CN103353524A

CN103353524A - 快速检测微量喹乙醇的试纸条

Info

Publication number: CN103353524A
Application number: CN201210532076XA
Authority: CN
Inventors: 职爱民; 邓瑞广; 杨苏珍; 宋春美; 赵东; 张改平
Original assignee: Henan Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Henan Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2012-12-12
Filing date: 2012-12-12
Publication date: 2013-10-16

Abstract

本发明涉及一种快速检测微量喹乙醇的胶体金试纸条。它含有底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为测试端吸附纤维层、吸附金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜层上有用偶联喹乙醇的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的直线式对照印迹。喹乙醇金标抗体为胶体金标记的喹乙醇单克隆抗体或多克隆抗体，偶联喹乙醇的载体蛋白溶液为喹乙醇与载体蛋白偶联的复合溶液。偶联喹乙醇的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA，或鸡卵清白蛋白OVA，或为血蓝蛋白KLH。本发明的试纸条具有特异性强，灵敏度高，简便，直观，准确，适用范围广，成本低，易于推广应用。

Description

快速检测微量喹乙醇的试纸条

一、技术领域：本发明涉及一种快速检测微量抗菌促生长剂类药物的器具，特别是涉及一种快速检测微量喹乙醇的试纸条。

二、技术背景：

喹乙醇（Olaquindox，OLA）是1965年由德国Bayer公司以邻硝基苯胺为原料合成的一种抗菌促生长剂，最初用于防治仔猪腹泻，1976年欧共体批准用于畜禽饲料添加剂，国内于1981年研制成功，因其具有良好的广谱抗菌效果，尤其是对大肠杆菌、沙门氏杆菌、巴氏杆菌等致病菌所引起的消化道、呼吸道疾病具有明显的预防和治疗效果，并且有促进畜禽对饲料的消化利用，提高生长速度等作用而被广泛用于多种兽药及饲料添加剂中。喹乙醇作为一种重要的畜禽饲料添加剂，按推荐剂量合理使用能起到抗菌促生长的作用，并能缩短养殖周期、降低饲养成本、提高经济效益。

近年来由于价格低廉、使用剂量过大、重复用药、用药时间过长、搅拌不均匀、计算或称量错误等原因，畜禽喹乙醇中毒事件时有发生，有研究报告称，在鲤鱼、罗非鱼、草鱼、斑点叉尾鮰的日粮中添加一定量的喹乙醇，其生长率能提高50%左右，但应控制剂量，否则鱼有中毒危险。在水产动物饲料中添加喹乙醇，主要作用在于提高饲料转化率，然而它蓄积毒性的特点，使其在鱼体内蓄积达到一定程度时，会对鱼的肝、肾造成很大破坏，鱼在受到刺激时，就容易大量出血而死。因此，喹乙醇中毒的商品鱼在运输过程中容易造成不同程度的死亡。据报道，喹乙醇能危害各个年龄的各种鱼，尤以鲤鱼成鱼发病率、死亡率为高在水产饲料中，曾一度被称为“水产瘦肉精”的喹乙醇，经历了被忽略毒副作用到被客观评价的过程。喹乙醇的毒性随动物种属不同存在较大差异，特别对禽和鱼类，有中度至明显蓄积毒性和一定遗传毒性，对部分鱼类有明显致畸作用。毒理学研究还证实，喹乙醇及其代谢物具有光敏毒性、肾毒性、遗传毒性、可能的致突变性和致癌性。这一系列的问题最终都会转嫁到人的身上，从而危害人类的健康。鉴于此，我国农业部批准的喹乙醇兽药国家标准（《中华人民共和国兽药典》）明确规定，喹乙醇作为抗菌促生长剂，仅限用于35 kg以下猪的促生长，以及防治仔猪黄痢、白痢，猪沙门氏菌感染，休药期35 d；禁用于体重超过35 kg以上的猪和禽、鱼等其他种类动物。

