CN103356904A - 一种天麻酒及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种天麻酒的制备方法，将天麻粉碎，加入葡萄糖活性干酵母和蒸馏水发酵，过滤，滤液减压蒸馏，得馏出液B；剩余母液用超滤膜过滤，得滤液C；取白酒10-12体积份、馏出液B0.5-1体积份、滤液C1-1.5体积份，混匀，室温放置24h，超滤膜过滤，滤液即为天麻酒。与现有技术相比，本发明采用生物酶转化法制备天麻酒醪，再将少量天麻酒醪与白酒进行调配，即得具有上佳口感，色泽透明，香味醇厚，兼具一定保健功能的天麻酒；经实验证明，该天麻酒具有明显的镇痛以及镇静作用，可有效促进睡眠；而且，本发明天麻酒的制备方法合理、操作简单，生产成本低，调配之后酒中天麻化学成分的含量较低，其服用量不受限制，可作为日常饮用酒。

Description

一种天麻酒及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种天麻酒及其制备方法，属于保健酒技术领域。

背景技术

迄今为止，有关天麻酒生产方法的公开技术并不多。在现有的公开文献中，天麻酒的生产一般分为两大类型，第一种直接以天麻为原料，通过发酵、浸泡等环节，过滤后得到的滤液即为天麻酒，这种方法生产出的天麻酒虽然有一定保健功能，但是由于浸出的天麻的化学成分在酒中的浓度比较高，而天麻有一定毒副作用，导致不能过多服用，常限于特殊疾病的辅助治疗。第二类天麻酒的生产方法多采用天麻为基础原料，再配伍其他药材，通过发酵、浸泡等环节，过滤后得到的滤液即为天麻酒，这种方法生产出的天麻酒同样具有第一种类型天麻酒的特性，服用量有限，与人们日常饮用的酒有较大差别。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种新的天麻酒及其制备方法。本发明采用生物酶转化法制备天麻酒醪，再将少量天麻酒醪与白酒进行调配，即得具有上佳口感、兼具一定保健功能的天麻酒，该天麻酒可作为日常饮用酒。

本发明采用的技术方案：一种天麻酒的制备方法，包括以下步骤：

（1）发酵：称取天麻药材，粉碎过筛，以天麻粉重量为基准，加入0.05%-1.0%的葡萄糖活性干酵母和2-4倍重量的蒸馏水，于40-50℃发酵5-7天，滤过，收集滤液A；

（2）精制：将滤液A置于旋转蒸发仪中，减压蒸馏，收集馏出液B；剩余母液用超滤膜（额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜）过滤，收集滤液C；

（3）调配：取白酒10-12体积份、馏出液B0.5-1体积份、滤液C1-1.5体积份，混匀，室温放置24小时，用超滤膜（额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜）过滤，弃掉滤渣，滤液即为天麻酒。

前述制备方法中，步骤（1）所述发酵过程为：称取天麻药材，粉碎过60目筛，以天麻粉重量为基准，加入0.5%的葡萄糖活性干酵母和3倍重量的蒸馏水，于45℃发酵6天，滤过，收集滤液A。

前述制备方法中，步骤（3）所述调配过程为：取酱香型或浓香型白酒11体积份、馏出液B0.8体积份、滤液C1.2体积份，混匀，室温放置24小时，用超滤膜过滤，弃掉滤渣，滤液即为天麻酒。

以上所述天麻酒的制备方法制得的天麻酒。该天麻酒不仅口感极佳，香味醇厚，可作为日常饮用酒，而且饮用之后有明显的镇痛以及镇静作用，可有效促进睡眠。

为了确保本发明的效果，申请人对天麻的发酵工艺进行了重点研究，还对所制得的天麻酒的药用保健功效进行了相应的试验研究，具体如下：

一、发酵工艺研究

以天麻素的含量高低为考核指标，进行工艺条件的筛选。

1、材料与仪器

试验所用天麻（批号：110801）购买于同仁堂药店；天麻素对照品（批号：0914-201101）购买于贵州省迪大科技有限责任公司；乙醇、甲醇、乙腈均为分析纯；水为超纯水。葡萄糖活性干酵母（安琪酵母股份有限公司）。

