CN103340923A - 一种核桃鞣质的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及核桃青皮中化学物质的制备方法，具体为一种核桃鞣质的制备方法，包括以下步骤：剥取核桃青皮，在背阴处晾干；干燥后粉碎，用筛网过筛；将过筛后的核桃青皮粉置于容器中配成溶液；在上述溶液中加入浓度为1-2.5g/L的果胶酶和纤维素酶，将容器中溶液的pH值调至5.5-6.7后将容器密封，恒温下振荡处理36-60h；在酶解后的溶液中加入浓度为2%～5%明胶，然后静置，过滤得到沉淀物；沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5-8的比例混合；将乙酸乙酯溶液加入到其内装有氧化铝粉末的层析柱中；再在层析柱中加入丙酮，丙酮以和层析柱溶液的体积比为3:5-9的比例加入；将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质，解决了现有方法对鞣质的提取率低和提取的鞣质含杂质较多的问题。
Description
技术领域
本发明涉及核桃青皮中化学物质的制备方法，具体为一种核桃鞣质的制备方法。
背景技术
核桃为胡桃科植物，核桃青皮又称青龙衣，为核桃外部的一层厚厚绿色果皮，富含鞣质；鞣质具有收敛性，内服可治疗胃肠道出血，溃疡和水泻等症，外用于创伤、灼伤，鞣质能使创面的微血管收缩，有局部止血作用；鞣质还有抑菌作用，具抗病毒作用，鞣质可用作生物碱及某些重金属中毒时的解毒剂；鞣质具较强的还原性，可清除生物体内的超氧自由基，延缓衰老；此外，鞣质还有抗变态反应、抗炎、驱虫、降血压等作用。现在常采用浸提法提取鞣质，浸提法所用的溶剂对鞣质有良好的溶解能力，不与鞣质发生化学反应，浸出的杂质少，易于分离；常用的溶剂有水，乙醇、甲醇、丙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂，有机溶剂和水的复合体系作溶剂也很普遍，一些科研人员还采用含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠的水溶液提取鞣质。现在鞣质提取方法都存在提取率低的问题，且提取的鞣质中含有大量的糖、蛋白质、脂类等杂质，需要进一步分离纯化。
发明内容
本发明为了解决现有方法对鞣质的提取率低和提取的鞣质含杂质较多的问题，提供了一种核桃鞣质的制备方法。
本发明是采用如下的技术方案实现的：
一种核桃鞣质的第一种制备方法，包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40-80目的筛网过筛；
将过筛后的核桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8-12的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1-2.5g/L以任意比混合的果胶酶和纤维素酶，以溶液和酶的体积比90-110:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5-6.7后将容器密封，在30-50℃恒温下振荡处理36-60h；
在酶解后的溶液中以和明胶的体积比10:1-2的比例加入浓度为2%～5%明胶，然后振荡10-15min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5-8的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25-45克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70-90%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5-9的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
本发明提供了一种核桃鞣质的制备方法，先将核桃青皮在背阴处晾干，在背阴处核桃青皮不容易发生光氧化反应，青皮中的有效物质不容易挥发掉，青皮晾干后粉碎，用40-80目筛网过筛，使得青皮粉容易被酶分解，以及青皮粉和纯水以质量比为1:8-12的比例混合，也是使得青皮粉容易被酶解，同时青皮粉配制成溶液选择了纯水，纯水中的离子少，对青皮粉的酶解影响小；在溶液中加入的果胶酶分解核桃青皮细胞胞间层与初生壁，使天然果胶完全分解，破坏细胞壁结构，以达到分离细胞的目的；利用纤维素酶分解初生壁与次生壁中的纤维素分子，促进细胞内各种化学活性物质的释放，而浓度为1-2.5g/L果胶酶和纤维素酶可以快速彻底得将核桃青皮酶解，而将溶液的pH调到5.5-6.7，且在30-50℃恒温下反应，果胶酶和纤维素酶的活性最大，利于核桃青皮的酶解，本发明对核桃青皮的酶解选用了果胶酶和纤维素酶，是一种生物方法，且对果胶酶和纤维素酶的浓度做了优选，提高了鞣质的提取率，还不破坏其活性；酶解后的溶液中加入明胶，明胶能和鞣质结合成鞣质蛋白，鞣质蛋白为沉淀，过滤后得到鞣质蛋白，鞣质蛋白中的鞣质是鞣质粗提取物，需进一步提纯，明胶和酶解后的溶液以体积比1-2:10的比例混合，确保能完全和鞣质结合，确保鞣质的提取率；含有鞣质蛋白的乙酸乙酯溶液加入含有氧化铝粉末的层析柱中，而后加入的丙酮能将鞣质和蛋白质分开，氧化铝能吸附掉溶液中的蛋白质等物质，被分解开的鞣质溶于乙酸乙酯与丙酮混合液中，丙酮以和乙酸乙酯溶液以体积比为3:5-9的比例混合，鞣质蛋白的分解率高，浓度为70-90%的丙酮分解鞣质蛋白的效果好；从层析柱中流出的溶液减压蒸发后得到纯度较高的鞣质。
一种核桃鞣质的第二种制备方法，包括以下步骤：沉淀物在和乙酸乙酯混合前先和氯仿以固液质量比为1:8-12的比例混合；再过滤得到沉淀物，再次得到的沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5-8的比例混合。
