctgacagctg ctgttattgc tgctggtgga aatgcaagtt acatacttga tggggtacca    600
cgaatgaggg agaggcctat aggggacttg gttgttggct tgaagcagtt aggtgcagat    660
gttgattgca ttttgggaac tgactgtcct cctgttcgtg ccaatgcaca tggaggtctt    720
ccaggaggaa aggtgaaact ctctggatca attagcagtc agtatttgac tgcgttgctt    780
atggcagcgc ccttagctct tggagacgtg gagattgaga tcatggataa acttatttca    840
gtcccatatg ttgaaatgac gcttaaactg atggaacgtt ttggggttag tgtggagcat    900
tccagtagct gggataggtt cttcatcaag ggtggtcaaa agtacaagtc ccctggaaat    960
gcttatgtgg aaggtgatgc ttcgagcgct agttattttc tcgcaggtgc agcggtcact   1020
ggcggcacgg taactgttga gggttgtggc acgagcagtt tgcagggaga tgtaaaattc   1080
gctgaagttc ttgagaaaat gggggcaaag gttacatgga cagagaatag cgtcacagta   1140
acaggcccac cgcaagatcc ttccaagaag aagcgattgc gagccgttga tgtcaatatg   1200
aataaaatgc ctgatgttgc catgactcta gctgttgttg ctctttatgc tgatggtccg   1260
actgccatta gagacgttgc ttcttggcga gtaaaggaga ctgaacgaat gattgctatt   1320
tgtacagaac ttagaaagct gggagcaaca gtggaggaag gacccgatta ctgcgtgatc   1380
accccaccgg agaagctgaa cgcgaatgca atcgacacct acgacgatca caggatggct   1440
atggcgttct ctctcgcagc ctgtgcggat gtacccgtca cgatcagaga ccccggttgc   1500
acccgcaaaa ctttccccga ctattttgag gtattgcaga ggttcacaac gcactaa      1557
<210> 4
<211> 518
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (146,186,234,275)
<223>  Met, Ile, Ala, Met
<220>
<221> SIGNAL
<222> (1)...(65)
<220>
<221> CHAIN
<222> (66)...(518)
<400> SEQ ID NO: 4 
Met Glu Gln Ala Ile Met Ala Lys Gly Val Ala Thr Asn Leu Gly Leu
1               5                   10                  15     
Ser Thr Ser Ser Leu Gly Asn Pro Lys Leu Ile Val Ala Ser Ser Ser
            20                  25                  30         
Pro Pro Pro Ser Ser Ile Arg Ile Gly Ser Gly Leu Lys Leu Gly Phe
        35                  40                  45             
Ser Val Gly Leu Lys Gly Gly Val Gly Met Arg Arg Ala Val Thr Val
    50                  55                  60                 
Ser Ala Ser Val Ala Ala Ala Glu Lys Pro Ser Thr Val Pro Glu Ile
65                  70                  75                  80 
Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr Ile Lys Leu Pro Gly
                85                  90                  95     
Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ala Glu
            100                 105                 110        
Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser Asp Asp Ile Arg Tyr
        115                 120                 125            
Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr Val Glu Asp Asp Ser
    130                 135                 140                
Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly Gly Gln Phe Pro Val
145                 150                 155                 160
Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Thr
                165                 170                 175    
Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala Ala Gly Gly Asn Ala
            180                 185                 190        
Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg Glu Arg Pro Ile Gly
        195                 200                 205            
Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala Asp Val Asp Cys Ile
    210                 215                 220                
Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn Ala His Gly Gly Leu
225                 230                 235                 240
Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile Ser Ser Gln Tyr Leu
                245                 250                 255    
Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu Gly Asp Val Glu Ile
            260                 265                 270        
Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr Val Glu Met Thr Leu
        275                 280                 285            
Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu His Ser Ser Ser Trp
    290                 295                 300                
Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr Lys Ser Pro Gly Asn
305                 310                 315                 320
Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser Tyr Phe Leu Ala Gly
                325                 330                 335    
Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu Gly Cys Gly Thr Ser
            340                 345                 350        
Ser Leu Gln Gly Asp Val Lys Phe Ala Glu Val Leu Glu Lys Met Gly
        355                 360                 365            
Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr Val Thr Gly Pro Pro
    370                 375                 380                
Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala Val Asp Val Asn Met
385                 390                 395                 400
Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala Val Val Ala Leu Tyr
                405                 410                 415    
Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala Ser Trp Arg Val Lys
            420                 425                 430        
Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu Leu Arg Lys Leu Gly
        435                 440                 445             
Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val Ile Thr Pro Pro Glu
    450                 455                 460                
Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp Asp His Arg Met Ala
465                 470                 475                 480
Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val Pro Val Thr Ile Arg
                485                 490                 495    
Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp Tyr Phe Glu Val Leu
            500                 505                 510        
Gln Arg Phe Thr Thr His
        515            
<210> 5
<211> 1557
<212> DNA
<213> 阔叶土麦冬种（Liriope platyphylla）
<220>
<400> SEQ ID NO: 5 
atggagcaag cgatcatggc taagggggtc gccaccaacc tcagcctctc cacttcctcc     60
cttgggaatc cgaagctcat cgtggcctct tcttctcctc cttcttcttc gattcggatc    120
ggatcggggc tgaaactagg gttttcggtt ggtttgaagg ggggagttgg gatgaggagg    180
gcggttacgg tttcggcgtc ggtggcggcg gcggagaagc cgtcgacggt gccggagatc    240
gtgctgcagc cgatcaagga gatctcgggg acgatcaagc tcccgggatc caagtcgttg    300
tccaatcgga ttctgcttct tgccgcgctc gctgagggaa ctactgttgt ggacaatttg    360
ttggacagtg atgacattcg ctatatgctt gctgcactta aaacgcttgg gctcgctgta    420
