CN103389373A - 一种检测磺胺类药物的试纸及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测磺胺类药物的试纸及应用。试纸包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、结合物释放垫(3)、反应膜(4)、吸水垫(5)和底板(8),所述反应膜上具有包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(6)和包被有兔抗羊抗抗体的质控线(7),所述结合物释放垫(2)包被有羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物,所述结合物释放垫(3)包被有磺胺类药物单克隆抗体。本发明还提供了一种应用上述磺胺类药物试纸检测化妆品中磺胺类药物残留的方法。本发明所提供的试纸可用于检测化妆品中磺胺类药物残留,具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点,适合大量样本的筛查和现场监控。
Description
技术领域
本发明涉及一种检测磺胺类药物的试纸及其应用,具体涉及一种用于检测磺胺类药物的胶体金试纸,其特别适用于化妆品中磺胺类药物残留的检测。
背景技术
磺胺类药物是具有对氨基苯磺酰结构的一类药物的总称,用于预防和治疗细菌感染性疾病,具有抗病原体范围广、化学性质稳定、使用方便、易于生产等特点,其抑菌作用是通过干扰细菌的叶酸代谢而抑制细菌的生长繁殖。临床研究表明,磺胺类药物具有一定的祛痘、抗粉刺、除螨等功效。但由于磺胺类药物在体内的作用时间和代谢时间较长,长期使用可能导致在人体中蓄积,进而对人体机能产生危害,并导致病原体产生抗药性。因此,我国《化妆品卫生标准》、《化妆品卫生规范》、欧盟化妆品规程(Council Directive 76/768/EEC)、日本药事法(Pharmaceutical Affairs Law)中均明确规定了磺胺类药物为化妆品组分中的禁用物质。
关于磺胺类药物免疫方法检测的研究报道主要集中在食品样品方面,而化妆品中磺胺类药物的检测方法主要有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等。这些方法灵敏、准确,特异性强、分离度好,可以同时测定多种药物,但需要昂贵的仪器、样品的前处理复杂、繁琐费时、检测的成本较高,不能现场操作,而且需专业人员操作,所以限制了其应用;与之相比,胶体金免疫层析法具有特异性好、灵敏度高、操作简便、检测成本低、适合于批量样品的筛选检测等优点,是理想的快速筛选手段,能够更好地满足我国化妆品企业、政府职能监管部门等开展检测工作。
发明内容
本发明的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的磺胺类药物残留检测试纸。
本发明所提供的检测磺胺类药物残留的试纸,包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、结合物释放垫(3)、反应膜(4)、吸水垫(5)和底板(8);所述反应膜上具有包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(6)和包被有兔抗羊抗抗体的质控线(7),所述结合物释放垫(2)包被有羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物,所述结合物释放垫(3)包被有磺胺类药物单克隆抗体。
所述磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物是由磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联得到,所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。
所述磺胺类药物单克隆抗体是以磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得,是由磺胺类药物单克隆杂交瘤细胞株E-4-4 CGMCC No.5888分泌获得;所述羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物中的羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到的,所述兔抗羊抗抗体是将羊源抗体免疫兔得到的。
所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、结合物释放垫(3)、反应膜(4)、吸水垫(5)依次粘贴在底板(8)上,所述结合物释放垫(2)叠放于结合物释放垫(3)上,并且结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。
所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料;所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸;所述吸水垫为吸水纸;所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜;所述保护膜为PE材质保护膜。
本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸的方法,其包括步骤:
1)制备包被有羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物的结合物释放垫(2)和包被有磺胺类药物单克隆抗体的结合物释放垫(3);
