CN102455361B - 一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒及方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒及方法。试剂盒包括微孔试剂和试纸，所述微孔试剂中冻干有胶体金标记的头孢类药物特异性抗体，所述头孢类药物特异性抗体可为为头孢类药物单克隆抗体或头孢类药物多克隆抗体；所述试纸由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜、底板，依次连接组成，所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体。所述反应膜上包括检测区和质控区，检测区包被有头孢类药物和载体蛋白的偶联物，质控区包被有抗抗体。用本发明试剂盒检测β-内酰胺类抗生素的方法，简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。

Description

一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒及方法

技术领域

本发明涉及一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒及方法。

背景技术

随着人们生活水平的提高，动物源食品中的药物残留日益受到国际社会的重视。β-内酰胺类抗生素作为发现最早、用量最多的一类抗生素，在牛乳及动物组织中残留检出报道最多。β-内酰胺类抗生素是指化学结构中含有β-内酰胺环的一类抗生素，主要包括青霉素类和头孢菌素类，其作用特点是能够抑制细菌黏肽转肽酶的活性，从而阻止细菌细胞壁的合成，呈现杀菌活性。在动物生产中，β-内酰胺类抗生素广泛用于控制奶牛的乳房炎，治疗动物尿道、胃肠道和呼吸道感染等。但由于其使用方法不当或不遵守休药期规定等原因，均可造成它在畜产品中的残留，给人类健康带来严重危害，如产生过敏反应、破坏胃肠道菌群平衡和增强细菌耐药性等。其中青霉素在食品中的残留会对青霉素过敏的人产生健康危害，更为重要的是，抗生素被过量食入健康人肠道，会破坏健康人的正常菌群环境，导致人体免疫力的降低，从而危害消费者的身体健康，同时也影响牛奶及乳制品的出口贸易。我国的原料乳中β-内酰胺类抗生素残留严重，对其开展监控检测是我国乳品业发展中极为关注的问题。为使牛奶中抗生素问题得到有效监控，符合最大残留限量标准，奶牛场、乳制品厂、政府监督部门、出入境检测、大型食品流通领域等都在努力寻求准确可行的检测方法，许多大型化学试剂和仪器公司也致力于开发β-内酰胺类抗生素残留检测的方法和仪器。

目前，牛奶及生鲜奶中β-内酰胺类抗生素残留的检测方法依据不同的检测原理，大体可分为三大类：微生物受阻检测、理化检测法、免疫学分析法。微生物受阻检测方法，主要有抑菌圈试验、浑浊度试验、变色型检测金标试剂盒方法，微生物检测方法检测成本价低，但是灵敏度低、耗时长、耐药菌的存在容易导致误检；理化检测方法，是目前检测β-内酰胺类抗生素主要方法，有液相色谱法、色谱/质谱联用技术、气相色谱法等，理化检测方法精确度高，但其存在检测成本高，检测设备复杂，对检测人员的要求较高，检测耗时长等缺点，目前常用的免疫学分析法，主要为酶联免疫检测法和放射免疫分析法需要的检测费用还是较高，不适合企业低成本的检测需要。

中国发明专利200810162588.5(CN101429241A)中公开了“青霉素与载体蛋白偶联产物和β-内酰胺类青霉素抗体制备的方法及用途”，该方法中的青霉素单克隆抗体制备的酶联免疫试剂盒仅能检测青霉素G、氨苄青霉素、羧苄青霉素三种β-内酰胺类抗生素，制备的胶体金试纸条检测灵敏度低，检测药物种类少。因此，在实践中有必要建立一种敏感度高、操作简单、成本低、检测药物种类多、适合大规模推广的检测方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒。

本发明所提供的试剂盒包括微孔试剂和试纸，微孔试剂具有微孔塞，试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂中冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物；头孢类药物特异性抗体可为头孢类药物单克隆抗体或头孢类药物多克隆抗体；反应膜上包被有检测区和质控区；当头孢类特异性抗体为头孢类药物单克隆抗体时，检测区包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗鼠抗抗体；当头孢类药物特异性抗体为头孢类药物多克隆抗体时，检测区包被头孢类药物-载体蛋白偶联物，质控区包被羊抗兔抗抗体。

所述保护膜粘贴在试纸两端，其中一端粘贴在样品吸收垫上，为检测端，上面有MAX标记线，另一端粘贴在吸水垫上为手柄端。

所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一侧，所述质控区位于远离所述有MAX标记线的保护膜的一侧。

