CN103316062A

CN103316062A - 乳苣的新用途

Info

Publication number: CN103316062A
Application number: CN2013102234061A
Authority: CN
Inventors: 贺燕云; 华子义; 张彩艳; 刘小敏; 韦嘉励; 李艳利; 马中良
Original assignee: University of Shanghai for Science and Technology
Current assignee: University of Shanghai for Science and Technology
Priority date: 2013-06-06
Filing date: 2013-06-06
Publication date: 2013-09-25

Abstract

本发明公开了一种乳苣的新用途，该药食两用的菊科乳苣属植物乳苣的水提取物能强烈的抑制肺癌细胞H1299和A549的生长，使癌细胞的线粒体膜电位下降，胞内活性氧水平增加，进而导致细胞凋亡等一系列生理反应，这种食用野菜的抗癌作用的发现为临床用药及开发新药或保健品开发提供了良好基础。

Description

乳苣的新用途

技术领域

本发明涉及一种乳苣的新用途。

背景技术

据世界卫生组织（WHO）统计，全世界每年有1000万新发癌症患者，600万人死于癌症，癌症几乎是死亡的代名词，目前，治疗癌症的措施有手术、化疗、放疗和免疫治疗等4种，但其治疗效果都不理想。中药抗肿瘤作用具有多靶点、多环节、多效应的特点，可作用于肿瘤发生、发展的多个环节，同时其毒副作用低，能提高机体的免疫力，不易产生耐药性。近年来许多报道证明了中药抗肿瘤复发、转移的优势，越来越多的中晚期癌症患者选择中药治疗，中药治疗也已经由单纯临床报道进入了较为系统的临床和实验相结合的前瞻性研究。寻找高效无毒的中草药，或能预防癌症并能长期服用的药物或保健品成为迫切的问题。

乳苣为菊科乳苣属植物，生长在海拔1200-4300m的地区，常生长在湖边、草甸、田边、河滩、固定沙丘以及砾石地。民间作为野菜采食，有抗菌、消炎、止痛等功效。关于乳苣的研究报道，国内外均较少。有报道乳苣中黄酮类化合物含量较高，且黄酮类化合物具有抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖，治疗骨质疏松，它能清除自由基、超氧化物和羟基自由基、抑制脂质过氧化及抗癌、抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。关于乳苣水提取物作用于癌细胞方面的研究，申请者尚未见国内外有报道。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种乳苣在制备抑制肺癌细胞H1299和A549增殖的药物中的应用。

本发明的目的之二在于提供一种乳苣在制备促进癌细胞H1299和A549的凋亡药物中的应用。

为达到上述目的，本发明进行如下实验：

第一步，乳苣水提物的获取。

第二步，用不同浓度的乳苣水提取物作用于体外培养的H1299和A549细胞48h，结果发现乳苣水提取物作用A549和H1299 48h后，光镜下直接可见未给药对照组细胞贴壁状况良好，细胞透明，状态佳，细胞折光性好；而实验组细胞的密度明显降低，细胞贴壁能力减弱、形态变小变圆、折光性差，悬浮细胞和颗粒增加，浓度越高，细胞状态越差，最高浓度处理组细胞稀疏已接近死亡，细胞状态与药物浓度呈正相关。

第三步，用cck8法检测不同浓度的乳苣水提取物作用H1299和A549细胞24h和48h的细胞增殖情况，结果发现乳苣水提取物能抑制H1299和A549细胞的增殖，且其对细胞增殖的抑制作用与其剂量、作用时间呈正相关。

第四步，流式细胞仪检测乳苣提取物作用肺癌细胞H1299和A549细胞48h，能明显诱导癌细胞凋亡，而且呈浓度依赖性关系。

第五步，线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件，通过Jc-1染色检测到乳苣水提取物处理H1299和A549 48h后，细胞的膜电位明显下降，表明乳苣诱导了肺癌细胞的凋亡。

第六步，用荧光探针DCFH-DA染色检测到不同浓度乳苣水提取物处理肺癌细胞H1299和A549细胞48h后胞内活性氧水平随药物浓度的增加胞内活性氧水平增加，表明活性氧水平增加可能是诱导细胞凋亡的主要原因。

本发明通过用乳苣水提取液作用于两种肺癌细胞，实验发现乳苣水提取物能强烈抑制肺癌细胞H1299和A549的生长。这种乳苣水提取液能有效、安全、毒副作用小的抑制肿瘤产生和发展，为临床用药及新药或保健品开发提供了良好基础。

