CN103421877B - 一种抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，所述抗生素缓释药物制剂采用高分子聚合物聚卡波菲作为缓释基质，其通过采用二价阳离子金属盐作为沉淀剂使抗生素缓释药物制剂中的聚卡波菲沉淀从而使抗生素缓释药物制剂能通过薄膜进行过滤，通过对薄膜进行培养，判断是否无菌，从而使无菌检查得以实现。本检测方法适用于含有抗生素且以聚卡波菲作为缓释基质无法直接采用薄膜过滤的产品的无菌检查。
Description
技术领域
本发明涉及一种药物制剂无菌检查的检测方法，尤其是一种采用高分子聚合物聚卡波菲作为缓释基质的抗生素缓释药物制剂的无菌检查的检测方法，属于药品质量检验技术领域。
背景技术
无菌检查法系用于药典要求无菌的药品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。《中国药典》2010年版收载，供试品的无菌检查有薄膜过滤法和直接接种法，其中：（1）薄膜过滤法：取规定量的供试品经薄膜过滤器过滤后，取出滤膜在培养基上培养数日，进行阴性与阳性对照。该方法使用的滤膜孔径应不大于0.45μm，直径约为50mm。对于采用高分子聚合物聚卡波菲作为缓释基质的抗生素缓释药物制剂来说，由于聚卡波菲的分子量大、粘度大而无法进行过滤，因此无法直接使用此法对供试品进行检查。（2）直接接种法：将供试品溶液接种于培养基上，培养数日后观察培养基是否出现浑浊或沉淀，与阳性和阴性对照品比较或直接用显微镜观察。此法适用于非抗菌作用的供试品，而抗生素缓释药物制剂中的抗生素本身具有抑菌活性，且该抗生素没有相应的酶或较温和的条件可使其降解，因此也无法使用直接接种法来对该产品进行无菌检查。综上所述，以上两种检查方法均不适合抗生素缓释药物制剂的无菌检查。同时现有技术中也没有对抗生素缓释药物制剂的无菌检查的方法报道。
发明内容
针对现有的无菌检查法无法对含有高分子聚合物的抗生素缓释药物制剂进行无菌检查，本发明提供了一种新的抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，其通过采用适当的沉淀剂使抗生素缓释药物制剂中的高分子聚合物沉淀从而能通过薄膜的微孔，且又对微生物的生长无影响，该方法适用于含有抗生素且又无法直接采用薄膜过滤的产品的无菌检查。
本发明所采用的技术方案是：一种抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，所述抗生素缓释药物制剂采用高分子聚合物聚卡波菲作为缓释基质，其采用二价阳离子金属盐作为沉淀剂与所述抗生素缓释药物制剂中的聚卡波菲混合后产生沉淀，然后进行薄膜过滤，再将滤膜放入培养基内培养，观察是否有菌生长。
由于本发明中的抗生素缓释药物制剂中含有的缓释基质为高分子聚合物聚卡波菲，该高分子聚合物的分子量在100万以上，粘度大（0.2%水溶液粘度达12000cps以上），稀释5000倍都无法进行薄膜过滤，在无菌检查中无法直接采用薄膜过滤法进行检查，因此必须寻找一种沉淀剂，该沉淀剂既能使供试品进行过滤又能对微生物的生长无影响。本发明所采用的二价阳离子金属盐可使该高分子聚合物聚卡波菲得到有效沉淀，从而使供试品能通过薄膜进行过滤，并且其对微生物的生长和存活无影响，且能有效去除药物对微生物生长的抑制作用。
本发明中所用的二价阳离子金属盐作为沉淀剂，其用量一般为每升抗生素缓释药物制剂中加入1～10mol二价阳离子金属盐，其中每升抗生素缓释药物制剂中含有聚卡波菲的质量体积百分比为：0.5～1.5%。采用此种配比可使抗生素缓释药物制剂中的高分子聚合物聚卡波菲得到有效沉淀，并且不影响微生物的生长。
所述的二价阳离子金属盐为钙盐或镁盐或铁盐或锌盐或锰盐，优选钙盐，所述的二价阳离子金属盐可以是氯化钙或氯化镁或硫酸镁或硫酸锌或硫酸锰或氯化亚铁或氯化锌，优选氯化钙。上述的二价阳离子金属盐可使高分子聚合物聚卡波菲得到有效沉淀，并且保证对微生物的生长和存活无影响。
本发明中，所述的抗生素缓释药物制剂可为阿奇霉素缓释滴眼液或左氧氟沙星缓释滴眼液或氧氟沙星缓释滴眼液或妥布霉素缓释滴眼液或帕珠沙星缓释滴眼液或阿奇霉素缓释滴鼻剂。上述抗生素缓释药物制剂中含有高分子聚合物聚卡波菲，作为缓释基质。
本发明的具体操作步骤是：配制二价阳离子金属盐溶液，经湿热灭菌至室温后，无菌操作条件下将二价阳离子金属盐溶液按比例加入所述的抗生素缓释药物制剂中，摇动静置后产生沉淀，再进行薄膜过滤，用无菌蛋白胨水溶液冲洗滤膜，然后将滤膜放入培养基内培养，观察是否有菌生长，所述湿热灭菌的条件为：温度121℃～126℃，时间15min～30 min。