gaagatgata gtgtcatgaa acgtgcaact gttgtgggat ctggtggtca atttcctgtt    480
gggaaagatt ccaaagaggt tcaacttttt ctaggaaatg cagggactgc aatgcgtcct    540
ctgacagctg ctgttattgc tgctggtgga aatgcaagtt acatacttga tggggtacca    600
cgaatgaggg agaggcctat aggggacttg gttgttggct tgaagcagtt aggtgcagat    660
gttgattgca ttttgggatc tgactgtcct cctgttcgtg ccaatgcaca tggaggtctt    720
ccaggaggaa aggtgaaact ctctggatca attagcagtc agtatttgac tgcgttgctt    780
atggcagcgc ccttagctct tggagatgtg gagattgaga tcatggataa acttatttca    840
gtcccatatg ttgaaatgac gcttaaactg atggaacgtt ttggtgttag tgtggagcat    900
tccagtagct gggataggtt cttcatcaag ggtggtcaaa agtacaagtc ccctggaaat    960
gcttatgtgg aaggtgatgc ttcgagcgct agttattttc tcgcaggtgc agcggtcact   1020
ggcggcacgg taactgttga gggttgtggc acgagcagtt tgcagggaga tgtaaaattc   1080
gctgaagttc ttgagaaaat gggggcaaag gttacatgga cagagaatag cgtcacagta   1140
acaggcccac cgcaagatcc ttccaagaag aagcgattgc gagccattga tgtcaatatg   1200
aataaaatgc ctgatgttgc catgactcta gctgttgttg ctctttatgc tgatggtccg   1260
actgccatta gagacgttgc ttcttggcga gtaaaggaga ccgaacgaat gattgctatt   1320
tgtacagaac ttagaaagct gggagcaaca gtggaggaag gacccgatta ctgcgtgatc   1380
accccaccgg agaagctgaa cgcgactgca atcgacacct acgacgatca caggatggct   1440
atggcgttct ctctcgcagc ctgtggggat gtacccgtca cgatcagaga ccccggttgc   1500
acccgcaaaa ctttcccgga ctattttgag gtattgcaga ggttcacaac gcactaa      1557
<210> 6
<211> 518
<212> PRT
<213>阔叶土麦冬种（Liriope platyphylla）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (146,186,234,275)
<223>  Met, Ile, Ala, Met
<220>
<221> SIGNAL
<222> (1)...(65)
<220>
<221> CHAIN
<222> (66)...(518)
<400> SEQ ID NO: 6 
Met Glu Gln Ala Ile Met Ala Lys Gly Val Ala Thr Asn Leu Ser Leu
1               5                   10                  15     
Ser Thr Ser Ser Leu Gly Asn Pro Lys Leu Ile Val Ala Ser Ser Ser
            20                  25                  30         
Pro Pro Ser Ser Ser Ile Arg Ile Gly Ser Gly Leu Lys Leu Gly Phe
        35                  40                  45             
Ser Val Gly Leu Lys Gly Gly Val Gly Met Arg Arg Ala Val Thr Val
    50                  55                  60                 
Ser Ala Ser Val Ala Ala Ala Glu Lys Pro Ser Thr Val Pro Glu Ile
65                  70                  75                  80 
Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr Ile Lys Leu Pro Gly
                85                  90                  95     
Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu Ala Ala Leu Ala Glu
            100                 105                 110        
Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser Asp Asp Ile Arg Tyr
        115                 120                 125            
Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Ala Val Glu Asp Asp Ser
    130                 135                 140                
Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly Gly Gln Phe Pro Val
145                 150                 155                 160
Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu Gly Asn Ala Gly Thr
                165                 170                 175    
Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala Ala Gly Gly Asn Ala
            180                 185                 190        
Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg Glu Arg Pro Ile Gly
        195                 200                 205            
Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala Asp Val Asp Cys Ile
    210                 215                 220                
Leu Gly Ser Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn Ala His Gly Gly Leu
225                 230                 235                 240
Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile Ser Ser Gln Tyr Leu
                245                 250                 255    
Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu Gly Asp Val Glu Ile
            260                 265                 270        
Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr Val Glu Met Thr Leu
        275                 280                 285            
Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu His Ser Ser Ser Trp
    290                 295                 300                
Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr Lys Ser Pro Gly Asn
305                 310                 315                 320
Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser Tyr Phe Leu Ala Gly
                325                 330                 335    
Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu Gly Cys Gly Thr Ser
            340                 345                 350        
Ser Leu Gln Gly Asp Val Lys Phe Ala Glu Val Leu Glu Lys Met Gly
        355                 360                 365            
Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr Val Thr Gly Pro Pro
    370                 375                 380                
Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala Ile Asp Val Asn Met
385                 390                 395                 400
Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala Val Val Ala Leu Tyr
                405                 410                 415     
Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala Ser Trp Arg Val Lys
            420                 425                 430        
Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu Leu Arg Lys Leu Gly
        435                 440                 445             
Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val Ile Thr Pro Pro Glu
    450                 455                 460                
Lys Leu Asn Ala Thr Ala Ile Asp Thr Tyr Asp Asp His Arg Met Ala
465                 470                 475                 480
Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Gly Asp Val Pro Val Thr Ile Arg
                485                 490                 495    
Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp Tyr Phe Glu Val Leu
            500                 505                 510        
Gln Arg Phe Thr Thr His
        515            
<210> 7
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<400> SEQ ID NO: 7 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Lys Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Arg Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 8
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 8 
