CN103421882A - 鹿血活性晶体制剂的鉴定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，该方法包括对鹿血活性晶体制剂中所含鹿血特异DNA序列的PCR扩增试验鉴定，若扩增出405bp的条带表示其中含有梅花鹿马鹿血成分，若扩增出317bp的条带则表示其中含有梅花鹿血成分；对所含特异抗原决定簇的免疫沉淀反应试验鉴定，若各非鹿血抗体免疫血清与所述鹿血活性晶体制剂之间出现免疫沉淀线，则表示所测鹿血活性晶体制剂中含有其他非鹿血成分；和对所含特异蛋白成分的SDS-PAGE试验鉴定，若经处理后的凝胶出现鹿血的特征谱带则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有鹿血特异蛋白成分；上述方法为当前市场上鹿血晶产品的真伪优劣提供了完整并科学可靠的鉴定方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种鹿血产品的鉴定方法，尤其涉及一种鹿血活性晶体制剂中所含的特异DNA序列、特异抗原决定簇和特异蛋白成分的鉴定方法，为鹿血产品在分子生物学、免疫学和生物化学方面的特型鉴定，属生物制品鉴定技术领域。
背景技术
鹿源类动物药材为名贵中药材，其中源自梅花鹿和马鹿的药材被《中国药典》列为正品。各种鹿源类药材中，由于鹿血具有补虚损、益精血、强腰肾和安心神的功效，被广泛记载并应用于中国传统医药学中。目前常见的鹿血产品主要为鹿血活性晶体（鹿血晶），但市场上的伪鹿血晶产品中往往掺有羊血、牛血、马血、猪血、驴血和狗血等，甚至完全以上述普通动物血以次充好，因此急需一系列科学可靠的检测纯正鹿血晶产品的方法。而目前对鹿血晶产品完整的科学鉴定方法，特别在鹿血晶的分子生物学、免疫学及生物化学的特型鉴定方面尚无依据可询，因此用高科技建立鹿血晶产品的分子生物学、免疫学和生物化学方面的特型鉴定手段，成为当前紧要任务。
发明内容
为了克服上述现有技术中存在的不足，本发明提供了鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，该鉴定方法通过对鹿血晶中所含鹿血特异DNA序列的PCR扩增试验鉴定，对其中所含特异抗原决定簇的免疫沉淀反应试验鉴定，和对其中所含特异蛋白的SDS-PAGE试验鉴定，为当前市场上鹿血晶产品的真伪优劣提供了科学可靠的鉴定方法。
本发明为了解决其技术问题所采用的技术方案是：
一种鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，包括对鹿血活性晶体制剂中所含鹿血特异DNA序列的PCR扩增试验鉴定，若扩增出405bp的条带则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有梅花鹿马鹿血成分，若扩增出317bp的条带则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有梅花鹿血成分；对鹿血活性晶体制剂中所含特异抗原决定簇的免疫沉淀反应试验鉴定，若各非鹿血抗体免疫血清与所述鹿血活性晶体制剂之间出现免疫沉淀线，则表示所测鹿血活性晶体制剂中含有其他非鹿血成分；和对鹿血活性晶体制剂中所含特异蛋白成分的SDS-PAGE试验鉴定，若经处理后的凝胶出现鹿血的特征谱带则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有鹿血特异蛋白成分。
本发明所采用的进一步技术方案是：
所述对鹿血活性晶体制剂中所含鹿血特异DNA序列的PCR扩增试验鉴定，包括以下步骤：
（1）按传统DNA纯化提取方法将鹿血活性晶体制剂中的基因组DNA进行纯化提取，得经纯化的鹿血基因组DNA提取物；
（2）利用引物对EP-1/H1478对（1）中所得鹿血基因组DNA提取物进行PCR扩增试验进行扩增，得扩增产物一；利用引物对EP-2/H1478对（1）中所得鹿血基因组DNA提取物进行PCR扩增试验进行扩增，得扩增产物二；
（3）将（2）中所得扩增产物一和二分别进行琼脂糖凝胶电泳检测，若能扩增出405bp的条带则表示鹿血活性晶体制剂含有梅花鹿马鹿的鹿血成分，若能扩增出317bp的条带则表示鹿血活性晶体制剂含有梅花鹿的鹿血成分。