Agilent1260高效液相色谱仪（包括四元泵、在线脱气机、自动进样器、控温箱、柱温箱、二极管阵列检测器）；超声波清洗器（KQ5200E，昆山市超声仪器有限公司）；台式高速冷冻离心机（TGL16M，长沙迈佳森仪器设备有限公司）；DFY-200高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；电热鼓风干燥箱（101-2AB型，天津市泰斯特仪器有限公司）；电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；万分之一电子分析天平（AL204，梅特勒-托利多）。

2、天麻素的含量测定方法

2.1高效液相色谱条件

色谱柱∶Phenomenex Synergi Hydro-RP色谱柱（250mm×4.6mm,4μm）；流动相：乙腈-水（5:95，v:v）；流速：1mL·min^-1；检测波长：220nm；柱温：30℃；进样量：5μL，所有样品均经过0.45μm微孔滤膜过滤。

2.2对照品溶液的配制

取40℃真空干燥至恒重的天麻素对照品适量，精密称定，加乙腈-水（5:95，v/v）制成每1mL含0.512mg天麻素的储备液；分别吸取储备液适量，用乙腈-水（5:95，v/v）稀释成浓度分别为256μg·mL^-1，51.2μg·mL^-1，25.6μg·mL^-1，5.12μg·mL^-1的天麻素对照品溶液。

2.3标准曲线的绘制

精密吸取各浓度的天麻素对照品溶液5μL，注入高效液相色谱仪测定。以天麻素的浓度（X）为横坐标，天麻素色谱峰的峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程：y=18.4x-17.892（r=0.9997），结果表明天麻素在5.12～512μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系。

2.4样品溶液的制备

取家种天麻提取液2ml，水浴挥干，残渣加入70%乙醇溶液10ml溶解，摇匀，过滤，取续滤液，即为样品溶液。

2.5样品中天麻素的含量测定

精密吸取样品溶液5μL，注入高效液相色谱仪，测定天麻素色谱峰峰面积。根据回归方程计算出天麻素的浓度，进而可以得到天麻中天麻素的百分含量。

3、提取工艺单因素考察

3.1提取方法的考察

申请人分别考察了回流提取法、超声提取法和冷浸提取法，试验结果见图1。方差分析结果表明各组数据间无显著性差异，由于冷浸提取法简单，操作方便，能耗少，故选择冷浸提取法作为天麻的提取方法。

3.2提取溶剂的考察

按照3.1项下的冷浸提取法，其它条件不变，分别考察了甲醇、乙醇、水及不同浓度的甲醇溶液和乙醇溶液对天麻中天麻素提取率的影响，试验结果见图2和图3。方差分析结果表明各组数据间具有显著性差异；由图2及图3可知，提取溶剂中有机相比例越低，提取物中天麻素含量越高，这主要与天麻素为极性较强的小分子化合物有关，提取溶剂中水相越多天麻素越易溶出。

3.3料液比的考察

按照3.1项下的冷浸提取法，其它条件不变，料液比分别考察了1∶1、1∶2、1∶3、1∶4及1∶5，试验结果见图4，方差分析结果表明各组数据间具有显著性差异。当料液比较小时，天麻素的得率随提取溶剂的增加而增加；当料液比为1∶4时，提取所得的天麻素含量最高，而再增加提取溶剂天麻素的含量有所降低，由此可知1∶4为最佳料液比。

3.4提取时间的考察

按照3.1项下的冷浸提取法，其它条件不变，提取时间分别考察了1d、2d、3d、4d、5d、6d、7d，结果见图5，方差分析结果表明，各组数据间具有显著性差异。在较短的时间内随着提取时间的延长，天麻素得率随之增大；当提取时间超过6d天麻素得率反而下降，这可能是由于天麻素在长时间的超声波剪切作用下结构发生破坏，造成天麻素损失所致。

4、响应面法优化天麻提取工艺研究

响应面优化设计法（Response surface Methodology，简称RSM）由英国统计学家G.Box和Wilso于1981年提出，是一种集试验设计及数学建模为一体的优化统计方法。利用响应面优化设计法可以采用更为合理的试验设计，连续地对各因素的各水平进行分析，克服了正交试验只能对一个个孤立的试验点进行分析和不能给出直观图形和预测值的缺陷，通过较少的试验次数对提取工艺进行全面研究，从而得到更为明确和科学的工艺参数。