Gly Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val Leu Glu Lys Met Gly Ala 
1               5                   10                  15   
<210> 9
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 9
Gly Gly Asp Val Lys Tyr Ala Glu Val Leu Glu Lys Met Gly Ala 
1               5                   10                  15     
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 10
Gly Gly Asp Val Lys Phe Ala Glu Val His Glu Lys Met Gly Ala 
1               5                   10                  15  
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 11
Gly Gly Asp Val Arg Tyr Ala Glu Val Leu Glu Lys Met Gly Ala 
1               5                   10                  15 
<210> 12
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 12
Gly Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val His Glu Lys Met Gly Ala 
1               5                   10                  15  
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 13
Gly Gly Asp Val Lys Tyr Ala Glu Val His Glu Lys Met Gly Ala 
1               5                   10                  15    
<210> 14
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 14
Gly Gly Asp Val Arg Tyr Ala Glu Val His Glu Lys Met Gly Ala 
1               5                   10                  15  
<210> 15
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 15
Glu Pro Val Thr Ile Arg Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30          
<210> 16
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 16
Val Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30
<210> 17
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 17
Val Pro Val Thr Ile Arg Val Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30 
<210> 18
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 18
Val Pro Val Thr Ile Arg Asp Pro Cys Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30
<210> 19
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 19
Val Pro Val Thr Ile Arg Asp Pro Gly Tyr Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr               
            20                  25                  30  
<210> 20
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 20
Glu Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30   
<210> 21
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 21
Glu Pro Val Thr Ile Arg Val Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30  
<210> 22
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 22
Val Pro Val Thr Ile Gly Val Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30
<210> 23
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 23
Val Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Cys Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30
<210> 24
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 24
Val Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Tyr Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30 
<210> 25
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 25
Val Pro Val Thr Ile Arg Val Pro Gly Tyr Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30         
<210> 26
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 26
Glu Pro Val Thr Ile Gly Val Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30         
<210> 27
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 27
Glu Pro Val Thr Ile Arg Asp Pro Cys Tyr Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30  
<210> 28
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> SEQ ID NO: 28
Val Pro Val Thr Ile Gly Val Pro Cys Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro
1               5                   10                  15     
Asp Tyr              
            20                  25                  30       
<210> 29
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (37，67，276，350，421)
<223>  Val，Asn，Ser，Gly，Gly
<400> SEQ ID NO: 29 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Val Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asn Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110         
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                 
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Ser Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Lys Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Gly Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 30
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (10，202，271，308，397)
<223>  Thr，Gln，Ala，Ser，Val
<400> SEQ ID NO: 30 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Thr Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15      
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45              
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Gln Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Ala Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Lys Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Ser Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Val Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 31
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (27，82，90，93，198，347，366，421，425)
<223>  Tyr，Leu，Asn，His，Val，Gly，Arg，Gly，Tyr
<400> SEQ ID NO: 31 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Tyr Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Leu Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Asn Glu Val His Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Val Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Lys Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Gly Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Arg Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Tyr Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 32
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (69，208，254，284，299，421)
<223>  Arg，Phe，Gly，Arg，Ile，Gly
<400> SEQ ID NO: 32 
Met Glu Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Arg Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Phe
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Gly Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Ile Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 33
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (70，100，284，421)
<223>  Ala，Trp， Arg， Gly
<400> SEQ ID NO: 33 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Ala Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Trp Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110         
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                 
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 34
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (69,284，421)