所述PCR扩增试验的反应体系为：鹿血基因组DNA提取物为1μg；10×PCR Buffer为10μL；引物对EP-1/H1478或引物对EP-2/H1478，其中每对引物对的正反向序列各80pmol；Taq.DNA聚合酶为3U；双蒸水补足体积至100μL；其中Mg2+含量为1.5mmol/L，dNTPs混合物含量各为200μmol/L；所述PCR扩增试验的反应程序为：85℃下变性2min，60℃下退火30sec，68℃下延伸50sec，进行35次扩增循环。
本发明所采用的进一步技术方案是：
对鹿血活性晶体制剂中所含特异抗原决定簇的免疫沉淀反应试验鉴定，包括以下步骤：
（1）采用0.1mol/L的巴比妥-巴比妥钠缓冲液和琼脂糖配制成0.8wt.%的琼脂糖凝胶，并在所述琼脂糖凝胶上制备若干同等孔深与同等孔径的凝胶扩散孔；
（2）于（1）中所述凝胶扩散孔中分别加入等量的不同种类的非鹿血抗体免疫血清和鹿血活性晶体制剂，室温下放置24h进行扩散；
（3）观察经（2）扩散好的琼脂糖凝胶上不同的非鹿血抗体免疫血清与鹿血活性晶体制剂之间的免疫沉淀线出现情况，若非鹿血抗体免疫血清与鹿血活性晶体制剂之间出现免疫沉淀线则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有其他非鹿血成分。
所述非鹿血抗体免疫血清为常见动物血抗体免疫血清，优选为羊全血抗体免疫血清、牛全血抗体免疫血清、马全血抗体免疫血清、猪全血抗体免疫血清、驴全血抗体免疫血清和狗全血抗体免疫血清。
本发明所采用的进一步技术方案是：
对鹿血活性晶体制剂中所含特异蛋白成分的SDS-PAGE试验鉴定，包括以下步骤：
（1）配制聚丙烯酰胺凝胶：在Bio-Rad微型凝胶电泳系统中的凝胶模具中分别灌注同等体积的6%（w/v）、9%（w/v）和12%（w/v）的分离胶溶液；在所述分离胶溶液上覆盖1mm~5mm的水层，静置直至分离胶溶液聚合形成分离胶后，将所述水层除去；在所述分离胶溶液上方分别灌注等同体积5%（w/v）的浓缩胶溶液；
（2）在（1）中所灌注的浓缩胶溶液上制备梳形样品孔，静置待浓缩胶溶液聚合形成浓缩胶；
（3）分别向所述梳形样品孔中添加等量的待测鹿血活性晶体制剂，并采用110V电压进行电泳1h；
（4）将经（3）电泳后的凝胶采用20~25ml考马斯亮蓝R250对所述凝胶进行染色5~15min后，将经染色后的凝胶放入50~60ml考马斯亮蓝脱色液中进行脱色1h；将所述经脱色后的凝胶采用干胶仪干燥；
（5）判读经（4）处理后的凝胶，若所述凝胶上出现鹿血的特征谱带则说明待测鹿血活性晶体制剂中含有鹿血特异蛋白成分。
本发明的有益技术效果是：本发明通过针对鹿血晶中鹿血特异DNA序列进行的PCR扩增试验，若能扩增出405bp的条带则表示鹿血晶含有梅花鹿马鹿血成分，若能扩增出317bp的条带则表示鹿血晶含有梅花鹿血成分；通过针对鹿血晶中所含特异抗原决定簇进行的免疫沉淀反应，若各非鹿血抗体与鹿血晶之间出现免疫沉淀线，则表示所测鹿血晶中含有其他非鹿血成分；通过针对鹿血晶中所含特异蛋白成分的SDS-PAGE试验鉴定，若经处理后的凝胶出现鹿血的特征谱带则说明待测样品中含有鹿血的特异蛋白成分，为当前市场上鹿血晶产品的真伪优劣提供了完整并科学可靠的鉴定方法。
附图说明
图1为鹿血晶及不同源种动物全血PCR实验中琼脂糖凝胶电泳检测结果；图1中数字编号与表1中数字编号含义相同；
图2为以鹿血晶为供试品，分别与羊、牛、马、猪、驴和狗的全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验结果；
图3为以鹿血晶和羊全血为供试品，分别与羊、牛、马、猪、驴和狗的全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验结果；
图4为以鹿血晶和牛全血为供试品，分别与羊、牛、马、猪、驴和狗的全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验结果；
图5为以鹿血晶和马全血为供试品，分别与羊、牛、马、猪、驴和狗的全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验结果；
