CN103271952A - 冬虫夏草活性浓缩粉剂的制备方法及其制剂 - Google Patents

Abstract

为了将冬虫夏草中的成分有效提取和长期保存，本发明将冬虫夏草中的活性物质首先进行了温和的提取，然后将其中的活性物质按照分子量大小进行分开和浓缩、冻干。提出了一种冬虫夏草浓缩活性粉剂的制备方法。首先将冬虫夏草粉碎为微粉。然后将粉碎后的冬虫夏草微粉加入质量比为2-50倍的提取液中进行温和搅拌提取其中的可溶性成分。控制提取温度不高于25℃、PH值7-9。然后将此提取液进行过滤，除去悬浮物和微生物。将除去悬浮物和微生物后的冬虫夏草提取液进行不同分子量的超滤，最后将超滤过后的提取液进行真空冷冻干燥成粉。得到不同分子量的冬虫夏草浓缩活性物粉剂。本发明涉及通过本方法制备的冬虫夏草活性浓缩冻干粉剂，以及使用该方法制作出的冬虫夏草冬虫夏草活性冻干粉剂作为原料的相关制剂，属于药品、食品以及保健品的范围。

Description

冬虫夏草活性浓缩粉剂的制备方法及其制剂

技术领域

本发明涉及通过本方法制备的冬虫夏草活性浓缩粉剂，以及使用该方法制作出的冬虫夏草冬虫夏草活性浓缩粉剂作为原料的相关制剂，属于药品、食品以及保健品的范围。

背景技术

冬虫夏草（Cordyceps sinensis）是中国传统的珍贵中药，在中国有上千年的使用历史。研究表明，冬虫夏草为蝙蝠蛾科幼虫被中国被毛孢真菌感染后，僵虫上长出子座的复合体。广泛分布于四川、青海、西藏、新疆、云南以及国外的喜马拉雅山脉海拔3000米以上草甸。现代医学研究表明，冬虫夏草具有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。

传统方式对冬虫夏草的使用，多采取煎服、炮制、泡酒或者采取与食物一同炖服的方式，冬虫夏草经过高温处理，有效成分损失严重，其中的活性蛋白质和受热不稳定有效成分，在此过程中被破坏，这使得冬虫夏草采取传统方法加工使用，其有效利用率很低。加上近几年冬虫夏草价格走高，产量减少，使得采取何种方式有效利用现有冬虫夏草资源成为一个紧迫的课题。

现代研究表明，冬虫夏草中的活性多糖和蛋白质为其中重要的抗癌和提高免疫活性成分。由于真菌的多糖和蛋白质属于大分子结构，高级结构复杂，易于在不良和剧烈的环境中降解失效。特别是冬虫夏草为嗜冷性真菌。适宜的活性生理温度在15-25℃之间。超过25℃就会因为体内蛋白质被高温破坏而失去生理活性。从而导致冬虫夏草真菌的死亡。现在证明冬虫夏草中的多糖更含有各种蛋白质的亚基。而蛋白质的亚基更容易因为高温和不良条件而失活。蛋白质是极为敏感的大分子物质。温度、超声波、有机溶剂、PH的微小变化、甚至光线都能使其高级结构改变，失去活性。这使得采取何种手段能够有效提取冬虫夏草中的活性成分，成为冬虫夏草现代化应用中的重大问题。

而冬虫夏草的传统服用方式采取高温炖服的方式。只能利用其中极为少量的耐热成分。而活性蛋白质和多糖则不能利用或利用率极低。近年来对冬虫夏草中有效成分的提取工艺中，也多采取超声波，加热回流，有机溶液提取等方式。这对冬虫夏草其中耐热的小分子成分固然可行。但经过现代研究的证明重要的有效成分，如冬虫夏草中的多糖和蛋白质却是极大的浪费。采取何种方式能够有效提取其中的有效成分，并且能够将冬虫夏草中的活性成分提取、浓缩。并且能够将活性的成分能够高效安全的提取、浓缩、长期保存。是对目前珍贵的冬虫夏草资源开展高效利用的极为重要的技术手段。