<223>  Arg，Arg，Gly
<400> SEQ ID NO: 34 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Tyr Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Arg Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Leu Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Asn Glu Val His Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                 
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Val Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205             
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Gly Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Arg Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Tyr Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445     
<210> 35
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (284，421)
<223> Arg，Gly
<400> SEQ ID NO: 35 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205             
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                 
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 36
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (69，211，247，284，348，421)
<223>  Arg，Val，Cys，Arg，Val，Gly
<400> SEQ ID NO: 36 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Arg Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Val Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Cys Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Val Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 37
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (48，137，169，235，248，421)
<223>  Cys，Ile，Glu，Met，Arg，Gly
<400> SEQ ID NO: 37
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Cys
        35                  40                  45              
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Ile Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Glu Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Met Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 38
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (120，284，332，340，389，421)
<223>  Leu，Arg，Val，Pro，Val，Gly
<400> SEQ ID NO: 38 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Leu Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Val Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Pro Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Val Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 39
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (66，224，284，353， 421)
<223>  Gly，Gly，Arg，Thr， Gly
<400> SEQ ID NO: 39 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15      
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45              
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Gly Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Gly
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Thr Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 40
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (66，284，371，401， 421)
<223>  Val，Arg，Met，Gly， Gly
<400> SEQ ID NO: 40 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15      
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45              
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Val Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Met Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Gly His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 41
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (169，265，272，284，301，310 ，421)
<223>  Arg，Ala，Gly，Arg，Tyr，Arg，Gly
<400> SEQ ID NO: 41 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Arg Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Ala Gly Gly Thr Val Thr Val Gly
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Tyr Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Arg Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 42
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (27，35，48，202，284，421，434)
<223>  Tyr，His，Gly，Asn，Arg， Gly，Leu
<400> SEQ ID NO: 42 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Tyr Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala His Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Gly
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Asn Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Leu Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 43
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (44，169，251，284，308，353，394， 421)
<223>  Lys，Thr，Asn，Arg，Thr，Thr，Tyr，Gly
<400> SEQ ID NO: 43 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Lys Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Thr Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asn Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Thr Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Thr Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Tyr Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 44
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (284，285，289，325，378，398，421)
<223>  Arg，Tyr，His，Leu，Asp，Ser， Gly
<400> SEQ ID NO: 44 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Tyr Ala Glu Val
        275                 280                 285            
His Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Leu Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Asp Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Ser Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 45
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (49，120，186，270，284，304，416，421)
<223>  Val，Val，Thr，Ile，Arg，Lys，Glu， Gly
<400> SEQ ID NO: 45 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Val Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Val Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Thr Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Ile Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Lys
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Glu
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 46
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (51，59，95，284，316，421)
<223>  Val，Arg，Leu，Arg，Arg，Gly
<400> SEQ ID NO: 46 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45              
Asp Asp Val Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Arg Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Leu Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Arg Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 47
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (73，88，154，178，234，250，284，358，421)
<223>  Pro，Val，Ser，Cys，Asn，Glu， Arg，Gly，Gly