氯仿能吸收掉鞣质粗提取物中的脂溶性物质，氯仿和沉淀物以固液质量比为1:8-12的比例混合，氯仿的吸收效果好，提高了制取的鞣质的纯度。
一种核桃鞣质的第三种制备方法，包括以下步骤：酶解后的溶液中以和酶解后溶液的体积比为1:5-7的比例加入浓度为70-90%的丙酮；
加丙酮后的溶液离心、过滤，直至无絮状物出现为止；
离心后的溶液减压浓缩后得到浓缩液；
在浓缩液中以和明胶的体积比10:1-2的比例加入浓度为2%～5%明胶，然后振荡10-15min，静置、过滤得到沉淀物。
离心能去除掉溶液中的纤维素、半纤维素与果胶质等杂质，丙酮能分解溶液中存在的鞣质蛋白，提高鞣质的提取率；以和溶液的体积比为1:5-7的比例加入丙酮，丙酮分解鞣质蛋白的效果好，从而提高鞣质的提取率。
一种核桃鞣质的第四种制备方法，包括以下步骤：加丙酮后的溶液在离心处理前置于微波超声波提取仪上，微波功率设为100-250W，超声波频率设为20-30KHz，超声波功率设为900-1200W，时间为20-36min。
酶解后的溶液用微波和超声波处理，是用物理方法辅助核桃青皮的酶解，将酶解彻底，细胞中的鞣质尽量的释放，从而提高鞣质的提取率。
上述的第一、二、三、四种核桃鞣质的制备方法，所述氧化铝粉末粒度为100～160目。
粒度为100～160目的氧化铝粉末，能保证氧化铝粉末和溶液充分接触，吸附掉多的蛋白质等杂质，提高制取的鞣质的纯度。
本方法简单、灵敏、稳定、可靠，核桃青皮中鞣质的提取率高，可以从 100g的青皮中提取0.378g的鞣质，制取的鞣质纯度也高，解决了现有方法对鞣质的提取率低和提取的鞣质含杂质较多的问题。
具体实施方式
实施例一：
一种核桃鞣质的制备方法，包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40（或者50或者60或者70或者80）目的筛网过筛；
将过筛后的核桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8（或者9或者10或者11或者12）的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1（或者1.5或者2或者2.5）g/L以1:1混合的果胶酶和纤维素酶，以溶液和酶的体积比90（或者95或者100或者105或者110）:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5（或者5.8或者6或者6.4或者6.7）后将容器密封，在30（或者35或者40或者45或者50）℃恒温下振荡处理36（或者42或者48或者54或者60）h；
在酶解后的溶液中以和明胶的体积比10:1（或者1.3或者1.5或者1.7或者2）的比例加入浓度为2（或者3或者4或者5）%明胶，然后振荡10（或者11或者12或者13或者14或者15）min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5（或者6或者7或者8）的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25（或者30或者35或者40或者45）克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70（或者75或者80或者85或者90）%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5（或者6或者7或者8或者9）的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
实施例二：
一种核桃鞣质的制备方法，包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40（或者50或者60或者70或者80）目的筛网过筛；
将过筛后的核桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8（或者9或者10或者11或者12）的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1（或者1.5或者2或者2.5）g/L以3:1混合的果胶酶和纤维素酶，以溶液和酶的体积比90（或者95或者100或者105或者110）:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5（或者5.8或者6或者6.4或者6.7）后将容器密封，在30（或者35或者40或者45或者50）℃恒温下振荡处理36（或者42或者48或者54或者60）h；
在酶解后的溶液中以和明胶的体积比10:1（或者1.3或者1.5或者1.7或者2）的比例加入浓度为2（或者3或者4或者5）%明胶，然后振荡10（或者11或者12或者13或者14或者15）min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和氯仿以固液质量比为1:8（或者9或者10或者11或者12）的比例混合；
再过滤得到沉淀物，再次得到的沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5（或者6或者7或者8）的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25（或者30或者35或者40或者45）克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70（或者75或者80或者85或者90）%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5（或者6或者7或者8或者9）的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
实施例三：
一种核桃鞣质的制备方法，包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40（或者50或者60或者70或者80）目的筛网过筛；
