CN103271962A - 一种防治肾纤维化的白首乌提取物 - Google Patents

Abstract

本发明的目的在于提供一种防治肾纤维化的白首乌提取物，以及其制备方法和所构成的药物组合物。该白首乌提取物有显著的防治肾纤维化作用，可用于制备预防或治疗肾纤维化的药物。本发明的提取物系通过将白首乌经95%乙醇提取，提取液减压干燥至干制得。将白首乌提取物作为活性成分与药学可接受的辅料，可制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、口服液、滴丸、糖浆剂、酊剂、注射剂等常用剂型。动物实验表明本发明的白首乌提取物可明显降低肾脏指数，降低肾脏组织中羟脯氨酸含量、且肾脏组织炎性细胞明显减少，纤维组织增生程度减轻，肾间质胶原明显减少，病变有大幅度改善，证明本发明的白首乌提取物确实具有预防和治疗肾纤维化的功效。

Description

一种防治肾纤维化的白首乌提取物

技术领域

本发明涉及白首乌提取物的药物新用途，具体地涉及白首乌提取物以及含有其的药物组合物在防治肾纤维化的药物中的应用，本发明还涉及该中药组合物的制备方法。

背景技术

肾纤维化是指肾脏在各种致病因素如炎症、损伤等作用下的病理修复反应，其实质是成纤维细胞的增殖、细胞外基质的过度积聚及肾功能进行性的下降。肾纤维化是多种慢性肾脏疾病的主要病理改变，是最终导致终末期肾衰竭的共同通路，西医目前用激素、干扰素、ACEI等抗纤维化，但疗效不太满意，目前尚无治疗肾纤维化的特效药。

白首乌系萝藦科（Asclepiadaceae）鹅绒藤属植物耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royleex Wight、隔山牛皮消C.wilfordii(Maxim.)Hemsl.及泰山白首乌（戟叶牛皮消）C.bungei Decne.等植物的块根。历史上用作补益性中药，有养血益肝、固肾益精、强筋健骨、乌黑须发及延年益寿等功效。关于白首乌的近代研究主要集中在抗肿瘤、抗衰老、增强免疫、保护肝脏等方面。中国专利CN101474227A于2009年7月8日公开了白首乌提取物以及含有其的药物组合物在治疗肿瘤中的应用，白首乌提取物有良好的抗肿瘤作用。中国专利CN1876003A于2006年12月13日公开了白首乌有效部位的制备方法，同时还公开了其在治疗失眠药物和治疗或改善失眠食品中的应用，白首乌磷脂和白首乌多糖有效部位有明显的治疗失眠作用。近年有报道称白首乌总苷有明显的抗肝纤维化作用（吕伟红，张爱香，徐姗等，江苏地产白首乌总苷对大鼠肝纤维化作用的研究，中国中药杂志，2009，34（19）：2508-2511）。其研究发现白首乌总苷的抗肝纤维化作用机制与其抗脂质过氧化作用密切相关，而白首乌总苷的抗氧化作用早已被研究证实。肾纤维化是与肝纤维化完全不同的两种疾病。肝纤维化最主要的病因是病毒感染，其他如过量饮酒、肥胖、非酒精性脂肪肝以及自身免疫性肝炎均可导致肝纤维化。肝星状细胞的过度活化与增殖是肝纤维化主要的发病机制。而肾纤维化多由多种慢性肾脏疾病导致，如原发性肾小球疾病、慢性肾盂肾炎、糖尿病肾病等。肾纤维化是多因素驱动的病理过程，涉及炎症、氧化应激、多种细胞因子的作用及信号级联、细胞凋亡、成纤维细胞增殖和活化，以及上皮细胞向成纤维细胞转化等。但到目前为止，白首乌在防治肾纤维化方面的研究尚未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种白首乌提取物的新用途。本发明提供白首乌提取物有显著的防治肾纤维化作用，可用于制备预防或治疗肾纤维化的药物。

本发明的另一目的在于提供从白首乌制备防治肾纤维化的提取物的方法。

本发明的再一目的在于一种防治肾纤维化的药物组合物，其含有上述从白首乌制得的提取物作为活性成分。

本发明是这样构成的：白首乌提取物在制备预防或治疗肾纤维化的药物中的用途。

所述的白首乌提取物是这样制备的：将白首乌经95%乙醇提取，提取液减压干燥至干，得白首乌提取物。

具体地说，白首乌提取物是这样制备的：白首乌加5-10倍量95%乙醇回流提取3-6次，每次不低于1.5小时，提取液减压干燥至干，得本发明的白首乌提取物。

本发明的发明人经过研究和实验发现，本发明的白首乌提取物具有良好的防治肾纤维化作用。

本发明还提供了一种防治肾纤维化的药物组合物，其含有本发明的白首乌提取物作为活性成分，还含有药学可接受的辅料。所述药学可接受的辅料例如是载体、赋形剂和稀释剂中的一种或多种。

本发明上述中药组合物可以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、口服液、滴丸、糖浆剂、酊剂、注射剂中的一种。

本发明的发明人对本发明中的白首乌提取物进行了防治肾纤维化作用的评价实验。本发明选用单侧输尿管结扎复制的大鼠肾间质纤维化动物模型进行活性评价，此模型目前是评价肾纤维化治疗方法的理想模型。多种证据表明此模型与梗阻性肾病患者的临床观察结果相似，可以反映人类梗阻性肾病和纤维化肾脏疾病的过程。