由于我国养殖模式落后，很多养殖户相关科学知识不足，道德观念淡薄，对有关的法律法规也不了解，国家监管制度也存在弊端，使得我国养殖业使用喹乙醇成为一种行业潜规则，这种潜规则伏击着我们每一个人，威胁着我们的生命安全。要想完全禁用喹乙醇还需加大力度，唤醒行业人士的良知，内部揭发，外部监管，全国人民共同努力，养殖者提高自身的科学知识水平，政府部门高度重视，严格控制，对危害人们健康的违法行为给予重罚，同时我们还需要建立起一套快速、准确、方便的检测方法。目前国内外测定喹乙醇在饲料和动物性食品中残留的方法种类不多，主要是采用理化分析方法，包括高效液相色谱法（High performance liquid chromatography，HPLC）、液相色谱/质谱联用分析法（Liquid chromatography/PBSs spectrometry，LC/MS）、气相色谱/质谱联用分析法（Gas chromatograph/PBSs spectrometry，GC/MS）、电化学分析法、薄层色谱法、等吸收点法、紫外分光光度法。但是这些方法检测喹乙醇灵敏度高，特异性强，但是样品需经一系列复杂的处理净化，繁琐费时，从样品预处理到得出检测结果至少需要2天时间；同时这种检测方法需要大型专门仪器设备和专业技术人员操作，无法进行现场检测，时效性差，难以推广。免疫学检测法具有半定量和一定的定量能力，可以提供待测物的初步信息，该法灵敏度高，分析过程相对简单，用作喹乙醇的筛查有独特的优势，是需要优先发展的检测技术，但目前喹乙醇免疫学检测方法在国内尚属空白，急待研究解决。

三、发明内容：

本发明的目的：研制出特异、灵敏、快速、简便的快速检测微量喹乙醇的试纸条。

本发明的技术方案是：

一种快速检测微量喹乙醇的试纸条，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，吸附层从测试端依次为测试端吸附纤维层、吸附金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜层上有用偶联喹乙醇的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的直线式对照印迹。

测试端吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯PVDF膜、或聚酯膜；金标抗体纤维层用吸附喹乙醇的金标抗体玻璃纤维棉，喹乙醇金标抗体为胶体金标记的喹乙醇单克隆抗体或多克隆抗体，偶联喹乙醇的载体蛋白溶液为喹乙醇与载体蛋白偶联的复合溶液；纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜。

偶联喹乙醇的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA，或鸡卵清白蛋白OVA，或为血蓝蛋白KLH，在纤维素膜层上设有直线式检测印迹和直线式对照印迹，两印迹为平行组合排列，或为十字型组合排列，或为┬字型组合排列，或为 ┴ 字型组合排列，或为├ 字型组合排列，或为 ┤字型组合排列。

在测试端吸附纤维层、金标抗体纤维层及吸水材料层上覆盖有保护膜，在测试端纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该标记线偏向测试端纤维层一侧约0.5cm处。

吸水材料层用吸水滤纸，支撑层即不吸水薄片层，用不吸水的韧性材料；不吸水的韧性材料用硬质塑胶条，或不吸水的硬纸条。

快速检测微量喹乙醇的试纸条具有以下优点：

特异性强，灵敏度高。本发明试纸条以胶体金标记高亲和力的单克隆抗体为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无共价键形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金标记对单克隆抗体的特异性及亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，快速检测试纸条具有较强的特异性和较高的灵敏度，可检测到10pb OLA的微量喹乙醇。本发明在保障食品安全，保护消费者健康方面具有极其重要的意义。

简便、快速。使用本发明试纸条，无需其它任何试剂和仪器，可现场操作。只要将试纸条插入被检样品10～20秒钟， 5分钟内即可判定检测结果。

结果显示形象、直观、准确。本发明试纸条以显示棕红色“︱”和“‖” （或“十”、或“┬”、或“┴”、或“├”、或“┤”）印迹作为检测结果阳性和阴性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“︱”印迹，表示被检样品中含有喹乙醇，显示两条棕红色“‖”印迹，表示被检样品中不含喹乙醇。结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阳性和假阴性等人为误判。

节省费用。使用快速检测试纸条，无需另配仪器设备和其它试剂，随时随地进行检测，费用低廉，节省大量贵重仪器及设备费用。

适用范围广，便于推广应用。快速检测试纸条操作简便，能满足不同层次人员需要，包括专业化验、海关检疫、卫生检疫、质量监测、畜产品加工、养殖户以及消费者个人等，具有广阔的市场前景和明显的经济、社会效益。