将过筛后的核桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8（或者9或者10或者11或者12）的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1（或者1.5或者2或者2.5）g/L的纤维素酶，以溶液和酶的体积比90（或者95或者100或者105或者110）:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5（或者5.8或者6或者6.4或者6.7）后将容器密封，在30（或者35或者40或者45或者50）℃恒温下振荡处理36（或者42或者48或者54或者60）h；
酶解后的溶液中以后酶解后溶液的体积比为1:5（或者6或者7）的比例加入浓度为70（或者75或者80或者85或者90）%的丙酮；
加丙酮后的溶液离心、过滤，直至无絮状物出现为止；
离心后的溶液减压浓缩后得到浓缩液；
在浓缩液中以和明胶的体积比10:1（或者1.3或者1.5或者1.7或者2）的比例加入浓度为2（或者3或者4或者5）%明胶，然后振荡10（或者11或者12或者13或者14或者15）min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和氯仿以固液质量比为1:8（或者9或者10或者11或者12）的比例混合；
再过滤得到沉淀物，再次得到的沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5（或者6或者7或者8）的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25（或者30或者35或者40或者45）克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70（或者75或者80或者85或者90）%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5（或者6或者7或者8或者9）的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
实施例四：
一种核桃鞣质的制备方法，包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40（或者50或者60或者70或者80）目的筛网过筛；
将过筛后的核桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8（或者9或者10或者11或者12）的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1（或者1.5或者2或者2.5）g/L以2：3混合的果胶酶和纤维素酶，以溶液和酶的体积比90（或者95或者100或者105或者110）:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5（或者5.8或者6或者6.4或者6.7）后将容器密封，在30（或者35或者40或者45或者50）℃恒温下振荡处理36（或者42或者48或者54或者60）h；
酶解后的溶液中以和溶液的体积比为1:5（或者6或者7）的比例加入浓度为70（或者75或者80或者85或者90）%的丙酮；
加丙酮后的溶液置于微波超声波提取仪上，微波功率设为100（或者150或者200或者250）W，超声波频率设为20（或者22或者24或者26或者28或者30）KHz，超声波功率设为900（或者1000或者1100或者1200）W，时间为20（或者24或者28或者32或者36）min；
微波超声波处理后的溶液离心、过滤，直至无絮状物出现为止；
离心后的溶液减压浓缩后得到浓缩液；
在浓缩液中以和明胶的体积比10:1（或者1.3或者1.5或者1.7或者2）的比例加入浓度为2（或者3或者4或者5）%明胶，然后振荡10（或者11或者12或者13或者14或者15）min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和氯仿以固液质量比为1:8（或者9或者10或者11或者12）的比例混合；
再过滤得到沉淀物，再次得到的沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5（或者6或者7或者8）的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25（或者30或者35或者40或者45）克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70（或者75或者80或者85或者90）%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5（或者6或者7或者8或者9）的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
Claims (5)
1.一种核桃鞣质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40-80目的筛网过筛；
将过筛后的核桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8-12的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1-2.5g/L以任意比混合的果胶酶和纤维素酶，以溶液和酶的体积比90-110:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5-6.7后将容器密封，在30-50℃恒温下振荡处理36-60h；