超声波和热水提取，会对其中珍贵的特殊活性蛋白和多糖进行毁灭性的变性和失效。超声波会打断其中的多糖高级结构，也会直接对蛋白质变性，从而失去其独特的药理作用。目前超声波提取工艺中，对虫草的发酵粉和天然冬虫夏草粉碎后的粉剂，首先进行低水温或者高水温的溶解，然后用200-800W的超声波进行20-40分钟的提取。最后采取有机溶剂沉淀的方式来收集多糖。超声波提取方便易控制，但是超声波会对大分子结构有巨大破坏作用，会引起真菌多糖的降解和活性的损失。真菌的葡聚糖具有免疫调节或抗肿瘤活性，目前在临床上广泛应用的香菇多糖、裂褶菌多糖、云芝多糖、小菌核葡聚糖均为(1→3)-β-D-葡聚糖(刘玉红等. 山东大学药学院生化与生物技术药物研究所.2007.)。然而经过研究，葡聚糖在浓度9.77 g/L、温度8±2℃、溶液25 mL容器30 mL、超声工作/间歇时间2 s/2 s情况下，超声波会对葡聚糖有巨大的降解作用。即使工业上常用的400W超声波影响下， 超声对葡聚糖的降解速率可以达到15.95/%/min。超声波对葡聚糖处理前5分钟降解速率为最高。(陈玮等. 超声降解葡聚糖的研究.广西大学轻工与食品工程学院.2009.) 将虫草属进行水溶性提取的方法，目前多集中在蛹虫草(北冬虫夏草)方面，目前有酸性水提取和水溶液提取等方法。由于蛋白质和多糖提取的特殊性。其中PH 值变化，会对大分子活性造成重大影响。经过研究表明:酸性和高温会使其有效成分降解，不同程度的部份酸水解可使冬虫夏草多糖提取物CS-81002的分子量下降，分支减少，并且对巨噬细胞吞噬功能的促进作用亦有下降趋势。在所得到的各个部份酸水解级分(分子量分别为41000，40000，32000，16000和12000)中，分子量为12000的级分对巨噬细胞吞噬功能无促进作用。(龚敏等.冬虫夏草多糖的分子结构与免疫活性.中国生物化学与分子生物学报.北京大学.1990.) 在现有技术条件下，采取何种温和的条件来提取和浓缩冬虫夏草其中的有效成分，并且能够将其制备成能够长期保存，方便取用的制剂。是冬虫夏草高水平深加工利用中重要的一步。

目前工艺中，多将天然冬虫夏草进行热水，超声波和各种有机成分溶解的提取。针对冬虫夏草中的单一小分子成分的纯化。小分子有效成分和耐热成分可以在超声波和热水，以及各种有机溶剂下不变性。但是冬虫夏草有效成分数量较多(Peter Xin.University of Guelph.2013.)现代药理研究证明，冬虫夏草的药理可能是几种大分子相互协同作用。而人体只能吸收利用具有活性的水溶物。一些特殊的药效来源于蛋白质和多糖等各分子高级结构。高级结构决定活性。然而高级结构会在剧烈的条件下被破坏。这就造成目前冬虫夏草产品其中有效利用率低下。开发程度低的现状。由于目前药典中规定对冬虫夏草质量标准仅仅要求腺苷，而腺苷来源于所有生物的DNA降解。不是冬虫夏草其中特有的有效成分。将腺苷作为唯一检验冬虫夏草质量的标准，较为落后。 目前市售产品也只能对产品中蛋白质水解后的氨基酸，降解后的无活性小分子多糖进行标注。 目前各种提取方法，多针对耐热的小分子或成分单一的多糖类，而能够将其中各种小分子和复杂的蛋白质和活性大分子多糖复合温和提取并且进行浓缩成方便取用的粉剂的工艺，并且还能够将冬虫夏草其中活性物质分段分离。并且能够保证活性的工艺和产品，目前也还未见报道。

