CN103370311A - 用于治疗HSP90相关病状的Pochoxime缀合物 - Google Patents

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Abstract

本发明包括天然产物根赤壳菌素、pochonin、pochoxime的新衍生物、类似物和中间体，和它们的合成。本发明还提供包含本发明化合物的药物组合物和所述化合物作为激酶抑制剂和作为被称为热休克蛋白90(HSP90)的酶家族的抑制剂的用途。

Description

用于治疗HSP90相关病状的Pochoxime缀合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2010年10月22日提交的并且题目为“POCHOXIMECONJUGATES USEFUL FOR THE TREATMENT OF HSP90RELATEDPATHOLOGIES”的美国临时申请61/405,882的优先权，将61/405,882披露的全部内容并入本文作为参考用于所有用途。本申请还涉及2007年8月10日提交的并且题目为“Macrocyclic Compounds Useful as Inhibitors of Kinase andHSP90”的国际申请PCT/US2007/017754；以及2009年1月15日提交的并且题目为“Synthesis of Resorcylic Acid Lactones Useful as Therapeutic Agents”的国际申请PCT/US2009/031149，出于所有目的，将每篇文献的全部内容并入本文作为参考。
技术领域
本发明涉及天然产物根赤壳菌素(radicicol)、pochonin、pochoxime的新衍生物、类似物和中间体，以及涉及它们的合成。本发明还涉及这些化合物作为激酶抑制剂和作为被称为热休克蛋白90(HSP90)的酶家族的抑制剂的用途。
背景技术
近年来，热休克蛋白90(HSP90)已经成为非常有前景的治疗靶标[1-3]。尽管表面上看这种高表达侣伴蛋白的功能无所不在，但是它在稳定构象不稳定蛋白中的作用已经牵涉在多种病状(pathology)中。HSP90的抑制剂已经证实对于许多癌症适应症[4,5]、神经变性疾病[6-10]、传染病[11]、和炎症相关障碍[12]广泛有效。两种天然产物，根赤壳菌素和格尔德霉素(如下面的方案1中所示)，有助于理解HSP90在致癌过程中的作用和对其它进行抑制的治疗潜力，这两种天然产物都破坏Hsp90的ATP酶活性[13-15]。然而，对于临床应用，这两种天然产物均不具有可接受的药理学性质。药物化学的努力导致发现新的结构骨架，例如嘌呤类[16,17](CNF-2024)、间苯二酚-异噁唑类[18-20](VER-52296)和2-氨基苯甲酰胺类[21,22](SNX2112)(其目前处于临床或者临床前开发中)。[5]然而，改进天然药效团的药理性质和效力仍然是重要的。事实上，最先进的临床候选药物是格尔德霉素的半合成衍生物，17AAG(3，图1)。[23,24]近来已经报导，当用作前药时，具有二甲氧基氢醌官能团的另一种半合成衍生物具有比17AAG更好的药理性质[25]。
方案1.所选择的代表不同药效团的HSP90抑制剂。
Figure BDA00003344749600021
本发明人先前已经证实[26]，pochonin D代表根赤壳菌素的简化药效团，所述pochonin D大致具有根赤壳菌素的活性。而且，通过形成肟，可实现细胞效力的显著改善。[27]事实上，pochoxime A、B和C(在上面的方案1中示出)包括在迄今为止所报导的最有效的HSP90抑制剂中，它们以低nM浓度在SKBR3细胞系中诱导客户蛋白质(client protein)降解，以及在携带BT474乳腺肿瘤细胞的异种移植物中用pochoxime A进行的治疗导致肿瘤退行。
本申请提供通过使pochoxime A和B与人HSP90α共结晶得到的晶体结构和扩展pochoxime多样性的化合物库以及具有C-6修饰的pochoxime类似物的不对称合成。
发明内容
在一个实施方案中，本发明提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药：
Figure BDA00003344749600031
其中：
X为O、S或NR；
Y为-OR、-O-(CH2)mCOOR、-O-(CH2)mCON(R)2、-N(R)2、-N(R)SOR或者-N(R)SO2R，其中与氮原子连接的基团可为Z-或者E-构型；
Z1和Z2独立地为氢或者-(CH2)-O-RZ；
RZ为任选取代的烷基；
R1和R2独立地为氢、卤素、OR、N(R)2、SR、叠氮基、硝基、氰基、脂族基团、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂环基、杂芳基、-S(O)R、-S(O)2R、-SO2N(R)2、-N(R)SO2R、-N(CO)R、-N(CO)N(R)2、-N(CO)OR、-O(CO)R、-(CO)R、-(CO)OR、-(CO)N(R)2、-O(CO)OR，或者-O(CO)N(R)2；
R3、R4、R5、R6、R8、R9和R10独立地为氢、卤素、叠氮基、硝基、氰基、脂族基团、烷基芳基、芳烷基、芳基、杂烷基、烷基杂芳基、杂环基、杂芳基、OR、N(R)2、SR、-O(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pR、-O(CH2)mOC(O)(CH2)pR、-O(CH2)mC(O)(CH2)pN(R)2、-O(CH2)mC(O)(CH2)pOR、-O(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pOR、-O(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pN(R)2、-O(CH2)mOC(O)(CH2)pOR、-O(CH2)mOC(O)(CH2)pN(R)2、-NR(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pR、-NR(CH2)mOC(O)(CH2)pR、-NR(CH2)mC(O)(CH2)pN(R)2、-NR(CH2)mC(O)(CH2)pOR、-NR(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pOR、-NR(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pN(R)2、-NR(CH2)mOC(O)(CH2)pOR、-NR(CH2)mOC(O)(CH2)pN(R)2、-(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pR、-(CH2)mOC(O)(CH2)pR、-(CH2)mC(O)(CH2)pN(R)2、-(CH2)mC(O)(CH2)pOR、-(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pOR、-(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pN(R)2、-(CH2)mOC(O)(CH2)pOR、-(CH2)mOC(O)(CH2)pN(R)2、-(CH2)mN3、-O(CH2)mN3、-(CH2)mN(R)2、-(CH2)mOR、-(CH2)mS(O)(CH2)pR、-(CH2)mS(O)2(CH2)pR、-(CH2)mSO2(CH2)pN(R)2，或者-(CH2)mN(R)SO2(CH2)pR；以及
每个R独立地为氢、脂族基团、氨基、叠氮基、氰基、硝基、烷基氨基、二烷基氨基、OH、烷氧基、羰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、羰基氧基、羧基、酰基、芳基、烷芳基、芳基烷基包括苄基、杂烷基、杂芳基、杂环基，或者保护基；或者在相同氮上的两个R与所述氮一起形成5元至8元杂环或者杂芳基环；其中在基团含有不止一个R取代基的情况下；其中R为任选取代的，并且每个R可相同或者不同；
m和p独立地为0、1、2、3、4或者5；
在携带R9和R10的碳原子之间的虚线表示单键或者双键，其中化合价需求通过另外的氢原子来满足；以及
L为选自以下的连接部分：-O-、-N(R)-、-S-、-C(=O)-、-O-C(=O)-、-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-、-O-C(=O)-O-、-O-C(=O)-N(R)-、-N(R)-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-N(R)-、-C(=O)-O-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-C(=O)-、-N(R)-N(R)-、-C(=N-NR2)-、-N(R)-C(=N-NR2)-、-C(=N-NR2)-N(R)-、-N(R)-C(=N-NR2)-N(R)-、-C(=NR)-、-N(R)-C(=NR)-、-C(=NR)-N(R)-、-N(R)-C(=NR)-N(R)-、-C(=S)-、-O-C(=S)-、-C(=S)-O-、-N(R)-C(=S)-、-C(=S)-N(R)-、-O-C(=S)-O-、-O-C(=S)-N(R)-、-N(R)-C(=S)-O-，和-N(R)-C(=S)-N(R)-；以及
TM为在生理条件下特异性地与生物位点结合的靶向部分；或者可选择地，L-TM为基团，其为基于氧或者氮的官能团。
在另一实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含本发明化合物和药学上可接受的载体。
在另一实施方案中，本发明提供治疗患有疾病的患者的方法，其包括向所述患有疾病的患者给药有效量的本发明化合物，其中所述疾病由激酶和热休克蛋白90(HSP90)介导。在一个实施方案中，所述疾病为自身免疫性疾病、炎性疾病、神经疾病或者神经变性疾病、癌症、心血管疾病、变态反应、哮喘，或者激素相关疾病。
附图说明
图1.根赤壳菌素与HSP90的共晶体结构(A组-pdb：1bgq)、pochoximeA与HSP90的共晶体结构(B组-pdb：3inw)和pochoxime B与HSP90的共晶体结构(C组-pdb：3inx)。
图2.pochoxime A1B5C1D1的细胞效力(IC50)。将缺失Her-2的SkBr3细胞用抑制剂处理18小时。
图3.在pochonin E和它的C-6差向异构体(差向-pochonin E)之间的关键区分质子NMR信号。
图4.pochoxime F10a(6-R)的X-射线结晶学结构。
图5.pochoxime E10b-R(顶部)和差向-pochonin E10b-S(底部)与HSP90的对接。
具体实施方式
本发明提供本申请描述的pochoxime衍生物。在一个实施方案中，本发明化合物具有结构式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)和(IIIc)，及其任何亚属和种，其中靶向部分通过连接部分与烯丙型碳6连接。具体地，烯丙型碳6是指与“L”共价连接的碳原子(标有*)，如下面在结构式(I)中所示：
Figure BDA00003344749600051
其中所述各个取代基与上面“发明内容”中的定义相同。
本申请使用的术语“靶向部分”可为在生理条件下特异性地与生物位点结合的分子部分。例如，靶向部分可与限定的细胞群或者选择的细胞类型结合。靶向部分也可结合受体、寡核苷酸、酶底物、抗原决定簇，或者存在于靶标细胞或者细胞群之上或者之中的其它结合位点。在一些实施方案中，所述靶向部分包括抗体、抗体片段，或者对于给定的受体结合位点具有特异性的物质。在其它实施方案中，所述配体或者靶向部分包括受体特异性的肽、碳水化合物、蛋白质、脂质、核苷、肽核酸或者它们的组合。在另外的实施方案中，所述配体或者靶向部分为有机化合物。
所述靶向部分可用于增强药理性质，或者可用于使用已知与细胞表面受体相互作用的缀合物如葡萄糖或者生物素或者肽，特异性地利用主动转运机制富集药物在特定细胞类型中的浓度。靶向基团可通过醚、酯、碳酸酯、硫醚、硫酯、胺、酰胺、脲、碳酸脲(carbonate urea)、硫脲、亚胺、肼、腙等来连接。
本申请使用的术语“基于氮的官能团”是指含有氮和一个或多个其它原子(包括氢、碳、卤素、氮、氧、硫等中的任意一个或者多个)的有机部分，其中所述氮原子与烯丙型碳6共价连接。基于氮的官能团的实例包括但不限于，氨基、叠氮基、N-烷基取代的氨基、N,N-二烷基取代的氨基、酰基取代的氨基等，其中烷基和酰基中的每个为任选取代的。
本申请使用的术语“基于氧的官能团”是指含有氧和一个或多个其它原子(包括氢、碳、卤素、氮、氧、硫等中的任意一个或者多个)的有机部分，其中所述氧原子与烯丙型碳6共价连接。基于氧的官能团的实例包括但不限于，羟基、烷氧基、酰基取代的氧等，其中烷基和酰基中的每个为任选取代的。
在一个实施方案中，本发明提供如上所述的式(I)化合物，或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药。
在一个实施方案中，结构式(I)不包括下表X中列举的化合物：
Figure BDA00003344749600061
Figure BDA00003344749600071
Figure BDA00003344749600081
在结构式(I)的一个实施方案中，X为O或者NR。
在结构式(I)的一个实施方案中，Y为-OR、-O-(CH2)mCOOR或者-O-(CH2)mCON(R)2。
在结构式(I)的一个实施方案中，R1和R2独立地为氢、卤素或者低级烷基。
在结构式(I)的一个实施方案中，R1为氢、卤素或者低级烷基；以及R2为氢。
在结构式(I)的一个实施方案中，RZ为低级烷基、烷氧基取代的低级烷基或者芳基取代的低级烷基。在一个实施方案中，RZ为甲基、乙基、异丙基、正丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基-乙基、甲氧基-甲基、氯甲基，或者苄基。
在结构式(I)的一个实施方案中，L-TM为基于氧或者氮的官能团。
在结构式(I)的一个实施方案中，化合物可通过结构式(II)表示：
Figure BDA00003344749600091
其中：
X为O、S或NR；
Y为-OR、-O-(CH2)mCOOR、-O-(CH2)mCON(R)2、-N(R)2、-N(R)SOR或者-N(R)SO2R，其中与氮原子连接的基团可为Z-或者E-构型；
Z1和Z2独立地为氢或者-(CH2)-O-RZ；
RZ为任选取代的烷基；
R1和R2独立地为氢、卤素，或者烷基；
R3、R4、R5、R6、R8、R9和R10独立地为氢、卤素，或者烷基；
L为选自以下的连接部分：-O-、-N(R)-、-S-、-C(=O)-、-O-C(=O)-、-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-、-O-C(=O)-O-、-O-C(=O)-N(R)-、-N(R)-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-N(R)-、-C(=O)-O-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-C(=O)-、-N(R)-N(R)-、-C(=N-NR2)-、-N(R)-C(=N-NR2)-、-C(=N-NR2)-N(R)-、-N(R)-C(=N-NR2)-N(R)-、-C(=NR)-、-N(R)-C(=NR)-、-C(=NR)-N(R)-、-N(R)-C(=NR)-N(R)-、-C(=S)-、-O-C(=S)-、-C(=S)-O-、-N(R)-C(=S)-、-C(=S)-N(R)-、-O-C(=S)-O-、-O-C(=S)-N(R)-、-N(R)-C(=S)-O-，和-N(R)-C(=S)-N(R)-；以及
TM为在生理条件下特异性地与生物位点结合的靶向部分；或者可选择地，L-TM为基团，其为基于氧或者氮的官能团；
在结构式(II)的一个实施方案中，化合物可通过结构式(IIIa)表示：
Figure BDA00003344749600101
其中，Z1和Z2为-(CH2)-O-RZ；RZ为任选取代的烷基；R1为H、卤素，或者低级烷基；R3和R9独立地为H或者低级烷基；以及L-TM为基于氧的官能团。
在结构式(II)的一个实施方案中，化合物可通过结构式(IIIb)表示：
Figure BDA00003344749600102
其中，Z1和Z2为-(CH2)-O-RZ；RZ为氢或者任选取代的烷基；R1为H、卤素或者低级烷基；R3和R9独立地为H或者低级烷基；以及L-TM为基于氮的官能团。
在结构式(II)的一个实施方案中，化合物可通过结构式(IIIc)表示：
其中，Z1和Z2为-(CH2)-O-RZ；RZ为氢或者任选取代的烷基；R1为H、卤素或者低级烷基；R3和R9独立地为H或者低级烷基；以及L为选自以下的连接部分：-O-、-N(R)-、-S-、-C(=O)-、-O-C(=O)-、-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-、-O-C(=O)-O-、-O-C(=O)-N(R)-、-N(R)-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-N(R)-、-C(=O)-O-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-C(=O)-、-N(R)-N(R)-、-C(=N-NR2)-、-N(R)-C(=N-NR2)-、-C(=N-NR2)-N(R)-、-N(R)-C(=N-NR2)-N(R)-、-C(=NR)-、-N(R)-C(=NR)-、-C(=NR)-N(R)-、-N(R)-C(=NR)-N(R)-、-C(=S)-、-O-C(=S)-、-C(=S)-O-、-N(R)-C(=S)-、-C(=S)-N(R)-、-O-C(=S)-O-、-O-C(=S)-N(R)-、-N(R)-C(=S)-O-和-N(R)-C(=S)-N(R)-；以及TM为在生理条件下特异性地与生物位点结合的靶向部分。
在某些具体实施方案中，本发明提供选自以下的化合物：
Figure BDA00003344749600111
Figure BDA00003344749600131
Figure BDA00003344749600141
Figure BDA00003344749600151
或其药学上可接受的盐、溶剂化物，和/或前药。
术语“一个”和“一”不表示数量限制，相反，表示存在引用项目中的至少一个。术语“一个”和“一”可与“一个或者多个”或者“至少一个”互换使用。术语“或者”或者“和/或”用作功能词语，表示两个词或者表达应一起考虑或者单独考虑。应将术语“包含”、“具有”、“包括”，和“含有”视为开放式术语(即，表示“包括，但不限于”)。涉及相同组分或者性质的所有范围的端点是包含在内的并且为可独立组合的。
术语“本发明化合物”、“这些化合物”、“这样的化合物(一种或多种)”、“所述化合物”和“本发明化合物”是指被本申请披露的结构式例如，式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)，和(IIIc)涵盖的化合物，包括结构在本申请中披露了的这些式中的任意具体化合物。化合物可通过它们的化学结构和/或化学名称识别。当化学结构和化学名称冲突时，由化学结构决定化合物的身份。而且，本发明化合物可抑制CK2蛋白的生物活性，并由此在本申请中也被称为“抑制剂(一种或多种)”或者“CK2抑制剂(一种或多种)”。式(I)、(II)、(IIIa)、(IIIb)和(IIIc)的化合物(包括本申请所述的任何具体化合物)是示例性的“抑制剂”。本发明对化合物的描述受本领域技术人员已知的化学键合规则的限制。因此，在基团可被多种取代基中的一种或者多种取代的情况下，对所述取代进行选择以符合化学键合的规则并得到非内在不稳定和/或非本领域普通技术人员视为在环境条件如含水、中性和数种已知生理条件下可能不稳定的化合物。例如，按照本领域技术人员已知的化学键合规则，杂环烷基或者杂芳基通过环杂原子与分子的剩余部分连接，由此避免内在不稳定的化合物。
每当将说明书中的术语确定为范围(即，C1-6烷基)时，所述范围独立地表示所述范围的每个元素。作为非限制性实例，C1-6烷基独立地表示C1、C2、C3、C4、C5或者C6烷基。类似地，当将一个或者多个取代基描述为“独立选自”一组时，这意味着，每个取代基可为那个组的任何元素，并且这些组的任意组合可独立于所述组。例如，如果R1和R2可独立选自X、Y和Z，那么这分别包括以下组：R1为X和R2为X；R1为X和R2为Y；R1为X和R2为Z；R1为Y和R2为X；R1为Y和R2为Y；R1为Y和R2为Z；R1为Z和R2为X；R1为Z和R2为Y；以及R1为Z和R2为Z。
本申请使用的术语"脂族"表示直链的、支链的或者环状的烃，通常为C1-C18，并且在某些实施方案中为C1-C10或者C1-C6，其为完全饱和的或者其含有一个或者多个不饱和单元，但是不是芳族的。例如，适当的脂族基团包括取代的或者未取代的直链的、支链的或者环状的烷基、烯基、炔基及它们的杂化物(hybrid)，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或者(环烷基)烯基。术语"烷基"、"烷氧基"、"羟基烷基"、"烷氧基烷基"和"烷氧基羰基"(单独使用或者作为较大部分的一部分使用)包括含有1-12个碳原子的直链和支链。术语"烯基"和"炔基"(单独使用或者作为较大部分的一部分使用)包括含有2-12个碳原子的直链和支链。术语"环烷基"(单独使用或者作为较大部分的一部分使用)包括环状的C3–C12烃，其为完全饱和的或者其含有一个或者多个不饱和单元但其不是芳族的，包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。脂族基团可任选取代有一个或者多个部分，包括但不限于，烷基、卤素、卤代烷基、羟基、羧基、酰基、酰基氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳基氧基、硝基、氰基、巯基、亚氨基、磺酸基团(sulfonic acid)、硫酸酯基团(sulfate)、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯基、羧酸基团、酰胺基团、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦基、硫酯基团、硫醚基团、酰卤基团、酸酐基团、肟基团、肼基(hydrazine)、氨基甲酸酯基团(carbamate)、膦酸基团(phosphonic acid)、磷酸酯基团(phosphate)、膦酸酯基团(phosphonate)，或者不抑制该化合物药理活性的任何其它可行的官能团，这些官能团为未保护的，或者按需要如本领域技术人员所已知的那样被保护，例如，如在Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，Second Edition，1991中所教导，将其并入本文作为参考。
除非另有说明，本申请使用的术语“烷基”是指饱和的支链的、支链的或者环状的伯烃、仲烃或者叔烃，包括但不限于通常为C1-C18的基团和在某实施方案中为C1-C10或者C1-C6的基团，并且具体包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、环戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基、环己基、环己基甲基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基和2,3-二甲基丁基。烷基可如上面就术语“脂族”所述被取代。
除非另有说明，本申请使用的术语“低级烷基”是指任选取代的C1-C6饱和的直链的、支链的或者如果适当环状的烷基(例如，环丙基)，包括取代的和未取代的形式。
烷基的说明性实例为甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、环丁基、1-甲基丁基、1,1-二甲基丙基、戊基、环戊基、异戊基、新戊基、环戊基、己基、异己基和环己基。除非另有说明，烷基可为未取代的或者取代有一个或者多个选自以下的部分：烷基、卤素、卤代烷基、羟基、羧基、酰基、酰基氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳基氧基、硝基、氰基、巯基、亚氨基、磺酸基团、硫酸酯基团、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯基、羧酸基团、酰胺基团、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦基、硫酯基团、硫醚基团、酰卤基团、酸酐基团、肟基团、肼基、氨基甲酸酯基团、膦酸基团、磷酸酯基团、膦酸酯基团，或者不抑制化合物药理活性的任何其它可行的官能团，这些官能团为未保护的，或者按需要如本领域技术人员所已知的那样被保护，例如，如在Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis,JohnWiley&Sons,3rd Ed.,1999中所教导。
本申请使用的术语“卤代”或者“卤素”包括氯、溴、碘和氟。
本申请使用的术语“手性”包括具有以下性质的化合物：它不可重叠在它的镜像上。
本申请使用的术语“互变异构体”是指交替结构，其在本领域中被识别为与所描述的结构平衡。例如，下面的烯醇结构是酮结构的互变异构体，并被识别为与所述酮结构平衡。
Figure BDA00003344749600181
本申请使用的术语“溶剂化物”或者"药学上可接受的溶剂化物"是一个或者多个溶剂分子与式I、I’、II、II’、III、III’、IV或者V中的任一种的化合物的一个或者多个分子或者表1中所示的化合物的一个或者多个分子缔合形成的溶剂化物。术语溶剂化物包括水合物(例如，半-水合物、一水合物、二水合物、三水合物、四水合物等)。
术语“烷基硫基”是指具有指定碳数的直链或者支链的烷基硫化物，例如，C1-4烷基硫基、乙基硫基、-S-烷基、-S-烯基、-S-炔基等。
术语“烷基氨基”或者“芳基氨基”是指分别具有一个或者两个烷基或者芳基取代基的氨基。除非在本申请中另外专门说明，当烷基为适合的部分时，那么它为取代的或未取代的低级烷基。
术语“烷基磺酰基”表示具有指定碳原子数的直链或者支链的烷基砜，例如，C1-6烷基磺酰基或者甲基磺酰基。
术语“烷氧基羰基”是指具有指定碳原子数的羧酸衍生物的直链或者支链的酯，例如，甲氧基羰基、MeOCO-。
本申请使用的术语“硝基”表示–NO2；术语“巯基(sulfhydryl)”表示–SH；以及术语“磺酰基”表示–SO2。