图6为以鹿血晶和猪全血为供试品，分别与羊、牛、马、猪、驴和狗的全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验结果；
图7为以鹿血晶和驴全血为供试品，分别与羊、牛、马、猪、驴和狗的全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验结果；
图8为以鹿血晶和狗全血为供试品，分别与羊、牛、马、猪、驴和狗的全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验结果；
图9为以鹿血晶为供试品，以牛全血、羊全血和猪全血为副供试品，分别与牛全血抗体免疫血清、羊全血抗体免疫血清和猪全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验结果；
图10为采用5%（w/v）浓缩胶，6%（w/v）分离胶制备的SDS-PAGE凝胶对待测鹿血活性晶体制剂的检测结果；
图11为采用5%（w/v）浓缩胶，9%（w/v）分离胶制备的SDS-PAGE凝胶对待测鹿血活性晶体制剂的检测结果；
图12为采用5%（w/v）浓缩胶，12%（w/v）分离胶制备的SDS-PAGE凝胶对待测鹿血活性晶体制剂的检测结果。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
（一）鹿血晶及不同源种动物全血中特异DNA序列的PCR扩增试验鉴定，包括以下步骤：
（1）采用QLAGEN公司生产的DNA提取试剂盒，按照所述试剂盒上的使用说明进行鹿血晶产品和不同源种动物全血中所含基因组DNA序列的提取纯化，得经纯化的鹿血基因组DNA提取物，和不同种源动物基因组DNA提取物；
（2）将（1）所得各基因组DNA提取物在下述反应体系和反应条件下进行PCR反应：
其中： Mg2+ 1.5mmol/L；
dNTPs混合物 每种各200μ mol/L；
其中引物对采用EP-1/H1478（SF/SR）或引物对EP-2/H1478（DF/DR），
所述SF/SR引物对的正反向序列为： CGTGGACTACGAT GCTT；TAGTCCTTGGCTACGT；
所述DF/DF引物对的正反向序列为：CAGCTAGCTATAG TCT；GTATGGATAA TGCAGTT。
反应程序：85℃变形2min；再经60℃下退火30sec后，68℃下延伸50sec，在PCR仪（Bio-Rad公司生产的MJ Mini型号）上进行35次扩增循环；
（3）将由（2）所得的PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测：采用1wt.%琼脂糖凝胶，以DL200 DNA Maker（Takara公司生产）中的DNA片段为分子量标准（其中DNA片段长度为100bp、00 bp、300 bp、400 bp、500 bp和1000bp）来计算PCR扩增产物片段的大小。
实验测试结果如下所述：
（1）通过1wt.% 琼脂糖凝胶电泳检测，并与DL200 DNAMaker比较知，马鹿梅花鹿血基因组DNA扩增得到长为405bp的目标片段；梅花鹿血基因组DNA扩增得到长为317bp的目标片段，如图1所示；
（2）鹿血晶及不同源种动物全血的PCR扩增试验产物的琼脂糖凝胶电泳结果如表1和图1所示。
表1
| 编号 | 标本来源 | SF/SR | DF/DR |
| 1 | 梅花鹿血 | 阳性 | 阳性 |
| 2 | 牛血 | 阴性 | 阴性 |
| 3 | 梅花鹿血晶 | 阳性 | 阳性 |
| 4 | 猪血 | 阴性 | 阴性 |
| 5 | 千灯鹿血晶 | 阳性 | 阳性 |
| 6 | 红冠庄鹿血晶 | 阳性 | 阳性 |
| 7 | 东北10.26鹿血晶 | 阳性 | 阳性 |
| 8 | 东北8.30鹿血晶 | 阳性 | 阳性 |
| 9 | 骡血 | 阴性 | 阴性 |
| 10 | 人血 | 阴性 | 阴性 |
| 11 | 马鹿血 | 阴性 | 阳性 |
注：其中SF/SR为梅花鹿特异引物对；DF/DR 为马鹿梅花鹿通用引物对；其中千灯鹿血晶、红冠庄鹿血晶、东北10.26鹿血晶和东北8.30鹿血晶为源自不同公司生产的鹿血晶产品。
