CN103399107A - 一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒及方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒及方法，试剂盒由盒体、试剂瓶组成，分别放在盒体内a、b、c、d、e、f6个空区内。其步骤：A、取样品于离心管中，加入第一试剂，振荡；B、加入第二试剂，振荡，离心，转移上清液；C、再向原离心管中加入第一试剂，振荡，离心后取上清液与上次液体合并；D、将合并液定容至一定体积，摇匀后取一定体积于离心管中，氮气吹干；E、残渣用第三试剂的溶液溶解，加入第四试剂，振荡，离心，取澄清液过滤，HPLC-MS/MS测定。操作简单、快速、准确、灵敏度高、价格低廉、易于推广。适于大量鲜活和冰鲜水产品可食样品的处理，大大提高了样品前处理的效率。

Description

一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒及方法

技术领域

本发明属于食品安全分析技术领域，更具体涉及一种检测水产品可食组织中氯硝柳胺（Niclosamide）（也适用于氯硝柳胺乙醇胺盐（Niclosamide ethanolamine salt））的前处理试剂盒，同时还涉及一种水产品可食组织中氯硝柳胺（氯硝柳胺乙醇胺盐经本试剂盒处理后也以氯硝柳胺的形式存在）残留量的检测方法，本试剂盒及检测方法适用于鲜活和冰鲜水产品（鱼、虾）可食组织（鱼类：肌肉和鱼皮，虾：肌肉）中氯硝柳胺（也适用于氯硝柳胺乙醇胺盐）残留量检测的样品前处理及检测。 

背景技术

氯硝柳胺，又名杀螺胺，育末生，贝螺杀，灭绦灵，清塘净等，为一种高效的杀虫剂，亦是一种人工合成的高效灭螺药，一般用于杀灭寄生在动物体内的寄生虫和人体内的绦虫，主要用于防治血吸虫，在水产养殖业中氯硝柳胺被用作清塘剂。该药物不仅杀螺持效长、效率高，同时对血吸虫尾蚴、螺卵均有明显杀灭作用，世界卫生组织（WHO）将该药物作为首推化学灭螺药，由于其水溶性差，国内外通常采用氯硝柳胺乙醇胺盐粉剂或乳剂，该粉剂或乳剂在水中可迅速生成氯硝柳胺和乙醇胺。研究发现氯硝柳胺对鱼类的毒性属剧毒，而且氯硝柳胺可引起TA1538株沙门氏菌鼠伤寒菌的染色体发生移码突变，小鼠骨髓染色体断裂，小鼠口服氯硝柳胺后小鼠尿液中的2种沙门氏菌均出现突变现象，一定剂量的氯硝柳胺可导致小鼠的精子异常率明显升高，氯硝柳胺可引起曲霉属小巢状曲菌的有丝分裂出现交叉互换和不分离现象，因此，氯硝柳胺是一种具有致突变和基因毒性的药物。为保障水产品质量安全，进而保护人类的健康，需要一种有效的方法检测水产品中的氯硝柳胺残留是非常必要的。 

目前，国内未见有水产品中氯硝柳胺的检测方法的报道，国外仅有一篇相关的报道，但该检测虹鳟和斑点叉尾鮰鱼片中氯硝柳胺的前处理方法，提取过程复杂，消耗大量有机溶剂，净化过程采用固相萃取小柱（SPE柱），不仅增加了工作量，而且增加了检测的成本；在分析方法上该方法所用的流动相（液相）组分复杂，检测氯硝柳胺的灵敏度低。 

水产品中氯硝柳胺检测用传统的前处理及检测方法费时、费钱且操作过程复杂不易掌握。为提高对水产品中氯硝柳胺残留检测的效率并节约检测成本，研制水产品中氯硝柳胺和氯硝柳胺乙醇胺盐检测的前处理试剂盒及检测方法具有非常重要的经济和社会意义。目前， 国内外均未见有水产品中氯硝柳胺检测前处理试剂盒的报道。 