术语“烯基”和“炔基”是指其中至少一个饱和C-C键被双键或者叁键替代的烷基部分(包括取代的和未取代的形式)。因此，C2-6烯基可为乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、1-己烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基或者5-己烯基。类似地，C2-6炔基可为乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基或者5-己炔基。
术语“亚烷基”包括式–(CH2)n-的饱和直链二价烷基，其中“n”可为1-12的任何整数。
“烷基”、“烷氧基”、“烯基”、“炔基”等包括直链的和支链的基团。然而，所提及的单个基团如“丙基”仅包括直链基团，而支链异构体如“异丙基”具有专门称呼。
除非另有说明，本申请使用的术语“芳基”是指任何稳定的单环碳环、二环碳环或者三环碳环，在每个环中具有最多8个成员，其中至少一个环是如Huckel4n+2规则所定义的芳香性的，并且尤其为苯基、联苯基或者萘基。术语包括取代的和未取代的部分。所述芳基可任选取代有一个或者多个部分。取代基的实例包括烷基、卤素、卤代烷基、羟基、羧基、酰基、酰基氧基、氨基、酰氨基、羧基衍生物、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳基氧基、硝基、氰基、磺酸基团、巯基、亚氨基、硫酸酯基、磺酰基、硫烷基、亚磺酰基、氨磺酰基、酯基、羧酸基团、酰胺基团、磷酸酯基团、膦酰基、氧膦基、磷酰基、膦基、硫酯基团、硫醚基团、酰卤基团、酸酐基团、肟基团、肼基、氨基甲酸酯基团、膦酸基团、膦酸酯基团，这些官能团为未保护的，或者按如本领域技术人员所已知的那样被保护，例如，如在Greene等人，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley and Sons，Second Edition，1991中所教导。
术语“烷芳基”或者“烷基芳基”是指具有芳基取代基的烷基或者通过本申请定义的芳基与分子连接的烷基。术语“芳烷基”或者“芳基烷基”是指取代有烷基取代基或者通过上面定义的烷基与分子连接的芳基。
术语“烷氧基”表示具有连接的氧基的直链或者支链的烷基，所述烷基具有指定数目或者在此范围内的任何数目的碳数。例如，“-O-烷基”、C1-4烷氧基、甲氧基等。
术语“酰基”包括式C(O)R’的基团，其中R’为直链的、支链的或者环状的烷基(包括低级烷基)、氨基酸的羧酸酯残基、芳基(包括苯基)、杂芳基、烷芳基、芳烷基(包括苄基)、烷氧基烷基(包括甲氧基甲基)、芳基氧基烷基如苯氧基甲基；或者取代的烷基(包括低级烷基)、任选取代有氯、溴、氟、碘、C1-C4烷基或者C1-C4烷氧基的芳基(包括苯基)、磺酸酯基如烷基磺酰基或者芳烷基磺酰基(包括甲磺酰基)、单、二或者三磷酸酯基、三苯甲基或者单甲氧基-三苯甲基、取代的苄基、烷芳基、芳烷基(包括苄基)、烷氧基烷基(包括甲氧基甲基)、芳基氧基烷基如苯氧基甲基。芳基优选包含苯基。在非限制性实施方案中，酰基包括乙酰基、三氟乙酰基、甲基乙酰基、环丙基乙酰基、环丙基-羧基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、新-庚酰基、苯基乙酰基、2-乙酰氧基-2-苯基乙酰基、二苯基乙酰基、α-甲氧基-α-三氟甲基-苯基乙酰基、溴乙酰基、2-硝基-苯乙酰基、4-氯-苯乙酰基、2-氯-2,2-二苯基乙酰基、2-氯-2-苯基乙酰基、三甲基乙酰基、氯二氟乙酰基、全氟乙酰基、氟乙酰基、溴二氟乙酰基、甲氧基乙酰基、噻吩-2-乙酰基、氯磺酰基乙酰基、3-甲氧基苯基乙酰基、苯氧基乙酰基、叔丁基乙酰基、三氯乙酰基、单氯-乙酰基、二氯乙酰基、7H-十二氟-庚酰基(7H-dodecafluoro-heptanoyl)、全氟-庚酰基、7H-十二-氟庚酰基(7H-dodeca-fluoroheptanoyl)、7-氯十二氟-庚酰基、7-氯-十二氟-庚酰基、7H-十二氟庚酰基、7H-十二-氟庚酰基、九-氟-3,6-二氧杂-庚酰基、九氟-3,6-二氧杂庚酰基、全氟庚酰基、甲氧基苯甲酰基、甲基3-氨基-5-苯基噻吩-2-羧基、3,6-二氯-2-甲氧基-苯甲酰基、4-(1,1,2,2-四氟-乙氧基)-苯甲酰基、2-溴-丙酰基、ω-氨基辛酰基、癸酰基、正-十五烷酰基、硬脂酰基、3-环戊基-丙酰基、1-苯-羧基、O-乙酰基扁桃酰基、新戊酰基乙酰基、金刚烷-1-羧基、环己烷-羧基、吡啶-2,6-二羧基、环丙烷-羧基、环丁烷-羧基、全氟环己基羧基、4-甲基苯甲酰基、氯甲基异噁唑基羰基、全氟环己基羧基、巴豆酰基、1-甲基-1H-吲唑-3-羰基、2-丙烯基、异戊酰基、吡咯烷-1-羰基、4-苯基苯甲酰基。
术语“酰基氨基”包括具有“-N(R’)-C(=O)-R’”结构的基团，其中每个R’独立地如上面所定义。
术语“酯”包括具有“-C(=O)-O-R’”或者“-O-C(=O)-R’”结构的基团，其中R’为直链的、支链的或者环状的烷基(包括低级烷基)、氨基酸的羧酸酯残基、芳基(包括苯基)、杂芳基、烷芳基、芳烷基(包括苄基)、烷氧基烷基(包括甲氧基甲基)、芳基氧基烷基如苯氧基甲基；或者取代的烷基(包括低级烷基)、任选取代有氯、溴、氟、碘、C1-C4烷基或者C1-C4烷氧基的芳基(包括苯基)、磺酸酯基如烷基磺酰基或者芳烷基磺酰基(包括甲磺酰基)、单、二或者三磷酸酯基、三苯甲基或者单甲氧基-三苯甲基、取代的苄基、烷芳基、芳烷基(包括苄基)、烷氧基烷基(包括甲氧基甲基)、芳基氧基烷基如苯氧基甲基。芳基优选包括苯基。
术语“杂原子”包括杂环化合物结构中的非碳或者非氢的原子，其非限制性实例为氮、氧、硫、磷或者硼。
术语“羰基”包括具有结构“-C(=O)-X-R’”或者“X-C(=O)-R’”的基团，其中X为O、S或者键，并且每个R独立地如上面针对“酯”所定义。
本申请使用的术语"杂环"、"杂环基"或者"杂环的"包括具有4-14个成员，优选5-10个成员的非芳族环系，其中一个或者多个环碳，优选1-4个环碳各自被杂原子替代。杂环的实例包括3-1H-苯并咪唑-2-酮、(1-取代的)-2-氧代-苯并咪唑-3-基、2-四氢-呋喃基、3-四氢呋喃基、2-四氢吡喃基、3-四氢吡喃基、4-四氢吡喃基、[1,3]-二氧杂戊环基([1,3]-dioxalanyl)、[1,3]-二硫杂戊环基、[1,3]-二噁烷基、2-四氢-噻吩基、3-四氢噻吩基、2-吗啉基、3-吗啉基、4-吗啉基、2-硫吗啉基、3-硫吗啉基、4-硫吗啉基、1-吡咯烷基、2-吡咯烷基、3-吡咯烷基、1-哌嗪基、2-哌嗪基、1-哌啶基、2-哌啶基、3-哌啶基、4-哌啶基、4-噻唑烷基、二唑酮基(diazolonyl)、N-取代的二唑酮基、1-苯并吡咯酮基、苯并噁烷基、苯并吡咯烷基、苯并哌啶基、苯并氧杂戊环基(benzoxolanyl)、苯并硫杂戊环基(benzothiolanyl)和苯并硫杂环己烷基(benzothianyl)。本申请使用的其中含杂原子的非芳族环与一个或者多个芳族或者非芳族环稠合的基团也包含在术语"杂环基"或者"杂环的"的范围内，例如二氢吲哚基、色满基、菲啶基或者四氢喹啉基，其中所述基(radical)或者连接点在含杂原子非芳族环上。术语"杂环"、"杂环基"或者"杂环的"(无论是饱和的，还是部分不饱和的)也表示任选取代的环。
术语"杂芳基"(单独使用或者作为较大部分的一部分使用，如在"杂芳烷基"或者"杂芳基烷氧基"中一样)表示具有5-14个成员的杂芳环基团。杂芳基环的实例包括2-呋喃基、3-呋喃基、3-呋咱基、N-咪唑基、2-咪唑基、4-咪唑基、5-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁二唑基、5-噁二唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、1-吡咯基、2-吡咯基、3-吡咯基、1-吡唑基、2-吡唑基、3-吡唑基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、3-哒嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、5-四唑基、2-三唑基、5-三唑基、2-噻吩基、3-噻吩基、咔唑基、苯并咪唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、吲哚基、喹啉基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并咪唑基、异喹啉基、吲唑基、异吲哚基、吖啶基，和苯并异噁唑基。本申请使用的其中杂芳环与一个或者多个芳族或者非芳族环稠合的基团也包括在术语"杂芳基"的范围内，其中所述基或者连接点在杂芳环上。实例包括四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[3,4-d]嘧啶基。术语"杂芳基"还表示任选取代的环。术语"杂芳基"可与术语"杂芳基环"或者术语"杂芳族"互换使用。
除非另有说明，本申请使用的术语“氨基”包括结构“-N(R)2”表示的部分，并且包括任选被烷基、芳基、杂环基和/或磺酰基取代的伯胺、仲胺和叔胺。因此(R)2可表示两个氢原子、两个烷基部分或者一个氢和一个烷基部分。
本申请使用的术语“酰氨基”包括氨基取代的羰基，而术语“脒基”表示具有结构“-C(=NH)-NH2”的基团。
术语“抗衡离子”是指带负电荷或者正电荷的离子物质，其伴有带相反电荷的离子物质以维持电中性。带负电荷的抗衡离子包括无机抗衡离子和有机抗衡离子，包括但不限于，氯、溴、碘、氟、磷酸根、乙酸根、甲酸根、磺酸根、三氟乙酸根、己二酸根、海藻酸根、天冬氨酸根、苯甲酸根、苯磺酸根、硫酸氢根、丁酸根、柠檬酸根、樟脑酸根、樟脑磺酸根、环戊烷丙酸根、二葡萄糖酸根、十二烷基硫酸根、乙磺酸根、甲酸根、富马酸根、葡庚糖酸根(glucoheptanoate)、甘油磷酸根、羟乙酸根、半硫酸根、庚酸根、己酸根、氢氯酸根、氢溴酸根、氢碘酸根、2-羟基乙磺酸根、乳酸根、马来酸根、丙二酸根、甲磺酸根、萘-2-磺酸根、烟酸根、硝酸根、草酸根、棕榈酸根、果胶酸根(pectinate)、过硫酸根、3-苯基丙酸根、磷酸根、苦味酸根、新戊酸根、丙酸根、水杨酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒石酸根、硫氰酸根、甲苯磺酸根和十一酸根。带正电荷的抗衡离子包括，但不限于，碱金属(例如，钠和钾)、碱土金属(例如，镁)、铵和N+(C1-4烷基)4抗衡离子。
本申请使用的术语“季胺”包括具有带正电荷的氮的季铵盐。它们是通过在感兴趣的化合物的碱性氮与适当的季铵化试剂如碘甲烷或者苄基碘之间的反应形成的。伴随季胺的适当的抗衡离子包括乙酸根、三氟乙酸根、氯离子、溴离子和碘离子。
术语“取代的”包括被一个或者多个指定的取代基多种程度的取代，所述取代基为例如卤素、羟基、硫基、烷基、烯基、炔基、硝基、氰基、叠氮基、氨基、甲酰氨基等。在可能存在多个取代基的情况下，所述化合物可被披露的或者权利要求保护的取代基中的一个或者多个取代，所述取代基彼此独立并且单独考虑或者多个一起考虑。
除非另外定义，本申请使用的术语“保护的”是指被添加至氧、氮或者磷原子以防止它们进一步反应或者用于其它目的的基团。多种氧和氮保护基是有机合成领域技术人员所已知的。
本申请使用的术语“保护基”是指可与反应性基团(包括杂原子如氧或者氮)连接以防止反应性基团参与在反应中的基团。可使用例如在Greene等人,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley&Sons,3rd Ed.,1999中教导的任何保护基。适当的保护基的实例包括但不限于烷氧基烷基如乙氧基甲基和甲氧基甲基；甲硅烷基保护基，例如叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)、苯基二甲基甲硅烷基、三甲基甲硅烷基(TMS)、2-三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)和2-三甲基甲硅烷基乙基；以及苄基和取代的苄基。
应理解的是，除非另有说明，上面和本申请所述的基团的各种可能的立体异构体在各个术语和实例的含义内。作为说明性实例，"1-甲基-丁基"以(R)和(S)形式存在，因此，除非另有说明，(R)-1-甲基-丁基和(S)-1-甲基-丁基被术语"1-甲基-丁基"涵盖。
术语"患者"包括人和兽医受试者。
"有效量"是当将化合物给药于患者时得到有益结果的所述化合物的量，或者可选择地，具有希望的体内或者体外活性的化合物的量。在增生性障碍的情况中，有益临床结果包括与疾病或者障碍相关的症状的程度或者严重性降低，和/或与不进行治疗相比患者的寿命和/或生活质量提高。例如，对于患有癌症的受试者，"有益临床结果"包括肿瘤质量减小、肿瘤生长速度降低、转移减少、与癌症相关的症状的严重性降低和/或与不进行治疗相比受试者寿命增加。给药于受试者的化合物的精确量取决于疾病或者病症的类型和严重性和患者的特征，例如一般健康状况、年龄、性别、体重和耐药性。也取决于增生性障碍的程度、严重性和类型。本领域技术人员根据这些和其它因素将能够测定适当的剂量。
本申请使用的术语“激酶抑制量”是指当通过本申请所述的方法测试时与对照相比抑制激酶的化合物的量。
本申请使用的术语“HSP90-抑制量”是指当通过本申请所述的方法测试时与对照相比抑制HSP90的化合物的量。
本申请使用的术语"生物样品"包括但不限于细胞培养物或者其提取物；适于体外测定的酶的制品；得自哺乳动物的活检物质或者其提取物；以及血液、唾液、尿液、粪便、精液、泪液或者其它体液或者它们的提取物。
术语"癌症"包括但不限于实体瘤和血源性肿瘤并且包括但不限于以下癌症：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食管癌、喉癌、胶质母细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌(lung adenocarcinoma)、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌(pancreas)、腺癌、甲状腺癌、滤泡型癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、髓样障碍(myeloiddisorder)、淋巴样障碍(lymphoid disorder)、霍奇金病(Hodgkin’s)、毛细胞癌、口腔和咽(口部)癌、唇癌、舌癌、口癌(mouth)、咽癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑和中枢神经系统癌和白血病。术语“癌症”包括原发性癌症、继发于治疗的癌症和转移性癌。
术语"药学上可接受的载体"是指可与本发明化合物一起给药于患者，并且不破坏本发明化合物药理活性的非毒性载体、助剂或者媒介物。
“赋形剂”是指与化合物一起给药的稀释剂、助剂、媒介物或者载体。
术语“HSP90介导的疾病”或者“HSP90介导的病症”是指已知HSP90在其中起作用的病症。所述病症包括但不限于炎性障碍、异常细胞增生、自身免疫性障碍、缺血、纤维发生性障碍(包括但不限于硬皮病)、多肌炎、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎、肝硬化、瘢痕疙瘩形成、间质性肾炎，和肺纤维化。(Strehlow，WO02/02123；PCT/US01/20578)。
术语“药学上可接受的盐”和“前药”在整个说明书中使用，用以描述化合物的任何药学上可接受的形式(例如盐、酯、磷酸酯、酯的盐或者相关基团)，其在给药于患者后提供说明书中所述的化合物。在化合物为足够碱性或者酸性以形成稳定的非毒性酸式盐或者碱式盐的情况中，给药盐形式的化合物可为适当的。术语药学上可接受的盐或者复合物是指保留本发明化合物期望的生物活性并呈现最小的不期望的毒理作用的盐或者复合物。
这种盐的非限制性实例是(a)与无机酸形成的酸加成盐如硫酸盐、硝酸盐、盐酸盐、磷酸盐等。例如，通过添加盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等形成的盐。另外，本发明也涵盖与有机酸形成的盐，包括甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐、丙二酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、苯甲酸盐、抗坏血酸盐、α-酮戊二酸盐和α-甘油磷酸盐，所述有机酸为例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、双羟萘酸、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸和聚半乳糖醛酸。本发明还包括(b)碱加成盐，包括与金属阳离子如锌、钙、铋、钡、镁、铝、铜、钴、镍、镉、钠、钾、锂等形成的加成盐，或者与由氨、N,N-二苄基乙二胺、D-葡糖胺、四乙铵或者乙二胺形成的阳离子形成的加成盐；或者(c)(a)和(b)的组合；例如，鞣酸锌盐等。本领域技术人员已知的药学上可接受的季盐也包含在此定义中，其具体地包括式-NR+A-的季铵盐，其中R如上面所定义并且A为抗衡离子，包括氯、溴、碘、-O-烷基、甲苯磺酸根、甲磺酸根、磺酸根、磷酸根或者羧酸根如苯甲酸根、琥珀酸根、乙酸根、羟乙酸根、马来酸根、苹果酸根、柠檬酸根、酒石酸根、抗坏血酸根、苯甲酸根、肉桂酸根、扁桃酸根、苄基羧酸根(benzyloate)和二苯基乙酸根。
药学上可接受的盐可使用本领域公知的标准操作得到，例如通过使足够碱性的化合物如胺与适合的酸反应，得到生理学上可接受的阴离子。
药学上可接受的“前药”是指在宿主中代谢(例如，水解或者氧化)以形成本发明化合物的化合物。前药的典型实例包括在活性化合物的官能部分上具有生物学上不稳定的保护基的化合物。前药包括可被氧化、还原、胺化、去胺化、羟基化、去羟基化、水解、脱水、烷基化、去烷基化、酰基化、去酰基化、磷酰基化、去磷酰基化以产生活性化合物的化合物。例如，适合的前药可为羧酸的酯或者酰胺，其经水解形成酸。前药的非限制性实例包括但不限于烷基酯或者芳烷基酯或者酰胺，包括甲基酯、乙基酯、丙基酯、苄基酯和取代的苄基酯或者酰胺。前药还包括化合物的磷酸酯。
立体异构现象和多晶型
具有手性中心的本发明化合物可以按光学活性形式和外消旋形式存在和分离。本发明包括本发明化合物的任何外消旋、光学活性、非对映异构、多晶型或者立体异构形式，或者它们的混合物，它们具有本申请所述的有用性质。
在一个实施方案中，使用本申请所述的方法或者本领域技术人员已知的合成转换通过不对称合成制备光学活性形式的化合物。
得到光学活性物质的其它方法是本领域已知的，并至少包括下列方法。
i)物理分离晶体—通过该技术手工分离各个对映异构体的大晶体。如果存在单独的对映异构体的晶体(即，所述物质为聚集物)并且所述晶体在视觉上是不同的，则可使用这种技术；
ii)同时结晶--通过该技术使各个对映异构体单独从外消旋体溶液中结晶出来，可能只要后者在固态时为聚集物即可；
iii)酶拆分—该技术借助对映异构体与酶的不同反应速度而部分或者全部分离外消旋体；
iv)酶不对称合成—通过该合成技术，合成的至少一个步骤使用酶反应以得到对映异构纯的期望的对映异构体或者富集的期望的对映异构体的合成前体；
v)化学不对称合成—通过该合成技术，在产物中产生不对称性(即，手性)的条件下由非手性前体合成期望的对映异构体，其可使用手性催化剂或者手性助剂实现；
vi)非对映异构体分离—通过该技术使外消旋化合物与对映异构纯的试剂(手性助剂)反应，将各个对映异构体转化成非对映异构体。然后将所得非对映异构体通过色谱法或者结晶，借助于它们现在更加不同的结构差别来分离，随后除去手性助剂得到希望的对映异构体；
vii)一级-和二级-不对称转换—通过该技术，来自外消旋体的非对映异构体平衡，从而在来自期望的对映异构体的非对映异构体的溶液中占优势，或者来自期望的对映异构体的非对映异构体优先结晶干扰所述平衡，使得最终原则上所有物质从期望的对映异构体转化成结晶非对映异构体。然后将期望的对映异构体从所述非对映异构体释放；
viii)动力学拆分—这种技术是指借助于在动力学条件下对映异构体与手性的非外消旋试剂或者催化剂的不同反应速度而实现外消旋体的部分或者全部拆分(或者进一步拆分经部分拆分的化合物)；
ix)由非外消旋前体的对映特异性合成—通过该合成技术，期望的对映异构体得自非手性起始物质并且在整个合成过程中立体化学完整性不妥协或者仅最小地妥协；
x)手性液相色谱法—通过该技术，在液体流动相中借助外消旋体的对映异构体与固定相不同的相互作用分离所述外消旋体的对映异构体。固定相可由手性物质制成或者流动相可含有另外的手性物质以引起不同的相互作用；
xi)手性气相色谱法--通过该技术，使外消旋体挥发并借助在气体流动相中与含有固定的非外消旋手性吸附相的柱的不同相互作用分离对映异构体；
xii)用手性溶剂萃取--通过该技术，借助一种对映异构体优先溶解在特定手性溶剂中来分离对映异构体；或者
xiii)跨手性膜运输--通过该技术，使外消旋体与薄膜屏障接触。所述屏障通常隔开两种可混溶流体，一种含有外消旋体，并且驱动力如浓度或者压力差导致优先跨膜屏障运输。由于膜的非外消旋手性性质而发生分离，所述性质仅允许所述外消旋体的一种对映异构体通过。
在另一方面，本发明提供药物组合物(即，制剂)。药物组合物可包含本申请所述的本发明化合物，其与至少一种药学上可接受的赋形剂或者载体混合。通常，组合物包含至少两种药学上可接受的赋形剂或者载体。
尽管本发明的组合物和方法通常用于治疗人类患者，但是它们也可在兽医医学中使用，以治疗类似或者相同的疾病。例如，组合物可用于治疗哺乳动物，所述哺乳动物包括但不限于，灵长类和家养的哺乳动物。例如，组合物可用于治疗食草植物。本发明组合物包括药物中的一种或者多种的几何异构体和光学异构体，其中每种药物为异构体的外消旋混合物或者一种或者多种经纯化的异构体。
适用于本发明的药物组合物包括这样的组合物，其中包含有效量的所述活性成分以实现预期目的。有效量的确定在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本申请提供的详细披露。
可制备上述化合物的任意适合制剂以用于给药。可使用任意适当的给药途径，包括但不限于，口服、肠胃外、静脉内、肌内、透皮、局部、皮下途径和吸入。根据待治疗的受试者、给药模式和希望的治疗类型--例如，防止、预防、治疗；按与这些参数一致的方式配制所述化合物。针对每种给药途径的适当制剂的制备是本领域已知的。这种配制方法和技术的总结可参见Remington's Pharmaceutical Sciences，最新版，Mack Publishing Co.，Easton，PA，将其引入本文作为参考。药物制剂的其它实例可参见Liberman，H.A.和Lachman，L.，Eds.，Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Decker，New York，N.Y.，1980。每种物质的制剂或者两种物质的组合的制剂通常将包含稀释剂以及在一些情况中包含助剂、缓冲剂、防腐剂等。待被给药的物质也可按脂质体组合物形式或者以微乳剂形式给药。
对于注射，可将制剂作为液体溶液剂或者混悬剂或者作为适于在注射之前溶解或者悬浮在液体中的固体形式或者作为乳剂以常规形式制备。适合的赋形剂包括，例如，水、盐水、右旋糖、甘油等。这种组合物也可含有一定量的无毒辅助物质，例如润湿剂或者乳化剂、pH缓冲剂等，例如，乙酸钠、失水山梨醇单月桂酸酯等。
也已经设计用于药物的多种持续释放系统，并可将它们应用于本发明化合物。参见，例如，美国专利5,624,677，将其方法通过引用的方式并入本文作为参考。
全身给药也可包括相对无创方法，例如使用栓剂、透皮贴剂、透粘膜递送和鼻内给药。口服给药也适用于本发明化合物。本领域理解的是，适合的形式包括糖浆剂、胶囊剂、片剂。
有效剂量可通过使用常规技术和通过观察在相似环境下得到的结果容易地确定。在确定有效剂量中，考虑许多因素，包括但不限于：患者的物种；它的尺寸、年龄和一般健康状况；涉及的具体疾病；涉及的程度或者疾病的严重性；个体患者的应答；所给药的具体化合物；给药模式；所给药的制剂的生物利用度特征；选择的给药方案；以及并行药疗法的使用。对于向动物或者人类受试者的给药，上述化合物的适当剂量经常为0.01-1500mg/kg，并且有时为0.1-10mg/kg。剂量水平依赖于病症的性质、药物效力、患者的病症、医师的判断以及给药的频率和模式；然而，对这些参数的优化在本领域技术人员的普通技术水平范围内。
对于本申请所述的所有病症，典型的全身性剂量是每日0.01mg/kg体重-1500mg/kg体重范围内的那些剂量，作为单次日剂量或者多次日剂量。针对所述病症的优选剂量为每日0.5-1500mg。对于希望的病症，更优选的剂量为每日5-750mg。典型的剂量范围也可为0.01-1500、0.02-1000、0.2-500、0.02-200、0.05-100、0.05-50、0.075-50、0.1-50、0.5-50、1-50、2-50、5-50、10-50、25-50、25-75、25-100、100-150，或者150mg/kg/日或者更多，其作为单次日剂量或者多次日剂量。在一个实施方案中，将所述化合物以约1至约5，约5至约10，约10至约25或者约25至约50mg/kg的剂量给药。对于局部应用，典型剂量是0.001-100重量%活性化合物范围内的剂量。
方便地，将化合物以单位形式的任意适合剂型给药，包括但不限于每单位剂型含有约7-3000mg、约70-1400mg或者约25-1000mg活性成分。例如，约50-1000mg的口服剂量通常为方便的，包括分为一种或者多种剂型的50、100、200、250、300、400、500、600、700、800、900或者1000mg。较低剂量可为优选的，例如，约10-100或者1-50mg。还包括0.1-50mg，0.1-20mg，或者0.1-10mg的剂量。而且，在通过非口服途径(例如，通过注射或者吸入)给药的情况中可使用较低剂量。
将化合物给药足够的时间，以减轻不希望的症状和与所治疗的病症相关的临床体征。
活性化合物以不存在严重毒性影响的情况下足以向患者体内递送治疗量的化合物的量包含在药学上可接受的载体或者稀释剂中。在这些药物组合物中可使用的药学上可接受的载体通常为本领域已知的。它们包括，但不限于，离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、溶剂、盐或者电解质，例如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧基甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、油、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。药学上可接受的媒介物可含有一种以上的赋形剂的混合物，其中可选择组分和比率以优化制剂的希望的特征，所述特征包括但不限于贮存期限、稳定性、药物载荷、递送位点、溶出速率、自乳化、释放速率和释放位点的控制，以及代谢。
制剂可通过本领域已知的多种技术制备。制剂技术的实例可参见文献公开和教科书，例如“Water-insoluble drug formulation”，Rong Liu编，2000，Interpharm Press。