四、附图说明：

图1为快速检测微量喹乙醇试纸条结构示意图。

图2为快速检测微量喹乙醇试纸条俯视结构示意图。

五、具体实施方式：

要制成快速检测微量喹乙醇试纸条，首先要改造喹乙醇，使其具有活性基团可与载体蛋白偶联，其次制备喹乙醇人工抗原和喹乙醇金标抗体，从而制备检测印迹和金标抗体纤维。最后需制备羊抗或兔抗小鼠IgG(或羊抗兔IgG）抗体，用于制备对照印迹。

（1）喹乙醇与载体蛋白偶联

采用琥珀酸酐法合成OLA-HS

称取26.30 g OLA和13.00 g琥珀酸酐置于500 mL反应瓶中，加入100 mL二甲基亚砜（DMSO）作为溶剂，90 ℃，反应1 h ；将反应液冷却至室温，缓慢加入400 mL蒸馏水中，边滴加边搅拌，溶液中析出大量淡黄色沉淀；抽虑沉淀，用冰蒸馏水洗涤后抽干，50 ℃烘干，用蒸馏水进行重结晶，重复三次，干燥得淡黄色针状结晶，即为OLA-HS。

采用活化酯法，将喹乙醇与载体蛋白进行偶联制备人工结合抗原。

称取10.96 mg OLA-HS溶于500 μL N，N-二甲基甲酰胺 (DMF) 中，加入9.34 mg N, N-二环己基碳二亚胺（DCC），用200 μL DMF溶解4.17 mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，将其滴加到上述溶液中，室温搅拌反应8 h，此为反应液A；另称取20.00 mg BSA或OVA或KLH溶于2.00 mL 0.01 mol/L，pH 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）中，此为反应液B。将反应液B置于磁力搅拌器上，4 ℃下将反应液A 缓慢滴加到反应液B中，搅拌反应过夜。次日将反应液置于处理过的透析袋内，在PBS中透析三天，离心弃沉淀，分装并贮于－20 ℃备用。

(2)抗喹乙醇单克隆抗体或多克隆抗体的制备

单抗制备：以50μg～100μg/只的喹乙醇载体蛋白偶联物免疫6～8周龄Balb/C小鼠3～4次，每次免疫间隔时间3～5周，确定抗体效价符合要求后超强免疫，之后3～4天，将免疫小鼠眶下窦采血，分离阳性血清；脱颈致死，用75%酒精浸泡小鼠5～10min消毒体表，无菌取其脾脏，将脾脏剪碎并研磨，经120目尼龙纱布过滤，1000rpm离心10min，收集脾细胞。将1×10⁸的脾细胞与NS0骨髓瘤细胞按10:1的比例混合，1000rpm离心10min弃上清，细胞沉淀物于37℃水浴中缓缓加入0.7～1.0OLA的50%PEG4000作用1min，然后缓缓加入无血清1640培养基15OLA，以终止PEG的作用，37℃水浴5～10 min，1000rpm离心10min弃上清，将细胞沉淀物重悬于HAT选择培养基中，并加入96孔细胞培养板孔（100μL～200μL/孔），置于37℃、5%CO₂培养箱中培养。培养10～14天，用间接ELISA法进行阳性孔筛选，选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行3次有限稀释克隆化，而后扩大培养，建立杂交瘤细胞株。所制备的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体可特异地与喹乙醇反应，亲和力常数达到10¹⁰～10¹²，轻链亚型为κ或λ，重链亚型为IgG₁、IgG_2a、IgG_2b、 IgG₃，针对喹乙醇特异抗原决定簇的单克隆抗体，用于制备金标抗体玻璃纤维棉。

