CN103357021A

CN103357021A - 一种以白蛋白为药用载体的药物组合物

Info

Publication number: CN103357021A
Application number: CN2012101012581A
Authority: CN
Inventors: 刘珂; 郎跃武
Original assignee: Shandong Target Drug Research Co Ltd
Current assignee: CHANGZHOU BADIAN MEDICINE TECHNOLOGY CO., LTD.
Priority date: 2012-04-09
Filing date: 2012-04-09
Publication date: 2013-10-23

Abstract

本发提供一种冬凌草甲素和白蛋白纳米颗粒的药物组合物及其制备方法。本发明还提供了该药物组合物在制备治疗肿瘤药物中的用途。

Description

一种以白蛋白为药用载体的药物组合物

发明领域

本发明涉及医药技术领域，具体为冬凌草甲素和白蛋白纳米颗粒的药物组合物、制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

冬凌草甲素(Oridonin)是从唇形科香茶菜属植物冬凌草中分离出的一种四环二萜类化合物，占冬凌草有效成分的90％以上，其易于提取，可溶于甲醇、乙醇、碱、醋酸、丙酮和氯仿等有机溶剂，在水中溶解度低。冬凌草甲素有广泛的生物活性，具有抗炎、降压等多种药理作用。近年研究发现冬凌草甲素有确切的抗癌活性，冬凌草甲素不仅可以通过阻遏细胞周期、下调端粒酶活性、抑制细胞膜钠泵活性、诱导肿瘤细胞凋亡、逆转多药耐药等作用机制发挥抗肿瘤作用[辛庆锋，陈俊辉.冬凌草甲素抗肿瘤作用机制研究进展.临床药学[J].2008，14(3)：455-457]，还可以抑制毒性药物损伤自身细胞DNA，增强机体吞噬细胞的吞噬等作用[王珍妮，沃兴德，周永列.冬凌草甲素抗肿瘤机制研究概况.中国医药导报[J].2008，5(28)：14-16]。研究表明冬凌草甲素抗瘤谱较广，对食管癌、肝癌、结肠癌、宫颈癌、肺癌、鼻咽癌、人黑色素瘤、胆囊癌、胃癌等均有一定的疗效[吴兆华，蔡明磊，吴立军.冬凌草甲素抗肿瘤活性及构效关系研究进展.中国现代中药[J].2008，10(5)：5-8]，冬凌草甲素有望成为一种新的抗癌药物。

冬凌草甲素结构式

白蛋白纳米颗粒是人或动物白蛋白与药物一起制成的一种微球制剂。白蛋白微球安全无毒、无免疫原性、可生物降解、生物相容性好，具独特靶向性、药物缓控释性、提高难溶药物的溶解率和吸收率、提高药物疗效、降低毒副作用和保护药物等作用[张志清，周树军.抗癌药物白蛋白微球的研究进展.中国药师[J].1999，2(4)：182-183，程宇慧，廖工铁.白蛋白微球的体内研究概况.华西药学杂志[J].1991，6(3)：150-154]，是一种理想的药物载体。纳米球进入血液很快作为异物被巨噬细胞吞噬，故白蛋白纳米颗粒能被动靶向至巨噬细胞丰富的组织、器官如肝、脾、肾，具有高度的靶向性，此外癌细胞代谢旺盛，肿瘤新生血管的通透性好，肿瘤部位血液丰富，均能将纳米颗粒被动靶向至肿瘤部位，白蛋白纳米颗粒作为药物载体能够在提高药物抗肿瘤活性的同时减小药物的毒副作用，这种靶向性对肿瘤化疗十分必要。白蛋白微球多应用于静脉注射的被动靶向和抗体引导的主动靶向运输。在静脉注射制剂的研究中包埋的药物多为抗癌的化学药物[王恺，马光辉.白蛋白微球的制备、改性和应用的研究进展.国外医学：药学分册[J].2003，30(6)：366-370]。

由于冬凌草甲素水溶性差，无法直接注射给药，而口服在机体内难吸收，易代谢，为改善冬凌草甲素水溶性，显著提高冬凌草甲素的ADMET特性(提高药耐受性和顺应性，提高药效，降低毒副作用，减少给药次数)，本专利将冬凌草甲素与白蛋白纳米颗粒技术结合起来用以有效解决冬凌草甲素的制剂问题，从而起到降低药物毒副作用、增强药物靶向性及药物缓释的功能作用。

发明内容

本发明提供一种含有冬凌草甲素和白蛋白的药物组合物，其特征在于含有冬凌草甲素和白蛋白纳米颗粒。

上述药物组合物，其中所述白蛋白可以是人血清白蛋白或牛血清白蛋白制备，也可以卵清蛋白为原料，优选为人血清白蛋白。

上述的药物组合物，冬凌草甲素与白蛋白的比例为1∶1-40，优选为1∶1-20，更优选为1∶10。

本发明提供一种制备包含冬凌草甲素和人血清白蛋白纳米颗粒药用组合物的制备方法，取处方量人血清白蛋白溶于水相，置于30℃恒温水浴，以480r/min持续搅拌的同时向水相中滴加冬凌草甲素无水乙醇溶液至处方量，加入2％戊二醛水溶液，继续搅拌固化24小时，于35℃旋转蒸发去除有机溶剂，过0.22μm微孔滤膜，冻干后即得固体粉末。