由表1和图1中结果显示可知，梅花鹿和马鹿的血液和血晶产品均为阳性，其他动物血和人血均为阴性。其中梅花鹿特异引物对SF/SR对马鹿血不起反应，显示为阴性；马鹿梅花鹿特异引物对DF/DR对马鹿血显示为阳性。说明梅花鹿特异引物组合对SF/SR的特异性更强。该方法的高特异性和高灵敏度能够精准的鉴定鹿血和鹿血产品的真实性，以及所用鹿血的品种。
（二）鹿血晶与不同源种动物全血抗体免疫血清之间的免疫沉淀实验
实验部分
将0.8g的琼脂糖（Sigma公司生产）溶解于100ml的0.1mol/LD的巴比妥-巴比妥钠缓冲液中配制成0.8wt.%的琼脂糖凝胶溶液。然后将该琼脂糖凝胶溶液倾于干净的玻片上，待琼脂糖凝胶溶液凝固后，按规定模式制备凝胶扩散板；然后于规定模式孔内分别加入10μl供试品及10μl不同源种动物全血抗体免疫血清；将加好供试品与各抗体免疫血清的凝胶玻片板置于室温中静置扩散24小时后观察免疫沉淀线出现的情况。
所述凝胶扩散板的规定模式根据测试需要进行设计，本实验中所述的规定模式如图2~图8所示。其中0号位所添加的为供试品，1-6号位所添加的为常见动物全血的抗体免疫血清，其中1号位为羊全血抗体免疫血清，2号位为牛全血抗体免疫血清，3号位为马全血抗体免疫血清，4号位为猪全血抗体免疫血清，5号位为驴全血抗体免疫血清，6号位为狗全血抗体免疫血清，以上抗体免疫血清均购自Sigma公司；其中0号位供试品分别为：
（1）如图2所示，0号位供试品为鹿血晶；
（2）如图3所示，0号位供试品为鹿血晶和羊全血按质量比1:1均匀混合配制而成；
（3）如图4所示，0号位供试品为鹿血晶和牛全血按质量比1:1均匀混合配制而成；
（4）如图5所示，0号位供试品为鹿血晶和马全血按质量比1:1均匀混合配制而成；
（5）如图6所示，0号位供试品为鹿血晶和猪全血按质量比1:1均匀混合配制而成；
（6）如图7所示，0号位供试品为鹿血晶和驴全血按质量比1:1均匀混合配制而成；
（7）如图8所示，0号位供试品为鹿血晶和狗全血按质量比1:1均匀混合配制而成；
如图9所示，0号位供试品为鹿血晶，1号位为牛全血，2号位为牛全血抗体免疫血清Ig，3号位为羊全血，4号位为羊全血抗体免疫血清，5号位为猪全血，6号位为猪全血抗体免疫血清。
如图2所示，各抗体免疫血清与鹿血晶样品之间没有沉淀条带出现；如图3所示，仅0号位和1号位之间出现沉淀条带；如图4所示，仅0号位和2号位之间出现沉淀条带；如图5所示，仅0号位和3号位之间出现沉淀条带；如图6所示，仅0号位和4号位之间出现沉淀条带；如图7所示，仅0号位和5号位之间出现沉淀条带；如图8所示，仅0号位和6号位之间出现沉淀条带；如图9所示，1号位和2号位之间出现沉淀条带，3号位和4号位之间出现沉淀条带，5号位和6号位之间出现沉淀条带，0号位和其他位置之间无沉淀条带出现。以上实验结果说明，当鹿血晶产品中混有上述常见动物血时，可通过免疫沉淀实验，鉴定鹿血晶产品是否纯正。
（三）鹿血晶中所含特异蛋白成分的聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）试验鉴定
（1）配制聚丙烯酰胺凝胶：在Bio-Rad微型凝胶电泳系统中的凝胶模具中分别灌注同等体积的6%（w/v）、9%（w/v）和12%（w/v）的分离胶溶液；在所述分离胶溶液上覆盖5mm的水层，静置直至分离胶溶液聚合形成分离胶后，将所述水层除去；在所述分离胶溶液上方分别灌注等同体积5%（w/v）的浓缩胶溶液；
（2）在（1）中所灌注的浓缩胶溶液中插入梳子，直至梳子齿的底部与浓缩胶溶液的上表面平齐，静置直至浓缩胶溶液聚合形成浓缩胶，然后小心拔出梳子，梳子齿部分形成梳形样品孔；
（3）分别向所述梳形样品孔中添加120μg的待测鹿血活性晶体制剂，并采用110V电压进行电泳1h；
（4）将经（3）电泳后的凝胶采用25ml考马斯亮蓝R250对所述凝胶进行染色10min后，将经染色后的凝胶放入60ml考马斯亮蓝脱色液中进行脱色1h；将所述经脱色后的凝胶采用常见干胶仪进行干燥；干燥后的凝胶如图10~图12所示；
（5）图10~图12所述凝胶上均出现鹿血的特征谱带，如图10中130KD与170KD之间的两条谱带，图11中130KD与170KD之间的一条谱带和25KD以下的一条谱带，图12中25KD和15KD之间的两条特征谱带，说明待测鹿血活性晶体制剂中含有鹿血特异蛋白成分。