多抗制备：用喹乙醇载体蛋白偶联物免疫新西兰白兔，免疫剂量为200μg～500μg /次，背部皮下分4～6点注射。首免，用无菌PBS溶解喹乙醇载体蛋白偶联物，与等量FCA混合，充分乳化；加强免疫，用无菌PBS溶解喹乙醇载体蛋白偶联物，与等量FIA混合，充分乳化，首免后2～3周进行，连续免疫4～5次，每次间隔2～3周，最后一次免疫后10～15天，以ELISA法测其定效价达到10⁵以上时，采血并分离收集高免血清。以饱和硫酸铵盐析法提取IgG抗体，即取1份高免血清加2份PBS（pH7.2）混匀，加等体积饱和硫酸铵溶液混匀，置4℃冰箱12h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，再以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，加饱和硫酸铵溶液至终浓度33％，置4℃冰箱2h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，置4℃冰箱内用PBS（pH7.2）透析48～72h，中间换液数次，4℃、12000rpm离心15min，收集上清，得纯化的抗喹乙醇多克隆抗体，－20℃冻存，用于制备金标抗体玻璃纤维棉。

（3）喹乙醇金标抗体和金标抗体玻璃纤维棉的制备

采用柠檬酸钠还原法制备胶体金溶液，即在沸腾的200OLA 0.01～0.02％氯金酸溶液中加入新鲜配制的1％柠檬酸钠8OLA，获得直径约15nm的胶体金溶液，用0.1mol/L K₂CO₃调pH值至8.5～9.5，置2～8℃保存备用。以1：2000的标记比将待标记的喹乙醇单克隆抗体或多克隆抗体加入pH8.5～9.5的金溶胶中，标记10min后，加入20％的PEG10000至终浓度为0.05％，4℃、1500～3000rpm离心20min，除去未结合的胶体金颗粒，4℃、15000rpm离心1h，弃上清，获初步纯化的金标抗体蛋白混合物，再用丙烯葡聚糖S－400柱层析进行分离纯化，获得喹乙醇胶体金标记抗体。将1：100～1：500稀释的胶体金标记抗体吸附于精制玻璃纤维棉中，4℃低温真空干燥，制备喹乙醇金标抗体玻璃纤维棉。

（4）羊抗或兔抗小鼠IgG抗体的制备

羊抗或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体的制备

以饱和硫酸铵提取喹乙醇阴性小鼠血清IgG（或阴性兔血清IgG），即取1份小鼠血清（或兔血清）加2份PBS（pH7.2）混匀，加等体积饱和硫酸铵溶液混匀，置4℃冰箱12h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，再以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，加饱和硫酸铵溶液至终浓度33％，置4℃冰箱2h，4℃、2500rpm离心15min，弃上清，以适量PBS（pH7.2）溶解沉淀，置4℃冰箱内用PBS（pH7.2）透析48h，中间换液3次，4℃、12000rpm离心15min，收集上清，以紫外分光光度计测定其蛋白浓度，以50μg～100μg/kg体重的小鼠血清（或兔血清）IgG经皮下和肌肉注射健康山羊或家兔3～4次，末次注射10天后，以ELISA测定其血清效价达到1：2000以上时，心脏或动脉采血，分离收集高免血清，以饱和硫酸铵提取羊抗或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体（方法与提取小鼠血清IgG相同，不再重述），用于微量喹乙醇快速检测试纸条对照印迹的制备。

（5）快速检测微量喹乙醇试纸条检测反应原理

当快速检测微量喹乙醇试纸条测试端插入待测样品溶液后，待测溶液通过虹吸作用带动待测喹乙醇及金标抗体玻璃纤维棉中的金标抗体一起向硝酸纤维素膜扩散，并最终渗入手柄端吸水滤纸。在扩散过程中，待测喹乙醇可与金标抗体相结合，进而封闭金标抗体上喹乙醇的抗原结合点，阻止金标抗体与纤维素膜上偶联喹乙醇载体蛋白的检测印迹结合，不能显示检测印迹，而羊或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体则可与金标抗体结合，形成棕红色对照印迹带“︱”，即一条棕红色带“︱”印迹为阳性表示。反之样品溶液中无喹乙醇则不能阻止金标抗体与纤维素膜上偶联喹乙醇载体蛋白的检测印迹结合，显示棕红色检测印迹带“︱”，同样羊抗或兔抗小鼠IgG（或羊抗兔IgG）抗体也与金标抗体结合，显示棕红色对照印迹带“︱”，形成两条棕红色带“‖”为阴性表示。如果纤维素膜上没有棕红色带显示，则表明试纸条已失效。

