CN103315992A - 甘草素口服和注射制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗肿瘤的甘草素口服制剂和注射剂及其制备方法，属于医药技术领域。口服制剂包括颗粒剂、片剂、胶囊剂、滴丸剂和软胶囊，注射剂包括小水针、冻干粉针剂、葡萄糖注射液和氯化钠注射液。甘草素口服制剂每1000个制剂单位含甘草素0.1～100g，注射剂每1000mL含甘草素0.1～100g，药用辅料包括稀释剂、润湿剂、崩解剂、助流剂、助溶剂、赋形剂、渗透压调节剂。本发明甘草素制剂安全可靠，具有预防和治疗癌症的作用，所述的治癌药物用于预防和治疗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、白血病等多种癌症，是一种有效的抗肿瘤新药。

Description

甘草素口服和注射制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种以甘草素为有效成分的口服和注射制剂及其制备方法，属于医药技术领域。 

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康和生命的疾病之一，具有疗程长、难治愈、经济与精神负担重等特点，给病人和社会带来了沉重负担。20世纪70年代以来，我国癌症发病率一直呈上升趋势，每年癌症的发病人数约200万人，死于癌症的人数超过140万人。其中，肝癌高发情况十分严重，死亡率位于癌症死亡率的第三位，每年有11万人死于肝癌，约占世界肝癌死亡总数的45％。对此，我国提出重点预防的癌症依次为肺癌、肝癌、食管癌、结直肠癌、乳腺癌、宫颈癌，它们合计占癌症死因的80％。因此，研究天然植物中具有抗肿瘤作用的化合物，对肿瘤的治疗和预防具有非常重要的意义，受到世界各国科学界的普遍关注。 

甘草作为一种天然植物在我国资源丰富，是一味应用极其广泛的中药，性平，味甘，具有解毒、祛痰、止痛、解痉以及抗癌等药理作用，临床已有数千年的应用历史，被卫生部列入既是食品又是药品的保健食品名单，在中医临床也是一味重要的治疗肿瘤的处方药。目前研究认为，甘草黄酮类具有抗癌、抗突变和抗氧化的作用，有希望发展成为一个有效的预防肿瘤的药物。探讨甘草中具有抗肿瘤活性的单体成分并开发制剂应用于临床是研究的重要方向。 

甘草素是一种从甘草中提取的二氢黄酮单体成分，结构式如图1。 

研究显示甘草素具有抗肿瘤活性，能够抑制人肝癌SMMC-7721细胞、人肺癌A549细胞、人胃癌SGC-7901细胞、人低分化胃腺癌BGC-823细胞、人结肠癌Lovo细胞、人早幼粒细胞白血病HL-60细胞的生长。例如Chang-wei Liu^]研究发现，不同剂量的甘草素(0.05-0.4mM)处理HeLa细胞24-72h后，均能够降低HeLa细胞的生存率，随着剂量的增加，细胞存活率不断下降。Shi-ping Zhang等报道，甘草素对人结肠癌Lovo细胞和人肝癌SMMC-7721细胞的生长均有抑制作用，其中对SMMC-7721肝癌细胞的生长抑制作用更加明显，并能诱导SMMC-7721肝癌细胞细胞凋亡。进一步的研究结果表明，给予小鼠口服甘草素10，20and40mg/kg，15天后，给药组能延长H₂₂荷瘤小鼠的生存时间，并能抑制瘤体增生及诱导肿瘤组织细胞凋亡，显示甘草素具有明显的抗肝肿瘤的作用。 

虽然关于甘草素抗肿瘤作用及其机制的研究已有报道，但迄今为止，甘草素仅仅作为甘草提取物而存在，未见甘草素抗肿瘤制剂方面的报道，其临床疗效与应用情况一直处于 空白状态。若能开发成为抗肿瘤制剂，将对肿瘤的治疗和预防产生重大的意义。 