本发明可用于含有抗生素且以高分子聚合物聚卡波菲作为缓释基质的产品的无菌检查。
本发明所述的抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法经过了方法学验证。首先对加入的沉淀剂进行细菌回收试验，以确认其是否对微生物的生长和存活有影响，分别进行3次独立的试验并在3次独立的回收试验中，各试验菌的回收率均不低于70%，然后再进行抗生素缓释药物制剂无菌检查法的验证试验，验证合格后，照此检验法和检查条件进行供试品的无菌检查。
1、沉淀剂的细菌回收试验
本发明中所使用的菌种：大肠埃希菌CMCC（B）44102、枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、白色念珠菌ATCC10231均由中国药品生物鉴定所提供，黑曲霉菌ATCC16404由上海汉尼贸易有限公司提供。
1.1 验证用试验菌制备
验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特征。
使用菌液浓度为50～100CFU/ml。
1.2 沉淀剂的细菌回收试验
以二价阳离子盐氯化钙为例：
分别吸取9ml 5%的无菌氯化钙溶液至无菌试管中，并分别加入大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌五种试验菌50～100CFU，轻轻摇动使其均匀，每种试验菌制备2支试管，放置10分钟后，采用薄膜过滤法分别对每种试验菌进行计数。
结果：5种试验菌的回收率均大于70%，说明5%氯化钙溶液对微生物无影响。
以此方法对其他二价金属阳离子盐类进行验证，均对微生物生长无影响。
2、抗生素缓释药物制剂无菌检查法的验证试验
本发明中所使用的菌种：铜绿假单胞菌CMCC（B）10104、金黄色葡萄球菌CMCC（B）26003、生孢梭菌CMCC（B）64941、枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501、白色念珠菌ATCC10231均由中国药品生物鉴定所提供，黑曲霉菌ATCC16404由上海汉尼贸易有限公司提供。
培养基：硫乙醇酸盐流体培养基购自青岛高科园海博生物技术有限公司，改良马丁培养基购自北京三药科技开发公司。
2.1 验证用试验菌制备
验证试验所用的菌株传代次数不得超过5代并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌株的生物学特征。
使用菌液浓度为10～100CFU/ml。
2.2方法验证步骤
以阿奇霉素缓释滴眼液为例：
分别抽取10支阿奇霉素缓释滴眼液（2.5ml/支）样品，每支吸取1.25ml，共12.5ml至无菌锥形瓶中，加入80ml 5%无菌氯化钙溶液，盖塞。摇动后静置使其产生沉淀，倾斜锥形瓶使沉淀形成凝胶团状。分别吸取30ml至3个无菌滤器内，分别用100ml/次×10次 0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗每张滤膜，在最后一次冲洗液中接入10～100CFU铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌，同法操作另外3种试验菌，即枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌。将接有铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌的滤膜放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基内，另外3种试验菌滤膜放入100ml改良马丁培养基内。将适量0.1%无菌蛋白胨水溶液加入盛有凝胶团的锥形瓶内，摇匀后连同凝胶团倒入一滤器内，分别用100ml×10 0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗每张滤膜，在最后一次冲洗液中分别接入10～100CFU铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、生孢梭菌，枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌，并分别放入相应的培养内。另取装有同体积培养基的容器加入与上述等同等量各试验菌作为阳性对照管（不加样品）。
2.3结果
与阳性对照管比较，含有供试品各容器中的试验菌均生长良好，供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用，照此检验法和检查条件进行供试品的无菌检查。