附图说明

图1不同浓度乳苣水提取物对H1299和A549细胞生长的影响；

图2不同浓度乳苣的水提取物对H1299和A549 细胞增殖的影响；

图3不同浓度乳苣水提取物作用H1299细胞凋亡的检测；

图4不同浓度乳苣水提取物作用A549细胞凋亡的检测；

图5不同浓度乳苣水提取物作用H1299和A549细胞膜电位的变化；

图6不同浓度乳苣水提取物作用H1299和 A549细胞，细胞内活性氧水平检测。

具体实施方式

以下结合具体实例进一步阐述本发明。

实施例一：乳苣的处理

采于晋西北农田的乳苣(Mulgedium tataricum (Linn.) DC.)全草，荫干，-80℃保存。将8g的干乳苣，粉碎，浸泡到100ml沸水中，超声1h，沸水浴30min，过滤两次，分装原液经48h冷冻干燥后制成冻干粉，用培养基重新溶解冻干粉，分别用2mg/ml、1.5mg/ml、1.2mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml的终浓度处理细胞。

实施例二：不同浓度乳苣水提取物作用H1299和A549细胞，对细胞生长的影响

将H1299和A549细胞分别均匀铺在24孔板中，生长24小时待细胞贴壁且生长状态良好时，分别用2mg/ml、1.5mg/ml、1.2mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml的乳苣提取物处理细胞48h，结果发现对照组生长良好，细胞折光性好，而处理组，随着乳苣的浓度增加，细胞的状态越来越差，尤其2mg/ml、1.5mg/ml的处理组与未处理组相比，细胞皱缩，贴壁能力差，细胞生长缓慢。

实施例三：乳苣水提取物对肺癌细胞H1299和A549增殖有抑制作用

将H1299和A549分别均匀铺在24孔板中，生长24小时待细胞贴壁且生长状态良好时，分别用终浓度为2mg/ml、1.5mg/ml、1.2mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml的乳苣提取物处理细胞24h和48h时分别用CCK8试剂盒（上海七海复泰生物公司）检测细胞的活力，检测波长为450nm。结果显示，与未处理组相比，实验组细胞的活力随着药物浓度的增加活力越来越差，尤其到2mg/ml、1.5mg/ml、1.2mg/ml的处理组，药物显著的抑制了细胞的增殖和活性。

实施例四：乳苣水提取物促进了H1299和A549的凋亡

将H1299和A549细胞均匀的铺在6孔板中，生长24小时待细胞贴壁且生长状态良好时，分别用终浓度为2mg/ml、1.5mg/ml、1.2mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml的乳苣提取物处理细胞48h时，将收集到的细胞，用Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒（上海七海复泰生物公司）染色细胞，流式细胞技术检测H1299和A549细胞的凋亡情况。结果证明，用2mg/ml、1.5mg/ml、1.2mg/ml的乳苣水提取物处理的H1299和A549细胞凋亡率显著大于未处理组。

实施例五：乳苣水提取物处理H1299和A549，对细胞的线粒体膜电位有降低作用

将H1299和A549分别均匀铺在24孔板中，生长24小时待细胞贴壁且生长状态良好时，分别用终浓度为2mg/ml、1.5mg/ml、1.2mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml的乳苣提取物处理细胞48h，用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1) (Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1，碧云天生物公司)染色，结果表明乳苣水提取物处理H1299和A549 48小时后，细胞的膜电位明显下降，细胞膜电位的下降是细胞早期凋亡的一个主要事件，表明乳苣确实能诱导H1299和A549细胞凋亡。

实施例六：乳苣水提取物处理H1299和A549可显著提高细胞内活性氧水平

将H1299和A549分别均匀铺在24孔板中，生长24小时待细胞贴壁且生长状态良好时，分别用终浓度为2mg/ml、1.5mg/ml、1.2mg/ml、0.8mg/ml、0.4mg/ml的乳苣提取物处理细胞48h，用活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit，碧云天生物公司)染色结果表明乳苣水提取物处理H1299和A549 48小时后，细胞内活性氧水平提高，表明活性氧水平的提高可能是乳苣诱导肺癌细胞凋亡的主要原因。尽管本发明描述了具体的例子，但是有一点对于本领域技术人员来说是明显的，即在不脱离本发明的精神和范围的前提下可对本发明作各种变化和改动。因此，所附权利要求覆盖了所有这些在本发明范围内的变动。

Claims

1.一种乳苣在制备抑制肺癌细胞H1299和A549增殖的药物中的应用。

2.一种乳苣在制备促进癌细胞H1299和A549的凋亡药物中的应用。