所述头孢类药物-载体蛋白偶联物是由头孢类药物与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物中的头孢类药物特异性抗体是以头孢类药物-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；样品吸收垫可为吸滤纸或虑油纸；吸水垫为吸水纸；反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；吸水垫为吸水纸；保护膜为PE材质保护膜。

本发明的另一个目的是提供了一种制备上述试剂盒的方法，其包括步骤：

1)制备冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2)制备具有包被头孢类药物-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜；

3)将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4)将1)和3)制备好的冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

具体的说，步骤包括：

1)将头孢类药物与载体蛋白偶联，形成头孢类药物-载体蛋白偶联物；

2)用头孢类药物-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌头孢类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株或用头孢类药物-载体蛋白免疫兔，得到头孢类药物多克隆抗体；

3)提取小鼠IgG或兔IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠IgG抗体或羊抗兔抗抗体；

4)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

5)将制备的头孢类药物特异性抗体加入到制备的胶体金中，得到头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物；

6)将头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物冻干在微孔试剂中后，将微孔试剂加上微孔塞；

7)将样品吸收垫用含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在缓冲液中的终浓度为0.5％(体积百分含量))、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，在37℃下烘干2h。

8)在底板上按顺序贴上样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜；

9)将制备好的微孔试剂和试纸组装成试剂盒，2-8℃条件下保存6个月。

本发明的另一个目的提供了一种牛奶样本中β-内酰胺类抗生素残留的检测方法。

用本发明上述任一所述试剂盒进行检测。

本发明试剂盒的检测原理：将待检牛奶样本滴加于微孔试剂，混匀后，孵育5min，将标有MAX标记线端向下，插入孵育后的微孔试剂，待检样品液与微孔中的金标抗体结合后一起向反应膜扩散；若待检样品液中β-内酰胺类抗生素的含量高，则扩散过程中待测样品液中的β-内酰胺类抗生素可与金标抗体相结合，进而完全封闭金标抗体上β-内酰胺类抗生素的抗原结合点，阻止金标抗体与反应膜上头孢类药物-载体蛋白偶联物结合，检测区不能显色，而抗抗体则可与金标抗体结合，质控区显色；若待检样品液中β-内酰胺类抗生素的含量低或者无，则金标抗体上的抗原结合位点不能被封闭，进而金标抗体会与反应膜上头孢类药物-载体蛋白偶联抗原结合，检测区显色，同时抗抗体也可与金标抗体结合，质控区显色。如果质控区不显色，则试纸失效。如图3所示。

阳性：当质控区(C)显示出红色条带，而检测区(T)不显色，判为阳性，用“+”表示。

阴性：当质控区(C)显示出红色条带，而检测区(T)显色，判为阴性，用“-”表示。

无效：当质控区(C)不显示红色条带，则无论检测区(T)是否出现红色条带，试纸均失效。

本发明的试剂盒具有敏感度高、特异性高、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。其中，采用高特异性的头孢类药物单克隆抗体，保证了检测结果的可靠性；将金标抗体冻干在微孔试剂中，在检测过程中，能够使金标抗体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。用本发明试剂盒检测β-内酰胺类抗生素的方法，简便、快速、直观、准确，适用范围广，成本低，易推广使用。

附图说明

图1为试纸剖面结构示意图。

图2为试纸的俯视图。

图3为试纸检测结果判定图。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

实施例1、检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒的构成

一、微孔试剂

所述微孔试剂上具有微孔塞；

所述微孔试剂上冻干有头孢类类药物单克隆抗体-胶体金标记物，包被量0.20-0.25μg/ml；

二、试纸(称作试纸条)(图1)：

所述试纸是由底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜组成；

所述样品吸收垫1、反应膜2、吸水垫3和保护膜依次按顺序黏贴在所述底板6上，样品吸收垫的末端与反应膜相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐；

所述试纸两端黏贴有保护膜。

保护膜7-1覆盖在吸水垫上手柄端，保护膜7-2覆盖在样品吸收垫上的检测端，在检测端保护膜上应有MAX字样(图2)。

所述反应膜上有检测区4和质控区5，检测区和质控区均为与所述试纸条的长相垂直的条带状，检测区位于近于有MAX标记线的保护膜的一侧，质控区位于远离所述有MAX标记的保护膜的一侧。检测区包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物(头孢类药物-牛血清白蛋白的偶联物)，质控区包被有羊抗鼠抗抗体。