通过方法学验证的结果可知，本发明所述的抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法具有有效性。
3、抗生素缓释药物制剂无菌检查法
依据被检查药物制剂的规格，根据《中国药典》2005年版无菌检查取样量的要求，取规定量抗生素缓释药物制剂至无菌锥形瓶，加入二价金属盐沉淀剂，摇动后静置使其产生沉淀，混合液连同沉淀一起倒入无菌滤器内，用100ml/次×10次 0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗滤膜，滤膜分别放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基内以及100ml改良马丁培养基内，硫乙醇酸盐流体培养基置于30-35℃下培养，改良马丁培养基置于23-28℃下培养，培养14天，并每天观察是否有菌生长。
综上所述，本发明所采用的沉淀剂对细菌、真菌的生长没有负面影响，而且能有效去除药物对微生物生长的抑制作用。本发明的检测方法可对含有抗生素、采用高分子聚合物作为缓释基质的抗生素药物制剂进行有效的无菌检查，检测方法可靠。该检测方法可用于药典规定应无菌的滴眼液、滴耳剂、滴鼻剂，符合无菌要求的外用制剂等产品的无菌检查。
具体实施方式
下面通过非限定性的实施例对本发明作进一步的说明：
本发明实施例中所使用的培养基：硫乙醇酸盐流体培养基购自青岛高科园海博生物技术有限公司，改良马丁培养基购自北京三药科技开发公司。
仪器：全封闭式集菌仪，型号：HTY集菌系列。
实施例1
分别抽取10支阿奇霉素缓释滴眼液（2.5ml/支）样品，每支吸取1.25ml，共12.5ml至无菌锥形瓶中，加入80ml 5%无菌氯化钙（0.036mol）溶液，盖塞。摇动后静置使其产生沉淀，倾斜锥形瓶使沉淀形成凝胶团状。混合液连同沉淀一起倒入无菌滤器内，用100ml/次×10次0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗混合纤维素滤膜（孔径0.45μm），同法操作冲洗另一张混合纤维素滤膜（孔径0.45μm）。滤膜分别放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基内以及100ml改良马丁培养基内，硫乙醇酸盐流体培养基置于30～35℃下培养，改良马丁培养基置于23～28℃下培养，培养14天，并每天观察是否有菌生长。结果：无明显的微生物生长。具体实验结果如表1所示。
实施例2
分别抽取10支阿奇霉素缓释滴眼液（2.5ml/支）样品，每支吸取1.25ml共12.5ml至无菌锥形瓶中，加入100ml 5%无菌氯化亚铁（0.039mol）溶液，盖塞。摇动后静置使其产生沉淀，倾斜锥形瓶使沉淀形成凝胶团状。混合液连同沉淀一起倒入无菌滤器内，用100ml/次×10次0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗混合纤维素滤膜（孔径0.45μm），同法操作冲洗另一张混合纤维素滤膜（孔径0.45μm）。滤膜分别放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基内以及100ml改良马丁培养基内，硫乙醇酸盐流体培养基置于30～35℃下培养，改良马丁培养基置于23～28℃下培养，培养14天，每天观察是否有菌生长。结果：无明显的微生物生长。具体实验结果如表1所示。
实施例3
分别抽取10支左氧氟沙星缓释滴眼液（2.5ml/支）样品，每支吸取1.25 ml共12.5ml至无菌锥形瓶中，加入200ml 10%无菌硫酸锌（0.125mol）溶液，盖塞。摇动后静置使其产生沉淀，倾斜锥形瓶使沉淀形成凝胶团状。混合液连同沉淀一起倒入无菌滤器内，用100ml/次×10次 0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗混合纤维素滤膜（孔径0.45μm），同法操作冲洗另一张混合纤维素滤膜（孔径0.45μm）。滤膜分别放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基内以及100ml改良马丁培养基内，硫乙醇酸盐流体培养基置于30～35℃下培养，改良马丁培养基置于23～28℃下培养，培养14天，并每天观察是否有菌生长。结果：无明显的微生物生长。具体实验结果如表1所示。
实施例4