在酶解后的溶液中以和明胶的体积比10:1-2的比例加入浓度为2%～5%明胶，然后振荡10-15min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5-8的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25-45克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70-90%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5-9的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
2.一种核桃鞣质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40-80目的筛网过筛；
将过筛后的核桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8-12的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1-2.5g/L以任意比混合的果胶酶和纤维素酶，以溶液和酶的体积比90-110:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5-6.7后将容器密封，在30-50℃恒温下振荡处理36-60h；
在酶解后的溶液中以和明胶的体积比10:1-2的比例加入浓度为2%～5%明胶，然后振荡10-15min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和氯仿以固液质量比为1:8-12的比例混合；
再过滤得到沉淀物，再次得到的沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5-8的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25-45克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70-90%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5-9的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
3.一种核桃鞣质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40-80目的筛网过筛；
将过筛后的胡桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8-12的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1-2.5g/L以任意比混合的果胶酶和纤维素酶，以溶液和酶的体积比90-110:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5-6.7后将容器密封，在30-50℃恒温下振荡处理36-60h；
酶解后的溶液中以和酶解后溶液的体积比为1:5-7的比例加入浓度为70-90%的丙酮；
加丙酮后的溶液离心、过滤，直至无絮状物出现为止；
离心后的溶液减压浓缩后得到浓缩液；
在浓缩液中以和明胶的体积比10:1-2的比例加入浓度为2%～5%明胶，然后振荡10-15min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和氯仿以固液质量比为1:8-12的比例混合；
再过滤得到沉淀物，再次得到的沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5-8的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25-45克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70-90%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5-9的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
4.一种核桃鞣质的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
剥取核桃青皮，在背阴处晾干；
干燥后粉碎，用40-80目的筛网过筛；
将过筛后的胡桃青皮粉置于容器中，按固液质量比1:8-12的比例加入纯水；
在上述溶液中加入浓度为1-2.5g/L以任意比混合的果胶酶和纤维素酶，以溶液和酶的体积比90-110:1的比例加入，将容器中溶液的pH值调至5.5-6.7后将容器密封，在30-50℃恒温下振荡处理36-60h；
酶解后的溶液中以和溶液的体积比为1:5-7的比例加入浓度为70-90%的丙酮；
加丙酮后的溶液置于微波超声波提取仪上，微波功率设为100-250W，超声波频率设为20-30KHz，超声波功率设为900-1200W，时间为20-36min；
微波超声波处理后的溶液离心、过滤，直至无絮状物出现为止；
离心后的溶液减压浓缩后得到浓缩液；
在浓缩液中以和明胶的体积比10:1-2的比例加入浓度为2%～5%明胶，然后振荡10-15min，静置、过滤得到沉淀物；
沉淀物和氯仿以固液质量比为1:8-12的比例混合；
再过滤得到沉淀物，再次得到的沉淀物和乙酸乙酯以固液质量比为1:5-8的比例混合；
将混入沉淀物的乙酸乙酯溶液加入到其内装有25-45克氧化铝粉末的层析柱中；
再在层析柱中加入浓度为70-90%的丙酮，丙酮以和层析柱中溶液的体积比为3:5-9的比例加入；
将溶液从层析柱中流出，减压浓缩得到鞣质。
5.根据权利要求1或2或3或4所述的一种核桃鞣质的制备方法，其特征在于所述氧化铝粉末粒度为100～160目。
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