发明内容

本发明目的是在于提供了一种检测鲜活和冰鲜水产品（鱼、虾）可食组织中氯硝柳胺（Niclosamide）和氯硝柳胺乙醇胺盐（Niclosamide ethanolamine salt）的样品前处理试剂盒。该样品前处理试剂盒所用试剂价格便宜，容易获得，且用量小，样品前处理无需用固相萃取小柱进行样品净化，从而大大节约了检测成本；该试剂盒操作方便快捷，适于大量鲜活和冰鲜水产品（鱼、虾）可食样品的处理，从而大大提高了样品前处理的效率；该试剂盒将所需试剂整合于一个前处理试剂盒内便于携带和储存。 

本发明的另一个目的是在于提供了一种经本前处理试剂盒处理后的样品中氯硝柳胺（氯硝柳胺乙醇胺盐经本试剂盒处理后也以氯硝柳胺的形式进行存在）残留量的检测方法，该检测方法的流动相无需配制，且用量少；该检测方法所用时间短，且在较短的时间里能将氯硝柳胺与样品中的杂质峰完全分开，从而大大节约了检测时间和检测成本。从使用该前处理试剂盒和检测方法的效果来看，样品处理干净，在色谱图上无杂质峰干扰且检测氯硝柳胺的灵敏度高。该方法是一种能够快速、准确、灵敏地检测利用本前处理试剂盒处理的样品的液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）。 

为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施： 

一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒，该试剂盒由盒体、试剂瓶组成。盒体内分为a、b、c、d、e、f6个区，分别为第一试剂瓶、第二试剂瓶、第三试剂瓶、第四试剂瓶、第五试剂瓶、第六试剂瓶放置的孔区，且孔区大小顺序为a＞e=f＞d＞b＞c。 

优选的，所述的第一试剂瓶中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种调节了pH的酸性或碱性的液体试剂。 

优选的，所述的第二试剂瓶中是氯化钠、碳酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、硫酸钠或硫酸镁中的任一种试剂。 

优选的，所述的第三试剂瓶中是丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、乙二醇任一种试剂与双蒸水按照体积比为1:9－24:1配制成的混合溶液。 

优选的，所述的第四试剂瓶中是弗罗里硅土、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、十八烷基硅烷键合硅胶粉、石墨化炭黑、N-丙基乙二胺的中任一种试剂。 

优选的，所述的第五试剂瓶中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种液体试剂。 

优选的，所述的第六试剂瓶中是双蒸水、含0.1%（体积比）甲酸的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）氨水的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）乙酸的双蒸水溶液中的任一种液体试剂。 

所述的第一试剂瓶中液体试剂的配制方法：乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一试剂用乙酸、甲酸、丙酸中的任意一种调节成pH1－5的酸性溶液或用氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氨水中的任一种调节成pH8－12的碱性溶液。 

所述的第三试剂瓶中的溶液的配制方法为：取丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、乙二醇任一种试剂5－48mL，加入双蒸水2－45mL，配制成体积比为1:9－24:1的混合溶液。 

所述的第六试剂瓶中含0.1%（体积比）甲酸的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）氨水的双蒸水溶液或含0.1%（体积比）乙酸的双蒸水溶液的配制方法为：0.2mL的甲酸、0.2mL的氨水、0.2mL的乙酸分别加到200mL的双蒸水中混匀即成。 

一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒的使用方法，其步骤是： 

A、取水产品可食组织2.0－4.0g于15mL塑料离心管中，加入第一试剂瓶中液体试剂2-10mL，振荡30s；所述试剂瓶A2中可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种调节了pH的酸性或碱性的液体试剂。 

B、再加入第二试剂瓶中的试剂0.5－5g，振荡30s，5000r/min离心5min，将上清液转移至15mL刻度离心管中；所述的第二试剂瓶中可以是氯化钠、碳酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、硫酸钠或硫酸镁中的任一种试剂。 

C、再向原15mL离心管中加入第一试剂瓶中的溶液2-6mL，振荡30s，5000r/min离心5min，将上清液合并于15mL刻度离心管中，并用第一试剂瓶中的溶液定容至15mL；所述第一试剂瓶中的溶液可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种调节了pH的酸性（pH1－5）或碱性（pH8－12）的液体试剂。 