底板为PVC底板；样品吸收垫为吸滤纸；吸水垫为吸水纸；反应膜为硝酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

将上述试纸与微孔试剂组装成试剂盒，在2～8℃的环境中储存，有效期6个月。

实施例2、实施例1中所述试剂盒的制备方法

一、试剂盒的制备

该试剂盒的制备方法主要包括如下步骤：

1)制备冻干有头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2)制备具有包被头孢类药物-载体蛋白偶联物的检测区和包被羊抗鼠抗抗体的质控区的反应膜；

3)将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；

4)将1)和3)制备好的冻干有头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

下面分步详细叙述：

(一)各部件的制备

1、头孢类药物-载体蛋白偶联物的合成与鉴定

头孢类药物是小分子物质，只有免疫反应性，没有免疫原性，不能诱发机体产生免疫应答，必须与大分子载体蛋白偶联后才具有免疫原性。

1)免疫原的制备-头孢类药物与卵清蛋白偶联物合成

取头孢匹林的钠盐40mg，用1.5ml双蒸水溶解，得到(I)液；取EDC40mg和NHS60mg用0.5ml水溶解得到(II)液；在搅拌状态下将(II)加入(I)中，反应1h，得到(III)液；取卵清蛋白60mg用8ml水溶解，得到(IV)液；将(IV)加入(III)中，室温搅拌反应24h分别得到免疫原，用0.02M PBS透析3天，分装、冻存。

2)包被原的制备-头孢类药物与牛血清白蛋白偶联物合成

取头孢匹林的钠盐40mg，用1.5ml双蒸水溶解，得到(I)液；取EDC40mg和NHS60mg用0.5ml水溶解得到(II)液；在搅拌状态下将(II)加入(I)中，反应1h，得到(III)液；取牛血清白蛋白100mg用8ml水溶解，得到(IV)液；将(IV)加入(III)中，室温搅拌反应24h分别得到免疫原，用0.02M PBS透析3天，分装、冻存。

3)头孢类药物-载体偶联物的鉴定

将载体蛋白、头孢类药物、头孢类药物-载体蛋白偶联物用pH7.4的PBS配成0.5mg/ml的溶液，以0.01mol/L pH7.4PBS调零，用紫外分光光度计在波长200-800nm范围内扫描，得到载体蛋白、头孢类药物、头孢类药物-载体蛋白偶联物的吸收曲线。三者出现不同的吸收曲线，表明头孢类药物与载体蛋白偶联成功。

2、头孢类药物单克隆抗体的制备

(1)制备单抗

a.动物免疫

将步骤1得到的免疫原注入到Balb/c小鼠体内，免疫剂量为150μg/只，使其产生抗血清。

b.细胞融合和克隆化

取免疫Balb/c小鼠脾细胞，按9∶1(数量配比)比例与SP2/0骨髓瘤细胞融合，筛选得到稳定分泌头孢类药物单克隆抗体的头孢类药物单克隆杂交瘤细胞株。

c.细胞冻存和复苏

将杂交瘤细胞用冻存液制成1×10⁹个/ml的细胞悬液，在液氮中长期保存。复苏时取出冻存管，立即放入37℃水浴中速融，离心去除冻存液后，移入培养瓶内培养。

d.单克隆抗体的制备与纯化

增量培养法：将杂交瘤细胞置于细胞培养基中，在37℃条件下进行培养，用辛酸-饱和硫酸铵法将得到的培养液进行纯化，得到单克隆抗体，-20℃保存。

所述细胞培养基为向RPMI-1640培养基中添加小牛血清和碳酸氢钠，使小牛血清在细胞培养基中的终浓度为20％(质量百分含量)，使碳酸氢钠在细胞培养基中的终浓度为0.2％(质量百分含量)；所述细胞培养基的pH为7.4。

3、羊抗鼠抗抗体的制备：以羊作为免疫动物，以鼠源抗体为免疫原对无病原体羊进行免疫，得到羊抗鼠抗抗体。

4、头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物的制备

(1)胶体金的制备

用双蒸去离子水将1％氯金酸(购于sigma公司，产品目录号T09041)稀释成0.01％(质量百分含量)，置磁力加热棒搅拌器上搅拌煮沸，每100ml 0.01％氯金酸加入2.5ml1％柠檬酸三钠(购于广州化学试剂厂，产品目录号BG11-AR-01KG)，继续搅拌加热反应至液体呈红色时停止加热，冷却至室温后补足失水。制备好的胶体金外观纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。