目前报道有效成分，小分子有效成分: 6个环二肽化合物：L-甘-L-脯环二肽、L-亮-L-脯环二肽、 L-颉-L-脯环二肽、 L-丙-L-亮环二肽、 L-丙-L-颉环二肽、 L-苏-L-亮环二肽。虫草素:分子量251.24，腺苷: 分子量267.24，大分子有效成分:活性多糖(分子量>14000)。蛋白质和酶(分子量>10000) 。小分子的有效成分，如虫草素， 腺苷等。 研究发现，用虫草素皮下注射接种了艾氏腹水癌的小鼠，可使小鼠中位生存期延长到60 d，而对照组仅为19 d，这说明虫草素对小鼠艾氏腹水癌有明显的抑制作用，能明显延长接种艾氏腹水癌小鼠的存活时间。小分子有效成分更适合血液和皮下注射使用，因为血液和皮下注射代谢损失小，所以使用率高。并且小分子不引起免疫反应。通过血液和皮下给药，方便快捷，利用率高，并且将注射的过敏风险大大降低。适宜于不需要皮试的安全快捷的针剂和口服剂。人体体液免疫体系会对分子量在10000以上的蛋白质和多糖大分子进行反应，而小于此分子量的小分子物质不会触发人体免疫系统的应答机制，从而也就不会导致过敏反应。而冬虫夏草大分子多糖和蛋白质，要在分子量在14000以上才会有药效。所以冬虫夏草大分子多糖和蛋白质更适于与高剂量的粘膜吸收和微量的注射，用以刺激免疫系统的综合调整。目前开发的真菌多糖注射液产品如射用香菇多糖针剂，猪苓多糖注射液用以辅助恶性癌症的治疗。由于大分子容易引起人体的免疫系统的过敏反应，使用时均要进行皮试，无过敏反应才可进行注射。真菌多糖注射液用小量即可达到效果，注射用香菇多糖针剂使用量为1mg/3.5天，每周2次。 猪苓多糖注射液使用量为150mg/天。目前以天然冬虫夏草直接提取物为唯一成分的注射液，还未见任何报道。我们从高效利用目前不可人工培养的珍稀野生冬虫夏草资源出发，开发出一种制备冬虫夏草可溶性活性浓缩粉剂的方法，能够有效将冬虫夏草中的活性物质温和提取，并且按照分子量大小将其中活性物质分离冻干成粉剂，以适用于不同的用途。

发明内容

本发明在浓缩冬虫夏草有效成分前提下，将其中的活性物质进行温和提取，并且将其中的活性物质按照分子量大小进行分段提取和浓缩、冻干。提出了一种冬虫夏草浓缩活性粉剂的制备方法。

冬虫夏草活性浓缩粉剂的制作方法，其特征在于：首先将冬虫夏草冷冻到0℃以下，再在不高于0℃度的条件下粉碎。然后将粉碎后的冬虫夏草微粉加入质量比为2-50倍的提取液中进行温和搅拌提取其中可溶成分。控制提取温度不高于25℃。然后将此提取液进行过滤，除去悬浮物和微生物。将除去悬浮物和微生物后的冬虫夏草提取液通过不同孔径大小的超滤膜进行超滤分离，最后将分离过后的提取液进行真空冷冻干燥成粉。得到不同分子量的冬虫夏草浓缩活性物粉剂。不同分子量的冬虫夏草浓缩活性物粉剂，用于不同的用途。