<400> SEQ ID NO: 47 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Pro Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Val Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Ser Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Cys Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Lys Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Asn Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Gly Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 48
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (24，34，74，133，284，323，387，389，416，421， 422)
<223>  Thr，Ser，Val，Arg，Arg，Asp，Thr，Val，Leu，Gly，Val
<400> SEQ ID NO: 48 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Thr Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ser Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Val Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Arg Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Asp Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Thr Pro Val Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Leu
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Val Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 49
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (117，212， 284，421，441)
<223>  Thr，Ser，Arg，Gly，Pro
<400> SEQ ID NO: 49 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15      
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45              
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Thr Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Ser Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Pro Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 50
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (75，87，268，284，359，362， 421)
<223>  Ser，Arg，Ser，Arg，Ser，Lys，Gly
<400> SEQ ID NO: 50 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45             
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Ser Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Arg Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Ser Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Ser Glu Arg Lys Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 51
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (68，284，349，421，424)
<223>  Gly，Arg，Gly，Gly，Cys
<400> SEQ ID NO: 51 
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15      
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45              
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Gly Ser Val Met Lys Arg Ala Thr Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Val Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Gly Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Leu Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Asp Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Cys Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445            
<210> 52
<211> 443
<212> PRT
<213>土麦冬种（Liriopes Spicatae）
<220>
<221> ACT_SITE
<222> (75，110，284，372，381，421)
<223>  Ser，Ala，Arg，Gln，Val，Gly
<400> SEQ ID NO:52
Met Val Pro Glu Ile Val Leu Gln Pro Ile Lys Glu Ile Ser Gly Thr
1               5                   10                  15     
Ile Lys Leu Pro Gly Ser Lys Ser Leu Ser Asn Arg Ile Leu Leu Leu
            20                  25                  30         
Ala Ala Leu Ala Glu Gly Thr Thr Val Val Asp Asn Leu Leu Asp Ser
        35                  40                  45              
Asp Asp Ile Arg Tyr Met Leu Ala Ala Leu Lys Thr Leu Gly Leu Thr
    50                  55                  60                 
Val Glu Asp Asp Ser Val Met Lys Arg Ala Ser Val Val Gly Ser Gly
65                  70                  75                  80 
Gly Gln Phe Pro Val Gly Lys Asp Ser Lys Glu Val Gln Leu Phe Leu
                85                  90                  95     
Gly Asn Ala Gly Thr Ala Met Arg Pro Leu Thr Ala Ala Ala Ile Ala
            100                 105                 110        
Ala Gly Gly Asn Ala Ser Tyr Ile Leu Asp Gly Val Pro Arg Met Arg
        115                 120                 125            
Glu Arg Pro Ile Gly Asp Leu Val Val Gly Leu Lys Gln Leu Gly Ala
    130                 135                 140                
Asp Val Asp Cys Ile Leu Gly Thr Asp Cys Pro Pro Val Arg Ala Asn
145                 150                 155                 160
Ala His Gly Gly Leu Pro Gly Gly Lys Val Lys Leu Ser Gly Ser Ile
                165                 170                 175    
Ser Ser Gln Tyr Leu Thr Ala Leu Leu Met Ala Ala Pro Leu Ala Leu
            180                 185                 190        
Gly Asp Val Glu Ile Glu Ile Met Asp Lys Leu Ile Ser Val Pro Tyr
        195                 200                 205            
Val Glu Met Thr Leu Lys Leu Met Glu Arg Phe Gly Val Ser Val Glu
    210                 215                 220                
His Ser Ser Ser Trp Asp Arg Phe Phe Ile Lys Gly Gly Gln Lys Tyr
225                 230                 235                 240
Lys Ser Pro Gly Asn Ala Tyr Val Glu Gly Asp Ala Ser Ser Ala Ser
                245                 250                 255    
Tyr Phe Leu Ala Gly Ala Ala Val Thr Gly Gly Thr Val Thr Val Glu
            260                 265                 270        
Gly Cys Gly Thr Ser Ser Leu Gln Gly Asp Val Arg Phe Ala Glu Val
        275                 280                 285            
Leu Glu Lys Met Gly Ala Lys Val Thr Trp Thr Glu Asn Ser Val Thr
    290                 295                 300                
Val Thr Gly Pro Pro Gln Asp Pro Ser Lys Lys Lys Arg Leu Arg Ala
305                 310                 315                 320
Val Asp Val Asn Met Asn Lys Met Pro Asp Val Ala Met Thr Leu Ala
                325                 330                 335    
Val Val Ala Leu Tyr Ala Asp Gly Pro Thr Ala Ile Arg Asp Val Ala
            340                 345                 350        
Ser Trp Arg Val Lys Glu Thr Glu Arg Met Ile Ala Ile Cys Thr Glu
        355                 360                 365            
Leu Arg Lys Gln Gly Ala Thr Val Glu Glu Gly Pro Val Tyr Cys Val
    370                 375                 380                
Ile Thr Pro Pro Glu Lys Leu Asn Ala Asn Ala Ile Asp Thr Tyr Asp
385                 390                 395                 400
Asp His Arg Met Ala Met Ala Phe Ser Leu Ala Ala Cys Ala Asp Val
                405                 410                 415    
Pro Val Thr Ile Gly Asp Pro Gly Cys Thr Arg Lys Thr Phe Pro Asp
            420                 425                 430        
Tyr Phe Glu Val Leu Gln Arg Phe Thr Thr His     
        435                 440                 445  