(2)头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物的制备

在磁力搅拌下，用0.2mol/L碳酸钾调胶体金的pH值至7.0，按50-100μg抗体/ml胶体金的标准向胶体金溶液中加入上述头孢类药物单克隆抗体，继续搅拌混匀30min，加入10％BSA至BSA在胶体金溶液中的终浓度为1％(体积百分含量)，静置30min。12000rpm、4℃离心30min，弃上清液，沉淀用复溶缓冲液洗涤两次，用体积为初始胶体金体积1/20的复溶缓冲液将沉淀重悬，得到的头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物溶液的浓度为50ug单抗/ml溶液，置4℃备用。

复溶缓冲液：含酪蛋白、吐温-80的0.02mol/L、pH7.2的磷酸盐溶液，其中酪蛋白在复溶缓冲液中的终浓度为0.05-0.1％(体积百分含量)，吐温-80在复溶缓冲液中的终浓度为0.05-0.15％(质量百分含量)。

5、将头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物冻干到微孔试剂上

向微孔试剂微孔板中加入100μl头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物，放入冷冻干燥机中，冷阱温度为-70℃条件下，预冻4h后，再冻干14h，即可取出，得到冻干有头孢类药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

6、样品吸收垫的准备：将样品吸收垫置于含牛血清白蛋白(牛血清白蛋白在缓冲液中的终浓度为0.5％(体积百分含量))、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃烘2h备用；

7、反应膜的制备

包被过程：用磷酸缓冲液将头孢类药物-牛血清白蛋白偶联物稀释到10mg/mL，用Biodot点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的检测区，包被量为1.0μg/cm²；用0.01M、pH 7.4PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释到200μg/ml，用Biodot点膜仪将其包被于硝酸纤维素膜上的质控区，包被量为1.0μg/cm²。将包被好的反应膜置于37℃条件下干燥2h，备用。

(二)各部件的组装

1、试纸的组装：

将所述样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次按顺序黏贴在所述底板上；样品吸收垫的末端与反应膜的始端相连，反应膜的末端与吸水垫的始端相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐，吸水垫的末端与底板的末端对齐；在组装好试纸两端黏贴保护膜。

2、试剂盒组装

将上述步骤1得到试纸与微孔试剂组装成试剂盒，在2～8℃的环境中储存，有效期6个月。

二、试剂盒的灵敏度和特异性检验

(一)灵敏度试验

将青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、头孢喹诺、头孢洛宁、头孢唑林、头孢匹林、头孢噻呋标准品(购自德国Dr和中国兽医药品监察所)；稀释成如下不同浓度：0、1、2、4μg/L青霉素G；0、1、2、3、4μg/L的氨苄青霉素、阿莫西林；0、10、15、20、30μg/L头孢喹诺；0、10、18、25、30μg/L头孢洛宁；0、20、50、60、80μg/L头孢唑林；0、30、50、70μg/L头孢匹林；0、50、70、90、120μg/L头孢噻呋；所用的稀释液为pH为7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液。

用试剂盒进行检测。每次向微孔试剂中滴加200μl样品，混匀，孵育5min后，将试纸插入检测，结果为：滴试0、1μg/L青霉素G，0、1、2μg/L氨苄青霉素、阿莫西林，0、10μg/L头孢喹诺，0、10μg/L头孢洛宁，0、20μg/L头孢唑林，0、30μg/L头孢匹林，0、50、70μg/L头孢噻呋时，试纸条上显示出肉眼可见的两条红色条线，呈阴性；当滴试2、4μg/L青霉素G，3、4μg/L氨苄青霉素、阿莫西林，15、20、30μg/L头孢喹诺，18、25、30μg/L头孢洛宁，50、60、80μg/L头孢唑林，50、70μg/L头孢匹林，90、120μg/L头孢噻呋时，试纸条质控区显色，但检测区不显色，呈阳性；表明，本试剂盒对青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、头孢喹诺、头孢洛宁、头孢唑林、头孢匹林、头孢噻呋检测灵敏度分别为2μg/L、3μg/L、3μg/L、15μg/L、18μg/L、50μg/L、50μg/L、90μg/L。