发明目的 

本发明的目的是提供一种甘草素口服制剂和注射剂及其制备方法，其中甘草素来自甘草药材的提取物或人工合成产物。 

技术方案 

本发明甘草素口服制剂包括甘草素颗粒剂、片剂、胶囊、软胶囊和滴丸剂，所述甘草素为甘草素原料药，根据不同剂型的制作工艺，需要加入一些辅料如稀释剂、润湿剂、润滑剂。 

甘草素颗粒剂优选采用如下方法制备：甘草素100份过60～200目筛，粉末中加入200～2000份乳糖、100～500份微粉硅胶、200～2000份淀粉混匀，得到混合物I；取1000～3000份20～80％乙醇混匀后，缓缓加入到混合物I中，混匀制成软材。将软材过10～60目筛制成湿颗粒，40～55℃干燥2～12小时后，过10～60目筛整粒，即得甘草素颗粒剂。 

甘草素片剂是将上述颗粒剂按每片含0.01～0.05g经压片机压制得。 

甘草素胶囊剂是将上述颗粒剂按每粒含0.01～0.05g装入硬胶囊壳制得。 

甘草素软胶囊优选采用如下方法制备：甘草素100份过60～200目筛，所得粉末中加入200～2000份聚山梨酯80、200～2000份聚乙二醇(分子量200～600)、40～400份1，2-丙二醇、10～1000份水的混合液中，研磨30～120min，使全部过80～200目筛，静置过夜；将药液置于轧囊机的贮液槽中，保温40～50℃压囊，压囊用300～3000份明胶浆，重量比例为干明胶∶甘油∶水＝1∶(0.4～0.6)∶1。冷风干燥20～24小时，无水乙醇洗涤，干燥，选粒即得。 

甘草素滴丸优选采用如下方法制备：取500～1500份PEG6000在油浴上加热至120～150℃，加入100份甘草素细粉，不断搅拌至全部熔融，趁热过滤至贮液瓶中，120～150℃下保温，用滴管滴入含20～60％煤油的液体石蜡(外层为冰水浴)冷却液中，冷凝成丸，以液体石蜡洗丸至无煤油味，用毛边纸吸去黏附的液体石蜡，即得。 

本发明甘草素注射剂可以采用本领域的常规制备工艺进行制备，辅料包括增溶剂、缓冲剂、抑菌剂、等渗调节剂、填充剂、稳定剂，可制成注射液或注射用粉针剂，以克服可能的胃肠和肝首过效应，提高药物的生物利用度。 

甘草素注射液优选采用如下工艺进行制备：准确称取100份甘草素、500～5000份丙二醇、10～50份烟酰胺，混合溶解后，加入适量注射用水，调节pH值为6.5～8.5使其溶解，补加注射用水至全量。加0.1～2％(g/mL)的活性炭混匀，煮沸10～60min，过滤脱炭，然后加入葡萄糖或氯化钠使溶解，冷却至室温，合格后滤至澄明，灌装封口，100～120℃流通蒸汽灭菌30～60min，即得甘草素葡萄糖或氯化钠注射液。 

本发明甘草素注射剂优选为注射用冻干粉针剂，其制备工艺优选如下：准确称取100份甘草素、10～50份精氨酸、10～50份烟酰胺、10～50份甘露醇，用适量注射用水溶剂后，无菌过滤，0.2～5mL/支分装于安瓿瓶中，冷冻干燥后封口，漏气检查即得。 

本发明所具有的效益是：由于采用上述技术方案，使得甘草素可以制成口服制剂或注射剂应用于多种癌症的预防和治疗，开发并充分利用了甘草素作为新的药物资源，为患者缓解或解除疾患，并且创造出显著的经济效益。 

附图说明

图1为甘草素结构式。 

图2中，A为小鼠体重随时间变化(数值均为平均值±SD，n＝10)；B为给药后体内 实体瘤体积变化(与阳性对照组相比，P＜0.05)。 

具体实施方式

实施例1甘草素颗粒剂 

取10g甘草素过120目筛，粉末中加入200g乳糖、80g微粉硅胶、80g淀粉混匀；另取120g70％乙醇混匀后，缓缓加入到上述混合物中，混匀制成软材。将软材过20目筛制成湿颗粒，55℃干燥6小时后，过20目筛整粒，即得甘草素颗粒剂。 