在药物组合物中活性化合物的浓度取决于药物的吸收、钝化和排泄速率，以及本领域技术人员已知的其它因素。应注意的是，剂量值也将随着待减轻的病症的严重性改变。还应理解的是，对于任何具体受试者，具体剂量方案应根据个体需要和给药组合物或者指导给药组合物的人的专业判断随时间进行调节，以及本申请阐述的剂量范围仅为示例性的并且不意图限制要求保护的组合物的范围或者实践。活性成分可一次性给药，或者可分成多个较小剂量以不同时间间隔给药。
本申请所述的化合物对于治疗或者预防由激酶介导的或者由HSP90介导的障碍特别有用。在一个实施方案中，本申请所述的化合物可用于治疗或者预防增生性障碍，包括癌症转移。在另一实施方案中，本申请所述的化合物可用于治疗或者预防与激酶或者HSP90相关的炎性或者自身免疫性障碍。
本发明的一个方面涉及可用于治疗癌症的化合物和组合物。
本发明的另一方面涉及治疗以下癌症：乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食管癌、喉癌、胶质母细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡型癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、髓样障碍、淋巴样障碍、霍奇金病、毛细胞癌、口腔和咽(口部)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑和中枢神经系统癌，和白血病。
本发明的另一方面是治疗癌症的方法，其包括将有效量的本发明化合物给药于患有癌症的患者。
血管发生的特征在于内皮细胞增生形成新的血管(常称为新生血管形成)。抑制内皮细胞的有丝分裂的导致对血管发生的抑制。因此本发明的另一方面涉及抑制不希望的有丝分裂，包括不希望的血管发生。本申请定义的特征在于不希望的细胞有丝分裂的哺乳动物疾病包括但不限于，内皮细胞的过度或者异常刺激(例如，动脉粥样硬化)、实体瘤和肿瘤转移、良性肿瘤，例如，血管瘤、沙眼和脓性肉芽肿(pyogenic granulomas)、血管功能失常、异常伤口愈合、炎性障碍和免疫障碍、贝赫切特病(Bechet’s disease)、痛风或者痛风性关节炎、异常血管发生伴类风湿性关节炎、皮肤疾病如银屑病、糖尿病性视网膜病变和其它眼血管生成性疾病如早产儿视网膜病变(眼晶状体后纤维形成)、黄斑变性、角膜移植排斥、新生血管性青光眼和奥-韦综合征(Osler Weber syndrome)(奥-韦-朗病(Osler-Weber-Rendu disease))。
其它不希望的血管发生涉及包括排卵和囊胚植入的正常过程。上述组合物通过降低或者防止胚胎植入所需要的子宫血管化而可用作生育控制剂。因此，上述组合物可用于阻断排卵和囊胚植入或者可用于阻断月经(引起闭经)。
与不希望的有丝分裂(包括新生血管形成)相关的疾病可根据本发明治疗。这样的疾病包括但不限于，眼新生血管疾病、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、角膜移植排斥(corneal graft rejection)、新生血管性青光眼和眼晶状体后纤维形成、流行性角膜结膜炎、维生素A缺乏病、接触性晶状体过劳症(contact lens overwear)、变应性角膜炎、上缘角膜炎(superiorlimbic keratitis)、翼状胬肉干性角膜炎(pterygium keratitis sicca)、舍格伦综合征(
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syndrome)、红斑痤疮(acne rosacea)、phylectenulosis、梅毒、分枝杆菌感染、脂质变性(lipid degeneration)、化学烧伤、细菌性溃疡、真菌性溃疡、单纯疱疹感染、带状疱疹感染、原虫感染、卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、莫伦溃疡(Mooren’s ulcer)、Terrien角膜边缘性变性(Terrien marginaldegeneration)、边缘性角质层分离(marginal keratolysis)、创伤、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、多动脉炎(polyarteritis)、韦格纳结节病(Wegenersarcoidosis)、巩膜炎、斯-约病(Steven-Johnson disease)、类天疱疮、放射状角膜切开术(radial keratotomy)和角膜移植物排斥(corneal graphrejection)。
与不希望的有丝分裂(包括新生血管形成)相关的其它疾病可根据本发明治疗。这种疾病包括但不限于，镰状细胞性贫血(sickle cell anemia)、结节病(sarcoid)、弹性纤维假黄瘤、佩吉特病(Paget’s disease)、静脉阻塞(veinocclusion)、动脉阻塞(artery occlusion)、颈动脉梗塞性疾病、慢性葡萄膜炎/玻璃体炎、莱姆病(Lyme disease)、全身性红斑狼疮、伊尔斯病(Eales disease)、贝赫切特病、导致视网膜炎或者脉络膜炎的感染、眼假组织胞浆菌病(presumed ocular histoplasmosis)、贝斯特病(Best disease)、近视、视窝(opticpit)、斯塔加特病(Stargart disease)、扁平部睫状体炎(pars planitis)、慢性视网膜脱落(chronic retinal detachment)、高粘滞综合征(hyperviscosity syndrome)、弓形体病和激光后并发症(post-laser complication)。其它疾病包括但不限于，与潮红相关的疾病(虹膜和眼角的新生血管形成(neovascularization of the irisand the angle))和由纤维血管或者纤维组织的异常增生导致的疾病，包括所有形式的增生性玻璃体视网膜病变，无论是否与糖尿病相关。
本发明的另一方面涉及炎性疾病的治疗，所述炎性疾病包括但不限于，内皮细胞的过度或者异常刺激(例如，动脉粥样硬化)、实体瘤和肿瘤转移、良性肿瘤，例如，血管瘤、听神经瘤(acoustic neuromas)、沙眼和脓性肉芽肿、血管功能失常、异常伤口愈合、炎性障碍和免疫障碍、贝赫切特病、痛风或者痛风性关节炎、异常血管发生伴类风湿性关节炎、皮肤疾病如银屑病、糖尿病性视网膜病变和其它眼血管生成疾病如早产儿视网膜病变(眼晶状体后纤维形成)、黄斑变性、角膜移植排斥、新生血管性青光眼和奥-韦综合征(奥-韦-朗病)。其它不希望的血管发生涉及包括排卵和囊胚植入的正常过程。因此，上述组合物可用于阻断排卵和囊胚植入或者阻断月经(引起闭经)。
本发明的另一方面涉及抑制患者中的HSP90活性的方法，其包括向患者给药有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐或者前药。本发明还提供治疗由HSP90介导的疾病的方法。
本发明的另一方面涉及抑制患者中的极光激酶A(Aurora A)活性的方法，其包括向患者给药有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐或者前药。
本发明的另一方面涉及用GSK-3抑制剂治疗或者预防GSK-3介导的疾病的方法，其包括向患者给药有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐或者前药。
本发明的一个方面涉及在有此需要的患者中增强糖原合成和/或降低血液葡萄糖水平的方法，所述方法包括向所述患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。这种方法对于糖尿病患者尤其有用。另一方法涉及抑制高度磷酸化τ蛋白的产生，该方法可用于减慢阿尔茨海默病的进展或使其停止。另一方法涉及抑制β-联蛋白的磷酸化，该方法可用于治疗精神分裂症。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品中的GSK-3活性，所述方法包括使生物样品与式I、II、III、IVa或者IVb的GSK-3抑制剂接触。
本发明的另一方面涉及抑制患者中的GSK-3活性的方法，其包括向所述患者给药本发明化合物或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及治疗或者预防CDK-2介导的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的CDK-2活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及治疗或者预防ERK-2介导的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的ERK-2活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及治疗或者预防AKT介导的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的AKT活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及治疗或者预防Src-介导的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的Src活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及用Lck抑制剂治疗或者预防Lck介导的疾病的方法，所述方法包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物，或者其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的Lck活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及用Abl抑制剂治疗或者预防Abl介导的疾病的方法，所述方法包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物，或者其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的Abl活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及治疗或者预防cKit介导的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物，或者其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的cKit活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及治疗或者预防Flt3介导的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物，或者其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的Flt3活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
本发明的另一方面涉及治疗或者预防KDR介导的疾病的方法，其包括向需要这种治疗的患者给药治疗有效量的本发明化合物，或者其药物组合物。
本发明的另一方面涉及抑制生物样品或者患者中的KDR活性，所述方法包括向所述患者给药本发明化合物，或者包含所述化合物的组合物。
有效抑制蛋白质激酶的量是当与不存在抑制剂的情况下的酶活性相比时，导致可测量性抑制激酶活性的量。可使用任何方法测定抑制，例如，下述的生物测试实施例。
如上所述的本发明化合物可使用本领域技术人员已知的方法、技术和物质合成，例如，描述于March,ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY4.sup.thEd.,(Wiley1992);Carey and Sundberg,ADVANCED ORGANIC CHEMISTY3.sup.rd Ed.,Vols.A and B(Plenum1992)和Green and Wuts,PROTECTIVEGROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS2.sup.nd Ed.(Wiley1991)中。可用于制备本发明化合物及其中间体的起始物质可从诸如以下的来源商购：AldrichChemical Co.(Milwaukee,Wis.)、Sigma Chemical Co.(St.Louis,Mo.)、Maybridge(Cornwall,England)、Asinex(Winston-Salem,NC)、ChemBridge(SanDiego,CA)、ChemDiv(San Diego,CA)、SPECS(Delft,The Netherlands)、Timtec(Newark,DE)，或者可选择地，可通过公知的合成方法制备(参见，例如，Harrison et al.,"Compendium of Synthetic Organic Methods",Vols.1-8(JohnWiley and Sons,1971-1996);"Beilstein Handbook of Organic Chemistry,"Beilstein Institute of Organic Chemistry,Frankfurt,Germany;Feiser et al.,"Reagents for Organic Synthesis,"Volumes1-21,Wiley Interscience;Trost et al.,"Comprehensive Organic Synthesis,"Pergamon Press,1991;"Theilheimer'sSynthetic Methods of Organic Chemistry,"Volumes1-45,Karger,1991;March,"Advanced Organic Chemistry,"Wiley Interscience,1991;Larock"Comprehensive Organic Transformations,"VCH Publishers,1989;Paquette,"Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,"3d Edition,John Wiley&Sons,1995)。用于合成本发明化合物和/或其起始物质的其它方法描述在本领域中，或者对于本领域技术人员而言是显而易见的。试剂和/或保护基的备选方案可参见上面提供的参考文献和本领域技术人员已知的其它纲要。
本发明化合物的制备可包括一个或者多个保护和脱保护步骤(例如，形成和除去缩醛基团)。选择适合的保护基的指导可参见，例如，Greene&Wuts,"Protective Groups in Organic Synthesis,"Wiley Interscience,1999。另外，所述制备可包括多种纯化，例如柱色谱法、快速色谱法、薄层色谱法(TLC)、重结晶、蒸馏、高压液相色谱(HPLC)等。此外，也可使用在化学领域中公知的用于鉴定和定量化学反应产物的各种技术，例如质子和碳-13核磁共振(1H和13C NMR)、红外和紫外光谱法(IR和UV)、X-射线晶体学、元素分析(EA)、HPLC和质谱(MS)。制备也可涉及化学领域中公知的任何其它用于保护和脱保护、纯化以及鉴别和定量的方法。
本发明化合物实例的合成在下面的一般和具体方案中说明。本领域技术人员可容易地根据上面讨论的方法从下列实施例得到本发明化合物的合成。
POCHONIN肟类似物库的制备:
在一些实施方案中，库的合成计划基于先前开发的化学方法[27]并使用固相合成和聚合物结合试剂。为了拓宽pochoxime的SAR，设想具有四个不同点的库(参见1，方案2)，其源于片段A-B的发散性(divergent coupling)偶合，然后形成肟并先后引入片段C和D。片段A-D的选择基于本发明人的初步结构-活性数据[27,29]和通过不同的环尺寸和另外的小取代基使大环倾向于某种构象分布的目的。关于芳基部分(片段A)，初步实验显示，对苯酚进行的任意修饰都是有害的；然而，在R1处是否存在氯确实对于活性具有细微影响，并在所述库中包含这两种备选方案。关于大环的下部(衍生自片段B)，发明人[27]和其他人[30]先前已经发现，饱和的片段B2是允许的，然而，没有研究另外的取代，并且包含三个新的组合(B3-5)。关于大环的上部(片段C)，考虑八种修饰，得到内酯(C1-2，C4)或者内酰胺(C3)、不同的大环尺寸(C5-6)和炔(C8)，其得到作为置换(metathesis)的产物的二烯，而非通常的内环烯烃。最后一个基团(D)包含最大多样性，从而探寻得到最佳肟取代基。[27,31,32]
方案2.库的合成计划和库片段的结构
Figure BDA00003344749600361
如方案3中所示，将甲苯甲酸酯片段A用LDA去质子化，然后添加片段B，以中等至良好的收率(50-85%)得到中间体2的总共十种不同的组合，除了与片段B2的偶合，其得到不可接受的收率(<10%)，可能是由于Weinreb酰胺的竞争性烯醇化。可选择地，相同产物可通过以下方法得到：使用NaCNBH3将与片段B1得到的偶合产物共轭还原(25-50%)。将每种产物用氨基氧基乙酸处理，并在通过硅胶垫过滤除去过量的氨基氧基乙酸后，将所得的肟2加载在氯三苯甲基树脂上，得到聚合物结合的中间体3。为了确保起始物质完全消耗掉，使用过量高载荷树脂(1.1mmol/g)并一次性消耗掉所有起始物质(24h)，通过添加AcOH使树脂封端，得到3的十种树脂。然后将2-(三甲基甲硅烷基)乙基酯在TBAF的作用下断裂，得到4，并将每批树脂进一步分成八个批次，用于与片段C进行酯化或者形成酰胺。结果发现，有必要在TBAF脱保护后使用于CH2Cl2中的1%AcOH溶液充分洗涤树脂，从而使聚合物结合的羧酸盐质子化并除去四丁基铵盐。然后使每种树脂与第二代Grubbs催化剂[33]在微波辐射下在120°C进行置换反应45分钟，得到希望的聚合物结合的大环5。为了确保反应完成并平衡至热力学上更有利的E-烯烃，将所述反应重复三次，其中在每次处理中使用6%的催化剂载荷。对于烯-炔置换(包含片段C8的树脂)，将另外的烯烃添加在溶液中以促进催化剂周转。然后使用六氟异丙醇(HFIP)(其被发现保持EOM基团的完整性)使大环5的库从树脂上断裂下来，在纯化后得到产物，五步的收率为20-30%。然后将携带游离羧酸的大环进一步分装在隔开的池中，用含有过量胺(>2.0当量)的聚合物结合的碳化二亚胺和4-DMAP使所述大环与片段D偶合，以优异的转化率(>90%)得到产物。蒸发除去过量的胺，或者在随后用大量过剩(10当量)的磺酸树脂/MeOH处理以在进行EOM脱保护期间将所述胺与DMAP一起分离出来(两个步骤的分离收率(siolated yield)为>75%)。尽管未得到所有排列，但是制备了含有每个片段至少一个实施例的库。所有化合物通过PTLC纯化，然而未尝试分离肟的E和Z异构体，其通常具有即使不相同也是非常相似的Rf。所有产物的纯度通过LC/MS评定，并且通过NMR来分析库的样品。通常，化合物作为肟几何结构的1:1E:Z混合物得到。
方案3.
Figure BDA00003344749600381
试剂和条件：a)LDA(2.0当量)，B(0.9当量)，THF，-78°C，20min，50-85%；b)H2NOCH2CO2H(5.0当量)，40°C，py，24-48h，85-95%；c)PS-ClTr-Cl(3.0当量)，EtiPr2N(6.0当量)，CH2Cl2，23°C，24h；然后AcOH(20当量)，23°C，24h；d)TBAF(4.0当量)，23°C4h；e)C(5.0当量)，Ph3P(2.0当量)，DIAD(2.0当量)，甲苯，23°C12h；f)Grubb's II(0.06当量)，CH2Cl2，120°C(MW)，3x45min；g)HFIP/CH2Cl21/4，23°C，3h，5个步骤的收率为20-30%；
h)PS-DCC(3.0当量)，DMAP(催化剂)，D(2.0当量)，23°C72h；i)PS-SO3H(10当量)，MeOH，23°C4h，两个步骤的收率为>75%(>90%转化率)。
通过使用具有17AAG的荧光素标记类似物的竞争测定[34]并在使用Her-2作为细胞效力的药效标志物的细胞测定中[35]就该库的亚库与人HSP90α的亲和性筛选所述亚库。本发明人先前已经观察到，Z异构体的效力低于E异构体的效力(特别是在细胞测定中)，然而，由于在所述库中E/Z比率是一致的，所以得到的结果在定性上应该是显著的。结果总结在下表1中并揭示关于修饰的令人感兴趣的机会，这些修饰作为单点修饰或者与其它修饰的结合是充分允许的。如上所述，对于具有未取代的芳基环的化合物(A1)和具有氯化芳基环的化合物(A2)(条目1相对于条目41)，它们的活性仅有中等差别。然而，当与其它修饰结合时，这可变的显著。例如，氯原子的存在与片段C2的结合是有益的，其中就与HSP90的亲和性而言，组合A2C2的效力是A1C2效力的大概5倍(条目3相对于42，30相对于47以及34相对于49)。另一方面，与B4的结合是有害的(条目36相对于50和38相对于52)。关于大环的下部，α,β-共轭的肟系统上优于饱和的肟(B1相对于B2)。在β位(B3)或者γ位(B4)的另外的亚甲基以及在γ位(B5)的羟基通常是充分允许的，其中所述库的最适配体中包括组合A1B3C4D1(条目35)、A1B4C4D1(条目38)和A1B5C1D1(条目40)。关于大环的上部，具有手性甲基的化合物(C1)或者具有简单伯酯的化合物(C4)的活性之间通常几乎没有区别。在碳2处的较长烷基链(C2和C7)在一些排列(条目42和45)中是允许的，但与片段B4(条目51)组合则是不允许的。将内酯修饰为内酰胺(C3)导致亲和性显著降低(条目43相对于41)并且不同的大环尺寸(具有C5的13元环和具有C6的15元环)也导致亲和性降低。片段C8(其得到在碳4处取代有乙烯基的产物)也导致亲和性显著降低(条目46)。发明人已经注意到，脂族酰胺为片段D提供最佳活性，然而，这种较大酰胺组(this larger panel of amides)限定构效关系。在哌啶环上的取代基在β(D3)和δ(D4)位是充分允许的，但是在α位(D2，D5，D6)不允许，太大的取代基(D7和D8)也不允许。5元环(D15-17)或者7元环(D23)以及非环状仲酰胺(D18-21，D25)导致亲和性降低。一种修饰确实使亲和性轻微改善，其为：脱氢哌啶D9(条目11)。
表1.pochoxime的HSP90亲和性(EC50(μM)和统计学分析(r2))和药效(EC50，μM)评价(测量用抑制剂处理过夜的缺失Her-2的SkBr3细胞)。
Figure BDA00003344749600391
Figure BDA00003344749600401
*基于以下事实：使用20nM HSP90进行测定，
低于20nM的IC50不能可靠地测量
与根赤壳菌素结合的N末端部分HSP90的共晶体结构(1bgq，图1，照片A)[36]非常类似于apo-HSP90(1yer)[37]的结构。也已经报导了功能上相关的ER侣伴蛋白GRP94(1u0z)的晶体结构[38]，其再次显示出HSP90的ATP结合口袋的类似构象。同样，也已经报导根赤壳菌素的数种resorcylide类似物与HSP90的共晶体结构与HSP90的类似构象结合。[30]本发明发明人使用对接(docking)、结合自由能计算和NMR15N化学位移对pochoxime与酵母HSP90结合模式的研究暗示与根赤壳菌素相似的结合模式。[39]然而，他们没有提供从pochonin D至pochoxime活性显著增强的原理。尽管pochonin D的酮确实指向小的未被占据的口袋，但是对接实验暗示，其转化为具有大取代基(如pochoxime A、B和C中存在的哌啶酰胺)的肟则太大了，以至于不能适合所述结合口袋并且将被置于结合口袋的外面。使用两倍摩尔过量的具有人HSP90α的N末端结构域的配体的pochoxime A和B的共结晶分别得到在(pdb ID：3inw)和
Figure BDA00003344749600412
(pdb ID：3inx)衍射的晶体(参见统计分析的补充信息)。在两种情况中，可将所述抑制剂明确地置于计算的电子密度。两种结构的分析揭示了“ATP-lid”中肽区段从Ile104至Ala124(假定为连续α-螺旋)的明显重排(图1，照片B和C)。这种重排在侧链Met98、Leu103、Phe138和Trp162与哌啶部分的界面处创造了大的亲液口袋，其中所述哌啶部分夹在Thp162的芳基部分和侧链Met98之间。因此，所述重排为与肟取代基的有利相互作用创造了机会，并因此，为pochoxime活性增强以及羟胺上的亲液基团优选为如哌啶酰胺提供了原理。基于pochonin的结合模式和根赤壳菌素的结合模式之间的相似性，将这些结果外推至根赤壳菌素也可解释肟的益处。[31,32]对于一些基于嘌呤的抑制剂PU3(pdb ID1uym)也已经注意到HSP90构象的类似变化，[37]然而，在后一情况中，由Met98、Leu103和Thp162创造的口袋开口较小，仅容纳甲氧基，而非整个哌啶环，尽管Ph138的芳基环牵涉在与PU3的苄基部分的π-堆叠相互作用中。同样，代表性2-氨基苯甲酰胺(pdb ID：3d0b)的共晶体结构[40]显示在“ATP-lid“中具有连续α-螺旋，然而，它不利用Met98和Trp162之间的亲液相互作用。
基于这种结构，在烯丙位的取代(例如在包含片段B4和B5的化合物中)应指向溶剂。在烯丙位(碳6)携带羟基取代的化合物1A1B5C1D1被认为是最令人感兴趣的，因为它应该相对于pochoxime A、B和C改善了水溶性，并提供用标志物或者亲和性标记物标记抑制剂的手段。这种化合物作为四种非对映异构体(在碳6处具有任一立体化学的两种肟几何结构)的混合物制备，其被证明可通过HPLC分离。令人感兴趣地，尽管E和Z肟可容易地通过NMR分析来辨别，但是源于烯丙位羟基的不同手性的非对映异构体具有非常相似的NMR，并且不能推断出它的立体化学。测试了所述四种异构体的细胞效力(图2)。如上所述，肟的E异构体比Z肟明显更有效(60-100倍)。在两种不同的非对映异构体之间也具有明显的活性差别(约10倍)，其中最有活性的化合物在5nM具有活性，从而使它成为迄今为止最有活性的pochoxime(基于对接，暂时指定为R异构体)。
为了制备这种新识别的类似物的衍生物，根据先前开发的方案制备在烯丙位羟基上携带甲硅烷基保护基的化合物6(参见详细合成方案的补充信息)。[29]如方案4中所示，使用TBAF进行6的选择性甲硅烷基脱保护得到7，经烷基化在7上引入短连接物，叠氮化物置换并还原，得到胺9。用Cy3标记9，接着EOM脱保护，得到pochoxime-Cy3缀合物10。可选择地，经四步序列用生物素标记化合物7，所述四步序列包括与短的PEG连接物偶合，Fmoc脱保护，与生物素偶合并用TFA完全脱保护。应注意的是，在这种情况中，用磺酸树脂完全脱保护导致PEG酯的酯交换。结果发现，这些衍生物对人HSP90α的亲和性低于30nM，暗示呈醚或者酯形式的与荧光团或者生物素的连接物不干扰结合。
方案4.