D、从15mL定容溶液中取5mL，于10mL离心中，置45℃氮吹仪吹至干，加入第三试剂瓶中的溶液1.0mL，涡旋振荡30s；所述第三试剂瓶C4中的溶液可以是丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、乙二醇任一种试剂与双蒸水按照体积比为1:9－24:1配制成的混合溶液。 

E、再加入0.01g－1.0g第四试剂瓶中的试剂，涡漩振荡30s，5000r/min离心5min，取澄清液经0.22μm滤头过滤，HPLC-MS/MS测定。所述第四试剂瓶中是弗罗里硅土、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、十八烷基硅烷键合硅胶粉、石墨化炭黑、N-丙基乙二胺中任一种试剂。结果表明经本试剂盒处理后的样品经本检测方法检测，色谱基线平稳，在目标物附近无杂质峰干扰，方法的灵敏度高。 

一种用于检测经本前处理试剂盒处理的水产品中的氯硝柳胺（氯硝柳胺乙醇胺盐经本试剂盒处理后也以氯硝柳胺的形式进行存在）的方法，本检测方法包括：流动相组成（试剂瓶E6中的液体试剂和试剂瓶F7中的液体试剂），液相色谱条件，质谱条件。 

流动相组成是：A相为液体第五试剂瓶中的液体试剂，B相为第六试剂瓶中的液体试剂。 

优选的，所述的第五试剂瓶中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种液体试剂。 

优选的，所述的第六试剂瓶中是双蒸水、含0.1%（体积比）甲酸的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）氨水的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）乙酸的双蒸水溶液中的任一种液体试剂。第六试剂瓶中含0.1%（体积比）甲酸的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）氨水的双蒸水溶液或含0.1%（体积比）乙酸的双蒸水溶液的配制方法为：0.2mL的甲酸、0.2mL的氨水、0.2mL的乙酸分别加到200mL的双蒸水中混匀即成。 

优化的液相色谱条件是：色谱柱为Hypersil C18色谱柱（2.1mm×150mm，5μm），柱温：25－40℃，流速0.1－0.4mL/min，进样量5.0－20.0μL；梯度洗脱程序是：0－2.0min，50%第五试剂瓶中的液体试剂和50%（体积比）第六试剂瓶中的液体试剂；2.0－2.5min，50%－90%（体积比）第五试剂瓶中的液体试剂和10％－50%（体积比）第六试剂瓶中的液体试剂，2.5－7.0min90%（体积比）第五试剂瓶中的液体试剂和10%（体积比）第六试剂瓶中的液体试剂，7.0－7.1min，50%－90%（体积比）第五试剂瓶中的液体试剂和10%－50%（体积比）第六试剂瓶中的液体试剂，7.1－8.0min，50%（体积比）第五试剂瓶中的液体试剂和50%（体积比）第六试剂瓶中的液体试剂。 

优化的质谱条件是：负离子模式，喷雾电压2500V，传输毛细管温度330℃，鞘气压力为40arb，辅助气压为5arb，离子吹扫气压力为0V，碰撞气及压力：氩气，1.5m Torr。氯硝柳胺的质谱选择反应监测条件依次为：母离子：325m/z，子离子：289、171m/z。 

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果： 

（1）该试剂盒操作过程简单、快速、所用试剂量少（使用本试剂盒处理一个样品只需40min，消耗液体试剂16mL，固体试剂2g）。 

（2）无需用固相萃取小柱进行样品净化，节约检测成本，节约样品前处理时间（该试剂盒一个样品的处理成本仅是普通处理方法成本的20%，节约处理成本80%；样品处理时间仅为普通方法的1/2）。 