实施例2甘草素片剂 

如实施例1所述，不同的是将得到的甘草素颗粒剂按每片含0.025g甘草素压制成片剂。 

实施例3甘草素胶囊剂 

如实施例1所述，不同的是将得到的甘草素颗粒剂按每粒含0.025g甘草素装入硬胶囊壳得到甘草素胶囊剂。 

实施例4甘草素软胶囊剂 

.取10g甘草素过120目筛，所得粉末中加入80g聚山梨酯80、80g聚乙二醇400、10g1，2-丙二醇、10g水的混合液中，研磨60min，使全部过120目筛，静置过夜，测定药液中的甘草素含量(1g药液中甘草素含量为55.6mg)；将药液置于轧囊机的贮液槽中，保温48℃压囊，压囊用80g明胶浆，重量比例为干明胶∶甘油∶水＝1∶0.5∶1。冷风干燥24小时，无水乙醇洗涤，干燥，选粒即得甘草素软胶囊剂。 

实施例5甘草素滴丸剂 

取100gPEG6000在油浴上加热至135℃，加入10g甘草素细粉，不断搅拌至全部熔融，趁热过滤至贮液瓶中，135℃下保温，用滴管滴入含45％煤油的液体石蜡(外层为冰水浴)冷却液中，冷凝成丸，以液体石蜡洗丸至无煤油味，用毛边纸吸去黏附的液体石蜡，即得。 

实施例6甘草素氯化钠注射液 

准确称取10g甘草素、400mL丙二醇、5g烟酰胺，混合溶解后，加入注射用水300mL，调节pH值为8.0使其溶解，补加注射用水至1000mL。加0.2％(g/mL)的活性炭混匀，煮沸30min，过滤脱炭，然后加入氯化钠使溶解，冷却至室温，合格后滤至澄明，灌装封口，115℃流通蒸汽灭菌60min，即得甘草素氯化钠注射液。 

试验例甘草素口服制剂体内抗肿瘤评价研究 

1药品和试剂 

甘草素口服制剂；环磷酰胺(江苏恒瑞药业)；丙二醛检测装置(南京建成生物工程研究所) 

2动物 

ICR小鼠，体重20-22g，雄性 

3方法 

3.1肿瘤模型的建立： 

将小鼠腹水肿瘤H₂₂细胞腹腔注射入小鼠体内，连续7天。选取肿瘤生长良好、腹部隆起明显的小鼠，碘酒或酒精消毒腹部皮肤，用一次性无毒采血器经腹壁刺入腹腔，抽取腹水置无菌烧杯中，以生理盐水稀释至10×10⁶细胞混悬液，于每只小鼠腋下接种0.2ml。 

3.2动物分组及给药： 

随机设治疗组、阳性对照组、阴性对照组，每组10只小鼠，给药剂量为折合成甘草素的量。 

(1)治疗组(甘草素制剂组)： 

高剂量组   40mg/kg 

中剂量组   20mg/kg 

低剂量组   10mg/kg 

灌胃，一天一次。 

(2)阳性对照组(环磷酰胺组)： 

腹腔注射环磷酰胺0.1ml/次(10mg/kg)，一天一次。 

(3)阴性对照组： 

灌胃与治疗组同体积的生理盐水，一天一次。 

接种肿瘤三天后开始给药，一天一次，连续15天。 

3.3评价标准： 

3.3.1测量瘤径 

生长较慢小鼠肿瘤采用测量瘤径的评价方法，肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长情况而定，一般为每周2-3次，每次测量同时还需称鼠重。 

肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为： 

V＝1/2×a×b²或π/6×a×b×c 

其中a、b、c分别表示长宽高。 

根据测量结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)： 

RTV＝Vt/V₀。 

其中V₀为分笼给药时测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。 

抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)： 

T/C％＞60％为无效；T/C％≤60％，并经统计学处理P＜0.05为有效。 

3.3.2称取瘤重 

生长较快小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价。试验结束后处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，称瘤重。阴性对照组肿瘤平均瘤重小于1克，或20％肿瘤重量小于400毫克，表示肿瘤生长不良，试验作废。 