Claims (10)

1.一种具有草甘膦耐性的基因，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：5。
2.一种具有草甘膦耐性的蛋白质多肽，该蛋白质多肽的氨基酸序列为SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6 。
3.一种具有草甘膦耐性的基因，该基因的核苷酸序列为编码权利要求2所述蛋白质多肽的核苷酸序列。
4.一种具有草甘膦耐性的基因，其特征在于：所述基因编码的蛋白质的氨基酸序列在SEQ ID NO：7的第280到294位的保守区1、第416到433位的保守区2中至少各发生一个氨基酸突变；所述保守区1中的氨基酸突变优选发生在第284位、第285位、第289位；所述保守区2中的氨基酸突变优选发生在第416位、第421位、第422位、第424位、第425位；所述氨基酸突变最优为：第284位氨基酸突变为精氨酸，第285位氨基酸突变为酪氨酸，第289位氨基酸突变为组氨酸，第416位氨基酸突变为谷氨酸，第421位氨基酸突变为甘氨酸，第422位氨基酸突变为缬氨酸，第424位氨基酸突变为半胱氨酸，第425位氨基酸突变为酪氨酸。
5.一种具有草甘膦耐性的蛋白质，其特征在于：所述蛋白质的氨基酸序列的第280到294位的保守区1为SEQ ID NO：8-14中任意一种，第416到433位的保守区2为SEQ ID NO：15-28中任意一种，其余氨基酸序列同氨基酸序列SEQ ID NO：7；或所述蛋白质的氨基酸序列优选为SEQ ID NO：29-52中任意一种。
6.一种具有草甘膦耐性的基因，该基因的核苷酸序列为编码权利要求5所述蛋白质的核苷酸序列。
7.包含权利要求1、3、4或6所述基因的表达载体，所述表达载体为原核表达载体或植物转化质粒。
8.权利要求1、3、4或6所述基因在制备抗/耐草甘膦植株方面的用途。
9.根据权利要求8所述基因在制备抗/耐草甘膦植株方面的用途，其特征在于：包括以下步骤：
（1）利用DNA重组技术，构建含有所述基因的植物转化质粒；
（2）将步骤（1）中构建的植物转化质粒通过基因枪或农杆菌浸染方法或花粉介导法导入植物组织，利用草甘膦培养基筛选含有所述基因的植物细胞；
（3）将步骤（2）中筛选的植物细胞进行分化获得转化芽，经过生根培养获得植物种苗，从而得到所述抗/耐草甘膦植株。
10.权利要求1、3、4或6所述基因作为植物转基因筛选标记的用途。
CN201310396762.3A 2012-09-06 2013-09-04 一种具有草甘膦耐性的基因及其应用 Active CN103436547B (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310396762.3A CN103436547B (zh) 2012-09-06 2013-09-04 一种具有草甘膦耐性的基因及其应用
US15/109,580 US9926573B2 (en) 2012-09-06 2013-09-05 Glyphosate-tolerant gene and use thereof
PCT/CN2013/001039 WO2014036806A1 (zh) 2012-09-06 2013-09-05 一种具有草甘膦耐性的基因及其应用