2)制备具有包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有兔抗羊抗抗体的质控线的反应膜;
3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸。
具体地说,步骤包括:
1)半抗原制备:将4-乙酰氨基苯磺酰氯与2-氨基-4-甲基嘧啶-5-甲酸反应得到磺胺类药物半抗原;
2)将磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联,得到磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物;
3)用磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠,将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选,得到磺胺类药物单克隆杂交瘤细胞株;
4)提取小鼠IgG免疫健康山羊,得到羊抗鼠抗抗体;
5)提取山羊IgG免疫健康兔,得到兔抗羊抗抗体;
6)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金;
7)将步骤4)制备的羊抗鼠抗抗体加入步骤6)制备的胶体金中,得到羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物;
8)将羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物包被在结合物释放垫上,37℃烘1h后取出,即为结合物释放垫(2),置于干燥环境中保存备用;
9)将磺胺类药物单克隆抗体包被在结合物释放垫上,冷冻干燥后,即为结合物释放垫(3),置于干燥环境中保存备用;
10)将磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线,并将兔抗羊抗抗体包被在反应膜上构成质控线;
11)将样品吸收垫用含0.5%牛血清白蛋白(体积百分含量)、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h,37℃下烘干2h;
12)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫,将结合物释放垫(2)叠放于结合物释放垫(3)上,样品吸收垫盖住结合物释放垫,最后切成3mm宽的小条,加塑料盒,真空包装,4~30℃条件下可保存12个月。
本发明的另一个目的是提供一种应用上述试纸检测化妆品中磺胺类药物残留的方法,它包括步骤:
(1)样品前处理;
(2)用试纸进行检测;
(3)分析检测结果。
本发明的磺胺类药物快速检测试纸采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术,将羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物和磺胺类药物单克隆抗体分别固定于两张结合物释放垫上,样品中的磺胺类药物在流动过程中,先与结合物释放垫(3)上的磺胺类药物单克隆抗体结合,磺胺类药物单克隆抗体可以与结合物释放垫(2)上的羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物结合,形成药物-抗体-金标二抗复合物。样本中的药物与反应膜检测线上的磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物竞争结合磺胺类药物单克隆抗体-金标二抗复合物,根据检测线红色条带有无或颜色深浅来判断待测样品液中是否含有磺胺类药物残留。
检测时,样品经处理后滴入试纸卡孔内,当磺胺类药物在样品中的浓度低于检测限或为零时,单克隆抗体-金标二抗复合物在层析过程中会与固定在反应膜上的磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物结合,在检测线(T)和质控线(C)内各出现一条红色条带;如果磺胺类药物在样品中的浓度等于或高于检测限,单克隆抗体-金标二抗复合物会与磺胺类药物全部结合,从而在T线处因为竞争反应不会与磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带。如图2所示。
阴性:当质控线(C)显示出红色条带,检测线(T)同时也显示出红色条带,判为阴性。
阳性:当质控线(C)显示出红色条带,而检测线(T)不显色,判为阳性。
无效:当质控线(C)不显示出红色条带,则无论检测线(T)显示出红色条带与否,该试纸判为无效。
本发明的试纸具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。其中,将胶体金标记在羊抗鼠抗抗体上,有效减少了标记胶体金时可能产生的空间位阻,提高了抗原-抗体的结合效率,对提高检测灵敏度有较大帮助;同时,通过改变胶体金标记物和采用直接冻干抗体稀释液双重手段,有效地减少了由于抗体-胶体金标记物干燥在结合物释放垫上后降解所导致的试纸失效问题的发生,使经过处理的结合物释放垫上的结合物更加稳定,可有效提高产品稳定性。用本发明试纸检测磺胺类药物残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。
附图说明
图1为试纸剖面结构示意图。
图2为试纸检测结果判定图。
具体实施方式
下面结合具体的实施例来进一步阐述本发明。应理解,这些实施例仅用于说明本发明,而不用来限制本发明的范围。
实施例1 磺胺类药物检测试纸的制备
该试纸的制备方法主要包括以下步骤:
1)制备包被有羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物的结合物释放垫(2)和包被有磺胺类药物单克隆抗体的结合物释放垫(3);