Figure BDA00003344749600421
试剂和条件：a)TBAF(1.5当量)，THF，0-23°C，3h，88%；b)NaH(7.2当量)，0°C，然后Bu4NI(1.1当量)和MsO(CH2)3Br(4.7当量)，0-40°C，3h；c)NaN3(11当量)，DMSO，60°C，2h，历经两个步骤的收率为50%；d)Ph3P(2.0当量)，THF/H2O(9:1)，40°C，24h，54%；e)Cy-3(1.5当量)，TNTU(1.35当量)，iPr2EtN(3.0当量)，0-23°C，1h，95%；f)PS-SO3H(10当量)，MeOH，40°C，2h，>90%；g)FmocAEEA-OH(2.0当量)，EDC(2.0当量)，4-DMAP(0.1当量)，CH2Cl2，23°C，22h，50%；h)20%哌啶/DMF，10min，20°C，>95%；i)生物素-OSu(1.2当量)，Et3N(4.6当量)，DMF，23°C，12h，60%；TFA/甲酚(4:1)，10min，23°C，>95%。FmocAEEA-OH=Fmoc-8-氨基-3,6-二氧杂辛酸。
这种扩展的pochoxime库导致识别出数种具有增强活性的类似物。在大环上的碳6处引入羟基得到迄今为止最有效的pochoxime，其显示低于10nM的细胞效力。pochoxime A和B与人HSP90α的共晶体结构显示，与紧密相关的根赤壳菌素相比，pochoxime与不同的HSP90构象结合。是否这种可选择的结合模式转化成不同的生物活性目前仍在研究中。识别具有亲和性标记物或者标志物的衍生物应在这一努力中有帮助，并可在诊断和成像中证实是有用的。最后，如本申请报导的结构所示例，人HSP90的“ATP-lid”区域中的柔性[41]在抑制剂设计中应为重要考虑要素。而且，HSP的不同旁系同源体(paralog)中的或来自不同物种的HSP中的这种蛋白质区域中的柔性的差别可经开发用于实现选择性抑制。
方案5.aminopochoxime3和glycopochoxime衍生物5的合成
Figure BDA00003344749600431
试剂和条件：a)MsCl(4.0当量)，Et3N(5.0当量)，CH2Cl2，0-23°C，7h；b)NaN3(10当量)，DMF，23°C，24h，历经两个步骤的收率为87%；c)Me3P(4.0当量)，THF:H2O(5:1)，23°C，5h，74%；d)(ClCH2CO)2O(5.0当量)，i-Pr2EtN(5.0当量)，CH2Cl2，0°C，10min，82%；e)四-O-乙酰基-1-S-乙酰基-1-硫代-β-D-吡喃葡萄糖(3.0当量)，Na2CO3(15当量)，MeOH，23°C，6h；f)PS-SO3H(10当量)，23°C，16h，历经两个步骤并在HPLC分离后的收率为30%。
Figure BDA00003344749600441
制备叠氮化物2。将醇1(1.0当量，100mg，0.17mmol)溶解在二氯甲烷(5.0mL)中并将溶液冷却至0°C。在0°C缓慢添加三乙胺(5.0当量，100μL，0.85mmol)和甲磺酰氯(4.0当量，52μL，0.68mmol)。将反应混合物在23°C搅拌7小时，然后用饱和NaHCO3水溶液淬灭。将萃取的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩溶剂，留下黄色残留物。将粗制甲磺酸酯溶解在DMF(5.0mL)中，添加叠氮化钠(10当量，111mg，1.7mmol)并在23°C搅拌。在24小时后，将反应混合物过滤并在减压下浓缩。将残留物通过快速色谱法(SiO2，1:1EtOAc/己烷)纯化，得到叠氮化物2(87mg，历经两个步骤的收率为87%)，其为无色油状物。Rf=0.3(1:1EtOAc/己烷)；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ=6.87(d，J=16.0Hz，1H)，6,74-6.73(m，2H)，6.66(d，J=2.0Hz，1H)，6.60(d，J=2.0Hz，1H)，6.15(d，J=16.4Hz，1H)，6.04-5.92(m，2H)，5.75-5.69(m，2H)，5.42(dt，J=15.6，4.4Hz，2H)，5.24-5.19(m，10H)，4.84(d，J=3.2Hz，4H)，4.26(d，J=15.2Hz，1H)，4.18-4.17(m，2H)，3.71-3.68(m，8H)，3.61-3.58(m，6H)，3.48-3.42(m，6H)，2.53-2.49(m，2H)，2.42-2.34(m，5H)，1.71-1.59(m，12H)，1.45(dd，J=6.0，1.6Hz，6H)，1.30-1.20(m，12H)ppm；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C31H44N5O8计算值：614.3112；实测值：614.3139
Figure BDA00003344749600442
合成胺3。向叠氮化物2(1.0当量，83.6mg，0.136mmol)在THF:H2O混合物(5.5mL，5:1)中的溶液中添加Me3P(4.0当量，0.54mL，1M于THF中)。将反应混合物在23°C搅拌5小时，然后在减压下浓缩。然后将化合物通过反相纯化，以74%收率得到胺3(59mg，100mmol)，其为异构体的混合物。HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C31H46N3O8计算值：588.3207；实测值：588.3212。
Figure BDA00003344749600451
合成氯化物4。将胺3(59mg，100μmol)溶解在二氯甲烷(5.0mL)中并冷却至0°C，先后添加i-Pr2EtN(5.0当量，88μL，500μmol)和氯乙酸酐(5.0当量，84mg，500μmol)并搅拌10min。将反应混合物用NaHCO3水溶液萃取并用盐水洗涤，干燥并真空蒸发。将残留物通过快速色谱法(SiO2，6:4EtOAc/己烷)纯化，得到氯化物4(55mg，82%)。Rf=0.15(1:1EtOAc/己烷)；1HNMR(CDCl3，400MHz)δ=6.82(d，J=16.4Hz，1H)，6.65-6.64(m，2H)，6.56(d，J=2.0Hz，1H)，6.48(t，J=8.0Hz，2H)，6.12(d，J=16.8Hz，1H)，5.96-5.80(m，2H)，5.43-5.42(m，1H)，5.41-5.40(m，1H)，5.23-5.21(m，2H)，5.15-5.09(m，10H)，4.75(s，4H)，4.58(bs，2H)，4.42(d，J=15.2Hz，1H)，3.98(d，J=2.0Hz，4H)，3.68-3.59(m，8H)，3.52-3.34(m，10H)，3.09(d，J=15.2Hz，1H)，2.38-2.31(m，8H)，1.58-1.44(m，12H)，1.35(d，J=6.0Hz，6H)，1.20-1.11(m，12H)ppm.
Figure BDA00003344749600452
合成硫代糖苷5。将四-O-乙酰基-1-S-乙酰基-1-硫-β-D-吡喃葡萄糖(3.0当量，82mg，0.201mmol)溶解在甲醇(2.0mL)中。添加碳酸钠(15当量，105mg，1.0mmol)并在23°C搅拌3小时，然后添加氯化物3(1.0当量，45mg，0.67mmol)并再搅拌3小时。将反应混合物过滤，用Dowex50WX2-100树脂中和并真空蒸发。将粗制产物溶解在甲醇(3.0mL)中，添加PS-SO3H(10当量，223mg，3.0mmol/g)并在23°C搅拌16小时。将反应混合物过滤，并真空蒸发。将肟异构体通过HPLC[Agilent Zorbax Eclipse XDB-C189.4mm x25mm柱；流速3.0mL/min；线性梯度为80%-40%H2O(0.01%TFA)/乙腈(0.01%TFA)]分离，得到硫代糖苷5(Z-异构体：6.0mg；E-异构体：7.9mg)。
glycopochoxime5的Z-异构体1H NMR(CD3OD，400MHz)δ=6.81(d，J=16Hz，1H)，6.33(d，J=2.4Hz，1H)，6.20(d，J=2.4Hz，1H)，6.19-6.11(m，1H)，5.72-5.64(m，1H)，5.49(dd，J=15.2，6Hz，1H)，5.36-5.29(m，1H)，4.48-4.46(m，1H)，4.43(d，J=4.8Hz，1H)，)，4.02(d，J=15.2Hz，1H)，)，3.88(d，J=11.6Hz，1H)，3.68-3.61(m，4H)，3.60-3.55(m，4H)，3.31-3.28(m，4H)，3.25(t，J=8.4Hz，1H)，2.64-2.59(m，1H)，2.50-2.40(m，2H)，2.30-2.23(m，1H)，1.73-1.62(m，6H)，1.47(d，J=6。4Hz，3H)ppm；13C NMR(CD3OD，100MHz)δ174.6，173.5，172.4，164.8，164.4，159.4，144.2，141.6，135.9，130.5，124.4，113.1，111.1，104.8，89.0，84.8，82.0，76.9，75.2，75.1，74.0，65.5，55.1，49.7，46.7，41.9，40.5，38.1，36.4，30.0，29.2，27.9，22.2ppm；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C33H46N3O12S计算值：708.2724；实测值：708.2712。
glycopochoxime5的E-异构体1H NMR(CD3OD，400MHz)δ=6.09-6.07(m，2H)，5.96-5.82(m，2H)，5.57-5.49(m，1H)，5.31(dd，J=15.6，6.4Hz，1H)，5.21-5.17(m，1H)，4.32-4.24(m，4H)，3.75(d，J=11.2Hz，1H)，3.66(d，J=15.6Hz，1H)，3.54-3.46(m，4H)，3.40-3.36(m，4H)，3.19-3.15(m，4H)，3.10(t，J=9.2Hz，1H)，2.54-2.47(m，1H)，2.35-2.25(m，2H)，2.10-2.03(m，1H)，1.59-1.58(m，2H)，1.53-1.48(m，4H)，1.33(d，J=6。4Hz，3H)ppm；13C NMR(CD3OD，100MHz)δ170.5，169.7，168.1，161.1，158.1，139.3，133.5，132.0，127.4，126.6，108.1，100.9，85.0，80.8，78.1，73.0，71.4，71.3，70.1，61.5，51.4，45.8，42.8，37.8，36.4，32.4，29.0，26.1，25.3，24.0，18.2ppm；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C33H46N3O12S计算值：708.2724；实测值：708.2738。
方案6.经三信反应(Mitsunobu)使醇构型反转.
Figure BDA00003344749600471
试剂和条件：a)ClCH2COOH(4.0当量)，PPh3(4.4当量)，DIAD(4.4当量)，THF，0-23°C，14h，77%；b)HSCH2CH2NH2(4.0当量)，吡啶(2.0mL)，Et3N(1.0mL)，MeOH，45°C，24h，83%.
Figure BDA00003344749600472
合成化合物6：向醇1(1.0当量，200mg，0.34mmol)、氯乙酸(4.0当量，127mg，1.36mmol)和三苯基膦(4.4当量，391mg，1.49mmol)在THF(5mL)中的搅拌的冰冷溶液中滴加DIAD(4.4当量，0.294mL，1.49mmol)，并在23°C搅拌14小时。将反应混合物真空蒸发并通过快速色谱法(SiO2，3:7-1:1EtOAc/己烷)纯化，得到酯6(173mg，77%)。Rf=0.32(1:1EtOAc/己烷)。HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C33H46ClN2O10计算值：665.2763；实测值：665.2719。
Figure BDA00003344749600473
合成醇7：向酯6(1.0当量，163mg，0.245mmol)在甲醇(3.0mL)中的溶液中添加吡啶(2.0mL)、三乙胺(1.0mL)和胱胺(4.0当量，77mg，0.98mmol)，并将所得混合物在45°C搅拌24小时。然后真空蒸发溶剂并通过快速色谱法(SiO2，1:1-7:3EtOAc)/己烷)纯化粗制产物，得到醇7(120mg，83%)。Rf=0.11(8:2EtOAc/己烷)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ=6.88(d，J=16.4Hz，1H)，6,74-6.72(m，2H)，6.66(d，J=2.4Hz，1H)，6.59(d，J=2.0Hz，1H)，6.18(d，J=16.4Hz，1H)，6.07-5.91(m，2H)，5.64-5.53(m，4H)，5.21(s，8H)，5.20-5.16(m，2H)，4.83(s，4H)，4.46-4.42。(m，3H)，3.78-3.69(m，10H)，3.60-3,59(m，6H)，3.46-3.42(m，6H)，3.28(d，J=15.2Hz，1H)，2.46-2.37(m，8H)，1.68-1.58(m，12H)，1.46(d，J=6Hz，6H)，1.30-1.20(m，12H)；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C31H45N2O9计算值：589.3047；实测值：589.3033。
Figure BDA00003344749600481
合成叠氮化物8。遵循就叠氮化物2所述相同的操作得到叠氮化物8。Rf=0.3(1:1EtOAc/己烷)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ=6.87(d，J=16.4Hz，1H)，6,74-6.72(m，2H)，6.65(s，1H)，6.59(s，1H)，6.14(d，J=16.0Hz，1H)，5.78-5.60(m，4H)，5.40-5.34(m，2H)，5.24(s，8H)，5.20-5.14(m，2H)，4.83(s，4H)，4.53(d，J=14.8Hz，1H)，3.71-3.68(m，10H)，3.61-3.57(m，5H)，3.48-3.39(m，5H)，3.11(d，J=14.8Hz，1H)，2.52-2.48(m，2H)，2.42-2.35(m，5H)，1.68-1.58(m，12H)，1.46(d，J=6.4Hz，6H)，1.30-1.20(m，12H)ppm；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C31H44N5O8计算值：614.3112；实测值：614.3126
Figure BDA00003344749600482
合成胺9。遵循与就胺3所述相同的操作得到胺9。HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C31H46N3O8计算值：588.3207；实测值：588.3225。
Figure BDA00003344749600491
制备氯化物10。遵循与之前就氯化物6所述相同的操作，将胺9转化成氯化物10。HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C33H46ClN2O10计算值：664.2763；实测值：664.2760。
Figure BDA00003344749600492
合成硫代糖苷11。遵循与就合成化合物5所述相同的操作制备glycopochoxime衍生物11。粗制产物通过HPLC[Agilent Zorbax EclipseXDB-C189.4mm x25mm柱；流速3.0mL/min；线性梯度为80%-40%H2O(0.01%TFA)/乙腈(0.01%TFA)]纯化，得到硫代糖苷11(Z-异构体：4.7mg；E-异构体：5.9mg)。
glycopochoxime11的Z-异构体1H NMR(CD3OD，400MHz)δ=6.69(d，J=16Hz，1H)，6.16(d，J=2Hz，1H)，6.07(d，J=2Hz，1H)，5.95-5.87(m，1H)，5.54-5.46(m，1H)，5.29(dd，J=15.2，8.8Hz，1H)，5.17-5.13(m，1H)，4.70(d，J=4Hz，2H)，4.28(d，J=10Hz，1H)，4.13-4.07(m，1H)，3.75(d，J=12Hz，1H)，3.54-3.45(m，5H)，3.38(t，J=5.2Hz，2H)，3.18-3.17(m，4H)，3.14-3.08(m，2H)，2.43-2.22(m，3H)，2.13-2.05(m，1H)，1.59-1.48(m，6H)，1.30(d，J=6Hz，3H)ppm；13C NMR(CD3OD，100MHz)δ170.3，169.2，168.3，160.3，158.8，155.2，139.3，137.7，131.9，129.3，120.0，110.9，106.8，100.8，85.1，80.8，78.1，73.0，70.9，69.7，61.5，52.6，48.5，45.8，42.8，39.0，38.7，37.4，35.5，34.5，32.5，26.0，23.9ppm。HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C33H46N3O12S计算值：708.2724；实测值：708.2747。
glycopochoxime11的E-异构体1H NMR(CD3OD，400MHz)δ=6.21(s,1H)，6.19(d，J=1.6Hz，1H)，6.05(d，J=16Hz，1H)，5.97-5.89(m，1H)，5.67-5.60(m，1H)，5.41(dd，J=15.2，8.4Hz，1H)，5.29-5.23(m，1H)，4.42(s，2H)，4.39(d，J=5.6Hz，1H)，4.20-4.15(m，1H)，3.88(d，J=11.6Hz，1H)，3.66-3.62(m，2H)，3.59-3.50(m，4H)，3.47-3.44(m，4H)，3.31(s，2H)，2.55-2.51(m，1H)，2.44-2.36(m，2H)，2.22-2.15(m，1H)，1.72-1.62(m，6H)，1.45(d，J=6Hz，3H)ppm；13C NMR(CD3OD，100MHz)δ170.2，169.1，168.0，160.2，157.9，137.8，134.0，131.8，129.5，126.8，106.8，100.6，85.0，80.8，78.0，72.9，71.5，71.0，70.0，61.5，52.8，48.5，45.9，42.8，39.1，36.9，32.5，28.2，26.1，25.3，24.0，19.0ppm；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C33H46N3O12S计算值：708.2724；实测值：708.2790。
Figure BDA00003344749600501
合成胺12。将胺3(15mg)溶解在TFA/间甲酚1:1(200μL/200μL)中并在室温搅拌5min。将反应混合物用10mL H2O稀释，冻干并通过HPLC[AgilentZorbax Eclipse XDB-C189.4mm x25mm柱；流速2.0mL/min；线性梯度为80%-60%H2O(0.01%TFA)/乙腈(0.01%TFA)]纯化，得到0.9mg纯的胺12的Z异构体(Rt=12.2min)和1.8mg胺12的E异构体(Rt=13.4min)
胺12的Z-异构体1H NMR(CDCl3，400MHz)δ=6.67(d，J=16.4Hz，1H)，6.53(d，J=2.0Hz，1H)，6.29(d，J=2.0Hz，1H)，6.08-5.95(m，1H)，5.54-5.47(m，2H)，5.40-5.35(m，1H)，4.62-4.59(m，2H)，4.34(d，J=15.6Hz，1H)，3.82(d，J=15.2Hz，1H)，3.55-3.54(m，2H)，3.37(s，2H)，2.71-2.66(m，2H)，2.49-2.45(m，2H)，2.33-2.25(m，2H)，1.93(s，3H)，1.66-1.58(m，6H)，1.43(d，J=6。4Hz，3H)ppm。HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C25H34N3O6计算值：472.2369；实测值：472.2332
胺12的E-异构体1H NMR(CDCl3，400MHz)δ=6.45(s，1H)，6.30(d，J=1.6Hz，1H)，5.95(s，1H)，5.55-5.50(m，3H)，5.41-5.35(m，1H)，4.91-4.79(m，2H)，4.62-4.56(m，1H)，4.37(d，J=4.4Hz，1H)，3.56(s，2H)，3.37(s，2H)，2.73-2.65(m，2H)，2.46-2.21(m，4H)，1.99(s，3H)，1.66-1.59(m，6H)，1.44(d，J=6.4Hz，3H)ppm；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C25H34N3O6计算值：472.2369；实测值：472.2353
Figure BDA00003344749600511
合成胺13。将胺9(10mg)溶解在TFA/间甲酚2:1(100μL/50μL)中并在室温搅拌5min。将反应混合物用10mL H2O稀释，冻干并通过HPLC纯化，试图分离两种异构体[Agilent Zorbax Eclipse XDB-C189.4mm x25mm柱；流速2.0mL/min；线性梯度为80%-60%H2O(0.01%TFA)/乙腈(0.01%TFA)]，但是没有成功，得到胺13，其为异构体的混合物(1.7mg)；1H NMR(CD3OD，400MHz)δ=6.91(d，J=16Hz，1H)，6.27(d，J=1.6Hz，1H)，6.19(s，3H)，6.12(d，J=15.6Hz，1H)，5.91-5.78(m，4H)，5.46-5.40(m，2H)，5.29-5.23(m，2H)，4.42(d，J=15.2Hz，1H)，3.68-3.49(m，13H)，2.69-2.47(m，8H)，2.34-2.28(m，4H)，1.72-1.71(m，6H)，1.63-1.62(m，6H)，1.47(d，J=6Hz，6H)ppm；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C25H34N3O6计算值：472.2369；实测值：472.2324。
合成乙酰胺14。将胺9溶解在二氯甲烷(1mL)中并冷却至0°C，先后添加i-Pr2EtN(5.0当量，1.9μL，0.085mmol)和乙酸酐(5.0当量，8.6μL，0.08mmol)并搅拌10min。将反应混合物用NaHCO3水溶液淬灭并用盐水洗涤，干燥并真空蒸发。将粗制乙酰基衍生物溶解在甲醇(3mL)中并添加PS-SO3H(10.0当量，56mg，0.17mmol，3.0mmol/g)并在23°C搅拌16小时。将反应混合物过滤并真空蒸发。将粗制产物通过HPLC[Agilent ZorbaxEclipse XDB-C189.4mm x25mm柱；流速2.0mL/min；线性梯度为70%-50%H2O(0.01%TFA)/乙腈(0.01%TFA)]纯化，得到乙酰胺14(Z-异构体：Rt=13.8min，5.4mg；E-异构体：Rt=14.7min，5.8mg)。
乙酰胺14的Z-异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ=6.67(d，J=16.4Hz，1H)，6.53(d，J=2.0Hz，1H)，6.29(d，J=2.0Hz，1H)，6.08-5.95(m，1H)，5.54-5.47(m，2H)，5.40-5.35(m，1H)，4.62-4.59(m，2H)，4.34(d，J=15.6Hz，1H)，3.82(d，J=15.2Hz，1H)，3.55-3.54(m，2H)，3.37(s，2H)，2.71-2.66(m，2H)，2.49-2.45(m，2H)，2.33-2.25(m，2H)，1.93(s，3H)，1.66-1.58(m，6H)，1.43(d，J=6。4Hz，3H)ppm。HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C27H36N3O7计算值：514.2475；实测值：514.2400。
乙酰胺14的E-异构体：1H NMR(CDCl3，400MHz)δ=6.45(s，1H)，6.30(d，J=1.6Hz，1H)，5.95(s，1H)，5.55-5.50(m，3H)，5.41-5.35(m，1H)，4.91-4.79(m，2H)，4.62-4.56(m，1H)，4.37(d，J=4.4Hz，1H)，3.56(s，2H)，3.37(s，2H)，2.73-2.65(m，2H)，2.46-2.21(m，4H)，1.99(s，3H)，1.66-1.59(m，6H)，1.44(d，J=6。4Hz，3H)ppm；HRMS(MALDI-TOF)m/z[M+H]+C27H36N3O7计算值：514.2475；实测值：514.2464
POCHONIN肟类似物的不对称合成:
方案7.用于合成pochonin E的切断
Figure BDA00003344749600521
pochonin E和F的不对称合成如方案7中所示进行并基于前面的pochonin合成的逻辑，因此需要已知片段As-1和具有任一S或者R立体化学的手性片段As-2。通过使用Denmark组开发的用手性路易斯碱活化弱路易斯酸的方法可便利地得到片段As-2。这种反应的突出特征是特别低的催化剂载荷(1mol%)和用插烯亲核试剂(vinylogous nucleophile)得到的优异的区域选择性和高对映异构体过量。从实际情况来看，催化剂的两种对映异构体可商购。然而，所需要的2-丁烯醛物质先前没有报导与插烯亲核试剂反应，并且脂族丙烯醛往往是差的底物(poor substrates)。通过Denmark催化剂催化的插烯用甲硅烷基烯醇醚As-3与2-丁烯醛和SiCl4的反应以45%的收率得到希望的化合物As-4，其为唯一的区域异构体(方案8)。先前已经注意到2-丁烯醛与甲硅烷基烯醇醚的反应的较低收率。然后将醇基团保护为TBS醚，并将酯在Weinreb胺的氯化镁盐的作用下以优异收率转化成Weinreb酰胺。用(R,R)-As-5催化剂开始制备R-As-2立体异构体，并使用(S,S)-As-5催化剂开始制备它的对映异构体S-As-2。
方案8.合成重要片段As-2。a)As-3(2.0当量)，2-丁烯醛(1.0当量)，As-5(0.01mol%)，SiCl4(1.1当量)，CH2Cl2，-78°C，1h，45%；b)TBSCl(1.5当量)，咪唑(1.5当量)，DMF，23°C，16h，89%.