Claims (6)
1.一种鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，其特征在于：包括对鹿血活性晶体制剂中所含鹿血特异DNA序列的PCR扩增试验鉴定，若扩增出405bp的条带则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有梅花鹿马鹿血成分，若扩增出317bp的条带则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有梅花鹿血成分；对鹿血活性晶体制剂中所含特异抗原决定簇的免疫沉淀反应试验鉴定，若各非鹿血抗体免疫血清与所述鹿血活性晶体制剂之间出现免疫沉淀线，则表示所测鹿血活性晶体制剂中含有其他非鹿血成分；和对鹿血活性晶体制剂中所含特异蛋白成分的SDS-PAGE试验鉴定，若经处理后的凝胶出现鹿血的特征谱带则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有鹿血特异蛋白成分。
2.根据权利要求1所述的鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，其特征在于：所述对鹿血活性晶体制剂中所含鹿血特异DNA序列的PCR扩增试验鉴定，包括以下步骤：
（1）按传统DNA纯化提取方法将鹿血活性晶体制剂中的基因组DNA进行纯化提取，得经纯化的鹿血基因组DNA提取物；
（2）利用引物对EP-1/H1478对（1）中所得鹿血基因组DNA提取物进行PCR扩增试验进行扩增，得扩增产物一；利用引物对EP-2/H1478对（1）中所得鹿血基因组DNA提取物进行PCR扩增试验进行扩增，得扩增产物二；
（3）将（2）中所得扩增产物一和二分别进行琼脂糖凝胶电泳检测，若能扩增出405bp的条带则表示鹿血活性晶体制剂含有梅花鹿马鹿的鹿血成分，若能扩增出317bp的条带则表示鹿血活性晶体制剂含有梅花鹿的鹿血成分。
3.根据权利要求2所述的鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增试验的反应体系为：鹿血基因组DNA提取物为1μg；10×PCR Buffer为10μL；引物对EP-1/H1478或引物对EP-2/H1478，其中每对引物对的正反向序列各80pmol；Taq.DNA聚合酶为3U；双蒸水补足体积至100μL；其中Mg2+含量为1.5mmol/L，dNTPs混合物含量各为200μmol/L；所述PCR扩增试验的反应程序为：85℃下变性2min，60℃下退火30sec，68℃下延伸50sec，进行35次扩增循环。
4.根据权利要求1所述的鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，其特征在于：对鹿血活性晶体制剂中所含特异抗原决定簇的免疫沉淀反应试验鉴定，包括以下步骤：
（1）采用0.1mol/L的巴比妥-巴比妥钠缓冲液和琼脂糖配制成0.8wt.%的琼脂糖凝胶，并在所述琼脂糖凝胶上制备若干同等孔深与同等孔径的凝胶扩散孔；
（2）于（1）中所述凝胶扩散孔中分别加入等量的不同种类的非鹿血抗体免疫血清和鹿血活性晶体制剂，室温下放置24h进行扩散；
（3）观察经（2）扩散好的琼脂糖凝胶上不同的非鹿血抗体免疫血清与鹿血活性晶体制剂之间的免疫沉淀线出现情况，若非鹿血抗体免疫血清与鹿血活性晶体制剂之间出现免疫沉淀线则表示所述鹿血活性晶体制剂中含有其他非鹿血成分。
5.根据权利要求4所述的鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，其特征在于：所述非鹿血抗体免疫血清为常见动物血抗体免疫血清，优选为羊全血抗体免疫血清、牛全血抗体免疫血清、马全血抗体免疫血清、猪全血抗体免疫血清、驴全血抗体免疫血清和狗全血抗体免疫血清。
6.根据权利要求1所述的鹿血活性晶体制剂的鉴定方法，其特征在于：对鹿血活性晶体制剂中所含特异蛋白成分的SDS-PAGE试验鉴定，包括以下步骤：