2)制备具有包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有兔抗羊三抗的质控线的反应膜;
3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸。
下面分步详细叙述:
1、磺胺类药物半抗原的制备
2-氨基-4-甲基嘧啶-5-甲酸0.60g和三乙胺1.6ml溶入10ml二氯甲烷中,加入适量催化剂4-二甲氨基吡啶(DMAP)。室温下缓慢滴入4-乙酰氨基苯磺酰氯的2ml二氯甲烷溶液,滴加完毕后继续反应5h,蒸除溶剂,柱层析纯化后调节pH4~5,有固体析出,即为磺胺类药物半抗原,得率45%。
2、免疫原的制备
取10mg磺胺类半抗原、N,N'-羰基二咪唑(CDI)15mg用1ml N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶解,室温下搅拌24 h,即可得到反应液A;称取牛血清白蛋白(BSA)40mg,使之充分溶解在3ml PBS(pH 7.2)中,将反应液A逐滴缓慢滴加到蛋白溶液中,并于室温下搅拌24h;用0.01mol/L PBS 4℃透析3d,每天换3次透析液,以除去未反应的小分子物质,即得到磺胺类药物免疫原,分装,于-20℃保存备用。
3、包被原的制备
取12mg磺胺类半抗原用0.8ml DMF溶解,冷却至10℃,得到反应液Ⅰ;取氯甲酸异丁酯10μl加入Ⅰ中,10℃搅拌反应30min;取30mg卵清蛋白用2.2ml 50mmol/L Na2CO3溶解,10℃反应4h,然后4℃过夜;用0.01mol/L PBS 4℃透析3d,每天换3次透析液,以除去未反应的小分子物质,即得到磺胺类药物包被原,分装,于-20℃保存备用。
4、磺胺类药物单克隆抗体的制备方法
(1)动物免疫
将步骤2得到的免疫原注入Balb/c小鼠体内,免疫剂量为150μg/只,使其产生抗血清。
(2)细胞融合和克隆化
取免疫Balb/c小鼠脾细胞,按8:1(数量配比)比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接竞争ELISA法测定细胞上清液,筛选阳性孔。利用有限稀释法对阳性孔进行克隆化,直到得到稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并意外发现,其中一株效价显著高于其它杂交瘤细胞株,将该磺胺类药物单克隆杂交瘤细胞株命名为E-4-4,该细胞株已于2012年3月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所),保藏号为CGMCC No.5888。
(3)细胞冻存和复苏
将杂交瘤细胞用冻存液制成1×106个/ml的细胞悬液,在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管,立即放入37℃水浴中速融,离心去除冻存液后,移入培养瓶内培养。
(4)单克隆抗体的制备与纯化
增量培养法:将杂交瘤细胞置于细胞培养基中,在37℃条件下进行培养,用辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化,得到单克隆抗体,-20℃保存。
所述细胞培养基为向RPMI1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠,使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20%(质量百分含量),使碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2%(质量百分含量);所述细胞培养基的pH为7.4。
5、羊抗鼠抗抗体的制备
以羊作为免疫动物,以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫,得到羊抗鼠抗抗体。
6、兔抗羊抗抗体的制备
以兔作为免疫动物,以羊源抗体为免疫原对无病原体兔进行免疫,得到兔抗羊抗抗体。
7、羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物的制备
(1)胶体金的制备
用双蒸去离子水将1%氯金酸稀释成0.01%(质量百分含量),取100ml置于锥形瓶中,用恒温电磁搅拌器加热至沸腾,在持续高温、持续搅拌下加入2.5ml 1%柠檬酸三钠,继续匀速搅拌加热至溶液呈透亮的红色时停止,冷却至室温后用去离子水恢复到原体积,4℃保存。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。
(2)羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物的制备
在磁力搅拌下,用0.2mol/L碳酸钾溶液调胶体金的pH值至7.0,按每毫升胶体金溶液中加入50~100mg的标准向胶体金溶液中加入羊抗鼠抗抗体,继续搅拌混匀30min,加入10%BSA,使其在胶体金溶液中的终浓度为1%(体积百分含量),静置10min。12000r/min、4℃离心40min,弃上清液,沉淀用复溶缓冲液洗涤两次,用体积为初始胶体金体积1/10的复溶缓冲液将沉淀重悬,置4℃备用。
复溶缓冲液:含牛血清白蛋白(BSA)0.1%~0.3%(体积百分含量)、吐温-80 0.05%~0.2%(质量百分含量)、pH7.2的0.02mol/L磷酸盐缓冲液。
8、结合物释放垫(2)的制备