4.1响应面法试验方案及试验结果

通过单因素试验结果确定响应面试验设计的因素和水平，选取溶剂浓度即水-乙醇比例（A）、料液比（B）、提取时间（C）为试验因素。根据Box-Behnken中心组合试验设计原理，以天麻素含量（%）为评价指标，设计三因素三水平响应面法试验，共17个试验点。试验因素及水平见表1，试验方案及天麻素得率的响应值见表2。

表1  中心组合试验设计方案中的因素及水平

水平	A∶浓度(％)	B∶料液比	C∶提取时间(d)
				-1	80	1∶3	5
0	90	1∶4	6
				1	100	1∶5	7

表2  中心组合试验设计方案及天麻素得率的响应值

4.2模型的建立及其有效性检验

由于各因素对天麻素提取率的影响不是简单的线性关系，为了明确各因素对其的影响，以天麻素含量为响应值，利用Design-Expert8.05对实验数据进行多元回归拟合，得到天麻素含量与各试验因素的多元二次回归方程模型为：

天麻素含量（%）=0.89+0.012*A+0.018*B-5.250E-003*C+4.000E-003*A*B+7.000E-003*A*C+0.013*B*C-0.011*A²-2.550E-003*B²-0.011*C²

式中：对溶剂浓度（A）、料液比（B）、提取时间（C）在设计中均经量纲线性编码处理，故方程中各项系数绝对值的大小直接反映了各因素对指标值的影响程度，系数的正负反映了影响的方向。

为了检验该模型的有效性，对该二次模型及其回归系数进行方差分析，结果见表3。由表3可知，该模型P=0.0035<0.01，说明该模型是显著的；该模型的失拟项P=0.0622＞0.05，且该模型的复相关系数R²=模型的平方和/总差的平方和×100%=6.12×10-3/6.61×10-3×100%=92.52%，说明天麻素含量的变化有92.52%来源于试验因素，7.48%的数据失拟可能由随机误差引起，该模型与实际情况拟合较好，失拟项不显著，可用于预测天麻中天麻素的含量并对天麻中天麻素的提取工艺进行优化。在本试验设定的区域范围内，料液比和溶剂浓度的线性效应对天麻中天麻素含量的提取有极显著影响；料液比和提取时间的交互作用对天麻中天麻素含量的提取影响显著；溶剂浓度和提取时间的曲面效应对天麻中天麻素含量的提取具有显著性影响。因素系数的F值越大则表明该因素对响应值的影响越大，故影响天麻素含量的因素主次顺序为：B＞A＞C，即料液比＞溶剂浓度＞提取时间。

表3响应面二次模型及其回归系数的方差分析结果

注：**为差异性极显著（P<0.01）；*为差异性显著（P<0.05）。

4.3响应曲面分析及优化

根据回归方程绘制出响应面图和等高线图，通过响应曲面图及等高线图形状可分析当溶剂浓度（A）、料液比（B）、提取时间（C）其中一个因素固定时，另外两个因素对天麻素含量的影响，结果见图6、图7、图8。

由响应曲面可知，随着提取溶剂中水的比例的增加，天麻素得率不断增大，当水的比例增大到一定程度后天麻素的含量趋于平稳；天麻素的含量随着料液比的增大不断增加，但随着提取时间的延长而降低。造成这种现象的原因也许是因为料液比增大，提取溶剂增多，有利于天麻素的溶出；而随着提取时间的延长，天麻素在长时间的超声波剪切作用下结构发生破坏，造成天麻素损失致使天麻素含量降低。由响应曲面的陡峭程度我们可以看出，料液比（B）对天麻素的提取影响最为显著，其次为溶剂浓度（A），提取时间（C）对天麻素的提取影响最弱，这与由方差分析所得的结论一致。

等高线的形状可以反映出两因素交互作用的强弱，椭圆形表示两因素交互作用显著，而圆形则表示交互作用不显著。由各因素交互作用的等高线可知料液比（B）和提取时间（C）的交互作用最为显著，溶剂浓度（A）与提取时间（C）的交互作用次之，料液比（B）与溶剂浓度（A）的交互作用最小，与方差分析结果相符。