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201210326805.6 2012-09-06
CN2012103268056A CN102816777A (zh) 2012-09-06 2012-09-06 植物抗/耐草甘膦基因及其应用
CN201310396762.3A CN103436547B (zh) 2012-09-06 2013-09-04 一种具有草甘膦耐性的基因及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103436547A true CN103436547A (zh) 2013-12-11
CN103436547B CN103436547B (zh) 2016-01-20

Family

ID=47301223

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012103268056A Pending CN102816777A (zh) 2012-09-06 2012-09-06 植物抗/耐草甘膦基因及其应用
CN201310396762.3A Active CN103436547B (zh) 2012-09-06 2013-09-04 一种具有草甘膦耐性的基因及其应用

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012103268056A Pending CN102816777A (zh) 2012-09-06 2012-09-06 植物抗/耐草甘膦基因及其应用

Country Status (3)

Country Link
US (1) US9926573B2 (zh)
CN (2) CN102816777A (zh)
WO (1) WO2014036806A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109182370A (zh) * 2018-08-03 2019-01-11 浙江大学 一种植物多基因表达载体、转化子及其应用
CN111500603A (zh) * 2020-04-29 2020-08-07 海南大学 第101位点发生突变的橡胶树epsps基因及其检测方法和应用
CN113122516A (zh) * 2019-12-31 2021-07-16 科稷达隆生物技术有限公司 一种植物epsps突变体及其在植物中的应用
CN114280306A (zh) * 2021-05-27 2022-04-05 中国农业科学院植物保护研究所 牛筋草epsps蛋白elisa检测试剂盒及检测方法

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102816777A (zh) 2012-09-06 2012-12-12 南京农业大学 植物抗/耐草甘膦基因及其应用
CN109913475A (zh) * 2019-03-29 2019-06-21 肖宇 一种增强橡胶草抗除草剂的基因、介导载体及应用
CN111944830B (zh) * 2020-08-26 2023-04-21 湖南省农业生物技术研究所 一种抗除草剂基因及其构建的载体、表达的多肽和基因的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101501197A (zh) * 2006-06-13 2009-08-05 阿则耐克斯公司 改善的epsp合酶：组合物及使用方法
CN102146371A (zh) * 2011-01-17 2011-08-10 杭州瑞丰生物科技有限公司 高抗草甘膦特变基因及其改良方法和应用
CN102399794A (zh) * 2010-09-08 2012-04-04 创世纪转基因技术有限公司 一种棉花epsp合成酶突变体基因及其应用