(二)特异性试验

特异性常用交叉反应率表示，是指抗体与结构不同的抗原决定簇发生结合的能力。本试剂盒对青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、头孢喹诺、头孢洛宁、头孢唑林、头孢匹林、头孢噻呋检测灵敏度分别为2μg/L、3μg/L、3μg/L、15μg/L、18μg/L、50μg/L、50μg/L、90μg/L，将牛奶中常检的其他药物(克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、三聚氰胺、群勃龙醋酸酯、磺胺类、氯霉素类、大环内酯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类)用pH为7.2、0.2mol/L的磷酸盐缓冲液进行稀释。用实施例1中所述的试剂盒进行检测，结果显示克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、三聚氰胺、群勃龙醋酸酯、磺胺类药物、氯霉素类药物、大环内酯类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、四环素类药物在500μg/L浓度时，试纸条质控区和检测区均显色，可以得出本试剂盒未对这些药物发生交叉反应。

实施例3、试纸的应用

一、用实施例1中所述试剂盒检测牛奶中β-内酰胺类抗生素

本发明的试剂盒可以检测牛奶样品。一般的检测方法如下：

1、检测方法

向微孔试剂中滴加需检测的样品溶液，混匀后，孵育5min，将试纸有MAX线标记端朝下插入微孔试剂，在5min内观看结果。

2、检测结果判定

β-内酰胺类抗生素药物在样品中浓度高于或等于试剂盒最低检测限时，胶体金抗体与β-内酰胺类抗生素结合，从而在检测区内因为竞争反应不会与头孢类药物偶联物结合而不出现红色条带，呈阳性。阴性样品在检测过程中由于缺少抗体抗原竞争反应，将会在检测区与质控区内出现红色条带。如图3所示。

阳性：当质控区(C)显示出红色条带，而检测区(T)不显色时，判为阳性。如图3a所示

阴性：当质控区(C)显示出红色条带，检测区(T)同时也显示出红色条带，判为阴性。如图3b所示

无效：当质控区(C)不显示出红色条带，则无论测试区(T)显示出红色条带与否，该试纸判为无效。如图3c、3d所示

下面具体举例：

取已知青霉素G含量大于2μg/L的牛奶阳性样品20份和浓度小于2μg/L的牛奶样本阴性样品20份，用3个批次生产的试剂盒分别进行检测，计算其阴阳性率。

表1、检测阳性样本结果

表2、检测阴性样本结果

结果表明：用3个批次生产的试剂盒检测阳性牛奶样本时，阳性符合率为100％；检测20份阴性牛奶样本时，阴性符合率为100％。本发明的检测β-内酰胺类抗生素试剂盒可以对-内酰胺类抗生素残留进行快速检测。

Claims (9)

1.一种检测β-内酰胺类抗生素的试剂盒，其特征在于包括试纸和微孔试剂，所述试纸包括反应膜、样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板，所述反应膜上有检测区和质控区，检测区包被有头孢类药物-载体蛋白偶联物，质控区包被有抗抗体，所述微孔试剂上冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物，头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物中的头孢类药物特异性抗体是以头孢类药物-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述头孢类药物为头孢匹林的钠盐。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述试纸由样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜依次黏贴在底板上组成，所述微孔试剂上具有微孔塞。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述保护膜粘贴在试纸两端，其中一端粘贴在样品吸收垫上，为检测端，上面有MAX标记线，另一端粘贴在吸水垫上为手柄端。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述检测区位于近于有MAX标记的保护膜的一侧，所述质控区位于远离所述有MAX标记的保护膜的一侧。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述头孢类药物-载体蛋白偶联物由头孢类药物与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述头孢类药物特异性抗体可为头孢类药物单克隆抗体或头孢类药物多克隆抗体。

7.权利要求1-6任一项所述的试剂盒在检测β-内酰胺类抗生素中的应用。

8.一种制备权利要求1-6任一项所述的试剂盒方法，其包括步骤：

1） 制备冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2） 制备具有包被头孢类药物-载体蛋白偶联物的检测区和包被抗抗体的质控区的反应膜；

3）  将2)制备好的反应膜与样品吸收垫、保护膜、吸水垫、底板组装成试纸；

4） 将1）和3）制备好的冻干有头孢类药物特异性抗体-胶体金标记物的微孔试剂和试纸组装成试剂盒。

9.一种牛奶样本中β-内酰胺类抗生素残留的检测方法，其包括步骤：

1）用权利要求1-6任一项所述的试剂盒进行检测；

2）分析检测结果。

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