本发明所述的药物组合物与冬凌草甲素相比具有较好的水溶性和稳定性，能够制备用于抗肿瘤的药物。其中，白蛋白可以是人血清白蛋白(HSA)或牛血清白蛋白(BSA)制备，也可以卵清蛋白为原料，优选人血清白蛋白。该组合物为水溶性混合物，在与可获得的类似药物制剂比较时，具有降低药物的某些毒副作用、增强药物靶向性及缓释的功能作用。

本发明中优选的药用载体包含蛋白质，可以使用任何适当的蛋白质。适当的蛋白质的实例包括白蛋白，包括IgA的免疫球蛋白，脂蛋白，载脂蛋白B，β-2-巨球蛋白，甲状腺球蛋白等。最优选的药用载体为白蛋白，最优选人血清白蛋白。适合于本发明的包括白蛋白的蛋白质可以是天然来源的或者合成制备的。

本发明中药物组合物优选的药用载体包括白蛋白、表面改性的白蛋白。表面改性的白蛋白包括(1)经过修饰的白蛋白作原料来制备微球，从而使其具有新的表面性质，(2)可以在白蛋白微球制备好以后再进行表面修饰以达到表面改性。结合到白蛋白上的分子有甲氧基聚乙二醇(mPEG)、含巯基的分子等。在微球表面结合特定的抗体可以使微球对某种细胞具有特异的结合能力，从而将药物导向该细胞，实现特异性杀伤。

本发明药物组合物中的白蛋白的量将根据药物活性、其它赋形剂和预期给药的途径和给药部位而变化。

本发明所涉及的药物组合物在临床上可用于抗肿瘤的治疗。包括但不限于人体恶性黑色素癌、肺部癌、卵巢癌、乳房癌、胃癌、结肠癌、头部及颈部癌、白血病。

实施例1

实验试剂：人血清白蛋白(Amresco分装，生物试剂)；25％戊二醛溶液(上海化学试剂采购供应站，生化试剂)；冬凌草甲素(山东靶点药物研究有限公司)，其它试剂为国产分析纯。

称取18.0g HSA于烧杯中，加入0.9％生理盐水50ml，搅拌溶解形成HSA生理盐水溶液，备用；称取600.3mg冬凌草甲素于烧杯中，加入10ml无水乙醇溶解制成冬凌草甲素无水乙醇溶液；将25％戊二醛溶液稀释至2％的戊二醛溶液；

将HSA生理盐水溶液置于30℃恒温水浴，以480r/min持续搅拌的同时向HSA生理盐水溶液中滴加10ml冬凌草甲素无水乙醇溶液，继续滴加无水乙醇120ml；将2％戊二醛水溶液缓慢滴加至上述溶液中，继续搅拌固化24小时，于35℃旋转蒸发去除有机溶剂，过0.22μm微孔滤膜，冻干后即得固体粉末。

实施例2

称取9.0g HSA于烧杯中，加入0.9％生理盐水50ml，搅拌溶解形成HSA生理盐水溶液，备用；称取600.1mg冬凌草甲素于烧杯中，加入10ml无水乙醇溶解制成冬凌草甲素无水乙醇溶液；将25％戊二醛溶液稀释至2％的戊二醛溶液；

实施例3

称取6.0g HSA于烧杯中，加入0.9％生理盐水50ml，搅拌溶解形成HSA生理盐水溶液，备用；称取400.5mg冬凌草甲素于烧杯中，加入10ml无水乙醇溶解制成冬凌草甲素无水乙醇溶液；将25％戊二醛溶液稀释至2％的戊二醛溶液；

实施例4

实验试剂：牛血清白蛋白(上海天呈科技有限公司)；25％戊二醛溶液(上海化学试剂采购供应站，生化试剂)；冬凌草甲素(山东靶点药物研究有限公司)，其它试剂为国产分析纯。

称取9.0g BSA于烧杯中，加入0.9％生理盐水50ml，搅拌溶解形成BSA生理盐水溶液，备用；称取600.2mg冬凌草甲素于烧杯中，加入10ml无水乙醇溶解制成冬凌草甲素无水乙醇溶液；将25％戊二醛溶液稀释至2％的戊二醛溶液；

将BSA生理盐水溶液置于30℃恒温水浴，以480r/min持续搅拌的同时向BSA生理盐水溶液中滴加10ml冬凌草甲素无水乙醇溶液，继续滴加无水乙醇120ml；将2％戊二醛水溶液缓慢滴加至上述溶液中，继续搅拌固化24小时，于35℃旋转蒸发去除有机溶剂，过0.22μm微孔滤膜，冻干后即得固体粉末。