上述的冬虫夏草活性浓缩粉剂制作方法，其特征在于：所述冬虫夏草的提取液，PH值在7~9之间。

上述的冬虫夏草活性浓缩粉剂制作方法，其特征在于：所述冬虫夏草的提取温度不高于25℃。

上述的冬虫夏草活性浓缩粉剂制作方法，其特征在于：所述将冬虫夏草的活性物质分段提取液，是将提取液按照不同分子量大小进行超滤获得的。

上述的冬虫夏草活性浓缩粉剂制作方法，其特征在于：所述冬虫夏草活性浓缩粉剂，是将按照不同分子量大小进行超滤获得后的分段提取液，进行真空冷冻干燥后获得的。

根据上述的冬虫夏草活性浓缩粉剂制作方法制备而得的冬虫夏活性浓缩制剂，其特征在于：取真空干燥后的冬虫夏草活性浓缩粉剂，不添加任何辅料，按照常规药学、食品或者保健品制备方法制备而成。

根据上述的冬虫夏草活性浓缩粉剂制作方法制备而得的冬虫夏活性浓缩制剂，其特征在于：取真空干燥后的冬虫夏草活性浓缩粉剂，添加在常规药学、食品或者保健品上允许的辅料或辅助成分制备而成。

上述冬虫夏草制剂，其特征在于：所述制剂为口服制剂或针剂。

上述冬虫夏草制剂，其特征在于：所述口服制剂为固体，液体或半流体制剂。

上述冬虫夏草制剂，其特征在于：所述的固体制剂为片剂、散剂、丸剂、冻干粉或胶囊；所述的液体制剂为口服液、煎剂、针剂或酒剂；所述的半流体制剂为膏剂。

有益效果：在温和的条件下对冬虫夏草中的活性物质进行提取，对其中的可溶性蛋白质和带有蛋白质亚基的多糖，有着极为重要的影响。通过我们实验证明，其提取液的PH值，为其中重要的提取参数，我们配置了PH值在5-11之间的不同提取液，经过SDS-Page凝胶电泳分析发现，即使PH上下浮动1，也会对其中物质的提取造成重大影响。大分子的多糖和蛋白质，在可溶于水的条件下，才会有其生理活性。如果采取过于剧烈的酸性和碱性条件提取，其中的蛋白质和多糖会造成不可逆的活性损失。通过我们研究发现，采取PH为8的提取溶液，无论对其中的小分子肽和蛋白质来说，都是最好的提取条件，其提取物蛋白质含量高，数量多。并且对其中分子量小于10KD的活性小肽影响极其明显。即使PH值上下浮动1，也会对其中的小分子肽影响巨大，在灵敏度为20ng的检测水平下，都完全不可检出。在附图1中可以直观的发现，在相同为25微升上样量的不同PH值提取液的电泳带中，过酸(PH4-6)和过碱(PH9-11)的提取条件都对其中的活性蛋白质和带有蛋白质亚基的多糖有巨大影响。其提取的图谱中显示，蛋白质数量少，损失大，即使是中性的PH=7的环境，也对冬虫夏草的大分子活性蛋白质提取液不利。经过我们研究和优化，发现PH=8时，为最好的提取条件，蛋白质条数量多，清晰，并且成分完全，没有损失。

对冬虫夏草在缓冲液中进行提取工艺，我们采取了超声波的对比试验。将冬虫夏草微粉在PH=8的缓冲液中采取40w的超声波提取。分别对照了5-30min的超声波提取液的蛋白质SDS-page电泳图谱。发现图谱并未有明显变化(见附图2)。由于超声波对多糖有强烈降解效应，为了提取最多的活性物质，我们最终确定采取PH为8，温度不高于25℃的条件下，对冬虫夏草进行温和提取。获得有大量活性物质的冬虫夏草初步提取液。

我们对温和提取后的冬虫夏草初步提取液，采取超滤的办法，选取了截留分子量为3KD和10KD两种常见的规格，对提取液进行截留，采取SDS-page电泳进行分析。发现分离效果明显，条带清晰，并且由于超滤过程中大量水分被过滤掉。对提取液的浓缩，也起到了效果(见附图3)。我们随后将分离后的冬虫夏草各分子量组分进行冻干，得到了呈淡黄色的冬虫夏草活性提取物冻干粉。使其中的活性物质可以长期存放和保存。也可以直接加入合适的溶液作为口服和针剂使用。