本发明取雄性wistar大鼠经单侧输尿管结扎复制大鼠肾间质纤维化动物模型，对上述白首乌提取物的研究表明：

⑴肾纤维化大鼠给予本发明的白首乌提取物后，明显降低肾脏指数，降低肾脏组织中羟脯氨酸含量。

⑵肾纤维化模型组大鼠肾脏组织HE染色发现，肾脏组织中有广泛的炎性细胞浸润，肾小管高度扩张，肾间质纤维组织增生明显。给予本发明的白首乌提取物后，肾脏组织炎性细胞明显减少，纤维组织增生程度减轻，病变均有不同程度改善。

⑶肾纤维化模型组大鼠肾脏组织Masson染色发现大量肾间质纤维细胞增生。给予本发明的白首乌提取物后，肾间质胶原明显减少。

附图说明

图1为病理组织学检查照片，HE染色（×200），其中A为伪手术组、B为模型组C为氯沙坦钾组、D为白首乌提取物组（400mg/kg）

图2为Masson染色照片（×200），其中A为伪手术组、B为模型组、C为氯沙坦钾组、D为白首乌提取物组（400mg/kg）

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限定的范围。

本发明以下实施例所用白首乌系萝藦科（Asclepiadaceae）鹅绒藤属植物耳叶牛皮消Cynanchum auriculatum Royle ex Wight、隔山牛皮消C.wilfordii(Maxim.)Hemsl.及泰山白首乌（戟叶牛皮消）C.bungei Decne.等植物的块根。

实施例

步骤一、本发明所述白首乌提取物的制备

白首乌500g加5000ml的95%乙醇回流提取3次，每次2小时，提取液60℃减压干燥至干，得到白首乌提取物112g。

步骤二、本发明所述白首乌提取物的体内抗肾纤维化作用实验研究

1.受试药物

使用步骤一中制备所得的白首乌提取物进行抗肾纤维化试验。

2.实验动物

Wiatar大鼠，雄性，体重200-250g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供[SCXK(沪)2008-0016]。

3.实验方法

3.1肾纤维化大鼠模型的建立

80只大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉(0.3mL·100g-1)后固定于操作台上。剪毛后用碘酒、75%酒精消毒手术区，行左侧腹肾区切口，用眼科镊分离左侧输尿管，用5号手术线结扎两道，上一道结扎点位于左肾下极水平，然后在两道结扎点间剪断输尿管，逐层缝合腹膜、肌肉和皮肤。术中严格遵守无菌操作。伪手术组大鼠仅游离左侧输尿管，但不结扎，其余操作同模型组。

3.2分组给药

除去手术过程中死亡大鼠，将75只模型大鼠随机分为5组，即模型组、对照药氯沙坦钾组（20mg/kg）、白首乌提取物400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg组，每组15只，另设伪手术组，每组10只。造模后第2天，每天给药一次，给药体积10ml/kg，连续给药4周。伪手术组与模型组给予等体积蒸馏水。给药28天后，末次给药24小时后处理动物，每组取10只大鼠进行指标检测。

3.3指标检测

肾脏指数：取肾脏，称重，计算肾脏/体重比值。

肾脏组织羟脯氨酸含量检测：称取肾脏约50-100mg，测定肾脏组织中羟脯氨酸含量。

肾脏组织病理学观察：肾脏组织以10%福尔马林固定，石蜡切片，分别进行HE染色和Masson染色，光学显微镜下观察肾脏组织结构变化。

4.实验结果

4.1肾脏指数：模型组动物的肾脏/体重比值明显较伪手术组高(P<0.01)。与模型组比较，本发明的白首乌提取物可明显降低肾脏/体重比值(P<0.05)，对肾脏组织水肿有良好的改善作用。见表1。

4.2肾脏组织羟脯氨酸含量：模型组动物肾脏组织中羟脯氨酸含量比伪手术组明显增加，给予本发明白首乌提取物后，肾脏组织中羟脯氨酸含量明显减少（P<0.05～0.01）。见表1。

表1白首乌提取物对肾间质纤维化模型大鼠肾脏指数及羟脯氨酸含量的影响

与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01

4.3肾脏组织病理学变化

HE染色切片显微镜下观察，伪手术组大鼠肾单位结构清晰，肾小球囊无扩张或缩小，肾小管上皮细胞无明显变性及坏死，管腔内无脱落上皮细胞或管型，间质中无血管扩张或炎细胞浸润。模型组大鼠肾盂高度扩张，肾小管明显扩张，肾间质有广泛的炎性细胞浸润，纤维组织增生明显，见图1。本发明的白首乌提取物可明显降低模型动物的病变程度，减少炎性细胞浸润及纤维组织增生。

利用Masson染色观察大鼠肾脏组织胶原增生情况。显微镜下观察，伪手术组大鼠肾脏组织为红色，仅肾小管基底有纤薄的纤维组织；模型组大鼠肾组织红色染色较少，胶原增生区域较大，表明在病灶局部胶原结缔组织增生，发生纤维化，见图2。本发明的白首乌提取物可明显减少胶原增生。见表2。

表2白首乌提取物对肾间质纤维化模型大鼠肾脏病理学指标的影响

与模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01

以上结果提示本发明的白首乌提取物具有明显的抗肾纤维化功效。

Claims (3)

1.一种具有防治肾纤维化功效的白首乌提取物。

2.如权利要求1所述的白首乌提取物制备的药物组合物，其特征为所述药物组合物系通过以下制备方法制得：先将白首乌加5-10倍量95%乙醇回流提取3-6次，每次不低于1.5小时，提取液减压干燥至干，得白首乌提取物；再将所述白首乌提取物作为活性成分，与含有药学可接受的辅料制得。

3.如权利要求2所述的白首乌提取物制备的药物组合物，其特征为所述药物剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、合剂、口服液、滴丸、糖浆剂、酊剂、注射剂。

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