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101285057B (zh) 2007-04-11 2013-04-10 中国农业科学院生物技术研究所 高抗草甘膦的epsp合酶及其编码序列
CN102643480B (zh) * 2012-05-04 2014-05-14 浙江三威防静电装备有限公司 防静电合金复合材料、制备方法
CN102816777A (zh) 2012-09-06 2012-12-12 南京农业大学 植物抗/耐草甘膦基因及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101501197A (zh) * 2006-06-13 2009-08-05 阿则耐克斯公司 改善的epsp合酶：组合物及使用方法
CN102399794A (zh) * 2010-09-08 2012-04-04 创世纪转基因技术有限公司 一种棉花epsp合成酶突变体基因及其应用
CN102146371A (zh) * 2011-01-17 2011-08-10 杭州瑞丰生物科技有限公司 高抗草甘膦特变基因及其改良方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JIANG,X. ET AL.: "Allium macrostemon EPSP synthase mRNA, complete cds", 《GENBANK: DQ462442.4》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109182370A (zh) * 2018-08-03 2019-01-11 浙江大学 一种植物多基因表达载体、转化子及其应用
CN109182370B (zh) * 2018-08-03 2022-06-17 浙江大学 一种植物多基因表达载体、转化子及其应用
CN113122516A (zh) * 2019-12-31 2021-07-16 科稷达隆生物技术有限公司 一种植物epsps突变体及其在植物中的应用
CN113122516B (zh) * 2019-12-31 2022-06-24 科稷达隆(北京)生物技术有限公司 一种植物epsps突变体及其在植物中的应用
CN111500603A (zh) * 2020-04-29 2020-08-07 海南大学 第101位点发生突变的橡胶树epsps基因及其检测方法和应用
CN111500603B (zh) * 2020-04-29 2023-04-18 海南大学 第101位点发生突变的橡胶树epsps基因及其检测方法和应用
CN114280306A (zh) * 2021-05-27 2022-04-05 中国农业科学院植物保护研究所 牛筋草epsps蛋白elisa检测试剂盒及检测方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN102816777A (zh) 2012-12-12
WO2014036806A1 (zh) 2014-03-13
CN103436547B (zh) 2016-01-20
US9926573B2 (en) 2018-03-27
US20160340689A1 (en) 2016-11-24
WO2014036806A8 (zh) 2014-10-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA3018255C (en) Herbicide tolerant protein, coding gene thereof and use thereof
CN103436547B (zh) 一种具有草甘膦耐性的基因及其应用
JP5323044B2 (ja) 植物においてストレス耐性を高める方法およびその方法
US20130145493A1 (en) Transgenic Plants with Enhanced Agronomic Traits
US20230212587A1 (en) Mutant Hydroxyphenylpyruvate Dioxygenase Polypeptide, Encoding Gene Thereof and Use Therefor
WO2010042575A1 (en) Transgenic plants with enhanced agronomic traits
CN105746255A (zh) 除草剂耐受性蛋白质的用途
CN105724139A (zh) 除草剂耐受性蛋白质的用途
CN105766992A (zh) 除草剂耐受性蛋白质的用途
US20140090101A1 (en) Transgenic plants with enhanced agronomic traits
GUO et al. Rapid and convenient transformation of cotton (Gossypium hirsutum L.) using in planta shoot apex via glyphosate selection
CN113604480B (zh) 一种玉米转录因子ZmHsf28及应用
CN112626111A (zh) 一种除草剂抗性基因表达载体及其应用
CN103409445A (zh) 抗草甘膦基因mtp-smg2-epsps及其在培育抗草甘膦玉米中的应用
KR100994443B1 (ko) 두 가지 제초제에 대하여 저항성을 가지는 항생제 마커프리형질전환 콩 식물체
KR100458138B1 (ko) 한국형 잔디의 유전적 형질전환 방법
CN102732553A (zh) 提高植物产量的基因工程方法及材料
KR101190255B1 (ko) 두 가지 제초제에 대하여 저항성을 가지는 항생제 마커프리 형질전환 크리핑 벤트그라스 식물체
KR20110001312A (ko) 무름병 내성이 증진된 배추의 형질전환체 및 그 제조방법
Datta Transgenic tomato (Solanum lycopersicum Mill.) regeneration by comparing different transformation techniques
Padole et al. In planta transformation studies in Gossypium hirsutum (L.)
CN115992173A (zh) 一种制备抗花瓣侵染病害转基因材料的方法
CN117363643A (zh) 耐除草剂抗虫耐逆大豆京豆625和京豆626培育方法及其应用
CN117511964A (zh) 一种GmERF5基因在抗旱和耐盐胁迫中的应用
CN110592087A (zh) Sgr基因的沉默在芸薹属植物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP02 Change in the address of a patent holder

Address after: 211225 Jiangsu Nanjing Lishui District Baima Town National Agricultural Science and Technology Park Nanjing Agricultural University base

Patentee after: Nanjing Agricultural University

Address before: 210095 Wei Gang 1, Xuanwu District, Nanjing, Jiangsu

Patentee before: Nanjing Agricultural University

CP02 Change in the address of a patent holder