（1）配制聚丙烯酰胺凝胶：在Bio-Rad微型凝胶电泳系统中的凝胶模具中分别灌注同等体积的6%（w/v）、9%（w/v）和12%（w/v）的分离胶溶液；在所述分离胶溶液上覆盖1mm~5mm的水层，静置直至分离胶溶液聚合形成分离胶后，将所述水层除去；在所述分离胶溶液上方分别灌注等同体积5%（w/v）的浓缩胶溶液；
（2）在（1）中所灌注的浓缩胶溶液上制备梳形样品孔，静置待浓缩胶溶液聚合形成浓缩胶；
（3）分别向所述梳形样品孔中添加等量的待测鹿血活性晶体制剂，并采用110V电压进行电泳1h；
（4）将经（3）电泳后的凝胶采用20~25ml考马斯亮蓝R250对所述凝胶进行染色5~15min后，将经染色后的凝胶放入50~60ml考马斯亮蓝脱色液中进行脱色1h；将所述经脱色后的凝胶采用干胶仪干燥；
（5）判读经（4）处理后的凝胶，若所述凝胶上出现鹿血的特征谱带则说明待测鹿血活性晶体制剂中含有鹿血特异蛋白成分。
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|---|---|
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104873541A (zh) * | 2015-06-12 | 2015-09-02 | 贵州广济堂药业有限公司 | 鹿血晶的新晶态及其制法 |
| CN106399521A (zh) * | 2016-10-09 | 2017-02-15 | 中国农业科学院特产研究所 | 一步法鉴定梅花鹿及其产品性别的多重pcr的引物组合及其鉴定方法、试剂盒 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN201388504Y (zh) * | 2009-03-16 | 2010-01-27 | 苏州市红冠庄国药饮片有限公司 | 鹿血晶制备装置 |
-
2012
- 2012-05-18 CN CN201210154335XA patent/CN103421882A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN201388504Y (zh) * | 2009-03-16 | 2010-01-27 | 苏州市红冠庄国药饮片有限公司 | 鹿血晶制备装置 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 白根本等: "鹿源类中药材DNA序列分析及马鹿和梅花鹿的PCR鉴定", 《中草药》, vol. 37, no. 10, 30 October 2006 (2006-10-30), pages 1567 - 1569 * |
| 范青等: "聚丙烯胺凝胶电泳在鹿血与其它动物血鉴别中的应用", 《中医药学报》, no. 5, 31 December 2000 (2000-12-31), pages 49 - 50 * |
| 郭秋月等: "鹿胎及其伪充品的免疫醋酸纤维素膜电泳鉴别", 《中药材》, vol. 22, no. 3, 30 March 1999 (1999-03-30), pages 121 - 122 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104873541A (zh) * | 2015-06-12 | 2015-09-02 | 贵州广济堂药业有限公司 | 鹿血晶的新晶态及其制法 |
| CN104873541B (zh) * | 2015-06-12 | 2019-04-05 | 贵州广济堂药业有限公司 | 鹿血晶的新晶态及其制法 |
| CN106399521A (zh) * | 2016-10-09 | 2017-02-15 | 中国农业科学院特产研究所 | 一步法鉴定梅花鹿及其产品性别的多重pcr的引物组合及其鉴定方法、试剂盒 |
| CN106399521B (zh) * | 2016-10-09 | 2019-07-30 | 中国农业科学院特产研究所 | 一步法鉴定梅花鹿及其产品性别的多重pcr的引物组合及其鉴定方法、试剂盒 |
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