本试验以天麻素含量为指标，通过Design-Expert 8.05软件分析，得到天麻素的最佳提取条件为：溶剂浓度为99.54%水≈纯水，料液比为1∶4.2，提取时间为5.82d。此条件下，天麻素的理论预测值为91.8%。为了验证响应曲面法所得结果的可靠性，采用优化所得的最佳提取工艺对天麻进行提取，考虑到实际操作的便利，将提取工艺参数修正为：溶剂浓度100%即采用水为提取溶剂，料液比为1∶4.2，提取时间为5.8d，在此条件下进行6组重复实验，所得天麻素平均含量为91.1%，与理论预测值相比相对误差为0.76%，方差分析结果表明二者无显著性差异（P＞0.05），说明此模型准确可靠，可用于预测不同提取工艺条件下可得的天麻素含量，优化所得的天麻素提取工艺准确可靠，具有实用价值。

二、本发明天麻酒对神经系统作用的药理研究

采用小鼠的镇痛、镇静作用，进行天麻酒对神经系统作用的药理研究。

试验样品：A、浓香型天麻酒；B、酱香型天麻酒

1、实验材料

1.1动物昆明种小鼠，体重18～22g，SPF级动物，动物合格证号：SCXK(川2005-19)，四川省中医药科学院动物中心提供。

1.2试验药物及试剂浓香型天麻酒（A）、酱香型天麻酒（B）、吲哚美辛、吗啡、强的松。

1.3主要仪器超级恒温器，上海市上海县第二五金厂，型号：501型。

1.4统计方法所有数据均用均数±标准差

表示，量反应资料用t检验，质反应资料用x²检验。

2、试验方法与结果

2.1对小鼠的镇痛作用—醋酸致小鼠扭体反应的影响

体重为18～22kg小鼠40只，雌雄兼用，按体重随机分为对照组、吲哚美辛组、浓香型天麻酒（A）、酱香型天麻酒（B）组。对照组给予等体积蒸馏水，每天2次,共5次。末次给药1h后,各鼠分别腹腔注射0.8%醋酸溶液0.1ml/10g，观察、记录注射醋酸溶液后5min～15min内各组小鼠发生扭体反应的次数。结果见表4。

表4天麻酒对小鼠的镇痛作用—扭体法

n=10）

注：与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。

结果：浓香型天麻酒（A）、酱香型天麻酒（B）组可显著减少小鼠的扭体次数，与对照组比较有统计学差异。

2.2对小鼠的镇静实验—协同戊巴比妥钠对小鼠睡眠时间的影响

小鼠460只，雌雄各半，按体重随机分为对照组、安定组、浓香型天麻酒（A）、酱香型天麻酒（B）组，每组10只。对照组给予等体积蒸馏水，每天2次，共5次，安定组在试验前1h灌胃1mg/kg1次。末次给药后1h各鼠腹腔注射戊巴比妥钠45mg/kg，以小鼠翻正反射消失为指标，记录睡眠时间。结果见表5。

表5协同戊巴比妥钠药物对小鼠睡眠时间的影响

n=10)

组别	剂量(g/kg)	睡眠时间(min)
			对照组	蒸馏水	46.35±1.36
安定组	0.01	72.18±2.34*
			浓香型天麻酒（A）	5.0	63.51±1.52*
酱香型天麻酒（B）	5.0	63.82±2.63*

注：与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。

由表5可见，浓香型天麻酒（A）、酱香型天麻酒（B）可显著延长小鼠睡眠时间，与对照组比较有统计学差异。

与现有技术相比，本发明采用生物酶转化法制备天麻酒醪，再将少量天麻酒醪与白酒进行调配，即得具有上佳口感，色泽透明，香味醇厚，酒度变化不大（略有下降），兼具一定保健功能的天麻酒；经实验证明，该天麻酒具有明显的镇痛以及镇静作用，可有效促进睡眠；而且，本发明天麻酒的制备方法合理、操作简单，生产成本低，将较少量的天麻酒醪与白酒调配之后酒中天麻化学成分的含量较低，其服用量不受限制，可作为日常饮用酒。