附图说明

下面结合附图对本发明的提取工艺进行进一步说明;

图1和图2为采取不同提取工艺的冬虫夏草提取液的SDS-page电泳图。图3为采取不同规格超滤工艺后的冬虫夏草提取液的电泳图。

图1中;M泳道为宽分子量蛋白质marker，分子量为200KD-10KD。泳道1为PH=5时冬虫夏草提取液电泳图。 泳道2为PH=6时冬虫夏草提取液电泳图。泳道3为PH=7时冬虫夏草提取液电泳图。泳道4为PH=8时冬虫夏草提取液电泳图。泳道5为PH=9时冬虫夏草提取液电泳图。泳道6为PH=10时冬虫夏草提取液电泳图。泳道7为PH=11时冬虫夏草提取液电泳图。

图2中;M泳道为宽分子量蛋白质marker，分子量为200KD-10KD。泳道1为PH=8，超声波功率20W， 超声工作/间歇时间0 min/0 s时冬虫夏草提取液电泳图。泳道2为PH=8，超声波功率20W， 超声工作/间歇时间5 min /2 s时冬虫夏草提取液电泳图。泳道3为PH=8，超声波功率20W， 超声工作/间歇时间10min /2 s时冬虫夏草提取液电泳图。泳道4为PH=8，超声波功率20W， 超声工作/间歇时间15 min /2 s时冬虫夏草提取液电泳图。泳道5为PH=8，超声波功率20W， 超声工作/间歇时间20 min /2 s时冬虫夏草提取液电泳图。泳道6为PH=8，超声波功率20W， 超声工作/间歇时间25 min /2 s时冬虫夏草提取液电泳图。

图3中;M泳道为宽分子量蛋白质marker，分子量为200KD-10KD。泳道1为采取自然干燥工艺的冬虫夏草进行提取后的提取液电泳图。泳道2为采取新鲜的冬虫夏草进行提取后的提取液电泳图。泳道3为新鲜冬虫夏提取液，采取分子量为3KD规格超滤后，电泳图显示其中分子量小于3KD的蛋白质电泳图。泳道4为新鲜冬虫夏提取液，采取分子量为3KD规格超滤后，电泳图显示其中分子量大于等于3KD的蛋白质电泳图。泳道5为新鲜冬虫夏提取液，采取分子量为10KD规格超滤后，电泳图显示其中分子量小于10KD的蛋白质电泳图。泳道6为新鲜冬虫夏提取液，采取分子量为10KD规格超滤后，电泳图显示其中分子量大于等于10KD的蛋白质电泳图。

具体实施方案:

本发明将冬虫夏草中的活性物质进行温和的提取，并且将其中的活性物质按照分子量大小进行分段提取和浓缩，冻干。提出了一种冬虫夏草浓缩活性粉剂的制备方法。

实施方案1

A首先在-196℃下将新鲜冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为2000ml的PH=4的缓冲溶液中，保持溶液温度25℃，温和搅拌混合物2h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为3 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于3KD和小于3KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于3KD的冬虫夏草活性提取物和小于3KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案2

A在-196℃下将新鲜冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为5000ml的PH=5的缓冲溶液中，保持溶液温度25℃，温和搅拌混合物3h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为10 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于10KD和小于10KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于10KD的冬虫夏草活性提取物和小于10KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案3

A在-196℃下将新鲜冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为10000ml的PH=6的缓冲溶液中，保持溶液温度10℃，温和搅拌混合物3h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为3 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于3KD和小于3KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于3KD的冬虫夏草活性提取物和小于3KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案4

A在-196℃下将新鲜冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为2000ml的PH=7的缓冲溶液中，保持溶液温度10℃，温和搅拌混合物5h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为3 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于3KD和小于3KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于3KD的冬虫夏草活性提取物和小于3KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案5