Figure BDA00003344749600531
如方案9中所示，将中间体As-1a和As-1b用LDA单独处理以使苄基位脱质子，并与R-As-2或者S-As-2进行反应，分别以可接受的收率得到产物As-6a和As-6b，与先前这种转化的使用一致。特别地，在反应的碱性条件下即使LDA过量也没有观察到羟基醚从α,β共轭系统的δ-消除。在第二代Grubbs催化剂(Grubbs II)的作用下使As-6的每种异构体排列和芳基取代基进行环化，接着进行磺酸催化的EOM脱保护，并伴随着甲硅烷基醚的脱保护，分别得到pochonin E(As-7b)和pochonin F(As-7a)的两种不同的非对映异构体。出人意料地，置换的收率(48%-65%)低于先前缺乏烯丙型取代的情况。已经证实，酮pochonin D转化为肟(pochoxime)(特别是使用2-(氨基氧基)哌啶基乙酰胺时)在与Hsp90的亲和性和促进Hsp90客户损耗(depletion ofHsp90client)的细胞效力方面得到显著改善。为了制备pochonin E和F的pochoxime类似物以及它们的差向异构体，使中间体As-6a和As-6b与2-(氨基氧基)哌啶基乙酰胺As-8在吡啶中缩合，分别得到产物As-9a和As-9b的两种差向异构体，其为肟几何结构的混合物。与酮As-6a和As-6b相反，肟As-9在置换中得到优异收率(75-95%)。在磺酸树脂的作用下完全脱保护，得到pochoxime E和F的E和Z肟异构体的可分离混合物以及它们的差向异构体(分别为As-10b和As-10a)。
方案9.合成pochonin E和F[As-7(6-S)]、差向-pochonin E和F[As-7(6-R)]和它们转化成相应的pochoxime As-10。a)As-1a或者As-1b(1.0当量)、R-As-2或者S-As-2(0.9当量)，LDA(2.2当量)，-78°C，15min，52-75%b)Grubbs II(0.5mol%)，甲苯(80°C)或者CH2Cl2(回流)，5-8小时，48-100%c)PS-SO3H(10当量)，23°C，16小时，47-57%；d)As-8(6.0当量)，吡啶，45°C，48小时，53-75%.
由于可得到在C-6羟基处具有R和S立体化学的pochonin E和F，将合成化合物的NMR与天然产物进行对比(表2)。在氘代甲醇中，在pochoximeE的NMR中最明显的差别是碳1质子的化学位移。对于S-异构体，该质子位于C-4和C-5这两个烯型质子之间，而对于R异构体，它位于稍高于烯型质子的磁场处(图3)。C-11的两个质子之间的化学位移的差别也很明显。在S-异构体的情况中，它们被充分解析，得到预期的一对双重峰。在R-异构体的情况中，它们很接近并且仅给出分裂的暗示，显示为表观单峰。在pochoninF(其被报道在代丙酮中)的情况中，在C-1质子之间的区别较不明显，但是可看见在C-11质子之间的类似的差别，其中S-异构体的两个质子之间的化学位移具有较大差别。两种合成差向异构体(在C-6处)和天然产物之间的NMR对比得出以下结论：天然化合物在C-6处具有R立体化学。来自中间体(由其得到pochonin F差向异构体)的pochoxime异构体As-10a(E-肟异构体)的结晶得到衍射晶体(图4)并清楚地显示在C-6处的R立体化学。
方案10.合成aminopochoxime F及其衍生物。a)As-9a(6-S)(1.0当量)，Grubbs II(0.2mol%)，CH2Cl2，回流，8小时，87%；b)As-9a(6-S)(1.0当量)，TBAF(5.0当量)，THF，23°C，3h，72%；c)As-11(6-S)(1.0当量)，MsCl(4.0当量)，Et3N(5.0当量)，CH2Cl2，0-23°C，7h；d)NaN3(10当量)，DMF，23°C，24h，历经两个步骤的收率为74%；e)Me3P(4.0当量)，THF:H2O(5:1)，23°C，5h；f)PS-SO3H(10当量)，23°C，16h，从As-12得到As-13的收率为62%，从As-12得到As-14的收率为52%和从As-12得到As-15的收率为64%；g)(Ac)2O(5.0当量)，i-Pr2EtN(5.0当量)，CH2Cl2，0°C，10min；h)i.(ClCH2CO)2O(5.0当量)，i-Pr2EtN(5.0当量)，CH2Cl2，0°C，10min；ii.四-O-乙酰基-1-S-乙酰基-1-硫-β-D-吡喃葡萄糖(3.0当量)，Na2CO3(15当量)，MeOH，23°C，6小时。
Figure BDA00003344749600551
在对pochoxime支架的C-6位处进行进一步修饰的努力中，用TBAF处理得自As-9a的置换环化的经完全保护的pochoxime，以选择性地除去甲硅烷基，从而得到As-11。将羟基分两个步骤(Ms-Cl；NaN3)转化成叠氮化物，得到As-12，将其用三甲基膦还原成氨基。将EOM基团用磺酸树脂完全脱保护，得到C-6为氨基的pochoxime As-13。在量不大的情况下，可选择的策略是使用钯催化的π-烯丙化学(π-ally chemistry)经由其乙酰化或者碳酸化形式来转化羟基。重要的叠氮化物As-12在还原为胺后，也可衍生为氯乙酰胺并与1-β-硫代葡萄糖缀合，得到As-14。使用简单乙酰化的相同顺序得到As-15。尽管在方案10中的化学显示为以S异构体As-9a开始，但是相同的操作也可用R异构体实施，从而得到产物As-13-As-15，其为在C-6处的S异构体。所有产物作为肟几何结构的混合物得到，通过色谱法分离所述混合物。
我们接下来使用先前报导的竞争测定测量了pochoxime对人HSp90α的亲和性。同时，对于化合物As-10(包含氯和不含氯的6-S和6-R非对映异构体)和As-13(6-S和6-R非对映异构体)，评价了在C-6处进行的修饰对构象分布的影响。通过分子动力学，用CHARMM程序中的Merck分子力场模拟每个分子，以分析它的构象分布。如前面所述，这种分析导致识别出三种主要构象：L-状构象，其为根赤壳菌素和pochoxime衍生物的生物活性构象(参见图5)；基本平面(P-状)构象，和；L‘-状构象，其主要通过以下事实区别于L-状构象：大环位于芳环的对面。L’-状构象异构体被发现是对于所有研究的分子而言在能量上最有利的，并且在化合物As-10a-6R的晶体结构中观察到确实如此(图4)。根据所述分子，L-状构象是在能量上最不利的，其为0.8-2.7kcal mol-1(表2)。另外，基于就Hsp90与pochoxime A和B(pdb ID：分别为2INW和3INX)的共晶观察到的Hsp90构象，每种化合物使用Autodock4、AutodockVina和EADock的“吸引腔(Attracting cavities)”算法对接在Hsp90中。结果发现，所有程序重现了通过X-射线晶体学确定的三种试验化合物(根赤壳菌素、pochoxime A和B)的实验结合模式，从而说明了这些方法的有效性。对于新的pochoxime衍生物，EADock的“吸引腔”方法预测了与3INW配体的结合模式相似的结合模式，因此采用L-状构象异构体，而无论给出的作为对接操作种子的输入分子的起始构象是何种构象。这些姿势通过使用L-状构象异构体开始的Autodock4和AutodockVinaruns来证实。由于对pochoxime大环构象空间的次优研究，从P-状构象异构体开始的Autodock4和AutodockVina运行导致未结合姿势，从而显示更不利的得分(数据未显示)。处于它们经计算的结合模式的新的pochoxime衍生物的结合亲和性通过前面描述的方法来估测。结果与实验测定的亲和性非常一致。如表2中所示，很明显，就因为采用生物活性构象而导致的能量惩罚(energetic penalty)而言，在C-6位的取代具有有害影响。在这方面，令人感兴趣地注意到，从As-10a-6R的结晶学结构得到的大环的构象不是生物活性构象。观察到的最明显的能量惩罚是对于C-6处的处于R-立体化学的氨基。氨基在生理pH被质子化的事实使得这种取代基与相应的羟基相比在空间上要求更高，并在此系列中导致最大的计算能量惩罚(2.68kcal/mol)。因此，这种化合物对Hsp90具有最差的亲和性(229nM，相比之下，相应的羟基取代类似物为38nM)。用聚糖(As-14)取代C-6氨基是允许的，优选采用S立体化学(32nM相对于R异构体的90nM)，这使采用生物活性构象的能量惩罚最小化。pochoxime F和它的C-6差向异构体在Hsp90中的对接显示，当使用R立体化学(pochoxime F)时，羟基指向溶剂，然而，当使用S-立体化学(差向-pochoximeF)时，它位于与天冬氨酸残基形成氢键的距离内(图5)。这种相互作用可解释以下事实：这种pochoxime F异构体是所述系列中最有效的(14nM)。类似地，令人感兴趣地注意到，差向-aminopochoxime E与aminopochoxime E相比具有与Hsp90明显更好的亲和性，并且也应受益于这种与Hsp90的Asp54的额外的相互作用。
Figure BDA00003344749600581
表3.采用生物活性构象所受到的经计算的自由能惩罚，预计的KD和测量的KD。
Figure BDA00003344749600591
本申请提供的简要合成可快速得到pochonin E和F以及它们在烯丙位羟基(C-6)处的差向异构体。在就天然产物和合成化合物所报导的质子NMR数据之间的对比清楚地确定羟基立体化学为R-异构体。而且，所描述的化学使得能够进一步研究这种药效团对于Hsp90抑制(一种重要的治疗靶标)的结构活性关系。尽管在C-6处的修饰施加了不利的构象倾向，但是差向-pochoxime F(As-10a)是pochoxime系列中最有效的Hsp90配体(14nM)，这可通过与Hsp90中的天冬氨酸残基形成大量氢键来解释。最后，pochoxime-葡萄糖缀合物As-14(6-S)被证实为是有效的Hsp90配体(32nM)，并可用于通过主动摄取机制将抑制剂导向代谢上需要的恶性细胞。
一般技术。除非另有说明，所有反应在氮气气氛下，用无水溶剂并在无水条件下进行。无水溶剂通过以下方法得到：使它们通过可商购的氧化铝柱(Innovative technology，Inc.，MA)。反应通过LC-MS或者在0.25mm E.Merck硅胶板(60F-254)上进行的薄层色谱法(TLC)监测，所述薄层色谱法使用紫外线作为显像剂和使用10%乙醇磷钼酸或者香草醛溶液和加热作为显影剂(developing agent)。E.Merck硅胶(60，粒度为0.040-0.063mm)用于快速柱色谱法。NMR光谱在Bruker Advance-400仪器上在400(1H)，100(13C)MHz记录。化学位移以百万分率(parts per million,ppm)给出，并使用残留的未氘代溶剂作为内标来校正。使用以下缩写解释多重性：s=单峰，d=二重峰，dd=双二重峰，t=三重峰，q=四重峰，m=多重峰，b=宽峰。LC-MS使用Agilent1100HPLC记录。除非另作说明，使用Supelco C8(5cm x4.6mm，5mm粒子)柱，线性洗脱梯度为历时8分钟内从95%H2O(0.5%HCO2H)至100%MeCN，流速为0.5mL/min。(S,S)-Denmark催化剂：(S,S)-N,N'-二[4,5-二氢-3,5-二甲基-4-(3H-二萘并[2,1-d:1',2'-f][1,3,2]-2-氧代-二氮杂磷杂环庚烯并)]-N,N'-二甲基-1,5-戊二胺((S,S)-N,N'-Bis[4,5-dihydro-3,5-dimethyl-4-(3H-dinaphtho[2,1-d:1',2'-f][1,3,2]-2-oxo-diazaphosphepino)]-N,N'-dimethyl-1,5-pentanediamine)，DMF=N,N-二甲基甲酰胺，Grubbs II=苯亚甲基[1,3-二(2,4,6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基]二氯(三环己基膦)钌，PS-SO3H=磺酸聚苯乙烯，TBAI=四丁基碘化铵，TBS=叔丁基二甲基甲硅烷基，TBSCl：叔丁基二甲基甲硅烷基氯，TFA=三氟乙酸，THF=四氢呋喃。
合成对映异构纯的醛醇加合物R-As-4。
在氮气气氛下，向火焰干燥的25ml双颈圆底烧瓶中添加(R,R)-Denmark催化剂(8.4mg，0.01mmol，0.01%)、巴豆醛(84μl，1.0mmol，1.0当量)，和5.0mL无水CH2Cl2。将此溶液用干冰-丙酮浴冷却至-78°C。在搅拌5分钟后，滴加SiCl4(123μl，1.1mmol，1.1当量)，并将溶液再搅拌5分钟。历时5分钟，向此溶液滴加净甲硅烷基烯酮缩醛As-3(293mg，1.2mmol，1.2当量)。在3小时后，在-78°C，通过套管添加在2.0ml无水甲醇中的Et3N(459μl，3.3mmol，3.3当量)，将混合物在室温搅拌1小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(10mL)淬灭，并继续搅拌1小时。然后用CH2Cl2(3x30mL)萃取混合物，并用Na2SO4干燥合并的有机层。过滤并在减压下蒸发溶剂，然后实施快速色谱法(硅胶，80/20石油醚/EtOAc)，以45%的收率(86mg)得到希望的化合物R-As-4，其为黄色油状物。Rf=0.18(80/20石油醚/EtOAc)；1H(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.99(dt，J=15.0，7.2Hz，1H)；6.46(dd，J=15.0，1.6Hz，1H)；5.76(m，1H)；5.56(m，1H)；4.25-4.11(m，3H)；2.46-2.43(m，2H)；1.73(d，J=6.4Hz，3H)；1.32(t，J=7.2Hz，3H)ppm；缺失OH信号。13CNMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=166.3，144.7，132.9，127.7，123.8，71.51，60.2，40.1，17.6，14.2ppm。
合成保护的醛醇加合物TBS-R-As-4。在室温向醛醇加合物R-As-4(163mg，0.814mmol，1.0当量)在无水DMF(5.0mL)中的溶液添加咪唑(72mg，1.053mmol，1.3当量)。在搅拌5分钟后，添加TBSCl(147.2mg，0.976mmol，1.2当量)并搅拌16小时。在蒸发溶剂后，通过快速色谱法(硅胶，90/10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以89%收率(216mg)得到保护的醇TBS-R-As-4。Rf=0.82(80/20石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.99(dt，J=15.0，7.2Hz，1H)；6.46(dd，J=15.0，1H)；5.76(m，1H)；5.56(m，1H)；4.25-4.11(m，3H)；2.46-2.43(m，2H)；1.73(d，J=6.4Hz，3H)；1.32(t，J=7.2Hz，3H)；0.91(s，9H)；0.06(d，J=7.6Hz，6H)ppm；13C NMR(CDCl3，100MHz，25°Cδ=166.4，145.7，133.7，125.8，123.1，72.5，60.1，41.4，25.8(x3)，25.6，17.5，14.2、-4.3、-4.8ppm。
Figure BDA00003344749600612
合成Weinreb酰胺R-As-2。向经保护的醇TBS-R-As-4(215mg，0.688mmol，1.0当量)在无水THF(8.0mL)中的溶液中添加N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(100mg，1.032mmol，1.5当量)，然后将悬浮液用NaCl-冰浴冷却至-20°C。然后向反应混合物中滴加i-PrMgCl(1.376mL，2.752mmol，4.0当量)，并将反应混合物搅拌10分钟，然后用饱和NH4Cl水溶液(10mL)淬灭。然后，用戊烷(2x30mL)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，并用无水Na2SO4干燥。在过滤并蒸发溶剂后，通过快速色谱法(硅胶，80/20石油醚/EtOAc)纯化残留物，以93%收率(200mg)得到Weinreb酰胺R-As-2，其为黄色油状物。Rf=0.34(80/20石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.99(dt，J=15.2，7.2Hz，1H)；6.46(d，J=15.2Hz，1H)；5.65(m，1H)；5.49(m，1H)；4.22-4.181(m，1H)；3.71(s，3H)；3.26(s，3H)；2.49-2.38(m，2H)；1.70(d，J=6.4Hz，3H)；0.91(s，9H)；0.067(d，J=8.8Hz，6H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=166.7，144.1，133.8，125.7，120.6，77.2，72.6，61.6，41.8，32.3，25.9，18.1，17.5、-4.3、-4.7ppm。
Figure BDA00003344749600621
合成酰基化的化合物As-6a(6-R)：在-78°C，将酯As-1a(79mg，0.224mmol，1.5当量)在无水THF(1.5mL)中的溶液用新鲜制备的LDA(0.352M，0.352mmol，2.2当量)通过套管处理。在25分钟后，在-78°C，通过注射器添加Weinreb酰胺R-As-2(45mg，0.144mmol，1.0当量)在THF(1.5mL)中的溶液。然后将所得混合物搅拌20分钟，并通过添加饱和NH4Cl水溶液淬灭反应。在温热至23°C后，用EtOAc(2x30mL)萃取反应混合物，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(90/10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以52%收率(43mg)得到As-6a(6-R)，其为黄色油状物。Rf=0.48(80/20石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.93-6.86(m，1H)；6.84(d，J=2.0Hz，1H)，6.56(d，J=2.0Hz，1H)；6.21(d，J=16Hz，1H)；5.90-5.80(m，1H)；5.64-5.55(m，1H)；5.45(dd，J=15.2，6.4Hz，1H)；5.22(s，2H)；5.21(s，2H)；5.19-5.08(m，3H)；4.20-4.15(m，1H)；3.94(d，J=16.4Hz，1H)；3.86(d，J=16.4Hz，1H)；3.75-3.71(m，4H)；2.49-2.31(m，4H)；1.70(d，J=6.0Hz，3H)；1.32-1.21(m，6H)；0.90(s，9H)；0.05(d，J=5.2Hz，6H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=195.8，167.1，159.1，156.3，144.4，134.9，133.9，133.7，131.1，126.0，118.7，117.6，111.2，102.5，93.5，93.0，72.5，71.0，64.3，53.4，45.3，41.7，40.2，29.7，25.8(x3)，19.4，18.2，17.5，15.1、-4.26、-4.78ppm.
Figure BDA00003344749600622
合成化合物As-6a(6-R)I：将As-6a(6-R)(140mg，0.231mmol，1.0当量)在甲苯(10.0mL)中的溶液脱气20分钟并加热至80°C。添加Grubbs II催化剂(10.0mg，11μmol，0.05当量)并在80°C搅拌5小时。在冷却至23°C后，将反应混合物用DMSO(57μL，60当量，相对于催化剂)处理12小时。然后使混合物通过硅胶垫，并先后用1:1和1:2的石油醚/EtOAc洗涤。在减压下浓缩合并的滤液并通过快速色谱法(90/10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以65%的收率(84mg)得到As-6a(6-R)I。Rf=0.28(80/20石油醚/EtOAc)1H(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.71(s，1H)，6.54-6.49(m，2H)，5.92(d，J=16.0Hz，1H)，5.41-5.28(m，2H)，5.15(s，2H)，5.13-5.12(m，3H)，4.01-3.99(m，1H)；3.96(d，J=14.8Hz，1H)，3.70-3.62(m，4H)，3.46(d，J=14.8Hz，1H)，2.40-2.21(m，4H)，1.37(d，J=6.0Hz，3H)，1.20-1.13(m，6H)，0.81(s，9H)、-0.00(s，3H)、-0.02(s，3H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=197.5，167.7，159.1，156.2，145.7，136.1，134.9，131.2，127.7，118.3，109.5，102.2，93.4，93.0，73.1，71.1，64.5，64.4，44.2，40.9，39.4，25.8(x3)，20.2，18.1，15.0(x2)、-4.37、-4.75ppm.