附图说明

图1是不同提取方法对天麻素提取率的影响分析结果图；

图2是不同浓度乙醇水溶液对天麻素提取率的影响结果图；

图3是不同浓度甲醇水溶液对天麻素提取率的影响结果图；

图4是料液比对天麻素提取率的影响结果图；

图5是提取时间对天麻素提取率的影响结果图；

图6-1是溶剂浓度与料液比对天麻素含量影响的响应面图；图6-2是溶剂浓度与料液比对天麻素含量影响的等高线图；

图7-1是溶剂浓度与提取时间对天麻素含量影响的响应面图；图7-2是溶剂浓度与提取时间对天麻素含量影响的等高线图；

图8-1是提取时间与料液比对天麻素含量影响的响应面图；图8-2是提取时间与料液比对天麻素含量影响的等高线图。

具体实施方式

本发明的实施例1：一种天麻酒的制备方法，包括以下步骤：

（1）发酵：称取天麻药材，粉碎过60目筛，以天麻粉重量为基准，加入0.5%的葡萄糖活性干酵母和3倍重量的蒸馏水，于45℃发酵6天，滤过，收集滤液A；

（2）精制：将滤液A置于旋转蒸发仪中，减压蒸馏，收集馏出液B；剩余母液用超滤膜（额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜）过滤，收集滤液C；

（3）调配：取45-53°酱香型白酒11体积份、馏出液B0.8体积份、滤液C1.2体积份，混匀，室温放置24小时，用超滤膜（额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜）过滤，弃掉滤渣，滤液即为天麻酒。

实施例2：一种天麻酒的制备方法，包括以下步骤：

（1）发酵：称取天麻药材，粉碎过60目筛，以天麻粉重量为基准，加入0.05%的葡萄糖活性干酵母和2倍重量的蒸馏水，于40℃发酵7天，滤过，收集滤液A；

（2）精制：将滤液A置于旋转蒸发仪中，减压蒸馏，收集馏出液B；剩余母液用超滤膜（额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜）过滤，收集滤液C；

（3）调配：取45-53°浓香型白酒10体积份、馏出液B0.5体积份、滤液C1体积份，混匀，室温放置24小时，用超滤膜（额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜）过滤，弃掉滤渣，滤液即为天麻酒。

实施例3：一种天麻酒的制备方法，包括以下步骤：

（1）发酵：称取天麻药材，粉碎过筛，以天麻粉重量为基准，加入1.0%的葡萄糖活性干酵母和4倍重量的蒸馏水，于50℃发酵5天，滤过，收集滤液A；

（2）精制：将滤液A置于旋转蒸发仪中，减压蒸馏，收集馏出液B；剩余母液用超滤膜（额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜）过滤，收集滤液C；

（3）调配：取52°酱香型白酒12体积份、馏出液B1体积份、滤液C1.5体积份，混匀，室温放置24小时，用超滤膜（额定孔径范围为0.001-0.02微米的微孔过滤膜）过滤，弃掉滤渣，滤液即为天麻酒。

实施例4：一种天麻酒的制备方法，包括以下步骤：

（1）发酵：称取天麻药材，粉碎过筛，以天麻粉重量为基准，加入0.1%的葡萄糖活性干酵母和3倍重量的蒸馏水，于40℃发酵5天，滤过，收集滤液A；

（2）精制：将滤液A置于旋转蒸发仪中，减压蒸馏，收集馏出液B；剩余母液用超滤膜过滤，收集滤液C；

（3）调配：取白酒10体积份、馏出液B1体积份、滤液C1体积份，混匀，室温放置24小时，用超滤膜过滤，弃掉滤渣，滤液即为天麻酒。

Claims (4)

1.一种天麻酒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）发酵：称取天麻药材，粉碎过筛，以天麻粉重量为基准，加入0.05%-1.0%的葡萄糖活性干酵母和2-4倍重量的蒸馏水，于40-50℃发酵5-7天，滤过，收集滤液A；

（2）精制：将滤液A置于旋转蒸发仪中，减压蒸馏，收集馏出液B；剩余母液用超滤膜过滤，收集滤液C；

（3）调配：取白酒10-12体积份、馏出液B0.5-1体积份、滤液C1-1.5体积份，混匀，室温放置24小时，用超滤膜过滤，弃掉滤渣，滤液即为天麻酒。

2.根据权利要求1所述的天麻酒的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述发酵过程为：称取天麻药材，粉碎过60目筛，以天麻粉重量为基准，加入0.5%的葡萄糖活性干酵母和3倍重量的蒸馏水，于45℃发酵6天，滤过，收集滤液A。

3.根据权利要求1所述的天麻酒的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述调配过程为：取酱香型或浓香型白酒11体积份、馏出液B0.8体积份、滤液C1.2体积份，混匀，室温放置24小时，用超滤膜过滤，弃掉滤渣，滤液即为天麻酒。

4.如权利要求1-3中任一项所述天麻酒的制备方法制得的天麻酒。

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