A在-80℃下将新鲜冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为2000ml的PH=8的缓冲溶液中，保持溶液温度4℃，温和搅拌混合物5h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为3 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于3KD和小于3KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于3KD的冬虫夏草活性提取物和小于3KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案6

A在-20℃下将新鲜冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为10000ml的PH=8的缓冲溶液中，保持溶液温度4℃，温和搅拌混合物5h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为3 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于3KD和小于3KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于3KD的冬虫夏草活性提取物和小于3KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案6

A在-196℃下将冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为50000ml的PH=8的缓冲溶液中，保持溶液温度4℃，温和搅拌混合物5h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为10 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于10KD和小于10KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于10KD的冬虫夏草活性提取物和小于10KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案7

A在-196℃下将冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为50000ml的PH=9的缓冲溶液中，保持溶液温度10℃，温和搅拌混合物5h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为10 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于10KD和小于10KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于10KD的冬虫夏草活性提取物和小于10KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案8

A在-196℃下冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为10000ml的PH=10的缓冲溶液中，保持溶液温度10℃，温和搅拌混合物5h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为3 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于3KD和小于3KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于3KD的冬虫夏草活性提取物和小于3KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案9

A在-80℃下将新鲜冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为10000ml的PH=11的缓冲溶液中，保持溶液温度4℃，温和搅拌混合物5h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为3 KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于3KD和小于3KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于3KD的冬虫夏草活性提取物和小于3KD的冬虫夏草活性提取物。

实施方案10

A在-20℃下将新鲜冬虫夏草粉碎至10微米。取粉碎后的冬虫夏草微粉1kg，加入体积为10000ml的PH=11的缓冲溶液中，保持溶液温度4℃，温和搅拌混合物5h。然后将混合物过滤，除去其中的不可溶部分和悬浮物与细菌。获得颜色为浅黄色的新鲜冬虫夏草初步提取液。

B将除去悬浮物的冬虫夏草初步提取液加压，通过筛孔为10KD分子量的超滤膜，分别截留分子量大于等于10KD和小于10KD的部分。

C 将通过超滤截留的冬虫夏草提取液冷冻干燥，获得颜色为浅黄色的大于等于10KD的冬虫夏草活性提取物和小于10KD的冬虫夏草活性提取物。

本发明还提供采用本发明获得的冬虫夏草浓缩粉剂制作的制剂，采用符合药学、医学、食品或者保健品允许的添加剂制作的产品。也可不添加任何辅料制备符合药学、医学、食品或者保健品的产品。

本发明还提供采用本发明获得的冬虫夏草浓缩粉剂制作的制剂，包含常见的粉剂、片剂、酊剂、冻干粉、针剂等。也包括胶囊，含片或者含有采用本发明获得的冬虫夏草微粉或超微粉制作的其他产品。

经过研究(靳朝霞。冬虫夏草的蛋白组学初步研究.2005.南开大学) ：烘干放置一段时间后的冬虫夏草进行2D-E(双向凝胶电泳)分析，只能检测出18种蛋白质，而新鲜状态下冬虫夏草所含活性蛋白质数量，通过分析，是不低于10000种蛋白质的。从蛋白组学意义上分析，烘干后再进行粉碎，其中仅活性蛋白质数量的损失就可能高达99%以上。我们在进行提取的时候，实验结果也验证了这一点:在附图1中泳道1中为干燥后的冬虫夏草提取物蛋白质电泳，其中的蛋白质含量少，条带不清晰，仅仅能检测出少量耐热的小蛋白。和泳道2的新鲜冬虫夏草提取物比较，其中的活性蛋白质损失是极大的。目前药典(2011版)中仅仅要求对冬虫夏草的腺苷含量进行强制检测，而经过现代药理药化证明对癌细胞有杀伤作用的成分，如含有蛋白质亚基的活性多糖，以及各种活性蛋白质未做要求。而活性蛋白质和大部分多糖，会在过高的温度下降解。而降解后的活性蛋白质和多糖，是会失去其抗癌和其他药效的。这也是现代药理验证冬虫夏草的抗癌功效时，多采取4℃甚至更低温度水提物来验证对各种癌细胞杀伤作用的根本原因。然而活性物质必须要溶解于水，才能被人体吸收利用。我们采取温和提取和分段截留的办法获得冬虫夏草的活性浓缩液。然后将其真空冷冻干燥，使其能够存放的时间更长久，活性物质在保存时候也不损失。当使用时，只需要加入水或适宜的溶剂即可使用。经过本方法制备的冬虫夏草浓缩粉剂，外观呈淡黄色，经过色谱和SDS-PAGE检测，在小于3KD的组分中大量含有小分子的腺苷、虫草素、多肽、甘露醇等成分。在大于10KD组分中主要含有大分子活性蛋白质和多糖。