（3）优选的试剂处理鲜活或冰鲜水产品可食组织效果好，价格低廉。 

（4）流动相配制简单，所用试剂对色谱柱无损害。 

（5）检测方法消耗试剂少，分析时间短，目标物附近无干扰峰，且检测方法的灵敏度高，分析一个样品需要消耗试剂1.6mL，仅为普通分析方法分析一个样品消耗试剂的1/25；该分析方法分析时间仅为8min，仅为普通分析方法分析时间的4/19；本分析方法的检测限为0.2μg/kg，定量限为0.5μg/kg，灵敏度是普通分析方法的30倍。 

附图说明

图1为一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒的直观示意图。 

其中：盒体1、A试剂瓶A2、B试剂瓶B3、C试剂瓶C4、D试剂瓶D5、试剂瓶E6、试剂瓶F7。试剂盒可常温（15－35℃）储存，有效期24个月。 

图2为一种经本试剂盒处理后的样品示意图。 

经本检测方法检测后得出的水产品中氯硝柳胺的定性定量色谱图。 

经本试剂盒处理后的样品，经本检测方法检测后得到的水产品可食组织样品中氯硝柳胺的色谱图，基线平稳，目标物附近无干扰峰，方法的灵敏度高。 

具体实施方式

实施例1： 

下面结合附图对本发明做进一步说明。 

一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒，本发明前处理试剂盒主要由盒体1、第一试剂瓶A2、第二试剂瓶B3、第三试剂瓶C4、第四试剂瓶D5、第五试剂瓶E6、第六试剂瓶F7。盒体内分为a、b、c、d、e、f6个区，分别为适合第一试剂瓶A2、第二试剂瓶B3、第三试剂瓶C4、第四试剂瓶D5、第五试剂瓶E6、第六试剂瓶F7放置的孔区，且孔区大小顺序为a＞e=f＞d＞b＞c。 

优选的，所述的第一试剂瓶A2中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种调节了pH的酸性或碱性的液体试剂，加入第一试剂瓶A2中液体试剂的量为2－10mL。第一试剂瓶A2中液体试剂的配制方法：乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一试剂用乙酸、甲酸、丙酸中的任意一种调节成pH1－5的酸性溶液或用氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氨水中的任一种调节成pH8－12的碱性溶液。 

优选的，所述的第二试剂瓶B3中是氯化钠、碳酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、硫酸钠或硫酸镁中的任一种试剂，加入第二试剂瓶B3中的试剂的量为0.5－5g。 

优选的，所述第三试剂瓶C4中是丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、乙二醇任一种试剂与双蒸水按照一定比例配制的混合溶液。第三试剂瓶C4中的溶液的配制方法为：取丙酮、乙 腈、甲醇、乙醇、乙二醇任一种试剂5－48mL，加入双蒸水2－45mL，配制成体积比为1:9－24:1的混合溶液。 

优选的，所述第四试剂瓶D5中是弗罗里硅土、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、十八烷基硅烷键合硅胶粉、石墨化炭黑、N-丙基乙二胺的中任一种试剂，加入第四试剂瓶D5中的试剂的量为0.01g－1.0g。 

优选的，所述第五试剂瓶E6中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种液体试剂。 

优选的，所述第六试剂瓶F7中是双蒸水、含0.1%（体积比）甲酸的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）氨水的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）乙酸的双蒸水溶液中的任一种液体试剂。试剂瓶F7中含0.1%（体积比）甲酸的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）氨水的双蒸水溶液或含0.1%（体积比）乙酸的双蒸水溶液的配制方法为：0.2mL的甲酸、0.2mL的氨水、0.2mL的乙酸分别加到200mL的双蒸水中混匀即成。 

实施例2： 

一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒的使用方法，其步骤是： 

A、取水产品可食组织2.0－4.0g于15mL塑料离心管中，加入第一试剂瓶A2中液体试剂2-10mL，振荡30s；所述第一试剂瓶A2中可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种调节了pH的酸性（pH1－5）或碱性（pH8－12）的液体试剂。 

B、再加入第二试剂瓶B3中的试剂0.5－5g，振荡30s，5000r/min离心5min，将上清液转移至15mL刻度离心管中；所述第二试剂瓶B3中可以是氯化钠、碳酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、硫酸钠或硫酸镁中的任一种试剂。 