实施例一：参见图1和图2。图中1为支撑层，用塑胶薄片条制成， 2为测试端吸附纤维层，用玻璃纤维棉制成，3为喹乙醇金标抗体纤维层，根据上述具体实施方式（3）所述的制备方法，制备吸附有抗喹乙醇单克隆抗体金标抗体玻璃纤维棉，4为纤维素膜层，本实施例采用硝酸纤维素膜，5为手柄端的吸水材料层，用吸水滤纸制成，将编号2、3、4、5各层从左至右粘贴固定在塑胶薄片条1上，彼此之间交界处纤维互相交叉渗透。在硝酸纤维素膜层4上，6为隐形检测印迹带，偶联喹乙醇载体蛋白溶液为牛血清白蛋白(BSA），在纤维素膜上印迹制成检测“︱”，7为隐形对照印迹带，用羊抗抗体溶液在纤维素膜上印迹制成“︱”，两条印迹带平行排列形成组合印迹带“‖”。8－1为覆盖在纤维层2和金标抗体纤维层3上面的样品端白色保护膜，8－2为覆盖在吸水材料层5上面的手柄端其它颜色保护膜（如黄色），9为测试样品标记线，即在纤维层2与金标抗体纤维层3交界处，对应的白色保护膜偏向纤维层2一侧约0.5cm处印制的标记线，在标记线右侧保护膜上印有箭头及max字样。

待测样品溶液的制备及检测操作步骤：

用于检测肉样：可将样品剪碎、磨细，以生理盐水稀释制成1：2～1：10待测样品悬液；

操作方法：将快速检测微量喹乙醇试纸条样品端插入待测样品中，插入深度不超过标记线，约10～20秒钟取出检测试纸条，水平放置，在5分钟内观察判定检测结果。

结果判定：(a)阳性如果在纤维素膜上显示有一条棕红色印迹带“︱”，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有喹乙醇；(b)阴性如果在纤维素膜上显示有两条棕红色印迹带“‖”，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中不含喹乙醇；(c)失效如果在纤维素膜上没有棕红色带显示，则表明试纸条已失效。

实施例二：快速检测微量喹乙醇试纸条结构和实施例一基本相同，不同之处在于喹乙醇金标抗体纤维层3吸附有抗喹乙醇多克隆抗体，测试端吸附纤维层2用尼龙膜制成，纤维素膜层4采用纯纤维素膜，检测印迹带和隐形对照印迹带均为“十”，8－2为覆盖在吸水材料层5上面的手柄端兰色保护膜。

用于检测奶样，可直接用生理盐水将奶样稀释制成1：2～1：5待测样品悬液；

结果判定：(a)阳性如果在纤维素膜上显示有一条棕红色印迹带“十”，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有喹乙醇；(b)阴性如果在纤维素膜上显示有两条棕红色印迹带“十”，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中不含喹乙醇；(c)失效如果在纤维素膜上没有棕红色带显示，则表明试纸条已失效。

操作方法同实施例一，不重述。

实施例三：快速检测微量喹乙醇试纸条结构和实施例一基本相同，不同之处在于测试端吸附纤维层2用PVDF膜制成，6为隐形检测印迹带，偶联喹乙醇载体蛋白溶液为鸡卵清白蛋白(OVA)，隐形对照印迹带7，用兔抗小鼠IgG抗体溶液在纤维素膜上印迹制成，纤维素膜层4采用羧化纤维素膜，8－2为覆盖在吸水材料层5上面的手柄端绿色保护膜，检测印迹带和隐形对照印迹带均为“┬”。

用于检测血样，则提取血清并用生理盐水将其稀释制成1：2～1：10待测样品。

结果判定：（a）阳性如果在纤维素膜上显示有一条棕红色印迹带“┬”，表示检测结果为阳性，说明在待测样品中含有喹乙醇；（b）阴性如果在纤维素膜上显示有两条棕红色印迹带“┬”，表示检测结果为阴性，说明在待测样品中不含喹乙醇；（c）失效如果在纤维素膜上没有棕红色带显示，则表明试纸条已失效。