分别抽取10支阿奇霉素缓释滴鼻剂（5ml/支）样品，每支吸取2 ml共20ml至无菌锥形瓶中，加入190ml 6%无菌氯化镁（0.12mol）溶液，盖塞。摇动后静置使其产生沉淀，倾斜锥形瓶使沉淀形成凝胶团状。混合液连同沉淀一起倒入无菌滤器内，用100ml/次×10次 0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗混合纤维素滤膜（孔径0.45μm），同法操作冲洗另一张混合纤维素滤膜（孔径0.45μm）。滤膜分别放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基内以及100ml改良马丁培养基内，硫乙醇酸盐流体培养基置于30～35℃下培养，改良马丁培养基置于23～28℃下培养，培养14天，并每天观察是否有菌生长。结果：无明显的微生物生长。具体实验结果如表1所示。
实施例5
分别抽取10支妥布霉素缓释滴眼液（2.5ml/支）样品，每支吸取1.25ml共12.5ml至无菌锥形瓶中，加入40ml 5%无菌硫酸锰（0.0125mol）溶液，盖塞。摇动后静置使其产生沉淀，倾斜锥形瓶使沉淀形成凝胶团状。混合液连同沉淀一起倒入无菌滤器内，用100ml/次×10次 0.1%无菌蛋白胨水溶液冲洗滤膜，同法操作冲洗另一张滤膜。滤膜分别放入100ml硫乙醇酸盐流体培养基内以及100ml改良马丁培养基内，硫乙醇酸盐流体培养基置于30～35℃下培养，改良马丁培养基置于23～28℃下培养，培养14天，并每天观察是否有菌生长。结果：无明显的微生物生长。具体实验结果如表1所示。
上述实施例中的抗生素缓释药物制剂，其成分包括主药、缓释基质、调节渗透压的辅料、防腐剂等，其中缓释基质包括高分子聚合物和其他缓释辅料，所述的高分子聚合物为聚卡波菲，其中每升抗生素缓释药物制剂中含有聚卡波菲的质量体积百分比为：0.5～1.5%。
上述实施例仅用于对本发明进行说明，并非对其进行的限制，本发明所述的抗生素缓释药物制剂也可为氧氟沙星缓释滴眼液、帕珠沙星缓释滴眼液等。本发明所用的沉淀剂也可以是硫酸镁、氯化锌等。
由上述各实施例可见，采用本发明的检测方法可对用高分子聚合物作为缓释基质的抗生素缓释药物制剂进行无菌检查，检查准确度高。其可用于药典规定应无菌的滴眼液、滴耳剂、滴鼻剂、符合无菌要求的外用制剂等产品的无菌检查。
下表所示为实施例1～5中无菌检查实验结果对照表：
表1
表中，“-”表示无菌生长。
Claims (7)
1.一种抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，所述抗生素缓释药物制剂采用高分子聚合物聚卡波菲作为缓释基质，其特征是：采用二价阳离子金属盐作为沉淀剂与所述抗生素缓释药物制剂中的聚卡波菲混合后产生沉淀，然后进行薄膜过滤，再将滤膜放入培养基内培养，观察是否有菌生长；抗生素缓释药物制剂与二价阳离子金属盐的配比为：每升抗生素缓释药物制剂中加入1～10mol二价阳离子金属盐，其中每升抗生素缓释药物制剂中含有聚卡波菲的质量体积百分比为：0.5～1.5％；所述金属盐为钙盐或镁盐或铁盐或锌盐或锰盐。
2.根据权利要求1所述的抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，其特征是：所述金属盐为钙盐。
3.根据权利要求1所述的抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，其特征是：所述金属盐为氯化钙或氯化镁或硫酸镁或硫酸锌或硫酸锰或氯化亚铁或氯化锌。
4.根据权利要求3所述的抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，其特征是：所述金属盐为氯化钙。
5.根据权利要求1或2所述的抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，其特征是：所述的抗生素缓释药物制剂为阿奇霉素缓释滴眼液或左氧氟沙星缓释滴眼液或氧氟沙星缓释滴眼液或妥布霉素缓释滴眼液或帕珠沙星缓释滴眼液或阿奇霉素缓释滴鼻剂。
6.根据权利要求1所述的抗生素缓释药物制剂无菌检查的检测方法，其特征是：其具体操作步骤是：配制二价阳离子金属盐溶液，经湿热灭菌至室温后，无菌操作条件下将二价阳离子金属盐溶液按比例加入所述的抗生素缓释药物制剂中，摇动静置后产生沉淀，再进行薄膜过滤，用无菌蛋白胨水溶液冲洗滤膜，然后将滤膜放入培养基内培养，观察是否有菌生长，所述湿热灭菌的条件为：温度121℃～126℃，时间15min～30min。
7.一种如权利要求1所述的检测方法的用途，其特征是：用于含有抗生素且以高分子聚合物聚卡波菲作为缓释基质的产品的无菌检查。
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