Figure BDA00003344749600631
合成As-7a(6-R)。向As-6a(6-R)I(10.0mg，0.017mmol，1.0当量)在异丙醇(1.0mL)中的溶液中添加磺酸树脂(33.6mg，0.102mmol，6.0当量，3.0mmol/g)，并将悬浮液在40°C加热16小时。然后过滤反应混合物，并用CH2Cl2(5.0mL)和MeOH(5.0mL)洗涤树脂。在减压下除去溶剂后，通过制备性TLC纯化残留物，以55%收率(3.1mg)得到As-7a(6-R)。Rf=0.22(60/40EtOAc/石油醚)1H(CDCl3，400MHz，23°C)δ=11.2(s，1H)，9.07(s，1H)，6.65-6.57(m，1H)，6.19-6.17(m，2H)，5.77(d，J=16.0Hz，1H)，5.43-5.36(m，1H)，5.28-5.21(m，2H)，4.29-4.28(m，1H)，3.92(d，J=16.8Hz，1H)，3.86(d，J=16.8Hz，1H)，2.53(ddd，J=11.6，7.2，4Hz，1H)，2.38-2.32(m，1H)，2.25-2.22(m，1H)，2.17-2.09(m，1H)，1.16(d，J=6.4Hz，3H)ppm，一个OH信号不可见。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=196.7，176.0，165.8，163.0，144.9，141.2，137.6，132.5，125.1，113.2，106.6，102.7，72.8，72.1，48.3，40.7，37.1，18.6ppm。
用于合成羟胺As-8的一般操作：
Figure BDA00003344749600641
合成化合物I：在氮气气氛下，在0°C，向哌啶(51.9ml，525mmol，2.1当量)在THF(1000mL)中的溶液中缓慢添加氯乙酰氯(19.9ml，250mmol，1.0当量)。将反应混合物温热至23°C，并搅拌1小时。用EA(2x500ml)从饱和NH4Cl溶液中萃取反应混合物，将合并的有机层通过盐水(300mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥。在过滤并在减压下蒸发后，将得到的粗制产物(36.4g，90%)直接用于后续步骤而不进一步纯化。1H NMR(CDCl3，400MHz，25°C)δ4.06(s，2H)，3.54(t，J=5.5Hz，2H)，3.43(t，J=5.2Hz，2H)，1.70-1.60(m，4H)，1.60-1.51(m，2H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)164.9，47.5，43.4，41.3，26.4，25.5，24.4ppm。
Figure BDA00003344749600642
合成化合物II：向N-羟基邻苯二甲酰亚胺(44.0g，270mmol，1.2当量)在DMF(600mL)中的悬浮液中分份添加K2CO3(46.6g，337mmol，1.5当量)，其形成大量固体。然后通过注射器添加I(36.4g，225mmol，1.0当量)在DMF(50mL)中的溶液。将反应混合物加热至60-65°C并保持3小时。在减压下蒸发溶剂，并用CH2Cl2和饱和NH4Cl溶液萃取得到的残留物，将合并的有机层通过盐水洗涤，用Na2SO4干燥。期望的产物在蒸发期间析出，在过滤后以70%收率得到II，其为白色固体。1H NMR(CDCl3，400MHz，25°C)δ7.86-7.71(m，4H)，4.84(s，2H)，3.63(t，J=5.3Hz，2H)，3.57(t，J=5.4Hz，2H)，1.74-1.65(m，4H)，1.65-1.57(m，2H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ164.0，163.0(x2)，134.7(x2)，128.8(x2)，123.7(x2)，75.9，46.9，43.1，26.3，25.3，24.5ppm。
合成羟胺As-8
Figure BDA00003344749600643
在0°C，通过注射器向II(38.9g，135mmol，1.0当量)在MeOH(270mL)中的悬浮液中添加MeNHNH2(7.55mL，142mmol，1.05当量)。将反应混合物温热至23°C并搅拌1小时。在减压下蒸发溶剂，添加水(150mL)并过滤固体。在除去水后，将粗制产物再次溶解在MeOH(150mL)中，在0°C滴加浓HCl(25.0ml，12mmol/mL，2.0当量)。在搅拌1小时后，蒸发溶剂并将得到的残留物用MeOH和乙醚(ether)重结晶，以73%收率(20.2g)得到白色固体。1H NMR(CDCl3，400MHz，25°C)δ4.89(bs，4H)，3.60(t，J=5.4Hz，2H)，3.34(t，J=5.4Hz，2H)，1.77-1.68(m，2H)，1.68-1.56(m，4H)ppm。13CNMR(CD3OD，100MHz，25°C)167.4，71.5，46.6，44.0，27.3，26.6，25.3ppm。
合成肟As-9a(6-R)。在45°C，在氮气下，历时48小时，向As-6a(6-R)(53mg，0.090mmol，1.0当量)在吡啶(3.0mL)中的搅拌的溶液中分两份添加羟基胺盐酸盐As-8(53mg，0.270mmol，3.0当量)。之后蒸发吡啶，然后将残留物溶解在CH2Cl2(30mL)中，用饱和NH4Cl水溶液(10.0mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。过滤并在减压下蒸发溶剂，然后实施快速色谱法(硅胶，梯度为60/40-50/50的石油醚/EtOAc)，以75%收率(50mg)得到希望的化合物As-9a(6-R)(无色油状物)，其为1:1比率的E/Z异构体的混合物。Rf=0.36(50/50石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.79-6.75(m，3H)；6.56(d，J=2.0Hz，1H)；6.44(d，J=2.0Hz，1H)；6.19-6.12(m，2H)；6.07-6.00(m，1H)；5.91-5.81(m，2H)；5.26-5.21(m，6H)；5.21-5.12(m，12H)；4.78(s，2H)；4.75(s，2H)；4.06-4.01(m，2H)；3.88(s，4H)；3.76-3.66(m，8H)；3.60-3.54(m，4H)；3.45(m，2H)；3.31-3.29(m，2H)；2.42-2.21(m，8H)；1.63-1.44(m，20H)；1.37-1.34(m，6H)；1.26-1.20(m，12H)；0.85(s，18H)；-0.02(m，12H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=167.28，167.24，167.0，166.7，159.1，158.8，157.2，155.55，155.51，154.5，138.2，137.6，136.1，134.2，133.9，133.8，133.77，133.75，128.1，125.4，120.5(x2)，118.4，118.3，117.8，117.7，109.3，109.03，101.5，101.4，93.4(x2)，93.2，93.1，73.2，73.0，72.9，72.5，71.0(x2)，64.3(x2)，64.2(x2)，46.1，46.0，42.9，42.7，42.4(x2)，40.2(x2)，34.1(x2)，28.0(x2)，26.4，26.3，25.5(x3)，25.4(x3)，24.6，24.5，19.6，19.5，18.2，18.1，17.5，17.3，15.1(x2)，15.0(x2)、-4.38、-4.40、-4.81(x2)ppm。
Figure BDA00003344749600661
合成受保护的pochoxime As-9a(6-R)I：将As-9a(6-R)(9.40g，12.8mmol)在甲苯(450mL)中的溶液在氮气气氛下脱气20分钟，然后加热至80°C。添加Grubbs II催化剂(545mg，0.64mmol，0.05当量)并在80°C搅拌5小时。在冷却至23°C后，将反应混合物用DMSO(3.0mL，60当量，相对于催化剂)处理24小时。使混合物通过硅胶垫，并先后用石油醚/EtOAc50/50和石油醚/EtOAc1/2洗涤。在减压下浓缩合并的滤液，并通过快速色谱法(石油醚/EtOAc，75/25)纯化残留物，得到As-9a(6-R)I(9.0g，定量的)，其为1/1比率的E/Z异构体的混合物。1H NMR(CDCl3，400MHz，25°C)δ6.78(d，J=17.6Hz，1H)，6.70(s，J=1.6Hz，1H)，6.69(d，J=1.6Hz，1H)，6.62(d，J=1.6Hz，1H)，6.53(d，J=1.6Hz，1H)，6.08(d，J=16.8Hz，1H)，5.79-5.70(m，2H)，5.36-5.34(m，4H)，5.18-5.05(m，10H)，4.80(s x2，4H)，3.86-3.83(m，4H)，3.72-3.66(m，12H)，3.58(m，2H)，3.49(m，2H)；3.43-3.38(m，4H)，2.45-2.13(m，8H)，1.63-1.55(m，12H)，1.41(d x2，J=6.4Hz，6H)，1.23-1.17(m，12H)，0.84(2x s，18H)，0.01(s x2，6H)、-0.01(s x2，6H)ppm.
Figure BDA00003344749600671
合成pochoxime As-10a(6-R)I：在0°C，将As-9a(6-R)I(140mg，0.2mmol)在THF(3.0mL)中的溶液用TBAF在THF中的溶液(0.3mL，1M，在THF中，1.5当量)处理。使反应混合物达到室温并搅拌3小时。然后将混合物从饱和NH4Cl水溶液中用EtOAc(3x10mL)萃取，用盐水(15mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，并浓缩。通过快速色谱柱(EtOAc)纯化，以88%收率(104mg)得到相应的TBS脱保护的醇。向这种化合物(100mg)的溶液中添加10当量磺酸聚苯乙烯树脂(磺酸树脂MP，70-90目，3.0mmol/g，Novabiochem，01-64-0432)，并将悬浮液在室温搅拌4小时。然后将混合物过滤，并通过硅胶垫。在HPLC(20-80%CH3CN/水的梯度，在50分钟内，流速：2mL/min，DiscoveryR HS C18，5μm，5cm x10.0mm)上分离两种异构体。1H(Z-异构体，CDCl3，400MHz，25°C)δ10.4(s，1H)，6.67(d，J=14.3Hz，1H)，6.55(d，J=2.3Hz，1H)，6.31(d，J=2.4Hz，1H)，5.90-5.81(m，1H)，5.66(dt，J=16.0，7.9Hz，1H)，5.54-5.39(m，2H)，4.78(s，2H)，4.17(m，2H)，3.82(d，J=14.6Hz，1H)，3.56-3.51(m，2H)，3.40-3.38(m，2H)，2.47-2.41(m，2H)，2.35-2.29(m，2H)，1.64-1.56(m，6H)，1.46(d，J=2.4Hz，3H)ppm，2个OH信号不可见。1H(E-异构体，CDCl3，400MHz，25°C)δ6.98(d，J=2.49Hz，1H)，6.30(d，J=2.5Hz，1H)，5.95(d，J=16.1Hz，1H)，5.85-5.77(m，1H)，5.67(dt，J=16.0，7.9Hz，1H)，5.32-5.43(m，2H)，4.79(d，J=3.9Hz，2H)，4.17(m，2H)，3.82(d，J=14.6Hz，1H)，3.56-3.51(m，2H)，3.40-3.38(m，2H)，2.47-2.41(m，2H)，2.35-2.29(m，2H)，1.64-1.56(m，6H)，1.46(d，J=2.4Hz，3H)ppm，3个OH信号不可见。
合成对映异构纯的醛醇加合物S-As-4。向火焰干燥的25mL两颈圆底烧瓶中添加(S,S)-Denmark催化剂(8.5mg，0.01mmol，0.01%)、巴豆醛(85μl，1.0mmol，1.0当量)、TBAI(73mg，0.2mmol，20%)和5.0mL无水CH2Cl2。将此溶液用干冰-丙酮浴冷却至-78°C。在搅拌5分钟后，滴加SiCl4(123μl，1.1mmol，1.1当量)，并将溶液再搅拌5分钟。历时5分钟，向此溶液中滴加净甲硅烷基烯酮缩醛As-3(458mg，2.0mmol，2.0当量)。在30分钟后，在-78°C，通过套管添加在2.0mL无水甲醇中的Et3N(459μl，3.3mmol，3.3当量)，将混合物搅拌1小时，然后用饱和NH4Cl水溶液(10mL)淬灭，并再搅拌1小时。然后用CH2Cl2(3x30mL)萃取混合物并用Na2SO4干燥合并的有机相。过滤并在减压下蒸发溶剂，然后实施快速色谱法(硅胶，80/20石油醚/EtOAc)，以52%收率(103mg)得到希望的化合物S-As-4，其为黄色油状物。Rf=0.18(80/20石油醚/EtOAc)；1H(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.99(dt，J=15.0，7.2Hz，1H)；6.46(dd，J=15.0，1.6Hz，1H)；5.76(m，1H)；5.56(m，1H)；4.25-4.11(m，3H)；2.46-2.43(m，2H)；1.73(d，J=6.4Hz，3H)；1.32(t，J=7.2Hz，3H)ppm，OH信号不可见。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=166.3，144.7，132.9，127.7，123.8，71.5，60.2，40.1，17.6，14.2ppm.
Figure BDA00003344749600681
合成受保护的醛醇加合物TBS-S-As-4。在室温向S-As-4(173.5mg，0.867mmol，1.0当量)在无水DMF(5.0mL)中的溶液中添加咪唑(94.45mg，1.387mmol，1.5当量)。在搅拌5分钟后，添加TBSCl(196mg，1.3mmol，1.3当量)。将反应混合物在相同温度搅拌16小时。在蒸发溶剂后，通过快速色谱法(硅胶，90/10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以97%收率(252mg)得到TBS-S-As-4。Rf=0.82(80/20石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.99(dt，J=15.0，7.2Hz，1H)；6.46(dd，J=15.0Hz，1H)；5.76(m，1H)；5.56(m，1H)；4.25-4.11(m，3H)；2.46-2.43(m，2H)；1.73(d，J=6.4Hz，3H)；1.32(t，J=7.2Hz，3H)；0.91(s，9H)；0.06(d，J=7.6Hz，6H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=166.4，145.7，133.7，125.8，123.1，72.5，60.1，41.4，25.7，18.1，17.5，14.2、-2.9、-4.3、-4.8ppm.
Figure BDA00003344749600682
合成Weinreb酰胺S-As-2。向TBS-S-As-2(252mg，0.846mmol，1.0当量)在无水THF(5.0mL)中的溶液添加N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(123.7mg，1.268mmol，1.5当量)，然后将这种悬浮液用NaCl-冰浴冷却至-20°C。然后向反应混合物中滴加i-PrMgCl(1.692mL，3.384mmol，4.0当量)，并将反应混合物搅拌10分钟，然后用饱和NH4Cl水溶液(10mL)淬灭。然后，用戊烷(2x30mL)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，并用无水Na2SO4干燥。在过滤并蒸发挥发物后，通过快速色谱法(硅胶，80/20石油醚/EtOAc)纯化残留物，以82%收率(216mg)得到Weinreb酰胺S-As-2，其为黄色油状物。Rf=0.34(80/20石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.99(dt，J=15.2，7.2Hz，1H)；6.46(d，J=15.2Hz，1H)；5.65(m，1H)；5.49(m，1H)；4.22-4.181(m，1H)；3.71(s，3H)；3.26(s，3H)；2.49-2.38(m，2H)；1.70(d，J=6.4Hz，3H)；0.91(s，9H)；0.07(d，J=8.8Hz，6H)ppm。13CNMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=166.7，144.1，133.8，125.7，120.6，77.2，72.6，61.6，41.8，32.3，25.9，18.1，17.5、-4.3、-4.7ppm。
Figure BDA00003344749600691
合成化合物As-6a(6-S)。在-78°C，将酯As-1a(84mg，0.234mmol，1.5当量)在无水THF(1.5mL)中的溶液通过套管用新鲜制备的LDA(0.352M，0.352mmol，2.2当量)处理。在30分钟后，在-78°C，通过注射器添加Weinreb酰胺S-As-2(50mg，0.160mmol，1当量)在THF(1.5mL)中的溶液。然后将所得混合物搅拌25分钟，并通过添加饱和NH4Cl水溶液淬灭反应。在温热至23°C后，用EtOAc(2x30mL)萃取反应混合物，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(90:10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以69%收率(64.5mg)得到As-6a(6-S)，其为黄色油状物。Rf=0.48(80/20石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.93-6.84(m，2H)；6.52(s，1H)；6.21(d，J=16Hz，1H)；5.9-5.8(m，1H)；5.6-5.4(m，1H)；5.4-5.3(m，1H)；5.3(s，4H)；5.3-5.1(m，3H)；4.2-4.1(m，1H)；3.9-3.7(m，2H)；3.8-3.7(m，4H)；2.5-2.3(m，4H)；1.7(d，J=6.4Hz，3H)；1.32-1.19(m，10H)；0.89(s，9H)；0.05(d，J=5.2Hz，6H)ppm.13CNMR(CDCl3，100MHz，23°C)δ=195.8，167.1，159.0，156.3，144.5，134.9，133.9，133.8，133.6，131.1，125.9，117.5，111.2，102.5，93.5，93.0，72.5，71.0，64.4，64.3，45.3，41.7，40.2，25.8，19.4，18.1，17.5，15.1，15.0，14.9、-4.30、-4.34、-4.8ppm。
Figure BDA00003344749600701
合成化合物As-6a(6-S)I：将As-6a(6-S)(28.4mg，0.048mmol，1.0当量)在甲苯(1.0mL)中的溶液脱气20分钟并加热至80°C。添加Grubbs II催化剂(2.0mg，24μmol，0.05当量)，并在80°C搅拌5小时。在冷却至23°C后，将反应混合物用DMSO(11μL，60当量，相对于催化剂)处理24小时。使混合物通过硅胶垫，并先后用50/50石油醚/EtOAc和25/75石油醚/EtOAc洗涤。在减压下浓缩合并的滤液，并通过快速色谱法(90/10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以44.4%收率(10.2mg)得到As-6a(6-S)I。Rf=0.28(80/20石油醚/EtOAc)1H(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.77(s，1H)，6.76-6.72(m，1H)，6.60(s，1H)，5.96(d，J=16.0Hz，1H)，5.66-5.61(m，1H)，5.47-5.42(m，1H)，5.23-5.19(m，5H)，4.38-4.37(m，1H)，4.08(d，J=14.8Hz，1H)，3.77-3.69(m，4H)，3.51(d，J=14.8Hz，1H)，2.45-2.30(m，4H)，1.43(d，J=6.0Hz，3H)，1.28-1.21(m，6H)，0.89(s，9H)，0.05(s，6H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=197.5，167.7，159.1，156.2，145.7，136.1，134.9，131.2，127.7，118.3，109.5，102.2，93.4，93.0，73.1，71.1，64.5，64.4，44.2，40.9，39.4，25.8(x3)，20.2，18.1，15.0(x2)、-4.37，-4.75ppm。
Figure BDA00003344749600702
合成As-7a(6-S)。向As-6a(6-S)I(12.2mg，0.021mmol，1.0当量)在异丙醇(1.0mL)中的溶液中添加磺酸树脂(41mg，0.126mmol，6.0当量，3.0mmol/g)，并将悬浮液在40°C加热16小时。过滤反应混合物并用CH2Cl2(5.0mL)和MeOH(5.0mL)洗涤树脂。在减压下除去溶剂后，通过制备性TLC纯化残留物，以57%收率(5.1mg)得到As-7a(6-S)。Rf=0.24(40/60石油醚/EtOAc)1H(CDCl3，400MHz，25°C)δ=11.4(s，1H)，9.13(s，1H)，6.58-6.50(m，1H)，6.21-6.19(m，2H)，5.73(d，J=15.6Hz，1H)，5.39-5.33(m，1H)，5.21-5.13(m，2H)，4.15-4.10(m，1H)，4.01(d，J=16.8Hz，1H)，3.55(d，J=16.8Hz，1H)，2.60-2.53(m，1H)，2.41-2.35(m，1H)，2.21-2.18(m，1H)，2.17-2.14(m，1H)，1.18(d，J=6.4Hz，3H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，23°C)δ=196.6，171.2，166.4，163.2，144.3，141.2，137.6，131.7，125.7，113.1，106.3，102.9，73.2，72.5，49.0，40.8，37.1，18.2ppm.
Figure BDA00003344749600711
合成开链肟As-9a(6-S)。在45°C和在氮气下，历时24小时，向As-6a(6-S)(64mg，0.108mmol，1.0当量)在吡啶(5.0mL)中的搅拌的溶液中分两份添加羟基胺盐酸盐As-8(64mg，0.233mmol，2.0当量)。在蒸发吡啶后，将残留物溶解在CH2Cl2(30mL)中，用饱和NH4Cl水溶液(10mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。过滤并在减压下蒸发溶剂，然后实施快速色谱法(硅胶，梯度为60/40-50/50的石油醚/EtOAc)，以75%收率(56mg)得到希望的化合物As-9a(6-S)(无色油状物)，为1/1比率的E/Z异构体的混合物。Rf=0.36(50/50石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.79-6.78(m，3H)；6.55(d，J=2.0Hz，1H)；6.44(d，J=2.0Hz，1H)；6.19-6.11(m，2H)；6.07-5.09(m，1H)；5.91-5.81(m，2H)；5.50-5.23(m，6H)；5.21-5.10(m，11H)；4.78(d，J=12.4Hz，4H)；4.06-4.01(m，2H)；3.9-3.82(m，4H)；3.76-3.66(m，8H)；3.60-3.53(m，4H)；3.45-3.43(m，2H)；3.31-3.29(m，2H)；2.53-2.23(m，8H)；1.63-1.44(m，20H)；1.37-1.20(m，18H)；0.85(s，18H)；-0.01-0.03(m，12H)ppm。13CNMR(CDCl3，100MHz，23°C)δ=167.2，166.9，166.7(x2)，159.1，158.8，157.2，155.5，154.5，154.2，138.2，137.6，136.1，134.1，133.9，133.8，133.75，133.72，128.1，125.4，120.5(x2)，117.75，117.7，109.3，109.0，101.5，101.4，93.4(x2)，93.2，93.1，73.2，72.9，72.8，72.5，71.0，70.9，64.3(x2)，64.2(x2)，46.0，45.9，42.9，42.8，42.7，42.3，40.2(x2)，34.1(x2)，27.9(x2)，26.4，26.3，25.8(x3)，25.7(x3)，25.5，25.4，24.54，24.5，19.6，19.5，18.2，18.1，17.5，17.4，15.1(x2)，15.0(x2)、-4.3、-4.4、-4.8(x2)ppm。
Figure BDA00003344749600721
合成受保护的pochoxime As-9a(6-S)I：在氮气流下，将开链肟As-9a(6-S)(50mg，0.067mmol，1.0当量)在无水CH2Cl2(7.0mL)中的溶液加热至回流。向此溶液中添加在1.0mL CH2Cl2中的Grubbs II催化剂(0.2mol%，11.4mg)，并将混合物回流8小时。将溶液冷却至室温，然后经硅藻土垫过滤除去催化剂。在减压下蒸发溶剂后，通过快速色谱法(硅胶，50/50石油醚/EtOAc)纯化残留物，以83%收率(39mg)得到希望的化合物As-9a(6-S)I(无色油状物)，其为1/1比率的E/Z异构体的混合物。Rf=0.31(60/40EtOAc/石油醚)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.73-6.69(m，4H)；6.06(bs，1H)；6.12-6.07(m，1H)；6.05-5.99(m，2H)；5.67-5.60(m，2H)；5.48(bs，1H)；5.44(bs，1H)；5.23(bs，8H)；4.86(d，J=13.6Hz，2H)；4.81(d，J=13.6Hz，2H)；4.36-4.32(m，2H)；3.75-3.70(m，8H)；3.65-3.56(m，4H)；3.48-3.38(m，4H)；2.46-2.24(m，8H)；1.67-1.59(m，12H)；1.46(d，J=6.0Hz，6H)；1.30-1.20(m，20H)；0.88(s，18H)；0.042(s，12H)ppm。
Figure BDA00003344749600722
合成pochoxime As-10a(6-S)：向As-9a(6-S)I(20.0mg，0.021mmol，1.0当量)在甲醇(2.0mL)中的溶液中添加磺酸树脂(111mg，0.34mmol，10当量，3.0mmol/g)，并在室温加热16小时。过滤反应混合物并用CH2Cl2(5.0mL)和MeOH(5.0mL)冲洗树脂。在减压下除去溶剂后，通过HPLC(20-80%CH3CN/水的梯度，在50min内，流速：2mL/min，DiscoveryR HS C18，5μm，5cm x10.0mm)纯化残留物，得到pochoxime As-10a(6-S)(Z-异构体：2.4mg；E-异构体：2.8mg)。1H NMR(Z-异构体，MeOD-d4，400MHz)δ=6.70(d，J=16.4Hz，1H)，6.28(d，J=2Hz，1H)，6.15(d，J=2.4Hz，1H)，6.13-6.04(m，1H)，5.71-5.64(m，1H)，5.64(dd，J=15.6，6.4Hz，1H)，5.33-5.27(m，1H)，4.79(d，J=2.0Hz，2H)，4.14-4.13(m，1H)，4.02(d，J=2.0Hz，1H)，3.57-3.55(m，2H)，3.51-3.46(m，3H)，2.64-2.57(m，1H)，2.40-2.33(m，2H)，2.25-2.18(m，1H)，1.66-1.58(m，6H)，1.43(d，J=6.0Hz，3H)ppm。13C NMR(MeOD-d4，100MHz，25°C)δ=170.0，169.7，162.4，157.2，142.0，140.0，136.8，126.9，121.0，108.9，102.3，72.8，72.6，72.4，64.7，47.2，44.2，40.5，39.2，35.2，27.4，26.7，25.4，25.2，19.6ppm。1H NMR(E-异构体，CDCl3，400MHz)δ=6.22(d，J=2.0Hz，1H)，6.19(d，J=2.0Hz，1H)，6.15(d，J=2.4Hz，1H)，6.05-5.99(m，1H)，5.91(d，J=16.4Hz，1H)，5.71-5.65(m，1H)，5.46(dd，J=15.6，6.4Hz，1H)，5.35-5.31(m，1H)，4.35(d，J=15.6Hz，1H)，4.16-4.15(m，1H)，3.83(d，J=15.2Hz，1H)，3.61-3.51(m，4H)，2.68-2.61(m，1H)，2.44-2.37(m，2H)，2.22-2.17(m，1H)，1.71-1.70(m，1H)，1.64-1.60(m，6H)，1.45(d，J=6.4Hz，3H)ppm。13C NMR(MeOD，100MHz，25°C)δ=171.0，169.4，162.6，159.7，140.9，137.0，135.8，127.8，126.8，109.6，102.3，72.8，72.7，72.74，64.7，47.3，44.2，40.3，39.1，30.2，27.5，26.7，25.4，25.2，19.5ppm.