在上述实施例中，采取孔径为0.2微米的滤膜对初步提取液进行低温过滤除菌。不通过其他加热和能让活性物质损失的方式除菌，能够最大限度的保留活性物质的含量。

本发明中，采用的冬虫夏草，优选经过表面清洗后的新鲜冬虫夏草。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明思路和原理之内，所做修改、等同替换，改进等，均应该包含在本发明的保护范围之内。 

Claims (10)

1.一种冬虫夏草活性浓缩粉剂的制作方法，其特征在于：首先将冬虫夏草粉碎为微粉；然后将粉碎后的冬虫夏草微粉加入质量比为2-50倍的提取液中进行温和搅拌提取其中可溶成分；控制提取温度不高于25℃、PH值在7~9之间；然后将此提取液进行过滤，除去悬浮物和微生物；将除去悬浮物和微生物后的冬虫夏草初步提取液通过不同孔径大小的超滤膜进行超滤分离，最后将分离过后的冬虫夏草提取液进行真空冷冻干燥成粉；得到不同分子量的冬虫夏草浓缩活性物粉剂。

2.根据权利要求1所述的冬虫夏草活性浓缩粉剂的制作方法，其特征在于：所述提取液，其PH值为8。

3.根据权利要求1所述的冬虫夏草活性浓缩粉剂的制作方法，其特征在于：所述提取过程中，温度为4℃。

4.根据权利要求1所述的冬虫夏草活性浓缩粉剂的制作方法，其特征在于：将冬虫夏草的初步提取液经过不同分子量的超滤膜，将其中的组分按照分子量大小分离。

5.根据权利要求1所述的冬虫夏草活性浓缩粉剂制作方法，其特征在于：所述冬虫夏草活性浓缩粉剂，是将其中的组分按照分子量大小分离后的冬虫夏草提取液，进行真空冷冻干燥后获得的。

6.根据权利要求1-5所述的采用冬虫夏草活性浓缩粉剂制备而得的冬虫夏草制剂，其特征在于：取通过上述方法制备的冬虫夏草活性浓缩粉剂，不添加任何辅料，按照常规药学、食品或者保健品制备方法制备而成。

7.根据权利要求1-6所述的采用冬虫夏草活性浓缩粉剂制备而得的冬虫夏草制剂，其特征在于：取通过上述方法制备的冬虫夏草活性浓缩粉剂，添加在常规药学、食品或者保健品上允许的辅料或辅助成分制备而成。

8.根据权利要求6或7所述冬虫夏草制剂，其特征在于：所述制剂为口服制剂或针剂。

9.根据权利要求8所述冬虫夏草制剂，其特征在于：所述制剂为固体，液体或半流体制剂。

10.根据权利要求9所述冬虫夏草制剂，其特征在于：所述的固体制剂为片剂、散剂、丸剂、冻干粉或胶囊；所述的液体制剂为口服液、注射液、煎剂或酒剂；所述的半流体制剂为膏剂。

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