将结合物释放垫浸泡于含有牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在缓冲液中的浓度为0.5%)和pH7.2,0.5mol/L磷酸盐缓冲液中,均匀浸湿1h,37℃烘3h备用。用Isoflow喷膜仪将制备好的羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物均匀包被在结合物释放垫上,每1cm结合物释放垫包被0.009ml羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物后,置于37℃环境中(湿度<20%)60min后取出,置于干燥环境(湿度<20%)中保存备用。
9、结合物释放垫(3)的制备
将结合物释放垫浸泡于含有牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在缓冲液中的浓度为0.5%)和pH7.5,0.02mol/L磷酸盐缓冲液中,均匀浸湿1h,37℃烘3h备用。用Isoflow喷膜仪将稀释好的磺胺类药物单克隆抗体均匀包被在结合物释放垫上,每1cm结合物释放垫包被0.01ml磺胺类药物单克隆抗体后,冷冻干燥,使抗体充分结合于结合物释放垫上,置于干燥环境(湿度<10%)中保存备用。
10、反应膜的制备
将磺胺类药物半抗原-卵清蛋白偶联物包被到反应膜上构成检测线,将兔抗羊抗抗体包被在反应膜上构成质控线。
包被过程:用磷酸缓冲液将磺胺类药物半抗原-卵清蛋白偶联物稀释到10mg/ml,用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测线(T线),包被量为1.0μg/cm2;用0.01mol/L、pH7.4的磷酸盐缓冲液将兔抗羊抗抗体稀释到200μg/ml,用Isoflow点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控线(C线),包被量为1.0μg/cm2。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥2h,备用。
11、样品吸收垫的制备
将样品吸收垫置于含0.5%牛血清白蛋白(体积百分含量)、pH7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡2h,37℃烘2h备用。
12、试纸的组装
将结合物释放垫(2)叠放于结合物释放垫(3)上,然后将样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次按顺序粘贴在PVC底板上;结合物释放垫从起始端有1/3区域被样品吸收垫覆盖,结合物释放垫的末端与反应膜的始端连接,反应膜的末端与吸水垫的始端相连,样品吸收垫的始端与PVC底板的始端对齐,吸水垫的末端与PVC底板的末端对齐;所述反应膜上有检测线和质控线,检测线(T线)和质控线(C线)均为与所述试纸的长相垂直的条状带;检测线位于靠近结合物释放垫的末端的一侧;质控线位于远离结合物释放垫的末端的一侧;将试纸用机器切成3mm宽的小条,装在特制的塑料制卡中,形成试纸卡,4~30℃条件下可保存12个月。
实施例2 样品中磺胺类药物残留的检测
1、样品的前处理
取0.1g±0.01g(霜状、乳液)或0.1ml(化妆水)样品于10ml离心管中,加入5ml 0.02mol/L的磷酸盐缓冲溶液,涡动1min,待检。
2、用试纸进行检测
用吸管吸取待检样品溶液垂直滴加2~3滴于加样孔,液体流动时开始计时,反应5~10min,判定结果。
3、分析检测结果
阴性(-):T线和C线都显色,表示样品中磺胺类药物浓度低于检测限,如图2(a)。
阳性(+):T线无显色C线显色,表示样品中磺胺类药物浓度等于或高于检测限,如图2(b)。
无 效 :未出现C线,表明不正确的操作过程或试纸已变质失效,如图2(c)。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并用新的试纸卡重新测试。
实施例3 样品检测实例
1、检测限试验
取空白化妆品样本(霜、乳液或化妆水),在其中分别添加磺胺类药物磺胺嘧啶至终浓度为1.5、3、6mg/kg(L),磺胺二甲基嘧啶至终浓度为0.5、1、2mg/kg(L),磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑至终浓度为2、4、8mg/kg(L),磺胺氯哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶至终浓度为0.75、1.5、3mg/kg(L),磺胺异噁唑至终浓度为0.25、0.5、1mg/kg(L),磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺苯酰至终浓度为1.25、2.5、5mg/kg(L),磺胺甲氧哒嗪、磺胺多辛至终浓度为1.75、3.5、7mg/kg(L),取试纸进行检测,每个样本重复测定三次。
用试纸检测化妆品样本时,当其中磺胺嘧啶添加浓度为1.5mg/kg(L),磺胺二甲基嘧啶添加浓度为0.5mg/kg(L),磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑添加浓度为2mg/kg(L),磺胺氯哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶添加浓度为0.75mg/kg(L),磺胺异噁唑添加浓度为0.25mg/kg(L),磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺苯酰添加浓度为1.25mg/kg(L),磺胺甲氧哒嗪、磺胺多辛添加浓度为1.75mg/kg(L)时,试纸上显示出肉眼可见的两条红色线条,呈阴性;当其中磺胺嘧啶添加浓度为3、6mg/kg(L),磺胺二甲基嘧啶添加浓度为1、2mg/kg(L),磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑添加浓度为4、8mg/kg(L),磺胺氯哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶添加浓度为1.5、3mg/kg(L),磺胺异噁唑添加浓度为0.5、1mg/kg(L),磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺苯酰添加浓度为2.5、5mg/kg(L),磺胺甲氧哒嗪、磺胺多辛添加浓度为3.5、7mg/kg(L)时,试纸质控线显色,但检测线不显色,呈阳性,表明本试纸对化妆品中磺胺类药物的检测限为:磺胺嘧啶3mg/kg(L),磺胺二甲基嘧啶1mg/kg(L),磺胺喹噁啉、磺胺甲噁唑4mg/kg(L),磺胺氯哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶1.5mg/kg(L),磺胺异噁唑0.5mg/kg(L),磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺苯酰2.5mg/kg(L),磺胺甲氧哒嗪、磺胺多辛3.5mg/kg(L)。
2、假阳性率、假阴性率试验
取已知磺胺嘧啶含量大于3mg/kg(L)的化妆品阳性样本20份和含量小于3mg/kg(L)的化妆品阴性样本20份,用三批试纸进行检测,计算其阴阳性率。结果见表1、表2。
表1 检测阳性样本结果
表2 检测阴性样本结果
结果表明:用3个批次生产的试纸检测阳性化妆品样本时,结果全为阳性,可知阳性样本符合率为100%,假阴性率为0;检测20份阴性化妆品样本时,结果全为阴性,可知阴性符合率为100%,假阳性率为0。说明本发明的检测磺胺类药物的试纸可以对化妆品中磺胺类药物残留进行快速检测。
3、特异性试验
特异性常用交叉反应率表示,是指抗体与结构不同的抗原决定簇发生结合的能力。将常检的其他药物大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、氟喹诺酮类药物用pH7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液进行稀释至50mg/L,用磺胺类药物胶体金试纸进行检测。结果显示,用该试纸检测50mg/L大环内酯类、氨基糖苷类、四环素类、氟喹诺酮类药物时,试纸质控线和检测线均显色,说明本试纸对这些药物无交叉反应。
Claims (9)
1.一种检测磺胺类药物的试纸,包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、结合物释放垫(3)、反应膜(4)、吸水垫(5)和底板(8),其特征在于所述反应膜上具有包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(6)和包被有兔抗羊抗抗体的质控线(7),所述结合物释放垫(2)包被有羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物,所述结合物释放垫(3)包被有磺胺类药物单克隆抗体。
2.如权利要求1所述的试纸,其特征在于所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、结合物释放垫(3)、反应膜(4)、吸水垫(5)依次粘贴在底板(8)上。
3.如权利要求1-2任一项所述的试纸,其特征在于所述结合物释放垫(2)叠放于结合物释放垫(3)上,并且结合物释放垫1/3~1/2被覆盖于样品吸收垫下。
4.如权利要求1所述的试纸,其特征在于所述磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物由磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联得到,所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。
6.如权利要求1所述的试纸,其特征在于所述磺胺类药物单克隆抗体是以磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得,所述羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物中的羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到的,所述兔抗羊抗抗体是将羊源抗体免疫兔得到的。
7.如权利要求1或6任一项所述的试纸,其特征在于磺胺类药物单克隆抗体是由磺胺类药物单克隆杂交瘤细胞株E-4-4 CGMCC No.5888分泌获得。
8.一种制备权利要求1-7任一项所述试纸的方法,其包括步骤:
1)制备包被有羊抗鼠抗抗体-胶体金标记物的结合物释放垫(2)和包被有磺胺类药物单克隆抗体的结合物释放垫(3);
2)制备具有包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有兔抗羊抗抗体的质控线的反应膜;
3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸。
9.一种检测化妆品中磺胺类药物残留的方法,其包括步骤:
1)样本前处理;
2)用权利要求1-7任一项所述的试纸进行检测;
3)分析检测结果。
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- 2012-05-08 CN CN201210141054.0A patent/CN103389373B/zh active Active
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