Figure BDA00003344749600731
合成化合物As-6b(6-R)：在-78°C，将酯As-1b(144mg，0.372mmol，1.5当量)在无水THF(2.0mL)中的溶液通过套管用新鲜制备的LDA(0.545M，0.545mmol，2.2当量)处理。在25分钟后，在-78°C，通过注射器添加Weinreb酰胺R-As-2(70mg，0.224mmol，1.0当量)在THF(1.5mL)中的溶液。然后将所得混合物搅拌25分钟，并通过添加饱和NH4Cl水溶液溶液淬灭反应。在温热至23°C后，用EtOAc(2x30mL)萃取反应混合物，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(90/10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以64%收率(89mg)得到As-6b(6-R)，其为黄色油状物。Rf=0.48(70/30石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=7.08(s，1H)；6.93-6.85(m，1H)；6.17(d，J=15.6Hz，1H)；5.82-5.71(m，1H)；5.61-5.52(m，1H)；5.42(dd，J=15.6，6.4Hz，1H)；5.27(s，2H)；5.17(s，2H)；5.14-5.02(m，3H)；4.18-4.14(m，1H)；4.02(s，2H)；3.74-3.68(m，4H)；2.37-2.30(m，4H)；1.66(d，J=6.4Hz，3H)；1.25-1.18(m，9H)；0.86(s，9H)；0.021(d，J=8.4Hz，6H)ppm。13C NMR(CDCl3，400MHz，25°C)δ=194.3，166.5，154.5，153.8，144.4，133.75，133.72，132.7，131.0，126.0，120.4，117.7，117.6，102.9，93.9，93.7，72.5，72.4，64.6，64.4，42.7，41.7，40.1，25.2(x3)，19.4，18.2，17.5，15.03，15.0、-4.23、-4.76ppm。
Figure BDA00003344749600741
合成化合物As-6b(6-R)I。将As-6b(6-R)(34mg，0.054mmol，1.0当量)在甲苯(1.0mL)中的溶液脱气20分钟，并加热至80°C。添加Grubbs II催化剂(3.0mg，24μmol，0.05当量)并在80°C搅拌5小时。在冷却至23°C后，将反应混合物用DMSO(11μL，60当量，相对于催化剂)处理24小时。使混合物通过硅胶垫，并先后用50/50和25/75的石油醚/乙酸乙酯洗涤。在减压下浓缩合并的滤液，并通过快速色谱法(90/10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以48%收率(15.4mg)得到As-6b(6-R)I。Rf=0.3(80/20石油醚/EtOAc)。1H(CDCl3，400MHz，23°C)δ=7.11(s，1H)，6.77-6.69(m，1H)，5.87(d，J=15.6Hz，1H)；5.47-5.39(m，1H)，5.34(s，2H)，5.33-5.31(m，1H)，5.26(s，2H)，5.18-5.14(m，1H)，4.32-4.28(m，1H)，4.03(d，J=17.2Hz，1H)，3.86-3.67(m，5H)，2.36-2.25(m，4H)，1.36(d，J=6.8Hz，3H)，1.30-1.23(m，6H)，0.90(s，9H)，0.07(s，3H)，0.04(s，3H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，23°C)δ=195.6，166.8，154.6，153.8，143.6，135.8，132.8，129.9，126.2，120.4，117.8，102.9，93.9，93.6，72.6，71.8，64.8，64.6，44.6，40.8，39.0，25.9(x3)，19.7，18.1，15.0(x2)、-4.5、-4.8ppm。
合成As-7b(6-R)。向As-6b(6-R)I(11.2mg，0.0188mmol，1.0当量)在异丙醇(1.0mL)中的溶液中添加磺酸树脂(37.0mg，0.1128mmol，6.0当量，3.0mmol/g)，并将悬浮液在40°C加热16小时。过滤反应混合物并用CH2Cl2(5.0mL)和MeOH(5.0mL)冲洗树脂。在减压下除去溶剂后，通过制备性TLC(60/40EtOAc/石油醚)纯化残留物，以47%收率(3.0mg)得到As-7b(6-R)。Rf=0.24(60/40EtOAc/石油醚)；1H(CDCl3，400MHz，23°C)δ=6.65-6.57(m，1H)，6.39(s，1H)，5.73(d，J=15.2Hz，1H)，5.42-5.34(m，1H)，5.27-5.21(m，1H)，5.12-5.06(m，1H)，4.12-4.11(m，1H)，4.08(d，J=18Hz，1H)，3.91(d，J=18Hz，1H)，2.49-2.43(m，2H)，2.24-2.16(m，1H)，2.05-1.91(m，1H)，1.18(d，J=6.4Hz，3H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=198.7，170.7，163.1，159.7，145.2，137.1，131.7，126.8，116.6，109.1，104.0，73.5，73.2，46.9，41.0，37.7，30.7，18.0ppm.
Figure BDA00003344749600752
合成开链肟As-9b(6-R)：在45°C和在氮气下，历时48小时，向酰化产物As-6b(6-R)(85mg，0.136mmol)在吡啶(3.0mL)中的搅拌的溶液中分两份添加羟基胺盐酸盐As-8(80mg，0.408mmol)。在蒸发吡啶后，将残留物溶解在CH2Cl2(30mL)中，用饱和NH4Cl水溶液(10mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。过滤并在减压下蒸发溶剂，然后实施快速色谱法(硅胶，梯度为60/40-50/50的石油醚/EtOAc)，以53%的总收率(41mg)得到期望的化合物As-9b(6-R)(无色油状物)。极性较强的异构体(21mg，无色油状物)Rf=0.37(50/50石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)(Z)-肟δ=7.06(s，1H)；6.81(d，J=16Hz，1H)；6.29(m，1H)；5.86-5.76(m，1H)；5.31(s，2H)；5.21(s，2H)；5.15-5.07(m，3H)；4.59(s，2H)；4.16(m，1H)；3.86(s，2H)；3.89-3.73(m，4H)；3.51(m，2H)；3.32(m，2H)；2.38-2.28(m，4H)；1.70(d，J=6.4Hz，3H)；1.68-1.48(m，8H)；1.32-1.22(m，12H)；0.90(s，9H)；0.10(d，J=8.4Hz，6H)ppm。13C NMR(CDCl3，400MHz，25°C)δ=166.9，166.4，154.1，153.2，152.6，136.0，134.4，134.0，133.7，125.6，121.0，120.8，117.78，117.7，102.6，94.0，93.8，73.07，73.03，71.2，64.7，64.6，46.4，42.9，42.5，40.1，32.6，26.4，25.8(x3)，24.6，19.3，18.2，17.57，17.55，15.06、-4.23、-4.77ppm。
极性较弱的异构体(20mg，无色油状物)Rf=0.48(50/50石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)(E)-肟δ=7.08(s，1H)；6.15-6.08(m，1H)；5.86-5.76(m，2H)；5.61-5.50(m，2H)；5.31(s，2H)；5.21(s，2H)；5.19-5.11(m，3H)；4.69(s，2H)；4.01-3.88(m，2H)；3.79-3.71(m，4H)；3.58-3.55(m，2H)；3.41-3.39(m，2H)；2.49-3.32(m，2H)；2.25-2.12(m，2H)；1.65-1.53(m，10H)；1.34-1.23(m，9H)；0.88(s，9H)；-0.034(d，J=8.4Hz，6H)ppm。13C NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=166.9，166.4，154.1，153.2，152.6，136.0，134.4，134.0，133.7，125.6，121.0，120.8，117.78，117.7，102.6，94.0，93.8，73.07，73.03，71.2，64.7，64.6，46.4，42.9，42.5，40.1，32.6，26.4，25.8(x3)，24.6，19.3，18.2，17.57，17.55，15.06、-4.23、-4.77ppm。
Figure BDA00003344749600761
合成受保护的pochoxime As-9b(6-R)I。在氮气流下，将As-9b(6-R)(50.0mg，0.066mmol)在脱气甲苯(3.5mL)中的溶液加热至80°C。向此溶液中添加Grubbs II催化剂[2x(0.05mol%，3.0mg)]并将混合物加热8小时。将溶液冷却至室温，然后添加DMSO(31.0μl，相对于催化剂为60当量)。将所得溶液在室温搅拌24小时，然后经硅藻土垫过滤以除去催化剂。在减压下蒸发溶剂后，通过快速色谱法(硅胶，石油醚/EtOAc，50/50)纯化残留物，以63%收率(31mg)得到期望的化合物As-9b(6-R)I(无色油状物)，其为1/1比率的E/Z异构体的混合物。Rf=0.36(50/50石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=7.05(s，1H)；7.01(s，1H)；6.59(d，J=16.4Hz；1H)；6.07-5.97(m，3H)；5.31-5.28(m，4H)；5.24-5.21(m，4H)；5.12-5.08(m，2H)；4.83-4.73(m，4H)；4.28-4.23(m，2H)；3.81-3.72(m，8H)；3.60-3.56(m，4H)；3.51-3.46(m，4H)；2.41-2.07(m，8H)；1.66-1.57(m，12H)；1.46(d，J=6.4Hz，3H)；1.38(d，J=6.4Hz，3H)；1.30-1.21(m，18H)；0.92(s，18H)；0.04(s，12H)ppm。
合成pochoxime As-10b(6-R)：向As-9b(6-R)I(20.0mg，0.021mmol，1.0当量)在甲醇(2.0mL)中的溶液中添加磺酸树脂(111mg，0.34mmol，10当量，3.0mmol/g)，并在40°C加热16小时。过滤反应混合物并用CH2Cl2(5.0mL)和MeOH(5.0mL)冲洗树脂。在减压下除去溶剂后，通过HPLC(20-80%CH3CN/水的梯度，在50min内，流速：2mL/min，DiscoveryR HS C18，5μm，5cm x10.0mm)纯化残留物，得到pochoxime As-10a(6-R)(Z-异构体：2.4mg；E-异构体：2.8mg)。1H NMR(丙酮-d6，400MHz，23°C)δ=6.58(s，1H)；6.08(m，1H)；5.59(m，1H)；5.41(d，J=15.6Hz，1H)；5.27(m，2H)；4.80(s，2H)；4.29(d，J=17.2Hz，1H)；4.22(m，1H)；4.15(d，J=17.2Hz，1H)；3.54(m，4H)；2.56(m，1H)；2.32(m，1H)；2.18(m，2H)；1.66(m，4H)；1.53(m，2H)；1.40(d，J=6.4Hz，3H)ppm，3个OH信号不可见。13C NMR(丙酮-d6，100MHz，23°C)δ=169.21，167.1，157.8，155.1，138.6，137.5，133.1，126.8，124.7，123.6，115.2，103.6，74.0，72.9，71.8，46.8，43.2，41.1，38.3，35.7，32.0，27.3，26.3，25.2，18.8ppm。
合成As-6b(6-S)：在-78°C，将酯As-1b(108mg，0.279mmol，1.5当量)在无水THF(1.5mL)中的溶液通过套管用新鲜制备的LDA(0.409M，0.409mmol，2.2当量)处理。在30分钟后，在-78°C，通过注射器添加Weinreb酰胺S-As-2(58mg，0.180mmol，1.0当量)在THF(1.5mL)中的溶液。然后将所得混合物搅拌25分钟，并通过添加饱和NH4Cl水溶液淬灭反应。在温热至23°C后，用EtOAc(2x30mL)萃取反应混合物，将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法(90/20石油醚/EtOAc)纯化残留物，以62%收率(69.4mg)得到As-6b(6-S)，其为黄色油状物。Rf=0.48(80/20石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=7.13(s，1H)；6.97-6.90(m，1H)；6.22(d，J=16Hz，1H)；5.86-5.76(m，1H)；5.64-5.57(m，1H)；5.47(dd，J=15.2，6.8Hz，1H)；5.32(s，2H)；5.22(s，2H)；5.20-5.07(m，3H)；4.23-4.18(m，1H)；4.07(s，2H)；3.80-3.71(m，4H)；2.49-2.30(m，4H)；1.71(d，J=6.4Hz，3H)；1.30-1.23(m，9H)；0.90(s，9H)；0.070(d，J=8.4Hz，6H)ppm.13C NMR(CDCl3，100MHz，23°C)δ=194.3，166.5，154.5，153.8，144.4，133.75，133.70，132.4，131.0，125.9，120.4，117.7，117.6，102.8，93.8，93.7，72.5，71.4，64.6，64.4，42.7，41.7，40.1，25.8(x3)，19.4，18.2，17.5，15.0，14.97、-4.2、-4.7ppm.
Figure BDA00003344749600782
合成化合物As-6b(6-S)I：将As-6b(6-S)(34.0mg，0.054mmol，1.0当量)在甲苯(1.0mL)中的溶液脱气20分钟，并加热至80°C。添加Grubbs II催化剂(3.0mg，24μmol，0.05当量)，并在80°C搅拌5小时。在冷却至23°C后，将反应混合物用DMSO(11μL，60当量，相对于催化剂)处理24小时。使混合物通过硅胶垫，并先后用50/50和25/75的石油醚/乙酸乙酯洗涤。在减压下浓缩合并的滤液，并通过快速色谱法(90/10石油醚/EtOAc)纯化残留物，以35%收率(11.2mg)得到As-6b(6-S)I。Rf=0.3(80/20石油醚/EtOAc)1H(CDCl3，400MHz，25°C)δ=7.11(s，1H)，6.77-6.69(m，1H)，5.87(d，J=15.6Hz，1H)；5.47-5.39(m，1H)，5.34(s，2H)，5.33-5.31(m，1H)，5.26(s，2H)，5.18-5.14(m，1H)，4.32-4.28(m，1H)，4.03(d，J=17.2Hz，1H)，3.86-3.67(m，5H)，2.36-2.25(m，4H)，1.36(d，J=6.8Hz，3H)，1.30-1.23(m，6H)，0.90(s，9H)，0.07(s，3H)，0.04(s，3H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，23°C)δ=195.6，166.4，154.6，153.6，143.4，135.9，132.7，130.3，125.0，120.5，117.8，102.9，93.9，93.6，72.0，71.8，64.7，64.6，44.5，40.3，38.2，29.6，25.8(x3)，18.1，15.0(x2)、-4.6、-4.9ppm。
Figure BDA00003344749600791
As-7b(6-S)I
合成As-7b(6-S)：向As-6b(6-S)I(11.2mg，0.0188mmol，1.0当量)在异丙醇(1.0mL)中的溶液中添加磺酸树脂(37mg，0.1128mmol，6.0当量，3mmol/g)，并在40°C加热16小时。过滤反应混合物并用CH2Cl2(5.0mL)和MeOH(5.0mL)冲洗树脂。在减压下除去溶剂后，通过制备性TLC(40/60石油醚/EtOAc)纯化残留物，以47%收率(3.0mg)得到As-7b(6-S)。Rf=0.24(40/60石油醚/EtOAc)1H(CDCl3，400MHz，25°C)δ=6.65-6.57(m，1H)，6.39(s，1H)，5.73(d，J=15.2Hz，1H)，5.42-5.34(m，1H)，5.27-5.21(m，1H)，5.12-5.06(m，1H)，4.12-4.11(m，1H)，4.08(d，J=18Hz，1H)，3.91(d，J=18Hz，1H)，2.49-2.43(m，2H)，2.24-2.16(m，1H)，2.05-1.91(m，1H)，1.18(d，J=6.4Hz，3H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，25°C)δ=198.7，170.7，163.1，159.7，145.2，137.1，131.7，126.8，116.6，109.1，104.0，73.5，73.2，46.9，41.0，37.7，30.7，18.0ppm.
Figure BDA00003344749600801
合成开链肟As-9b(6-S)：在45°C和在氮气下，历时48小时，向As-6b(6-S)(41.5mg，0.066mmol，1.0当量)在吡啶(3.0mL)中的搅拌的溶液分中两份添加羟基胺盐酸盐As-8(38.8mg，0.200mmol，3.0当量)。在蒸发吡啶后，将残留物溶解在CH2Cl2(30mL)中，用饱和NH4Claq(10mL)洗涤并用无水Na2SO4干燥。过滤并在减压下蒸发溶剂，然后实施快速色谱法(硅胶，梯度为60/40-50/50的石油醚/EtOAc)，以53%收率(27mg)得到期望的化合物As-9b(6-S)(无色油状物)，其为1/1比率的E/Z异构体的混合物。Rf=0.57(40/60石油醚/EtOAc)1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=7.13-7.07(m，2H)；6.81(d，J=16.4Hz，1H)；6.28-6.21(m，1H)；6.15-6.07(m；1H)；5.87-5.72(m，3H)；5.62-5.37(m，4H)；5.31(s，4H)；5.21(s，4H)；5.19-5.10(m，6H)；4.75(s，2H)；4.59(s，2H)；4.33-4.31(m；2H)；4.15-4.11(m，1H)；3.99-3.86(m，4H)；3.81-3.71(m，8H)；3.56-3.51(m，4H)；3.41-3.39(m，2H)；3.33-3.31(m，2H)；2.44-2.11(m，8H)；1.70-1.48(m，20H)；1.32-1.19(m，18H)；0.91(s，9H)；0.87(s，9H)；0.1-0.001(m，12H)ppm。13C NMR(CDCl3，100MHz，23°C)(E/Z异构体混合物)δ=166.9，166.7，166.4，166.2，155.1，154.6，154.3，154.2，154.1，153.9，153.3，153.2，152.6，135.9，134.41，134.38，133.98，133.87，133.7，133.5，132.9，125.6，125.2，121.1，120.85，120.82，117.88，117.78，117.7，102.8，102.6，102.5，94.0，93.99，93.91，93.8，93.74，93.72，73.3，73.1，73.08，73.03，71.6，71.2，64.7，64.6，64.5，64.4，46.4，46.2，42.99，42.94，42.5，42.4，40.15，40.09，32.6，26.5，26.4，26.3，25.9(x3)，25.8(x3)，25.57，25.52，24.6，24.5，19.3，19.26，18.2，17.57，17.55，15.1，15.0、-4.2、-4.4、-4.6、-4.7ppm。
Figure BDA00003344749600811
合成受保护的pochoxime As-9b(6-S)I。在氮气流下，将As-9b(6-S)(56.6mg，0.074mmol)在脱气甲苯(3.5mL)中的溶液加热至80°C。向此溶液中添加Grubbs II催化剂[2x(0.05mol%，3.15mg)]并将混合物加热8小时。将溶液冷却至室温，然后添加DMSO(31.53μl，60当量，相对于催化剂)。将所得溶液在室温搅拌24小时，然后经硅藻土垫过滤除去催化剂。在减压下蒸发溶剂后，通过快速色谱法(硅胶，石油醚/EtOAc，50/50)纯化残留物，以67%收率(36mg)得到期望的化合物As-9b(6-S)I(无色油状物)，其为1/1比率的E/Z异构体的混合物。Rf=0.36(50/50石油醚/EtOAc)；1H NMR(CDCl3，400MHz，23°C)δ=7.05(s，1H)；7.01(s，1H)；6.59(d，J=16.4Hz；1H)；6.07-5.97(m，3H)；5.31-5.28(m，4H)；5.24-5.21(m，4H)；5.12-5.08(m，2H)；4.83-4.73(m，4H)；4.28-4.23(m，2H)；3.81-3.72(m，8H)；3.60-3.56(m，4H)；3.51-3.46(m，4H)；2.41-2.07(m，8H)；1.66-1.57(m，12H)；1.46(d，J=6.4Hz，3H)；1.38(d，J=6.4Hz，3H)；1.30-1.21(m，18H)；0.92(s，18H)；0.04(s，12H)ppm。
Figure BDA00003344749600812
合成As-10b(6-S)：向As-9b(6-S)I(36mg，0.048mmol，1.0当量)在异丙醇(2.0mL)中的溶液中添加磺酸树脂(95mg，0.293mmol，6.0当量)，并在40°C加热16小时。过滤反应混合物并用CH2Cl2(5.0mL)和MeOH(5.0mL)冲洗树脂。在减压下除去溶剂后，通过快速色谱法(硅胶，50/50石油醚/EtOAc)纯化残留物，以77%收率(19mg)得到期望的化合物As-10b(6-S)(无色油状物)，其为1/1比率的E/Z异构体的混合物。Rf=0.69(30/70石油醚/EtOAc)。随后通过HPLC(20-80%CH3CN/水的梯度，在50min内，流速：2mL/min，DiscoveryR HS C18，5μm，5cm x10.0mm)纯化混合物，得到纯的As-10b(6-S)：1H(丙酮-d6，400MHz，25°C)δ=6.45(s，1H)，5.95-5.88(m，1H)，5.38-5.31(m，1H)，5.18-5.11(m，2H)，5.05(dd，J=15.2Hz，8Hz，1H)，4.65(s，2H)，4.15(d，J=17.2Hz，1H)，4.02(m，1H)，4.02(d，J=17.2Hz，1H)，3.42(m，4H)，2.47-2.41(m，1H)，2.31-2.27(m，1H)，2.19-2.16(m，1H)，1.79(m，1H)，1.51-1.38(m，6H)，1.24(d，J=6.4Hz，3H)ppm。13C NMR(丙酮-d6，100MHz，25°C)δ=169.20，167.0，158.2，154.2，139.0，138.0，137.5，125.5，123.2，116.0，109.3，103.3，73.5，73.0，70.7，46.8，43.1，40.9，36.8，35.7，31.0，27.1，26.3，25.2，18.8ppm。
Figure BDA00003344749600821
合成叠氮化物As-12(6-R)：在0°C，用TBAF在THF中的溶液(0.42mL，1M，在THF中，1.5当量)处理As-9a(6-S)I(200mg，0.28mmol)在THF(3.0mL)中的溶液。使反应混合物达到室温并搅拌3小时。然后将混合物从饱和NH4Cl水溶液中用EtOAc(3x10mL)萃取，用盐水(15mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，并浓缩。通过快速色谱柱(EtOAc)纯化，以72%收率(120mg)得到相应的TBS脱保护的醇As-11a(6-S)。将醇As-11a(6-S)(110mg，0.187mmol，1.0当量)溶解在CH2Cl2(5.0mL)中并将溶液冷却至0°C。在0°C缓慢添加三乙胺(130μL，0.93mmol，5.0当量)和甲磺酰氯(58μL，和0.748mmol，4.0当量)。将反应混合物在23°C搅拌7小时，然后用NaHCO3饱和水溶液淬灭并用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩溶剂，剩余黄色残留物。将粗制甲磺酸酯溶解在DMF(5.0mL)中，添加NaN3(204mg，3.74mmol，20当量)并将混合物在23°C搅拌24小时。然后，过滤反应混合物并在减压下浓缩。通过快速色谱法(SiO2，梯度为70/30-50/50的己烷/EtOAc)纯化残留物，历经两个步骤以74%得到叠氮化物As-12(6-R)，其为无色油状物(85mg)。Rf=0.3(50/50EtOAc/己烷)；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ=6.87(d，J=16.4Hz，1H)，6,74-6.72(m，2H)，6.65(s，1H)，6.59(s，1H)，6.14(d，J=16.0Hz，1H)，5.78-5.60(m，4H)，5.40-5.34(m，2H)，5.24(s，8H)，5.20-5.14(m，2H)，4.83(s，4H)，4.53(d，J=14.8Hz，1H)，4.20-4.13(m，1H)，3.71-3.68(m，10H)，3.61-3.57(m，5H)，3.48-3.39(m，4H)，3.11(d，J=14.8Hz，1H)，2.52-2.48(m，2H)，2.42-2.35(m，4H)，2.17-2.14(m，2H)，1.68-1.58(m，12H)，1.46(d，J=6.4Hz，6H)，1.30-1.20(m，12H)ppm.