试验例1 Larotaxel白蛋白纳米颗粒体外细胞毒试验

将体外培养的不同人肿瘤细胞系(人急性早幼粒白血病HL-60、人慢性髓性白血病K562、人肺癌A549、人前列腺癌PC3、人胃癌SGC7901、人肝癌SMMC7721)按照2×10⁵个细胞/毫升的密度接种到96孔细胞培养板中，24小时后加入不同浓度的受试物，与细胞共培养48小时后采用四氮唑盐还原法(MTT法)进行检测，计算受试物的半数抑制浓度(IC₅₀)。试验同时设阳性和阴性对照组，阳性对照为顺铂，阴性对照为溶媒DMSO对照。试验重复两次。

体外抗肿瘤试验结果表明：冬凌草甲素对多种人肿瘤细胞系表现出明显的增殖抑制作用，其中人急性早幼粒白血病HL-60、人前列腺癌PC3为敏感细胞系，IC₅₀分别为0.72和0.89μmol/L；体外抗肿瘤活性强于阳性对照药物顺铂(IC₅₀分别为1.6和12μmol/L)

试验例2冬凌草甲素白蛋白纳米颗粒体内抗肿瘤试验

观察受试物静脉注射对小鼠U14宫颈癌、Lewis肺癌的抑瘤活性。实验选用SPF级C57BL/6小鼠。设阴性对照组、环磷酰胺组和冬凌草甲素白蛋白纳米颗粒(按实施例1制备)高(3mg/kg)、中(1.5mg/kg)、低(0.75mg/kg)剂量组。采用腋下接瘤方法，接瘤后次日随机分组，连续静脉给药10天，末次给药24小时后，脱颈椎处死小鼠，剥取瘤组织，称重，计算抑瘤率。

在冬凌草甲素白蛋白纳米颗粒对小鼠U14宫颈癌及Lewis肺癌的抑瘤实验中，冬凌草甲素白蛋白纳米颗粒静脉给药均具有显著的抑瘤作用。

试验例3冬凌草甲素白蛋白纳米颗粒对裸小鼠荷人前列腺癌实体瘤的抑制作用

观察受试物静脉注射对裸小鼠荷人前列腺癌实体瘤的抑制作用。复苏人前列腺癌细胞株PC-3原代冻存细胞，培养至细胞恢复正常生长状态，取对数生长期细胞用生理盐水制备肿瘤细胞悬液(2×10⁶个/mL).用1mL注射器吸取细胞悬液0.8mL，分别注入4～6周龄裸鼠臀部外上限四分之一和前腋皮下各0.2～0.4mL，复制激素非依赖性前列腺癌荷瘤鼠模型，每天测量体质量。待肿瘤块直径超过1cm，无菌条件下，手术切除瘤块，把瘤块切成1mm×1mm大小的小块，植入20只裸鼠臀部外上限四分之一皮下，种瘤1周后给药.实验动物随机分为4组，分别为冬凌草甲素白蛋白低剂量组(1mg/kg)、中剂量组(2mg/kg)、高剂量组(4mg/kg)及对照组。定期测量荷瘤小鼠体质量，连续用药21d.治疗结束3d后处死动物，摘取瘤体，测量瘤体体积、瘤质量，采用免疫组化方法观察Bcl22在各组间的表达差异。在实验过程中每5d测量裸鼠体质量。测量瘤体相互垂直的长径d1(cm)、d2(cm).求出瘤质量及瘤体积，并计算抑瘤率。

与对照组比较，＊P＜0.05

Claims

1.一种以白蛋白为药用载体的药物组合物，其特征在于含有冬凌草甲素和白蛋白。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述白蛋白可以是人血清白蛋白或牛血清白蛋白制备，也可以卵清蛋白为原料。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述白蛋白是人血清白蛋白。

4.根据权利要求1所述的药物组合物，其中冬凌草甲素与白蛋白的比例为1∶1-40。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中冬凌草甲素与白蛋白的比例为1∶1-20。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中冬凌草甲素与白蛋白的比例为1∶10。

7.一种制备包含冬凌草甲素和人血清白蛋白的药用组合物的制备方法，取处方量人血清白蛋白溶于水相，置于30℃恒温水浴，以480r/min持续搅拌的同时向水相中滴加冬凌草甲素无水乙醇溶液至处方量，加入2％戊二醛水溶液，继续搅拌固化24小时，于35℃旋转蒸发去除有机溶剂，过0.22μm微孔滤膜，冻干后即得固体粉末。

8.权利要求1-6的药物组合物在制备治疗人体恶性黑色素癌、肺部癌、卵巢癌、乳房癌、胃癌、结肠癌、头部及颈部癌、白血病药物中的用途。