C、再向原15mL离心管中加入第一试剂瓶A2中的溶液2-6mL，振荡30s，5000r/min离心5min，将上清液合并于15mL刻度离心管中，并用第一试剂瓶A2中的溶液定容至15mL；所述第一试剂瓶A2中的溶液可以是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种调节了pH的酸性（pH1－5）或碱性（pH8－12）的液体试剂。 

D、从15mL定容溶液中取5mL，于10mL离心中，置45℃氮吹仪吹至干，加入第三试剂瓶C4中的溶液1.0mL，涡旋振荡30s；所述第三试剂瓶C4中的溶液可以是丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、乙二醇任一种试剂与双蒸水按照体积比为1:9－24:1配制成的混合溶液。 

E、再加入0.01g－1.0g第四试剂瓶D5中的试剂，涡漩振荡30s，5000r/min离心5min，取澄清液经0.22μm滤头过滤，HPLC-MS/MS测定。所述第四试剂瓶D5中是弗罗里硅土、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、十八烷基硅烷键合硅胶粉、石墨化炭黑、N-丙基 乙二胺中任一种试剂。结果表明经本试剂盒处理后的样品经本检测方法检测，色谱基线平稳，在目标物附近无杂质峰干扰，方法的灵敏度高。 

一种用于检测经本前处理试剂盒处理的水产品可食组织中氯硝柳胺（氯硝柳胺乙醇胺盐经本试剂盒处理后也以氯硝柳胺的形式进行存在）的方法，本检测方法包括：流动相组成（第五试剂瓶E6中的液体试剂和第六试剂瓶F7中的液体试剂），液相色谱条件，质谱条件。 

流动相组成是：A相为液体第五试剂瓶E6中的液体试剂，B相为第六试剂瓶F7中的液体试剂。 

优选的，所述第五试剂瓶E6中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种液体试剂。 

优选的，所述第六试剂瓶F7中是双蒸水、含0.1%（体积比）甲酸的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）氨水的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）乙酸的双蒸水溶液中的任一种液体试剂。试剂瓶F7中含0.1%（体积比）甲酸的双蒸水溶液、含0.1%（体积比）氨水的双蒸水溶液或含0.1%（体积比）乙酸的双蒸水溶液的配制方法为：0.2mL的甲酸、0.2mL的氨水、0.2mL的乙酸分别加到200mL的双蒸水中混匀即成。 

优化的液相色谱条件是：色谱柱为Hypersil C18色谱柱（2.1mm×150mm，5μm），柱温：25－40℃，流速0.1－0.4mL/min，进样量5.0－20.0μL；梯度洗脱程序是：0－2.0min，50%（体积比）第五试剂瓶E6中的液体试剂和50%（体积比）第六试剂瓶F7中的液体试剂；2.0－2.5min，50%－90%（体积比）第五试剂瓶E6中的液体试剂和50%－10%（体积比）第六试剂瓶F7中的液体试剂，2.5－7.0min90%（体积比）第五试剂瓶E6中的液体试剂和10%（体积比）第六试剂瓶F7中的液体试剂，7.0－7.1min，90%－50%（体积比）第五试剂瓶E6中的液体试剂和10%－50%（体积比）第六试剂瓶F7中的液体试剂，7.1－8.0min，50%（体积比）第五试剂瓶E6中的液体试剂和50%（体积比）第六试剂瓶F7中的液体试剂。 

优化的质谱条件是：负离子模式，喷雾电压2500V，传输毛细管温度330℃，鞘气压力为40arb，辅助气压为5arb，离子吹扫气压力为0V，碰撞气及压力：氩气，1.5m Torr。氯硝柳胺的质谱选择反应监测条件依次为：母离子：325m/z，子离子：289、171m/z。 

一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒及方法的准确度试验结果： 

在南美白对虾、草鱼、鳗鲡和甲鱼肌肉和皮肤组织样品中分别添加3个浓度水平的标准溶液：使样品浓度分别为0.5、5、20μg/kg每个浓度做5个平行，每个平行设一个空白对照。按照该前处理试剂盒及方法对上述样品进行前处理并进行测定，结果表明，该试剂盒及方法 的准确度