操作方法同实施例一，不重述。

实施例四：快速检测微量喹乙醇试纸条结构和实施例一基本相同，不同之处在于中测试端吸附纤维层2用聚酯膜制成，纤维素膜层4采用羧化纤维素膜，隐形检测印迹带6，偶联喹乙醇载体蛋白溶液为为血蓝蛋白（KLH），用于检测尿样，可直接取尿液作为待测样品。检测印迹带和隐形对照印迹带均为“┴”。

操作方法和结果判定方法同实施例一，不重述。

实施例五：快速检测微量喹乙醇试纸条结构和实施例一基本相同，不同之处在于隐形对照印迹带7，用羊抗兔IgG抗体溶液在纤维素膜上印迹制成，测试端吸附纤维层2用尼龙膜制成。检测印迹带和隐形对照印迹带均为“├”。

检测样品、结果判定和操作方法同实施例一，不重述。

实施例六：和实施例一基本相同，不同之处在于喹乙醇金标抗体纤维层3吸附有抗喹乙醇多克隆抗体，检测样品为奶样。检测印迹带和隐形对照印迹带均为“┤”。

实施例七：和实施例一基本相同，不同之处在于喹乙醇金标抗体纤维层3吸附有抗喹乙醇多克隆抗体，检测样品为血样。

实施例八：和实施例一基本相同，不同之处在于喹乙醇金标抗体纤维层3吸附有抗喹乙醇多克隆抗体，检测样品为尿样。

实施例九：和实施例一基本相同，不同之处在于隐形检测印迹带6，偶联喹乙醇载体蛋白溶液为血蓝蛋白（KLH），检测样品、结果判定和操作方法同实施例一，不重述。

实施例十：和实施例一基本相同，不同之处在于隐形检测印迹带6，偶联喹乙醇载体蛋白溶液为鸡卵清白蛋白（OVA），检测样品、结果判定和操作方法同实施例一，不重述。

Claims

1.一种快速检测微量喹乙醇的试纸条，底层为支撑层，中间层为吸附层，保护层固定在吸附层上，其特征是：吸附层从测试端依次为测试端吸附纤维层、吸附金标抗体纤维层、纤维素膜层及手柄端的吸水材料层，其中在纤维素膜层上有用偶联喹乙醇的载体蛋白溶液印制的直线式检测印迹，用羊抗或兔抗小鼠IgG或羊抗兔IgG抗体溶液印制的直线式对照印迹。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：测试端吸附纤维层用玻璃纤维棉、尼龙膜、聚偏二氟乙烯PVDF膜、或聚酯膜。

3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：金标抗体纤维层用吸附喹乙醇的金标抗体玻璃纤维棉，喹乙醇金标抗体为胶体金标记的喹乙醇单克隆抗体或多克隆抗体，偶联喹乙醇的载体蛋白溶液为喹乙醇与载体蛋白偶联的复合溶液。

4.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：纤维素膜层用硝酸纤维素膜、纯纤维素膜或羧化纤维素膜。

5.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：偶联喹乙醇的载体蛋白为牛血清白蛋白BSA，或鸡卵清白蛋白OVA，或为血蓝蛋白KLH，在纤维素膜层上设有直线式检测印迹和直线式对照印迹，两印迹为平行组合排列，或为十字型组合排列，或为┬字型组合排列，或为 ┴ 字型组合排列，或为├ 字型组合排列，或为 ┤字型组合排列。

6.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：在测试端吸附纤维层、金标抗体纤维层及吸水材料层上覆盖有保护膜，在测试端纤维层与金标抗体纤维层交界处对应的保护膜上印制有样品标记线，该标记线偏向测试端纤维层一侧约0.5cm处。

7.根据权利要求1所述的试纸条，其特征是：吸水材料层用吸水滤纸，支撑层即不吸水薄片层，用不吸水的韧性材料。

8.根据权利要求7所述的试纸条，其特征是：不吸水的韧性材料用硬质塑胶条，或不吸水的硬纸条。