疗效评价公式： 

肿瘤生长抑制率＜40％为无效；肿瘤生长抑制率≥40％，并经统计学处理P＜0.05为有效。 

4结果 

4.1甘草素制剂对小鼠体重和肿瘤体积的作用 

甘草素制剂对荷瘤小鼠体重的影响如图2A所示。各组小鼠体重均逐渐增加，与阴性对照组相比，前6天各组小鼠体重无明显区别。9～15天时，阴性对照组小鼠体重明显高于甘草素制剂组和阳性对照组，且中剂量甘草素制剂组体重最轻。 

甘草素制剂组、阳性对照组和阴性对照组中H₂₂肿瘤的生长情况如图2B所示。给药7天内，肿瘤的生长没有明显变化。然后多数小鼠逐渐出现可见的皮下实体瘤。9～15天，阴性对照组小鼠肿瘤体积迅速增加，而中剂量甘草素制剂组和阳性对照组肿瘤体积减小。给药15天时，阳性对照组小鼠肿瘤体积缓慢增长至1200mm³，而阴性对照组小鼠肿瘤平均体积迅速增加至2800mm³。甘草素制剂低剂量和高剂量组显示出相似的抗肿瘤效果，而中剂量组显示出明显高于其他组的抗肿瘤效果。 

4.2甘草素制剂对小鼠H₂₂肿瘤的抑制作用 

如表1所示，甘草素制剂组肿瘤平均重量明显低于阴性对照组。低、中、高剂量组的肿瘤生长抑制率分别为30.7％、49.3％和30.0％。而与阴性对照组相比，甘草素制剂低、中、高剂量组均显示出对小鼠移植瘤的抑制作用。高、低剂量组抑瘤作用相近，而中剂量组效果最好。 

表1甘草素制剂对H₂₂肿瘤生长的抑制作用 

P＜0.05 

Claims (9)

1.一种甘草素口服制剂及注射剂，其特征在于：口服制剂每1000个制剂单位含甘草素0.1～100g，注射剂每1000mL药液中含有效成分甘草素0.1～100g，并配以药用辅料组成。

2.根据权利要求1所述的口服制剂，其特征在于：该口服制剂为颗粒剂、片剂、胶囊剂、滴丸剂或软胶囊。

3.根据权利要求2所述的甘草素口服制剂，其特征在于：颗粒剂、片剂和胶囊剂以湿颗粒法制得，还包括乳糖、微粉硅胶、淀粉和乙醇；按甘草素100份计，乳糖用量为200～2000份，微粉硅胶用量为100～500份，淀粉用量为200～2000份，乙醇浓度为20～80％，用量为1000～3000份。

4.根据权利要求2所述的甘草素口服制剂，其特征在于：软胶囊中包括聚山梨酯80、聚乙二醇(分子量200～600)、1，2-丙二醇、水、明胶浆，按甘草素100份计，聚山梨酯80用量为200～2000份，聚乙二醇(分子量200～600)用量为200～2000份，1，2-丙二醇用量为40～400份，水的用量为10～1000份；滴丸剂中含有PEG6000，按甘草素100份计，PEG6000用量为500～1500份。

5.根据权利要求1所述的甘草素口服制剂的制备方法，其特征在于：明胶浆组成为干明胶∶甘油∶水＝1∶(0.4～0.6)∶1。

6.根据权利要求1所述的甘草素注射剂，其特征在于：该注射剂为小水针、冻干粉针剂、葡萄糖注射液或氯化钠注射液。

7.根据权利要求6所述的甘草素注射剂，其特征在于：注射液中包括丙二醇、烟酰胺、氯化钠或葡萄糖。按甘草素100份计，丙二醇用量为500～5000份，烟酰胺用量为10～50份；注射液pH值为6.5～8.5，活性炭用量为0.1～2％(g/mL)。

8.根据权利要求6所述的甘草素注射剂，其特征在于：采用冷冻干燥方法，辅料包括精氨酸、烟酰胺和甘露醇。按甘草素100份计，精氨酸用量为10～50份，烟酰胺用量为10～50份，甘露醇为10～50份，0.2～5mL/支分装。

9.根据权利要求1所述的甘草素口服制剂和注射剂，其特征在于：具有预防和治疗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、白血病等多种癌症的作用。

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