为90.40%～102.40%，相对标准偏差≤8.54%准确度具体值见表1。 

表1不同水产品可食组织中氯硝柳胺测定的准确度（每个浓度测定5个平行样品） 

Claims (5)

1.一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒，该试剂盒由盒体、试剂瓶组成，其特征在于：盒体内分为a、b、c、d、e、f 6个区，分别为第一试剂瓶（A2）、第二试剂瓶（B3）、第三试剂瓶（C4）、第四试剂瓶（D5）、第五试剂瓶（E6）、第六试剂瓶（F7）放置的孔区，孔区大小顺序为a＞e=f＞d＞b＞c；

所述的第一试剂瓶（A2）中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种调节了pH的酸性或碱性的液体试剂；

所述的第二试剂瓶（B3）中是氯化钠、碳酸钠、硝酸钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、硫酸钠或硫酸镁中的任一种试剂；

所述的第三试剂瓶（C4）中是丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、乙二醇任一种试剂与双蒸水按照一定比例配制的混合溶液；

所述的第四试剂瓶（D5）中是弗罗里硅土、酸性氧化铝、中性氧化铝、碱性氧化铝、十八烷基硅烷键合硅胶粉、石墨化炭黑、N-丙基乙二胺的中任一种试剂；

所述的第五试剂瓶（E6）中是乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一种液体试剂；

所述的第六试剂瓶（F7）中是双蒸水、含0.1%体积比甲酸的双蒸水溶液、含0.1%体积比氨水的双蒸水溶液、含0.1%体积比乙酸的双蒸水溶液中的任一种液体试剂。

2.根据权利要求1所述的一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒，其特征在于：所述的第一试剂瓶（A2）中液体试剂的配制方法：乙酸乙酯、丙酮、乙腈、甲醇、二氯甲烷中任一试剂用乙酸、甲酸、丙酸中的任意一种调节成pH1－5的酸性溶液或用氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氨水中的任一种调节成pH8－12的碱性溶液。

3.根据权利要求1所述的一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒，其特征在于：所述的第三试剂瓶（C4）中的溶液的配制方法为：取丙酮、乙腈、甲醇、乙醇、乙二醇任一种试剂5－48 mL，加入双蒸水2－45 mL，配制成体积比为1:9－24:1的混合溶液。

4.根据权利要求1所述的一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒，其特征在于：所述的第六试剂瓶（F7）中含0.1%体积比甲酸的双蒸水溶液、含0.1%体积比氨水的双蒸水溶液或含0.1%体积比乙酸的双蒸水溶液的配制方法为：0.2 mL的甲酸、0.2 mL的氨水、0.2 mL的乙酸分别加到200 mL的双蒸水中混匀。

5.权利要求1所述的一种检测水产品中氯硝柳胺的前处理试剂盒的使用方法，其步骤是：

A、取水产品可食组织2.0－4.0 g于15 mL塑料离心管中，加入第一试剂瓶（A2）中液体试剂2-10 mL，振荡30 s；

B、再加入第二试剂瓶（B3）中的试剂0.5－5 g，振荡30 s，5000 r/min离心5 min，将上清液转移至15 mL刻度离心管中；

C、再向原15 mL离心管中加入试剂瓶A2中的溶液2-6 mL，振荡30 s，5000 r/min离心5 min，将上清液合并于15 mL刻度离心管中，并用第一试剂瓶（A2）中的溶液定容至15 mL；

D、从15 mL定容溶液中取5 mL，于10 mL离心中，置45 ℃氮吹仪吹至干，加入第三试剂瓶（C4）中的溶液1.0 mL，涡旋振荡30 s；

E、再加入0.01 g－1.0 g第四试剂瓶（D5）中的试剂，涡漩振荡30 s，5000 r/min离心5 min，取澄清液经0.22 μm滤头过滤，HPLC-MS/MS测定。