合成glycopochoxime As-14(6-R)。向叠氮化物As-12(6-R)(80mg，0.13mmol，1.0当量)在THF:H2O混合物(5.5mL，5:1)中的溶液中添加Me3P(0.52mL，4.0当量，1M，在THF中)。将反应混合物在23°C搅拌5小时，然后在减压下浓缩。将粗制胺As-12(6-R)I溶解在CH2Cl2(5mL)中并冷却至0°C，相继添加i-Pr2EtN(0.1mL，0.65mmol，5.0当量)和氯乙酸酐(0.11g，0.65mmol，5.0当量)并搅拌10min。用NaHCO3水溶液淬灭反应混合物。然后将有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并在减压下浓缩。通过快速色谱法(SiO2，40/60己烷/EtOAc)纯化残留物，历经两个步骤以45.3%得到相应的氯化物(39.1mg)。Rf=0.15(1:1EtOAc/己烷)。LC-MS：m/z[M]+C33H46ClN3O9计算值：663.29；实测值：662.85。
向四-O-乙酰基-1-S-乙酰基-1-硫-β-D-吡喃葡萄糖(72.7mg，0.17mmol，3.0当量)在甲醇(2.0mL)中的溶液中添加碳酸钠(93.5mg，0.88mmol，15.0当量)，并将混合物在室温搅拌3小时；然后添加氯化物(39.1mg，0.058mmol，1.0当量)并再继续搅拌3小时。过滤反应混合物，用Dowex50WX2-100树脂中和并在减压下浓缩溶剂。将粗制产物溶解在甲醇(3.0mL)中并添加PS-SO3H(193mg，0.58mmol，10.0当量，3.0mmol/g)，并将所得悬浮液在23°C搅拌16小时。过滤反应混合物，并在减压下浓缩溶剂。通过HPLC(Agilent1100系列HPLC，配有DAD和Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6x300mm，5μm)柱，线性梯度为70%H2O(0.1%TFA)+30%MeCN(0.1%TFA)至50%H2O(0.1%TFA)+50%MeCN(0.1%TFA)，在35分钟内，流速为2.0mL/min)纯化粗制产物，历经两个步骤以52%得到硫代糖苷As-14(6-R)(Z-异构体：9.4mg；E-异构体：11.8mg)。1H NMR(Z-异构体，CD3OD，400MHz)δ=6.69(d，J=16Hz，1H)，6.16(d，J=2.0Hz，1H)，6.07(d，J=2.0Hz，1H)，5.95-5.87(m，1H)，5.54-5.46(m，1H)，5.29(dd，J=15.2，8.8Hz，1H)，5.17-5.13(m，1H)，4.70(d，J=4.0Hz，2H)，4.28(d，J=10Hz，1H)，4.13-4.07(m，1H)，3.75(d，J=12Hz，1H)，3.54-3.45(m，5H)，3.38(t，J=5.2Hz，2H)，3.18-3.17(m，4H)，3.14-3.08(m，2H)，2.43-2.22(m，3H)，2.13-2.05(m，1H)，1.59-1.48(m，6H)，1.30(d，J=6.0Hz，3H)ppm(所有OH和NH不可见)；13C NMR(Z-异构体，CD3OD，100MHz)δ170.3，169.2，168.3，160.3，158.8，155.2，139.3，137.7，131.9，129.3，120.03，106.8，100.8，85.1，80.8，78.1，72.9，71.3，70.9，69.7，61.5，52.6，45.8，42.8，39.0，38.7，37.4，34.5，32.5，26.0，25.3，23.9，18.8ppm.
1H NMR(E-异构体，CD3OD，400MHz)δ=6.21(s，1H)，6.19(d，J=1.6Hz，1H)，6.05(d，J=16Hz，1H)，5.97-5.89(m，1H)，5.67-5.60(m，1H)，5.41(dd，J=15.2，8.4Hz，1H)，5.29-5.23(m，1H)，4.42(s，2H)，4.39(d，J=5.6Hz，1H)，4.20-4.15(m，1H)，3.88(d，J=11.6Hz，1H)，3.66-3.62(m，2H)，3.59-3.50(m，4H)，3.47-3.44(m，4H)，3.31(s，2H)，2.55-2.51(m，1H)，2.44-2.36(m，2H)，2.22-2.15(m，1H)，1.72-1.62(m，6H)，1.45(d，J=6.0Hz，3H)ppm，(所有OH和NH不可见)；13C NMR(Z-异构体，CD3OD，100MHz)δ170.2，169.1，168.0，160.2，157.9，137.9，134.0，131.8，129.5，126.8，110.9，106.8，100.6，85.0，80.8，78.0，72.9，71.5，71.0，70.0，61.5，52.8，48.5，45.9，42.8，39.1，36.9，32.5，28.2，26.1，25.3，23.9，19.0ppm。
Figure BDA00003344749600841
合成胺As-13(6-R)。将胺As-12(6-R)I(10mg，0.017mmol)溶解在TFA/间甲酚2:1(100μL/50μL)中，并在室温搅拌5min。然后将反应混合物用10mL H2O稀释，冻干，以62%收率(5.0mg)得到胺As-13(6-R)，并通过HPLC(Agilent1100系列HPLC，配有DAD和Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6x300mm，5μm)柱，线性梯度为82%H2O(0.1%TFA)+18%MeCN(0.1%TFA)至64%H2O(0.1%TFA)+36%MeCN(0.1%TFA)，在35分钟内，流速为2.0mL/min)纯化。1H NMR(CD3OD，400MHz)δ=6.91(d，J=16Hz，1H)，6.27(d，J=1.6Hz，1H)，6.19(s，3H)，6.12(d，J=15.6Hz，1H)，5.91-5.78(m，4H)，5.46-5.40(m，2H)，5.29-5.23(m，2H)，4.42(d，J=15.2Hz，1H)，3.68-3.55(m，10H)，3.54-3.49(m，7H)，2.69-2.47(m，4H)，2.34-2.28(m，4H)，1.72-1.71(m，6H)，1.63-1.62(m，6H)，1.47(d，J=6.0Hz，6H)ppm.
Figure BDA00003344749600851
制备乙酰胺As-15(6-R)。将胺As-12(6-R)I(20mg，0.034mmol)溶解在CH2Cl2(1.0mL)中并冷却至0°C，相继添加i-Pr2EtN(3.8μL，0.17mmol，5.0当量)和乙酸酐(17.2μL，0.17mmol，5.0当量)并将混合物搅拌10min。然后将反应混合物用NaHCO3水溶液淬灭，将有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并在减压下蒸发。将粗制乙酰基衍生物溶解在甲醇(3.0mL)中，添加PS-SO3H(56mg，0.17mmol，10.0当量，3.0mmol/g)并在23°C搅拌16小时。将反应混合物过滤，并真空蒸发。通过HPLC(Agilent1100系列HPLC，配有DAD和Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6x300mm，5μm)柱，线性梯度为70%H2O(0.1%TFA)+30%MeCN(0.1%TFA)至50%H2O(0.1%TFA)+50%MeCN(0.1%TFA)，在35分钟内，流速为2.0mL/min)纯化粗制产物。得到乙酰胺As-15(6-R)(历经2个步骤的收率为64%：Z-异构体：5.4mg；E-异构体：5.8mg)。1H NMR(Z-异构体，CDCl3，400MHz)δ=6.67(d，J=16.4Hz，1H)，6.53(d，J=2.0Hz，1H)，6.29(d，J=2.0Hz，1H)，6.08-5.95(m，1H)，5.54-5.47(m，2H)，5.40-5.35(m，1H)，4.62-4.59(m，2H)，4.34(d，J=15.6Hz，1H)，3.82(d，J=15.2Hz，1H)，3.55-3.54(m，2H)，3.37(s，2H)，2.71-2.66(m，2H)，2.49-2.45(m，2H)，2.33-2.25(m，2H)，1.93(s，3H)，1.66-1.58(m，6H)，1.43(d，J=6.4Hz，3H)ppm，两个OH信号不可见。
1H NMR(E-异构体，CDCl3，400MHz)δ=6.45(s，1H)，6.30(d，J=1.6Hz，1H)，5.95(s，1H)，5.55-5.50(m，3H)，5.41-5.35(m，1H)，4.91-4.79(m，2H)，4.62-4.56(m，1H)，4.37(d，J=4.4Hz，1H)，3.56(s，2H)，3.37(s，2H)，2.73-2.65(m，2H)，2.46-2.21(m，4H)，1.99(s，3H)，1.66-1.59(m，6H)，1.44(d，J=6.4Hz，3H)ppm，两个OH信号不可见。
分子动力学方法
使用本领域技术人员已知的方法分析pochoxime衍生物的构象分布。通过分子动力学，用CHARMM程序(版本c31b1)中的Merck Molecular ForceField(MMFF94)模拟每个分子。以简单方式使用介电常数80模拟溶剂的影响。所述模拟在1000K在10ns内实施，并以10ps间隔从轨道提取2000帧。使用高温确保跨越构象能垒。通过CHARM中的2000步最速下降(SD)算法使每帧最小化，并计算MMFF能量。将所得的2000个构象聚集成簇(cluster)以测定主要构象。从代表第一簇的最低能量构象开始，将均方根差(RMSD)低于
Figure BDA00003344749600861
的所有构象聚集至那个簇中。剩余构象的最低能量构象异构体作为第二簇的起始点，并重复该过程，直到所有化合物都被聚集成簇。
使用三种不同的方法实施pochoxime衍生物在HSP90结合位点中的对接：Autodock4、AutodockVina和将在EADock中使用的被称为“吸引腔”的发育算法(developmental algorithm)。简而言之，在后者中，使配体的扩展构象在蛋白质的腔中最小化，从不同的位置和取向开始，采用的方法类似于MCSS的方法。最后将最小化的姿势聚集成簇并根据EADock的评分功能分级。这种算法的详细描述将是未来交流的主题。
在除去配体后，所有对接运行使用HSP90结构(PDB ID3INW)实施。对接在集中在最初存在于3INW PDB文件中的配体的中心上的
Figure BDA00003344749600862
立方体盒子中完成。存在于3INW结构中的两个水分子在对接计算中得以保留，因为它们对于在存在于所有配体中的苯酚官能团和HSP90的残基Asp93和Ser52之间的氢键桥的存在有贡献。
Autodock计算使用100个GA运行实施，每个GA运行涉及12’500’000次能量计算的最大值。Vina计算使用穷举值100实施。将默认值用于所有其它参数。
6个新pochoxime，以及存在于PDB ID3INW和3INX中的两个配体，和根赤壳菌素全部使用两个单独的对接运行系列对接。在第一系列中，向对接软件输入根赤壳菌素以及3INW和3INX配体的生物活性构象，和输入新pochoxime的P-状构象异构体。在第二系列中，向所有对接程序提供所有配体的生物活性L-状构象异构体。
MMFF94:
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Halgren,T.A.;Nachbar,R.B.J.Comput.Chem.1996,17,587-615
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Halgren,T.A.J.Comput.Chem.1996,17,520-552.
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CHARMM:
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Autodock4:
Morris GM,Huey R,Lindstrom W,Sanner MF,Belew RK,Goodsell DS,Olson AJ.J Comput Chem.2009Dec;30(16):2785-91.
AutodockVina:
Trott O,Olson AJ.J Comput Chem.2010Jan30;31(2):455-61.
EADock:
Grosdidier A,Zoete V,Michielin O.J Comput Chem.2009Oct;30(13):2021-30.
HSP90亲和性生物测定
荧光偏振Hsp90α竞争测定
荧光素-GA购自InvivoGen并将其溶解在DMSO中形成1mM溶液。HSP90α购自Stressgen(SPP-776F)。测定缓冲液含有20mM HEPES(K)(pH7.3)、50mM KCl、5mM MgCl2、20mM Na2MoO4、0.01%
Figure BDA00003344749600871
溶液型NP-40(70%在H2O中)(Sigma-Aldrich，NP40S)。在每次即将使用之前，新添加0.1mg/mL牛血清丙种球蛋白(BGG；Calbiochem，345876)和2mMDTT(Fluka，43817)。荧光偏振测量在Molecular Devices仪器上实施，从孔的顶部阅读黑色96孔板(Corning，3650)。进行测量，在485nm激发和在538nm发射，截断值为530nm。使用方程mP=1000x[(IS-ISB)-(IP-IPB)]/[(IS-ISB)+(IP-IPB)]计算偏振值，其中IS是平行发射强度，IP是垂直发射强度以及ISB和IPB是背景值。
在DMSO中以10mM的浓度制备化合物的原液。将药物在测定缓冲液中从30μM开始以三倍稀释度连续稀释。GA-FITC和Hsp90分别以5和25nM的浓度添加。总反应混合物为100μL。将板在4°C避光摇晃8小时，然后记录FP值。在含有蛋白质和示踪剂的孔和仅含示踪剂的孔之间观察100mP的窗口(window)。将测量的FP值(mP)对竞争剂浓度作图。将EC50值测定为50%GA被替代的竞争剂的浓度。
新的aminopochoxime化合物-实施例的细胞测定结果
将化合物溶解在100%DMSO中制备10mM原液。将HER2+BT474乳腺癌细胞在补充有10%FBS的DMEM/F12培养基中培养。将处于对数期生长的BT474细胞以每孔1.5X10E4个接种在96孔板中。在此细胞密度，预计BT474在3天内达到约70-80%的融合。将200μl不同的化合物稀释物或者媒介物(浓度范围0.004-10μM)添加至细胞中并孵育72小时。在完成孵育后，通过抽吸轻轻地除去培养基并在每孔中添加100μl ATPlite溶液(PerkinElmer)。通过使用96孔微量培养板发光阅读器，检测从ATPlite溶液和细胞中的ATP的反应产生的发光来测量活细胞。相对发光光单位与活细胞中的ATP的量相关。所述测定一式两份进行。使用XLfit计算IC50。下表4中示出的IC50是来自三个独立实验的平均IC50。
表4.本发明化合物的IC50
Figure BDA00003344749600881
Figure BDA00003344749600891
Figure BDA00003344749600901
Figure BDA00003344749600911
化合物5Z23(1.6)nM
化合物5E32(2.8)nM
化合物11Z100(10)nM
化合物11E90(6.7)nM
Figure BDA00003344749600922
化合物12Z44(3.34)nM
Figure BDA00003344749600931
化合物12E34(5.4)nM
Figure BDA00003344749600932
化合物13 229(19)nM
化合物14Z542(22)nM
Figure BDA00003344749600942
化合物14E343(4)nM
使用与上面在多个癌细胞系中描述的方法相似的方法，对某些示例性化合物进行了另外的增生性测定。IC50值在下表5中示出。
表5.本发明化合物的另外的IC50
Figure BDA00003344749600943
Figure BDA00003344749600951
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将本申请提及的所有公开和专利申请通过引用的方式并入本文，就如同每个单独的公开或者专利申请被明确地和单独地并入本文。
前面给出的详细描述仅用于清楚地理解，并且不应将其视为不必要的限制，因为修饰对于本领域技术人员而言是显而易见的。不承认以下几点：本申请提供的任何信息是现有技术，或者与要求保护的本发明相关，或者明确或者隐含提及的任何公开是现有技术。
本申请描述了本发明实施方案，包括发明人所知道的实施本发明的最佳方式。在阅读了前面的描述后，那些优选实施方案的变型对于本领域普通技术人员而言将变得显而易见。发明人预计技术人员在适当的情况下使用这种变型，并且发明人意图以与本申请描述的方式不同的方式实践本发明。因此，本发明包括适用法律允许的所附权利要求中引用的主题的所有修饰和等价物。而且，本发明涵盖在所有可能的变型中的上述元素的任何组合，除非本申请另外指出或者明显与上下文矛盾。

Claims (19)

1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药：
其中：
X为O、S或NR；
Y为-OR、-O-(CH2)mCOOR、-O-(CH2)mCON(R)2、-N(R)2、-N(R)SOR或者-N(R)SO2R，其中与氮原子连接的基团可为Z-或者E-构型；
Z1和Z2独立地为氢或者-(CH2)-O-RZ；
RZ为任选取代的烷基；
R1和R2独立地为氢、卤素、OR、N(R)2、SR、叠氮基、硝基、氰基、脂族基团、芳基、烷基芳基、芳基烷基、杂环基、杂芳基、-S(O)R、-S(O)2R、-SO2N(R)2、-N(R)SO2R、-N(CO)R、-N(CO)N(R)2、-N(CO)OR、-O(CO)R、-(CO)R、-(CO)OR、-(CO)N(R)2、-O(CO)OR或者-O(CO)N(R)2；
R3、R4、R5、R6、R8、R9和R10独立地为氢、卤素、叠氮基、硝基、氰基、脂族基团、烷基芳基、芳烷基、芳基、杂烷基、烷基杂芳基、杂环基、杂芳基、OR、N(R)2、SR、-O(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pR、-O(CH2)mOC(O)(CH2)pR、
-O(CH2)mC(O)(CH2)pN(R)2、-O(CH2)mC(O)(CH2)pOR、
-O(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pOR、-O(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pN(R)2、
-O(CH2)mOC(O)(CH2)pOR、-O(CH2)mOC(O)(CH2)pN(R)2、
-NR(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pR、-NR(CH2)mOC(O)(CH2)pR、
-NR(CH2)mC(O)(CH2)pN(R)2、-NR(CH2)mC(O)(CH2)pOR、
-NR(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pOR、-NR(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pN(R)2、
-NR(CH2)mOC(O)(CH2)pOR、-NR(CH2)mOC(O)(CH2)pN(R)2、
-(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pR、-(CH2)mOC(O)(CH2)pR、-(CH2)mC(O)(CH2)pN(R)2、
-(CH2)mC(O)(CH2)pOR、-(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pOR、
-(CH2)mN(R)C(O)(CH2)pN(R)2、-(CH2)mOC(O)(CH2)pOR、
-(CH2)mOC(O)(CH2)pN(R)2、-(CH2)mN3、-O(CH2)mN3、-(CH2)mN(R)2、
-(CH2)mOR、-(CH2)mS(O)(CH2)pR、-(CH2)mS(O)2(CH2)pR、
-(CH2)mSO2(CH2)pN(R)2或者-(CH2)mN(R)SO2(CH2)pR；以及
每个R独立地为氢、脂族基团、氨基、叠氮基、氰基、硝基、烷基氨基、二烷基氨基、OH、烷氧基、羰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、羰基氧基、羧基、酰基、芳基、烷芳基、包括苄基的芳基烷基、杂烷基、杂芳基、杂环基或者保护基；或者在相同氮上的两个R与所述氮一起形成5元至8元杂环或者杂芳基环；其中在基团含有不止一个R取代基的情况下；其中R为任选取代的，并且每个R可相同或者不同；
m和p独立地为0、1、2、3、4或者5；
在携带R9和R10的碳原子之间的虚线表示单键或者双键，其中化合价需求通过另外的氢原子来满足；以及
L为选自以下的连接部分：-O-、-N(R)-、-S-、-C(=O)-、-O-C(=O)-、-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-、-O-C(=O)-O-、-O-C(=O)-N(R)-、-N(R)-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-N(R)-、-C(=O)-O-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-C(=O)-、-N(R)-N(R)-、-C(=N-NR2)-、-N(R)-C(=N-NR2)-、-C(=N-NR2)-N(R)-、-N(R)-C(=N-NR2)-N(R)-、-C(=NR)-、-N(R)-C(=NR)-、-C(=NR)-N(R)-、-N(R)-C(=NR)-N(R)-、-C(=S)-、-O-C(=S)-、-C(=S)-O-、-N(R)-C(=S)-、-C(=S)-N(R)-、-O-C(=S)-O-、-O-C(=S)-N(R)-、-N(R)-C(=S)-O-和-N(R)-C(=S)-N(R)-；以及
TM为在生理条件下与生物位点特异性结合的靶向部分；或者可选择地，L-TM为基团，其为基于氧或者氮的官能团；以及
条件是，结构式(I)不包括表X中列出的化合物。
2.权利要求1的化合物，其中X为O或者NR。
3.权利要求1或者2的化合物，其中Y为-OR、-O-(CH2)mCOOR或者-O-(CH2)mCON(R)2。
4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R1和R2独立地为氢、卤素或者低级烷基。
5.权利要求4的化合物，其中
R1为氢、卤素或者低级烷基；以及
R2为氢。
6.权利要求1-5中任一项的化合物，其中RZ为低级烷基、烷氧基取代的低级烷基或者芳基取代的低级烷基。
7.权利要求6的化合物，其中RZ为甲基、乙基、异丙基、正丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基-乙基、甲氧基-甲基、氯甲基或者苄基。
8.权利要求1-7中任一项的化合物，其中L-TM为基于氧或者氮的官能团。
9.权利要求1-8中任一项的化合物，其中所述化合物具有式(II)：
Figure FDA00003344749500031
其中，
X为O、S或NR；
Y为-OR、-O-(CH2)mCOOR、-O-(CH2)mCON(R)2、-N(R)2、-N(R)SOR或者-N(R)SO2R，其中与氮原子连接的基团可为Z-或者E-构型；
Z1和Z2独立地为氢或者-(CH2)-O-RZ；
RZ为任选取代的烷基；
R1和R2独立地为氢、卤素或者烷基；
R3、R4、R5、R6、R8、R9和R10独立地为氢、卤素或者烷基；
L为选自以下的连接部分：-O-、-N(R)-、-S-、-C(=O)-、-O-C(=O)-、-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-、-O-C(=O)-O-、-O-C(=O)-N(R)-、-N(R)-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-N(R)-、-C(=O)-O-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-C(=O)-、-N(R)-N(R)-、-C(=N-NR2)-、-N(R)-C(=N-NR2)-、-C(=N-NR2)-N(R)-、-N(R)-C(=N-NR2)-N(R)-、-C(=NR)-、-N(R)-C(=NR)-、-C(=NR)-N(R)-、-N(R)-C(=NR)-N(R)-、-C(=S)-、-O-C(=S)-、-C(=S)-O-、-N(R)-C(=S)-、-C(=S)-N(R)-、-O-C(=S)-O-、-O-C(=S)-N(R)-、-N(R)-C(=S)-O-，和-N(R)-C(=S)-N(R)-；以及
TM为在生理条件下与生物位点特异性结合的靶向部分；或者可选择地，L-TM为基团，其为基于氧或者氮的官能团。
10.权利要求9的化合物，其中所述化合物具有式(IIIa)：
Figure FDA00003344749500041
其中，
Z1和Z2为-(CH2)-O-RZ；
RZ为任选取代的烷基；
R1为H、卤素或者低级烷基；
R3和R9独立地为H或者低级烷基；以及
L-TM为基于氧的官能团。
11.权利要求9的化合物，其中所述化合物具有式(IIIb)：
Figure FDA00003344749500042
其中，
Z1和Z2为-(CH2)-O-RZ；
RZ为氢或者任选取代的烷基；
R1为H、卤素或者低级烷基；
R3和R9独立地为H或者低级烷基；以及
L-TM为基于氮的官能团。
12.权利要求9的化合物，其中所述化合物具有式(IIIc)：
Figure FDA00003344749500051
其中，
Z1和Z2为-(CH2)-O-RZ；
RZ为氢或者任选取代的烷基；
R1为H、卤素或者低级烷基；
R3和R9独立地为H或者低级烷基；以及
L为选自以下的连接部分：-O-、-N(R)-、-S-、-C(=O)-、-O-C(=O)-、-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-、-O-C(=O)-O-、-O-C(=O)-N(R)-、-N(R)-C(=O)-O-、-N(R)-C(=O)-N(R)-、-C(=O)-O-C(=O)-、-C(=O)-N(R)-C(=O)-、-C(=O)-C(=O)-、-N(R)-N(R)-、-C(=N-NR2)-、-N(R)-C(=N-NR2)-、-C(=N-NR2)-N(R)-、-N(R)-C(=N-NR2)-N(R)-、-C(=NR)-、-N(R)-C(=NR)-、-C(=NR)-N(R)-、-N(R)-C(=NR)-N(R)-、-C(=S)-、-O-C(=S)-、-C(=S)-O-、-N(R)-C(=S)-、-C(=S)-N(R)-、-O-C(=S)-O-、-O-C(=S)-N(R)-、-N(R)-C(=S)-O-和-N(R)-C(=S)-N(R)-；以及
TM为在生理条件下与生物位点特异性结合的靶向部分。
13.化合物，其选自：
Figure FDA00003344749500061
Figure FDA00003344749500071
Figure FDA00003344749500081
或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药。
14.化合物，其选自说明书中所述的方案2举例说明的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物和/或前药。
15.药物组合物，其包含权利要求1-14中的任一项的化合物和药学上可接受的载体。
16.治疗患有疾病的患者的方法，其包括向所述患有疾病的患者给药有效量的权利要求1的化合物，其中所述疾病是由激酶和热休克蛋白90(HSP90)介导的。
17.权利要求16的方法，其中所述疾病为自身免疫性疾病、炎性疾病、神经或者神经变性疾病、癌症、心血管疾病、变态反应、哮喘或者激素相关疾病。
18.权利要求17的方法，其中所述癌症为实体瘤、血源性肿瘤、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、泌尿生殖道癌、食管癌、喉癌、胶质母细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡型癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、髓样障碍、淋巴样障碍、霍奇金病、毛细胞癌、口腔癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑和中枢神经系统癌，或者白血病。
19.权利要求17的方法，其中所述炎性疾病为内皮细胞的过度或者异常刺激、动脉粥样硬化、血管功能失常、异常伤口愈合、炎性和免疫障碍、贝赫切特病、痛风或者痛风性关节炎、异常血管发生伴类风湿性关节炎、皮肤病、银屑病、糖尿病性视网膜病变、早产儿视网膜病变、眼晶状体后纤维形成、黄斑变性、角膜移植排斥、新生血管性青光眼或者奥-韦综合征。
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